仪器分析试验讲义
（第二版）
授课人：李蓉
王小刚
西北大学化工学院食品科学系
2004年6月编制
实验一 邻二氮杂菲分光光度法测定铁
一．实验目的
1．了解752型紫外可见分光光度计的构造和使用方法。 2．掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法。 （1）吸收曲线的测绘； （2）标准曲线的测绘； （3）未知样中铁含量的测定；
二．原理
图1-1 分光光度计光学系统图
1- 光源 2-进光狭缝 3，6-反射镜 4，7-透镜 5-棱镜 8-出光狭缝 9-比色皿 10-光电调节器 11-硒光电池 12-检流计
1．分光光度法及其测量的条件:分光光度法主要利用的是物质对光的选择性吸收，按照郎伯-比尔定律，在一定的线性范围内（即浓度范围内）找出吸光度A 与物质含量之间的定量关系。主要受显色条件和测量吸光度条件的影响，其中显色条件主要与显色剂的用量、介质的酸度、显色温度、显色时间以及干扰离子的消除等有关；而测量吸光度的条件则与入射波长λ、吸光度范围以及参比溶液等有关。
2．邻二氮杂菲-亚铁配合物：在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe 3+离子还原为Fe 2+离子，其反应式如下：
-+++++++→⋅+Cl H O H N Fe HCl OH NH Fe 24222222223
在pH=2-9的条件下，Fe2+离子与邻二氮杂菲生成极稳定的橘红色配合物，其反应式如下：
N N Fe2+
该配合物的lgK
稳
= ，摩尔吸光系数ε
510
= ×104。
测定时，溶液酸度控制在pH=，以避免酸度过高导致反应速度过慢，酸度过低Fe2+离子水解，从而影响显色；此外，若溶液中存在着可与显色剂生成沉淀（Bi3+、Cd2+、Hg2+、Ag+、Zn2+）或有色配合物（Ca2+、Cu2+、Ni2+）的离子时，应注意它们的干扰作用。
三．752型紫外可见分光光度计的使用
1．打开电源开关，使仪器预热20分钟；
2．按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度方式；
3．按“波长设置”键（p，σ）设置想要的分析波长；
4．打开样品室盖，将盛有参比和被测溶液（约2.5 cm）的比色皿分别插入比色槽中，盖上样品室盖；
5．将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零ABS；
6．将被测溶液拉入到光路中，此时显示器上所显示的是被测样品的吸光度值。四．试剂
10 μg/mL的铁标准溶液；10%的盐酸羟胺溶液；%的邻二氮杂菲溶液；1 mol/L NaAc溶液。
五．实验内容
1．吸收曲线的测绘：准确移取10 μg/mL铁标准溶液5 mL于50 mL容量瓶中，加入10%盐酸羟胺溶液1 mL，摇匀，稍冷，加入1 mol/L溶液5 mL和%邻二氮杂菲溶液3 mL，以蒸馏水稀释至刻度，在752型紫外可见分光光度计，用比色皿以蒸馏水为参比溶液，用不同的波长从570 nm开始到430 nm为止，每隔10或20 nm测定一次吸光度（其中从530-490 nm，每隔10 nm测一次）。然后以波长
为横坐标，吸光度为纵坐标绘制出吸收曲线，从吸收曲线上确定该测定的适宜波长。
2．标准曲线的测绘：取50 mL容量瓶6只，分别移取10 μg/mL铁标准溶液、、、和 mL于5只容量瓶中，另一容量瓶中不加铁标准溶液。然后各加1 mL 10% 盐酸羟胺，摇匀，经2 min后，再各加5mL 1 mol/L NaAc溶液及3mL %邻二氮杂菲，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，用比色皿在最大吸收波长（510 nm）处，测定各溶液的吸光度。以铁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3．未知液中铁含量的测定：吸取5mL未知液代替标准溶液，其他步骤均同上，测定吸光度。由未知液的吸光度在标准曲线上查出5mL未知液中的铁含量，然后以每毫升未知液中含铁多少微克表示结果。
六．记录及分析结果
比色皿：光源电压：
（1）吸收曲线的测绘
波长/（nm）吸光度A
570
550
530
520
510
500
490
470
450
430
（2）标准曲线的测绘与铁含量的测定
试液编号标准溶液的量/mL 总铁含量/μg 吸光度
1 0 0
2 20
3 40
4 60
5 80
6 100
未知液
七．课堂提问
1．邻二氮杂菲分光光度法测定铁的原理、反应pH条件、用什麽控制酸度、加NH
OH-HCl的目的？
2
2．为什麽绘制吸收曲线？为什麽在最大吸收波长下测定？每改变 用参比液进行重新调零？
3．为什麽绘制标准曲线？如何绘制标准曲线？是否每测一点必须用参比液进行调零？
实验二 醋酸的电位滴定（间接电位法）
一．实验目的
1．掌握用酸碱电位滴定法测定醋酸的原理和方法。 2．学会用二阶微商法计算终点体积（V 终点）的方法。
3．学会用电位滴定法测定和计算HAC 电离常数的原理和方法。
二．原理
图2-1电位滴定仪器装置 1-滴定管 2-滴定池 3-指使电极
4-参比电极 5-搅拌棒 6-电磁搅拌器 7-电位计
1．二阶微商法计算终点体积（V 终点）：在酸碱滴定的过程中，利用酸碱中和反应，随着滴定剂的不断加入，被测物与滴定剂发生酸碱中和反应，溶液的批pH 值不断变化。由加入滴定剂的体积V 和测得的pH 值，可绘制?2pH/?V 2-V 滴定曲线。根据等当点时，二阶微商值等于零，计算出滴定终点时所消耗的终点体积（V 终点）。 2．HAC 电离常数的测定：
醋酸在水溶液中的离解如下 -++⇔Ac H HAc
其离解常数 ]
[]
[][HAc Ac H K a -+⋅=
