3 ?切割的结果:
【分析】大部分限制酶在切开DNA双链时，切口处的两个末端都带有伸出的由
若干个特定核苷酸组成的单链，这种单链称为“黏性末端”；还有部分限制酶在切割DNA后产生的末端称为“平末端”（如图所示）。
GAA nc
'I'S l
UTTC
criAA CCCiGGG
（-!-
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（ U
（：＜X-
U；1；etc
4 ?限制酶与解旋酶有什么区别？
【分析】限制酶主要作用于两个核苷酸之间的磷酸
二酯键，而解旋酶主要作用于碱基对之间的氢键
（如图所示）°a处为限制酶作用位点，b处则为解
旋酶作用位点。
5. DNA连接酶的作用是什么？它与DNA聚合酶的区别是什么？
【分析】（1）DNA连接酶将限制酶切割所产生的DNA片段“缝合”起来，恢复
被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。它与限制酶作用的位点相同。
（2）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来，而DNA聚合酶是将许多单个的脱氧核苷酸连接成脱氧核苷酸长链。
【拓展】DNA的种类主要有两种：E?coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来；而T4DNA连接酶既可以缝合双链DNA片段互补的黏性学生活动3:
阅读课本第10?12 页，思考并讨论这些问题。
思考2 :
分析课本图1 —2，画出限制酶切割DNA 的示意图。
思考3:
根据上图分析这
两种限制酶识别的核苷酸序列和切割的位点分别是什么？
回答：
1.识别的序列为GAA TTC ,切割的位点在G 与A之间。
2.识别的序列为CCCGGG，切割的位点在C与G之间。
DNA连接酶DNA聚合酶
作用实质
连接DNA片段间的磷酸二
酯键将单个核苷酸与DNA 单链通过磷酸二酯键连接起来
连接部位
将两个DNA片段通过磷酸
二酯键连接起来。将单个脱氧核苷酸加到已经存在的核酸片段的
Q/特甘卜
1
是否需要模板—不需要需^<
6?载体具有什么作用？在基因工程操作中，常用的载体有哪些？
【分析】载体的作用是将外源基因导入受体细胞并使其在受体细胞内稳定遗传并表达。目前，常用的载体有质粒、噬菌体和动、植物病毒。
质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外的并具有自我复
制能力的很小的双链环状DNA分子（见课本图1—4）。
7 ?作为载体必须具备哪些条件？
（1）载体的作用：作为运载工具将目的基因转移到宿主细胞中去，并利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。
（2）载体必须具备以下条件：①具有自我复制能力以便在宿主细胞中稳定保存并大量复制；②具有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插中2J-A.、、A
思考并讨论：
作为载体必须具备哪些条件？
入其中；③具有特殊的标记基因，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等标记基
因，供重组DNA勺鉴定和选择。
（3 ）目的基因与载体结合的过程：
含目的基因的DNA分子
▼
两个切口<
铁得目的基因
重组质粒（重组DNA分子）
【典型例题分析】
例1 ：下列有关基因工程中限制内切酶的描术，错误的是（）
A.一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
B.限制性内切酶的活性受温度的影响
C.限制性内切酶能识别和切割RNA
D.限制性内切酶可从原核生物中提取
例2 :下列黏性末端属于同一种限制酶切割而成的是（）
③T—TY
A.①② B .①③ C .①④ D .②③
例3 :实施基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出
来,
这要利用限性内切酶。一种限制性内切酶能识别
在G和A之间，这是应用了酶的（）
A.高效性
B.专一性C .多样性
例4 :依右图有关工具酶功能的叙述, 不正确的
是（）
A.切断a处的酶为限制性内切酶
B.连接a处的酶为DNA连接酶
C.切断b处的酶为解旋酶
D.连接b处的酶为RNA聚合酶例5 :番茄在运
输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术, 通过抑制
某种促进果实成熟激素的合成，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的
番茄新品种。这种转基因番茄已于1993年在美国上市，请回答：
（1）促进果实成熟的重要激素是。
学生回答这些例
题。
载体（质粒）
—个切口「
两个黏
DNA子中的GAATTC顺序，切点
D.催化活性受外界条件影响
二
(2)在培育转基因番
茄的操作中，所用的基因的剪刀”是
因的针线”是，基因的运输工具”是。
(3)与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点
是
【课堂总结】
r基因工程的诞生和发展
I基因操作的基本工具|
载体
教学
反思，基
基因工程的槪念r限制酶