细胞培养常见26 个问题
1.如何选用培养基？
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在DMEM 或 M199 中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640 做悬浮细胞培 养，各种目的无血清培养的首选是 AIM V 培养基（SFM）
2.为什么要热灭活血清？
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血 小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养 ES 细胞、昆虫细胞和 平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能 量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但 是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞 具有毒性。
4.GlutaMAX-I 是什么？培养细胞如何利用 GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？
GlutaMAX-I 二肽是 L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的 α－氨基用 L－丙氨酸来保 护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放 L－谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I 二肽非常稳定，即使在 121 磅灭菌 20 分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小 的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。
5.为什么培养基中可以省去加酚红？
酚红在培养基中被用来作为 PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时 为紫色。 研究表明， 酚红可以模拟固醇类激素的作用 （特别是雌激素）。 为避免固醇类反应， 培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员 在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
6.如何用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200－2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞中加入 0.1 毫升的 0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台 盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
7.如何消除组织培养的污染？
重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真 菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净 台，检查HEPA 过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗 生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素 B 和抗霉菌素如泰乐 菌素时尤其重要。
下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤:
1 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
2 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选 择抗生素加入到每一个孔中。 例如， 两性霉素 B 推荐下列浓度， 0.25， 0.50， 1.0， 2.0， 4.0,8.0 mg/ml。
3 每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
4 确定抗生素毒性水平后， 使用低于毒性浓度 2－3 倍浓度的抗生素的培养液培养细胞 2－3 代。
5 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6 重复步骤 4。
7 在无抗生素的培养基中培养 4－6 代，确定污染是否以已被消除。
8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但 是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
9.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？
GIBICO 的胎牛血清 没有预老化，储存在 2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如 冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影 响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
10.目录上说，Hank’s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2 培养箱。原 因是什么？Hank’s 平衡盐溶液（HBS）和 Earle’s 平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能 差别？
HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在 Eagles (2.2g/L)中 比在Hanks (0.35g/L) 中高。
碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡， 以维持溶液的PH值。 Eagles 液在空气水平的 CO2 中， 溶液会变碱， Hanks 液在 CO2 培养箱中会变酸。 如果希望在 CO2
培养箱中保存组织，需要用 Eagles 液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织， 用 Hanks 液就可以了。
11.Qualified 和 Certified 胎牛血清有什么差别?
Certified 胎牛血清包括了 Qualified 胎牛血清执行的所有的标准检验程序，而且除了 这些标准检测，Certified 胎牛血清还有如下一些附加的检测：
End-Point Determination of Endotoxin Content
噬菌体检验
生物化学检测
激素的检测
血红蛋白检测
Sf9 细胞生长促进及方法学检测
12.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入 EDTA 的目的是什么？
二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持 抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA 清洗细胞，以消除来自培养基 中所有的二价离子。
13.制备 lipid-DNA 的方法会影响转染效率吗？
是的。对于 LIPOFECTAMlNE Reagent，稀释试剂在100μl OPTI-MEM 中，稀释DNA
混合两种溶液在室温下孵育15分钟。 对于LIPOFECTIN Reagent， 在100μl OPTI-MEM中。
在加入 DNA 溶液前允许稀释的试剂和培养基孵育至少 30 分钟可以增加 3 倍的效率。确保 复合物在没有血清的情况下形成。孵育 15 分钟后，在复合物中加入含有血清的培养基 （800μl）。（注意以上是 35mm 培养皿使用体积）。对于 LIPOFECTAMlNE Plus Reagent DNA 应该在与脂质体混合之前首先与 Plus Reagent 混合。LIPOFECTAMlNE 2000 的操作 步骤允许在一个很小的体积下混合 DNA 和脂质体，接下来可以不需要换培养基的情况下直 接加入。对于每一种脂质体的详细的信息可以参考产品说明书。
14.我使用 SF900 Ⅱ时， 细胞生长良好， 但是为什么我的蛋白产物不如使用 Graces 液 和 10%胎牛血清时效果好？
如果目的蛋白是一个后期蛋白，它将与蛋白酶一起表达，这些蛋白酶将会作用于目的 蛋白。在加有血清的培养基中，这些蛋白酶将作用到血清中的蛋白，从而使目的蛋白产品保 持完好。在无血清配方中，蛋白酶作用的唯一底物是你的目的蛋白。为了避免这一问题，加 入一些蛋白酶抑制剂或加入少量的血清（少于 1％），让血清给蛋白酶提供作用底物。
15.如何检测内毒素(热源)水平？
LAL（Limulus Amebocyte Lysate）试验是可用的最敏感和特异的检测细菌内毒素的方 法。Levin 和 Bang 发现细菌可引起鲎（Limulus polyphemus）血管内的凝集作用。内毒素 启动一个细胞内酶原系统（丝氨酸蛋白酶级联反应系统），通过修饰凝集素，产生一种透明 的胶，LAL 中的凝固蛋白，从而，形成不可溶的基质。LAL 试剂缓冲的鲎（血细胞）裂解 物。
胎牛血清的内毒素检测是在 Grand Island，按照手册上 Gel-clot 方法进行的。在对血 清产品进行内毒素检测前，用无热源的水 1：10 稀释样品。稀释样品沸水育 5 分钟，以消 除抑制剂。（通常，血液中的内毒素结合成份的出现会抑制凝胶过程，使内毒素不能与 LAL 反应。样品预先热处理可以消除这种抑制作用。）
16.我可以使用固体形式的 Murashige Skog 培养基吗？
如果使用固体形式的培养基，需要加入琼脂。琼脂加入前要先灭菌。应该避免 MS培 养基的直接灭菌，应该高压灭菌琼脂溶液，然后把融化的琼脂溶液加入到MS 培养基中。
17.20℃下配制的缓冲液，在较高或较低的温度下 PH值会改变吗？
对于普通使用的缓冲液，PH 值随温度变化而变化。
下表列出温度改变 10℃时，PH 值的变化情况
例如 20℃下配制 PH7.4 Tris 缓冲液,40℃时 PH值为 7.4-（2x0.310）＝6.78
缓冲系统 pKa/20℃ [Delta]pKa/10℃
Mes 6.15 -0.110
Ada 6.60 -0.110
Pipes 6.80 -0.085
Aces 6.90 -0.200
Bes 7.15 -0.160
Mops 7.20 -0.013
Tes 7.50 -0.200
Hepes 7.55 -0.140
Tricine 8.15 -0.210
Tris 8.30 -0.310
Bicine 8.35 -0.180
Glycylglycine 8.40 -0.280
18.室温下(25℃)配制的 Tris-HCl 溶液，在 37℃使用时 PH 值是多少？
缓冲液的 PH值随温度变化而变化。下表列出了 50mM Tris-HC 溶液在 4℃，25℃， 37℃时，不同的 PH值。
4℃ 25℃ 37℃
8.1 7.5 7.2
8.2 7.6 7.3
8.3 7.7 7.4
8.4 7.8 7.5
8.5 7.9 7.6
8.6 8.0 7.7
8.7 8.1 7.8
8.8 8.2 7.9
8.9 8.3 8.0
9.0 8.4 8.1
9.1 8.5 8.2
9.2 8.6 8.3
9.3 8.7 8.4
9.4 8.8 8.5
19.昆虫细胞培养的最适 PH 值和渗透压是多少？
生长培养基的 PH 值对细胞的增值和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部 分鳞翅类昆虫细胞系，在 PH 值 6.0－6.4 范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细 胞系时， 培养基的最适渗透压是 345－380mOsm/kg.。 为保证可靠和持久的细胞培养方式， 减少技术问题，保持 PH 值和渗透压在以上所列的范围之内。
20.High Five 细胞有任何其它名称吗？
High Five细胞也被称为 Trichoplasia ni 5B1-4 和 BTI-TN-5B1-4。
21.PFHM-II 和 HYBRIDOMA-SFM 之间有什么差别？
PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养 基。如果作为杂交瘤生产培养基使用，PFHM-II 可能需要补充低水平的血清。
HYBRIDOMA-SFM即是杂交瘤生产培养基，也是单克隆抗体生产培养基。它包含低水平的 蛋白质。
22.在 High Five 无血清培养基中去污剂的浓度是多少？
High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。
23.High Five 细胞用多大的密度冻存？
3.0x10E6 cells/ml
24.在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的细胞有害 吗？
可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是 L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型
而且比谷氨酰胺更加难以溶解。 的2mM高6倍。 酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍，
沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要 沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会有不利的影响。
25.如何从 T25 瓶中转移 sf9 细胞？能用胰蛋白酶消化吗？
我们强力推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性最小，生活力最高。正如手 册上所显示，通过使用巴氏德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍 打培养瓶。只有在绝对必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。
胰酶消化一个 T25 瓶的 sf9 细胞：
1. 去除培养基。
2. 用 2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除 PBS.
3. 加入 2ml 1x 胰酶 EDTA（恰好覆盖细胞表面）。
4. 37 ℃孵育 5 到 10 分钟。在仪器下检测看到 5 分钟后它们正在向上移动。
5. 向细胞中加入 2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml 培养液洗瓶壁，移入同一锥 形管中。（培养基中的 FBS 终止了胰酶的活性。）
6. 离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。
7. 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。
26.在 Sf9, Sf21, 和 high Five 细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？
为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10 单位/毫升细胞悬液。
27.如何评估 ES 细胞合格的胎牛血清？
使用 D3 ES 细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感 的细胞系。
相关生长效率分析：
当 ES 细胞以非常低的密度传入包含 10％胎牛血清的生长培养基中，检测开始和支持 ES 细胞克隆的能力。
细胞毒分析：
当以非常低的密度传入包含 30％胎牛血清的生长培养基中， 检测 ES 细胞和feeder 细 胞的生长能力。
相关形态学和分化分析：
检测胎牛血清支持未分化 ES 细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。 未分化的 ES 细胞小颜色深红粉红，分化的细胞较大，丰满，颜色较浅。
所有的分析在没有 ESGRO 的情况下进行的，培养基中出现 ESGRO 会掩盖由胎牛血 清所导致的问题。（ESGRO或 LIF 经常用来保持 ES 细胞处于未分化状态。）
经过培养发现，大约 8 批中有 1 批可以用来培养 ES 细胞。
28.在重新冻存 sf9 细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力 会降低吗？
通常情况当细胞经过 30 次传代后，应该返回冻存。无论什么时候记数时，都应该检查 细胞活力。 如果超过 95％的细胞保持有活力和在大约30 小时左右加倍， 细胞仍然可以使用。 如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。
大规模细胞培养技术简介 大规模培养技术应用简介通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。上世纪60-70 年代，就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来，由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增，以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善，动物细胞大规模培养技术趋于成熟。 所谓动物细胞大规模培养技术( large-scale culture technology )是指在人工条件下(设定ph、温度、溶氧等) ，在细胞培养工厂 (Cosmo Cat.No. 1101-400 or 1101-800 )或生物反应器( bioreactor )中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho(中华仓鼠卵巢) 细胞、BHK-21( 仓鼠肾细胞)、Vero 细胞(非洲绿猴肾传代细胞，是贴壁依赖的成纤维细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。 在过去几十年来，该技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube 等贴壁细胞培养，发展为一次性细胞培养工厂( Made by Cosmo )或生物反应器 (Bioreactor )进行大规模细胞培养。第一代细胞培养技术核心问题是难以产业化或者说是规模化生产：一是在工艺生产时不能大规模制备产品；二是非批量生产容易导致产品质量的不均一性；三是难以对同批生产进行生产和质量控制。 随着生物技术的发展，迫切需要大规模的细胞培养，特别是培养表达特异性蛋白的哺乳动物细胞，以便获得大量有用的细胞表达产物。采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法，已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。因而必须为工业化生产开创一种新的技术方法。自70 年代以来，细胞培养用生物
2014福建银行招聘考试：银行招考常见问题解答四 【导语】银行备战伊始，广大考生基本都处在同一个起跑线上，如何备考就成了考试结果的决定因素。作为业内最权威的培训机构，中公金融人在备考指南、历年真题、报考常见问题等方面有充足的经验和可靠的信息来源，能够给考生提供有针对性的指导建议和专业的指导策略。为大家精心整理了备考信息祝大家顺利考上银行！ Q：银行笔试是否有分数线，一般如何定分数线？ A：以几大国资银行招聘来说，校园招聘笔试一般是没有明文分数线的。银行会根据招聘人数及具体的考试人数来确定参加面试人数。一般情况下参与笔试的考生会以2比1左右的比例进入面试环节。 Q:银行考试行测与公务员考试那个难度大？行测的题型就是选择吗？ A：银行考试行测部分和公务员考试难度相当，但银行考试的行测试题可能会结合专业知识。银行行测考试题型一般会以选择题形式出现。 Q：银行招聘考试与公务员的考试有什么区别和联系？哪个更加容易？ A：首先，银行招聘考试也会考行政能力测试，而且相对于公务员的行政能力测试会略微简单一些。另外银行通过笔试的比例也和公务员考试相近。不同之处当然是在于，银行考试需要一定程度的行业相关知识，也要考英语，而公务员考试则要考申论等科目。由于两者除了行政能力测试与面试有相似之处，其他科目并无共同点，因此不能单纯的说哪个考试更加容易。 Q：银行考试的英语一般都什么难度？一般有哪些题型？ A：一般银行考试英语部分各个银行的限定难度不一，而且同一银行招聘不同岗位要求的英语水平也不同（一般是涉及外汇及英语专业的岗位要求英语水平比较高），这根据具体银行所涉及的主要业务方向和业务岗位需求有关。一般岗位要
初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒 初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速 （500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 初代组织块培养法 1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。 4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
细胞培养中的黑胶虫问题 1.我们实验室最近一次的情况: 我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行培养也没发现问题。 同时培养箱也有本实验室保存的3t3细胞进行培养，生长快，很快铺满，仔细观察也可以见到少量的黑点。 后来还有从军科院过来的Hela细胞，没有使用我们的血清，直接吸出多余的培养液后，进行培养，传代后用原来吸出的培养液进行培养，同样发现了问题。 可以发现如下的特点： （1）与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则多； （2）对抗生素无效； （3）可能通过培养箱空气进行污染； （4）单用培养液及血清培养没发现问题。 （5）换掖冲洗后也无效。 以下是论坛里我找来的相关帖子内容 “黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。 目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题 关于是什么的问题的讨论 A. 玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西（曾经有文献报道过） B. 据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好象也没个统一的说法 C. 据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。 D. 有人说是纳米级的细菌 其他的特点 （1）形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米， （2）在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。 （3）细胞内好像也有存在， （4）但并不引起培养液混浊 （5）时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡 大家的处理： 1.换好一点的血清（我觉着和血清的关系不大）。
总结---细胞培养 一．基本理论概论 原代培养: 也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。 传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。 细胞系：原代培养物成功传代后，则称之为细胞系。(如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。) 细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。 培养类型：细胞培养，组织培养，器官培养。 细胞生长的方式：贴附生长，悬浮生长 培养细胞的形态（形态不一定，环境改变形态可能改变）：成纤维性型细胞，上皮型细胞（单层膜样生长），游走性细胞（游散生长，常有伪足跟突起） 二．培养过程及要点（切记无菌操作） （一）工作环境的处理 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。吸管口切勿碰到容器瓶口 4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒 感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。 5. 定期检测下列项目： CO2 钢瓶之CO2 压力。CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。 （二）试验用玻璃塑料用品清洗及其消毒灭菌 清洗： （1）玻璃器皿的清洗（酸液由重铬酸钾，浓硫酸，蒸馏水配置） 浸泡—刷洗—浸酸—冲洗 （2）胶塞的清洗 刚买回的常含滑石粉等杂质，先用自来水冲洗后再按常规方法处理。2%NaoH或洗衣粉煮沸10-20分钟---1%稀Hcl浸泡30分钟或蒸馏水冲洗后再煮沸10-20分钟—晾干备用 （3）塑料制品的清洗 2%NaoH浸泡过夜—自来水冲洗--5%稀Hcl浸泡30分钟—自来水和蒸馏水冲干备用。
福建银行考试常见问题解答农业发展银行校园招聘考试难不难竞争大 不大 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
2019年福建银行考试常见问题解答——中国农业发展银行校园 招聘考试难不难竞争大不大 致力于为广大报考银行的同学们提供丰富的银行招聘信息、笔、面试资料。福建中公金融人官网考试信息应有尽有，笔、面试资料琳琅满目，供各位考生选择，帮助莘莘学子积极备考银行招聘考试，还有更多的备考指导、考试题库在等着你！ 银行校园招聘是各大银行组织的针对应届毕业生的招聘计划。2019年农业发展银行校园招聘公告预计于11月初发布，且笔试时间预计在11月下旬。在考生报考过程中，经常有同学问中公金融人小编农业发展银行校园招聘考试难度，竞争强度大不大针对这些问题，中公金融人小编在这里为大家列举2018农业发展银行校园招聘报考条件，以供大家参考！ 农发行的笔试内容从2018年开始转变，最突出之处在于取消了申论，增加了综合知识，即金融、法律、计算机等专业学科。这样农发行笔试内容包含三个模块，第一个模块是行政职业能力测验，时间为90分钟;第二个模块是综合知识，时间为60分钟;第三个模块为性格测试，时间为30分钟。这样一来，农发行的笔试考情越来越接近商业银行考试的格局，但不同的是农发行不考英语。 2018农业发展银行试题占比如下：
第一个板块：行测一共是70道题，总的作答时间为90分钟，总体来说，时间还算相对宽裕。其中：言语理解题目为20道题，数字运算为10道题，逻辑推理为15道题，思维策略为10道题，资料分析为15道题。 第二个板块：综合知识一共有60道题，总的作答时间为60分钟。其中，农发行的认知考到6道题，时政考到6道题，经济5道题，金融11道题，会计9道题，管理7道题，法律8道题，计算机8道题。 第三个板块：性格测试一共有72道题目，时间为30分钟。虽然性格测试不计算分数，但是是这个板块是必须要做的。 加大专业知识的比重，也证明农发行在招聘人员上，更注重人员的专业素养。小编大胆预测，在未来的农发行笔试中，专业知识的题量不会减少，但难度会逐年增加，最终为农发行筛选出素质最优秀的合格员工。 小编语：中国农业发展银行相对于其他两个政策性银行而言，其报考的条件和笔试内容的难度往往比较低，特别是对英语几乎没有硬性的要求，而且在去年农发行的公告当中，不仅招收了当年的应届毕业生，上一届没有参加工作，没有签订劳动合同，档案依然在学校或者人才市场的毕业生也是可以参加考试的，相对而言，竞争激烈程度相对较小，机会比较大，希望广大考生能够结合自己的意愿，选择适合自己的岗位，顺利"入行"。
细胞培养常见问题及其解决 1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。 7.Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？ HBS和EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles 液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。 8. 细胞之接种密度为何？
细胞培养技术原理及应用研究进展 姓名：赵鹏学号：158033038 专业：流行病与卫生统计学 摘要：细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术，已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法。文章对细胞培养技术的应用作一综述。 关键词：细胞培养；应用；研究进展 细胞是构成机体的基本单位，是生命活动的基本单位。一切有机体（除病毒）都是由细胞组成的。细胞具有独立的、有序的自控代谢体系。因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、征服疾病的关键。细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术。细胞培养技术的优点是可以直接观察活细胞的形态结构、生命活动及其变化；提供大量生物性状相似的试验对象，特别是研究大型动物（奶牛）时具有耗资少的优点。但模拟体内环境仍与实际有很大的差异，因此利用细胞培养技术的试验结果不可以轻易做出与体内等同的结论。 动物组织（细胞）培养开始于20世纪初，现已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法[1 ]。随着细胞培养技术的不断发展，现在也广泛应用于动物生产研究。20 世纪60 年代，该技术应用于水产动物的病毒分离和纯化，对于鱼类疾病的防治具有重要作用。近年来研究发现单一种子细胞难以完成构建复杂组织的需要，因此产生了联合培养细胞技术。联合培养下的细胞之间存在着精细的相互调控关系，因而更符合仿生学的原理且更有利于种子细胞的增殖与分化，为复杂的细胞诱导分化以及体外组织构建提供了新思路、新方法[2 ]。 1 细胞培养 细胞培养是将活体组织或细胞从试验动物体内取出，放在模拟体内生存环境的体外环境（无菌、适温、营养丰富）中，使高体细胞生长、发育的一种方法。按照培养的结构成分不同，将其分为组织培养、细胞培养及器官培养等。根据细胞是否在支持物上生长，将其分为贴壁型和悬浮型。一般来说，圆形细胞如淋巴细胞属于悬浮型，而胞体梭型（成纤维型细胞）、扁平不规则（上皮型细胞）等属于贴壁型，贴壁型细胞必需贴附在支持物表面生长。细胞培养开始于1906 年，Harrison 用蛙新鲜淋巴液培养蛙胚神经组织4 周，首次成功地利用体外培养液培养神经元，标志着组织细胞的体外培养模式的基本建立。随着细胞培养技术的不断发展和完善，20 世纪50 年代进入繁盛阶段，细胞培养逐渐被基础研究与应用领域所应用，特别是在医学领域得到迅速的发展。目前，细胞培养技术已经涉及到生物学、农业、环境保护等领域[ 3 ]。 目前，在细胞培养过程中，只能根据离体细胞的特点和培养条件，提供满足其生长和发育的一些基本生理条件。必须在无菌条件下进行，细胞感染微生物后，会因被夺营养物质而导致细胞生长缓慢或停滞，甚至死亡。需要提供适宜的温度和pH，一般哺乳动物细胞培养的温度控制在37 ℃，鱼类的温度要低一些。温度过高或过低时，均不利于细胞生长甚至会导致细胞死亡。动物细胞最适宜pH一般控制在7.2~7.4，在此范围细胞生长活跃，增殖速度快，如果过低或过高性，细胞会因为细胞膜受损而死亡。细胞离体培养技术的关键是细胞培养液的设计，理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的pH、渗透压、营养物质、调节物质的全部需要。细胞培养液中需含有细胞增殖、生长所需要的各种营养物质。如提供能量的物质（N源、C源）、代谢调节控制的物质（无机盐、维生素、激素）。另外，在细胞培养过程中需要提供一定量的气体（O2和CO2）。CO2具有调节pH和缓冲的作用，一般提供5% CO2。
银行招聘考试面试常见问题及答案 1、请你介绍一下你自己? 回答思路： 一般人回答这个问题过于平常，只说姓名、年龄、爱好、工作经验，这些在简历上都有。其实，企业最希望知道的是求职者能否胜任工作，包括：最强的技能、最深入研究的知识领域、个性中最积极的部分、做过的最成功的事，主要的成就等，这些都可以和学习无关，也可以和学习有关，但要突出积极的个性和做事的能力，说得合情合理企业才会相信。企业很重视一个人的礼貌，求职者要尊重面试考官，在回答每个问题之后都说一句“谢谢”，企业喜欢有礼貌的求职者。 2、你觉得你个性上最大的优点是什么? 回答思路：沉着冷静、条理清楚、立场坚定、顽强向上、乐于助人和关心他人、适应能力和幽默感、乐观和友爱。我在XX经过一到两年的培训及项目实战，加上实习工作，使我适合这份工作。 3、说说你最大的缺点? 回答思路： 这个问题企业问的概率很大，通常不希望听到直接回答的缺点是什么等，如果求职者说自己小心眼、爱忌妒人、非常懒、脾气大、工作效率低，企业肯定不会录用你。绝对不要自作聪明地回答“我最大的缺点是过于追求完美”，有的人以为这样回答会显得自己比较出色，但事实上，他已经岌岌可危了。企业喜欢求职者从自己的优点说起，中间加一些小缺点，最后再把问题转回到优点上，突出优点的部分，企业喜欢聪明的求职者。 4、你对加班的看法? 回答思路： 实际上好多公司问这个问题，并不证明一定要加班，只是想测试你是否愿意为公司奉献。
参考回答：如果是工作需要我会义不容辞加班，我现在单身，没有任何家庭负担，可以全身心的投入工作。但同时，我也会提高工作效率，减少不必要的加班。 5、你对薪资的要求? 回答思路：如果你对薪酬的要求太低，那显然贬低自己的能力;如果你对薪酬的要求太高，那又会显得你分量过重，公司受用不起。一些雇主通常都事先对求聘的职位定下开支预算，因而他们第一次提出的价钱往往是他们所能给予的最高价钱，他们问你只不过想证实一下这笔钱是否足以引起你对该工作的兴趣。 参考回答1：我对工资没有硬性要求，我相信贵公司在处理我的问题上会友善合理。我注重的是找对工作机会，所以只要条件公平，我则不会计较太多。 参考回答2：我受过系统的软件编程的训练，不需要进行大量的培训，而且我本人也对编程特别感兴趣。因此，我希望公司能根据我的情况和市场标准的水平，给我合理的薪水。 参考回答3：如果你必须自己说出具体数目，请不要说一个宽泛的范围，那样你将只能得到最低限度的数字。最好给出一个具体的数字，这样表明你已经对当今的人才市场作了调查，知道像自己这样学历的雇员有什么样的价值。 6、在五年的时间内，你的职业规划? 参考回答： 这是每一个应聘者都不希望被问到的问题，但是几乎每个人都会被问到，比较多的答案是“管理者”。但是近几年来，许多公司都已经建立了专门的技术途径。这些工作地位往往被称作“顾问”、“参议技师”或“高级软件工程师”等等。当然，说出其他一些你感兴趣的职位也是可以的，比如产品销售部经理，生产部经理等一些与你的专业有相关背景的工作。要知道，考官总是喜欢有进取心的应聘者，此时如果说“不知道”，或许就会使你丧失一个好机会。最普通的回答应该是“我准备在技术领域有所作为”或“我希望能按照公司的管理思路发展”。 7、你朋友对你的评价? 回答思路：想从侧面了解一下你的性格及与人相处的问题。
细胞培养常见问题的原因及其解决的办法： 问题1培养液pH值变化太快 可能原因 (1)CO2张力不对 (2)培养瓶盖拧得太紧 (3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足 (4)培养液中盐浓度不正确 (5)细菌、酵母或真菌污染 建议解决方法 (1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。 (2)松开瓶盖1/4圈。 (3)改用不依赖CO2培养液。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。 (4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。 (5)丢弃培养物，或用抗生素除菌。 问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变 可能原因 (1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来 (2)冰冻保存培养液 建议解决方法 (1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。 (2)将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。 问题3：培养液出现沉淀，同时pH发生变化 可能原因 细菌或真菌污染 建议解决方法
丢弃培养物，或用抗生素除菌。 问题4：培养细胞不贴壁 可能原因 (1)胰蛋白酶消化过度 (2)支原体污染 (3)培养瓶瓶底不干净 (4)培养液pH值过碱(NaHCO3分解) (5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不 细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性) (7)接种细胞起始浓度太低或太高 建议解决方法 (1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 (2)分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 (3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶 (4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可) (5)重新配置消化液或培养液 启用新的保种细胞 (7)调节最佳接种细胞浓度 问题5：悬浮细胞成簇 可能原因 (1)培养液中含钙、镁离子 (2)支原体污染 (3)蛋白酶过度消化使得细胞裂解释 (4)DNA污染 建议解决方法 (1)用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。 (2)分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。
细胞培养常见问题及解答 1、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。 2、为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 3、L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 4、GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。 5、为什么培养基中可以省去加酚红？ 酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。 6、如何用台盼兰计数活细胞？ 用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。 7、如何消除组织培养的污染？
2014福建银行招聘考试：银行招考常见问题解答一 【导语】银行备战伊始，广大考生基本都处在同一个起跑线上，如何备考就成了考试结果的决定因素。作为业内最权威的培训机构，中公金融人在备考指南、历年真题、报考常见问题等方面有充足的经验和可靠的信息来源，能够给考生提供有针对性的指导建议和专业的指导策略。为大家精心整理了备考信息祝大家顺利考上银行！ 关于毕业证的问题： Q：只有毕业证，但没有学位证的毕业生可以报考银行吗? A: 对此情况考生一定要仔细阅读招聘公告，如果公告中没有这方面的限制，考生则可报考，但是这种情况还是对面试环节后的招录有一定的影响的。建议考生电话咨询要报考的银行（咨询电话一般在公告中会注明），了解具体情况，以防做无用功。 Q： 13年毕业的可以参加14年校园招聘吗？ A：2014校园招聘主要是针对2014届应届毕业生进行的招聘，但是12年毕业的考生如果是在择业期内（国家规定择业期为二年，有些地方延长至三年）未落实工作单位、其户口、档案、组织关系保留在原毕业学校，或保留在各级毕业生就业主管部门（毕业生就业指导服务中心）、各级人才交流服务机构和各级公共就业服务机构的毕业生，可按应届高校毕业生对待。当然，具体能否参加招聘最好还是亲自咨询相关银行，以免浪费时间和精力。 Q：2014年应届毕业生的范围是什么？ A：2014应届毕业生是指国家统一招生的普通高校毕业生离校时和在择业期内（国家规定择业期为二年，有些地方延长至三年）未落实工作单位、其户口、档案、组织关系保留在原毕业学校，或保留在各级毕业生就业主管部门（毕业生就业指导服务中心）、各级人才交流服务机构和各级公共就业服务机构的毕业生，可按应届高校毕业生对待。但是各个银行的要求也不统一，具体情况考生最好咨询相关银行，确保万无一失。 Q：不是应届毕业生，有过几年的工作经验，这样可以参加银行考试吗？ A: 银行每年招聘分为社招和校招，社招主要是针对有工作经验的人士。建议具体情况参考招考公告或拨打银行咨询电话。
细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/db11037899.html, 细胞培养时存在的生物安全问题简析 作者：胡燕玲高习文 来源：《现代畜牧科技》2018年第07期 摘要：动物细胞培养技术在生物技术和生物医药的相关研究领域中的应用非常广泛。随着动物细胞培养在各个领域应用的内涵逐渐的深入，随之也产生了相应的生物安全问题，也就是生产中常说的生物健康和环境因素之间的风险性问题，而且此问题已经受到相关领域专业人士的广泛关注。现主要分析动物细胞培养过程中存在的生物安全问题，并且针对具体的问题及其风险进行评估，以及更深入的探讨和研究，以期为生物健康和环保提供更加可靠的理论基础和相关的技术支持。 关键词：动物细胞培养；生物安全；危险评估 中图分类号：R446.11+3 文献标识码：B 文章编号：2095-9737（2018）07-0018-01 1 概述 目前，通常是通过动物细胞进行培养，以作为培养基质提供给病毒疫苗的生产所用，此外，许多生物药品的生产过程中也不能缺少动物细胞的培养。随着动物细胞培养的不断深入应用，相应的生物安全问题随机出现，愈来愈受到关注。然而，实际生产中如果想将风险在最大程度上加以控制，就需要采取比较全面的风险评估再进行确定，还要考虑细胞培养操作的类型以及细胞培养潜在的生物危害等情况。 2 动物细胞培养过程中存在的生物安全问题 2.1 细胞培养的特点 实际生产中针对动物细胞培养过程的风险进行评估时，必须考虑的因素就是细胞培养的本质特征，主要体现在物种来源、细胞或组织类型以及培养类型三个不同的方面。 2.2 遗传修饰获得的特征 实际生产中，在实验室遗传修饰获得的重组细胞与其非重组类似物相比较，通常对生物健康和环境破坏的能力要更强一些。所以在实际评估动物细胞培养风险时，还必须确定重组细胞获得的遗传修饰特征，将其对评估的影响考虑在内。
2019年福建银行考试常见问题解答——面试无领导小组讨论精 讲_两难类问题 银行招聘网致力于为广大报考银行的同学们提供丰富的银行招聘信息、笔、面试资料。福建中公金融人官网考试信息应有尽有，笔、面试资料琳琅满目，供各位考生选择，帮助莘莘学子积极备考银行招聘考试，还有更多的备考指导、考试题库在等着你！ 一、定义 两难类问题是让考生在两种各有利弊的答案中选择其中的一种。主要考查考生的思辨能力、说服力等。 二、应对思路 两难类问题的思考方法，可以使用开放类问题的思考方法。因为无领导面试中的两难类问题和开放类问题，本质上是一个话题的两种提问方式。 三、真题讲练 【例题1】 问题： 信息技术的进步到底是促进还是阻碍了人类独立思考的能力？ 要求： 1.请考生认真阅读题目，并依次进行个人陈述，时间5分钟。 2.请考生进行自由讨论，总时间20分钟。 3.推荐一个人进行总结陈词，时间5分钟。 【例题2】有人认为机遇对于成功更重要，有人则认为努力对于成功更重要。请"围绕着机遇和努力对于成功哪个更重要"进行讨论，最后小组形成一致意见。 要求： 1.请考生认真阅读材料，并准备发言提纲，提纲准备时间5分钟。
2.请考生依次回答问题，每人1分钟。 3.请考生进行自由讨论，最终必须达成一致意见，并推举一名考生代表进行总结陈述。讨论时间15分钟，总结发言时间3分钟。 【例题3】银行应留住大客户还是开发小客户，你赞成哪一个？ 要求： 1.请考生认真阅读材料，并准备发言提纲，提纲准备时间5分钟。 2.请考生依次回答问题，每人1分钟。 3.请考生进行自由讨论，最终必须达成一致意见，并推举一名考生代表进行总结陈述。讨论时间15分钟，总结发言时间3分钟。
细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液 一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养 液是否存在浑浊的现象！ 可在培养液中加相应的抗生素处理 2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的 消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。 CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期 清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。 其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。 预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就 要注意操作 3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体 感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。 用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用 8ug/ml的浓度。 4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。 5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。 6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。
细胞培养技术 指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织（动物）。 定义 培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。 在现代医学和生物科学研究中应用广泛 优点 1.直接观察活细胞的形态结构和生命活动。用于细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究. 2.直接观察细胞的变化可便于摄影。 3.研究细胞种类如低等到高等到人类、胚胎到成体、正常组织到肿瘤。 4.便于使用各种技术：相差、荧光、电镜、组化、同位素标记等方法观察和研究细胞状况。 5.是分子生物学和基因工程学的研究对象，也是其主要的组成部分。 6.易于施用物理、化学生物的实验研究。 7.易于提供大量生物性状相似的实验对象,耗资少比较经济。 8.成为生物制品单克隆抗体生产和基因工程等的材料来源。 缺点 组织和细胞离体后独立生存在人工的培养环境中，虽然模拟体内环境，仍有很大差异。因而利用培养细胞做实验时，不应视为体内细胞完全相同，把实验结果推测体内，轻易做出与体内等同的结论。 细胞类型 细胞类型根据是否附于支持物上生长的特性，分为: 贴附型悬浮型（一）贴附型 细胞贴附在支持物表面生长，只依赖贴附才能生长的细胞叫做贴附型细胞(Anchorrage-dependent cells)这种现象与细胞分化有关。 贴附型细胞的分型 1.成纤维型细胞：(fibroblast) 来自中胚层 特点：与体内成纤维细胞形态相似,胞体梭型或不规则三角形,中央有圆形核,胞质向外伸出2～3个长短不同的突起。细胞在生长时呈放射状,漩涡或火焰状走行。 起源：细胞来自中胚层间充质组织。 除真正的成纤维细胞、心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮细胞。
农村信用社基础知识问题集 第一部分基础知识 一、负债管理 1、存款业务管理的原则 坚持统一规范、分级管理、分工协作的原则。统一规范是指全省信用社必须遵守国家有关法律法规和规章，按照业务管理制度，服务标准和指导性工作目标开展存款业务活动。分级管理指省联社负债管理部，县级联社负债业务部门依据本级职能承担相应的存款业务管理工作。分工协作指各级信用社负债，信贷，结算等部门应根据各自的专业性质和特点，按照职责分工，、相互配合，做好组织资金工作。 2、存款人 是指在中国境内开立银行结算账户的单位、个体工商户和自然人。 3、储蓄存款的种类 按存期长短划分，可分为活期储蓄存款、整存整取储蓄存款、零存整取储蓄存款、存本取息定期储蓄存款、教育储蓄、通知存款和经银监会批准开办的其他种类的储蓄存款。 4、存款人基本存款账户、一般存款账户、专用存款账户和临时存款账户 （1）基本存款账户是存款人的主办账户。存款人日常经营活动资金收付及其工资、资金和现金的支取。可以申请开立基本存款账户：企业法人；非法人企业；机关、事业单位；团级（含）以上军队、武警部队及分散执勤的支（分）队；社会团体；民办非企业组织；异地常设机构；外国驻华机构；个体工商户；居民委员会、村民委员会、社区委员会；单位设立的独立核算的附属机构；其他组织。（2）一般存款账户用于办理存款人借款转存、借款归还和其他结算的资金收付。该账户可以办理现金缴存，但不得办理现金支取。存款人申请开立一般存款账户，应向银行出具其开立基本存款账户规定的证明文件、基本存款账户开户登记证和下列证明文件：①存款人因向银行借款需要，应出具借款合同。②存款人因其他结算需要，应出具有关证明。（3）存款人的专用账户用于办理各项专用资金的收付。对下列资金的管理与使用，存款人可以申请开立专用存款账户：基本建设资金；更新改造资金；财政预算外资金；粮、棉、油收购资金；证券交易结算资金；期货交易保证金；信托基金；金融机构存放同业资金；政策性房地产开发资金；单位银行卡备用金；住房基金；社会保障基金；收入汇缴资金和业务支出资金；党、团、工会设在单位的组织机构经费；其他需要专项管理和使用的资金。（4）临时存款账户用于办理临时机构以及存款人临时经营活动发生的资金收付。有下列情况的，存款人可以申请开立临时存款账户：设立临时机构；异地临时经营活动；注册验资。 5、存款人哪些情形可在异地开立有关银行结算账户？ （1）营业执照注册地与经营地不在同一行政区域（跨省、市、县）需要开立基本存款账户的。（2）办理异地借款和其他结算需要开立一般存款账户的。（3）存款人因附属的非独立核算单位或派出机构发生的收入汇缴或业务支出需要开立专用存款账户的。（4）异地临时经营活动需要开立临时存款账户的。（5）自然人根据需要在异地开立个人银行结算账户的。