ELISA测AFP试验临界值的确定
【实验原理】（孙熙奉200946603058）
在微孔板上包被纯化的甲胎蛋白抗体（抗AFP），加入待测血清和酶标抗体（抗AFP-HRP），血清中的AFP与微孔板上的抗AFP 和不同量的抗AFP-HRP结合，洗涤分离后，加入酶底物系统进行显色反应。
当样品中分析物浓度处于临界值时，用定性试验重复检测，将产生50%的阳性结果和50%的阴性结果
【试剂与器材】（应丽娟200946603073）
试剂：已知浓度50ng/ml的AFP阳性标本、抗AFP包被的酶标板、AFP阳性对照、AFP阴性
对照、抗AFP-HRP试剂、浓缩洗涤液、显色液A液、显色液B液、终止液。器材：加样器、温箱、洗板机、酶标仪。
【试验方法】（廖婷200946603064）
①实剂准备用前30分将酶标试剂盒从冰箱取出平衡至室温。
②将待测血清用生理盐水分别稀释至10ng/ml，20 ng/ml，25 ng/ml，30 ng/ml：
血清10ng/ml 20ng/ml 25ng/ml 30ng/ml 阳性对照阴性对照空白对照
AFP-HRP 50μL 50μL50μL 50μL 50μL 50μL50μL
温育30min，37℃
洗板机洗涤五次，最后一次尽量扣干
加显色剂A.B各50μL 振荡混匀，避光显色 37℃，15min
加终止剂50μL。振荡混匀，在450nm的波长和630nm双波长检测，
测定每个孔A值
注：每稀释倍各10孔，阳性，阴性，空白对照各2孔
【结果判断】：（凌凡200946603067）
1阳性判定CO值计算阳性判定值=阴性对照孔A均值Nc*2.1 2阴性判定样品A值＜CO值为AFP阴性 3阳性判定样品A值≧CO值为AFP阳性 4阴、阳性结果各占50%的浓度即为临界值
【结果处理】（朱洪200946603061）
以浓度为横坐标，阳性率为纵坐标，找出阳性率为50%的浓度的临界值（坐标图）
【质量控制】（欧洪菊200946603070）
每板应设阴性对照孔2孔、阳性对照孔2孔、空白对照2孔。
【注意事项】邱蓉（200946603052）
1，血清或血浆包括用EDTA，柠檬酸钠或肝素等抗凝剂采集的血浆均可使用。采集后尽早进行实验，可在2-8℃储存7天。不要使用任何热处理过的样品。 2，不能检测含叠氮钠抑制辣根过氧化物酶的活性。 3，试剂盒从冷藏环境中取出再室温平衡15-30min后方可使用。实验前将液体轻轻振荡混匀，未用完的微孔条用自封袋密封2-8℃保存。
4，封板膜不能重复使用，不同批次酶标板，酶标试剂和阴阳性对照不可混用，不能与其它厂家试剂混用，试剂在有效期内使用。
5，加样品和液体试剂时必须用加液器加注，并经常校对其准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，应更换加样器吸头，以防止出现交叉污染。
6，酶标板洗涤时各孔需加满洗液，以防止孔口有游离不能洗净。应设定30-60秒的洗液浸泡试剂。在洗板结束后，必须立即进行下一步，不可以使酶标板孔干燥。 7，显色时必须先加显色剂A液后加显色剂B液，以免显色过低。
8，AFP抗原测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。读取结果是，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底的外壁，指印或划痕都可能影响A值。 9，所有样品，废液和废弃物都应按传染物处理。 10，终止液为2M硫酸，使用时应注意安全。
11，加入试剂顺序应一致，以保证所有反应板空温浴时间一样 12，严格按照规范使用酶标仪。
【影响因素】（胥杨蕾：200946603055） 1.试剂盒的质量：
2．仪器：温度控制精准，标本和试剂的吸量准确，无携带污染，仪器测量准确。 3．试剂：配制准确浓度，稳定性好，成分单一。
4．操作人员：不频繁换人，无视觉误差，技术水准好，不任意更改操作条件或参数，处理标本无不当。
5．标本：患者准备与标本采集符合要求，标本输送与保存过程无失误，无溶血或药物的影响。