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各种DNA 提取方法 一，基因组DNA 提取方法
制备基因组DNA 是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb 。在DNA 提取过程中应尽量避免使DNA 断裂和降解的各种因素，以保证DNA 的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB 方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等 试验步骤：
1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS 漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA 提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K 使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h
5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm 离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min 离心收集水相
6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L 的LiCL 混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm 离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min 。2500rpm 离心10min 。弃上清。
8、加入倍体积3mol/L 乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min 。
9、12000r/min 室温离心5min 。弃上清。将DNA 溶于适量TE 中。 二，外周血DNA 提取技术 分离外周血白细胞提取方法： 试验步骤：
1、取人肘静脉血5ml ，EDTA 抗凝，2500rpm 离心10min 。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个 离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min 。
4、2500rpm 离心10min ，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min 。
6、3000rpm 离心10min ，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。 试验要求：
血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h ，4℃放置不超过5h ，以防白细胞自溶。
三，氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA ： 试验试剂： Ligsisbuffer ：
7.12g30.071g ；最后加灭菌去离子水至1000ml ，高压灭菌。ACD 抗凝剂：__________柠檬酸1.68g 柠檬酸钠4.62g 葡萄糖5.15g ；最后加灭菌去离子水至350ml ，高压灭菌。 提取缓冲液（Extractionbuffer ）：
10mMTrisCl(PH=(PH=(PH=(PH=%SDS10%；最后加灭去离子水至100ml ， 高压灭菌 试验步骤：
1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。以4000rpm ，离心5min 。弃上清液。
2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm ，离心5min 。
3、彻底弃去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h 。
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4、加入8μl 的蛋白酶K ，颠混，37℃过夜（或55℃，3h ，但是37℃效果要好些）。
5、每管加入450μl 饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min ，以5500rpm ，离心15min 。
6、取上清，每管加入250μl 饱和酚和250μl氯仿－异戊醇，摇匀10min ，以5500rpm ，离心15min 。
7、取上清，每管加入500μl 氯仿－异戊醇，摇匀10min ，以5500rpm ，离心15min 。
8、取上清，每管加50μl 的3M 的NaAC ＋，适量无水乙醇（预冷）至满，摇匀放入-20℃保存2h 以上。
9、以12000rpm ，离心20min 。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm ，离心5min ，去上清，50－60℃干燥。 10、加入50μl 灭菌去离子水，转弹，混匀。 四，NaI 提取法提取外周血白细胞基因组： 实验步骤：
1、取外周抗凝血（全血）100ul 于eppendorf 管中，12000rpm 离心12min 。
2、弃上清，加双蒸水200ul 溶解，摇匀20s 。
3、混匀后加6MNaI 溶液200ul ，摇匀20s 。
4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul ，边加边摇，摇匀20s ，12000rpm 离心12min 。
5、取上层液350ul ，加入另一新eppendorf 管中，加倍体积异丙醇，摇匀20s ，室温放置15min ，静置后的反应体系15000rpm 离心12min ，使沉淀紧贴eppendorf 管壁。
6、弃异丙醇，加70％乙醇1ml （不振动），以15000rpm 离心12min 。
7、弃乙醇，敞开eppendorf 管盖，烘干（37℃恒温箱）后，加1xTE 溶液30ul ，溶解DNA ＞12h 以上，制成的DNA 液-20℃冰箱保存备用。 五，常用的外周血白细胞基因提取方法：
试验原理：
苯酚/氯仿提取DNA 是利用岘_Q______酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K 、EDTA 的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA 从核蛋白中游离出来。DNA 易溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA 存于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA 溶液中的酚。抽提后的DNA 溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl 存在下沉淀DNA ，回收DNA 用70%乙醇洗去DNA 沉淀中的盐，真空干燥，用TE 缓冲液溶解DNA 备用。 试验步骤：
1、将1mlEDTA 抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml 离心管中，加入1ml 磷酸缓冲盐溶液（PBS ），混匀，3500rpm 离心15min 倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h 。
2、将上述DNA 提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h 后，加入1mg/ml 蛋白酶 至终浓度为100-200ug/ml 上下转动混匀，液体变粘稠。50℃水浴保温3h ，裂解细胞，消化蛋白。保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。
3、反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min ，直至水相与酚相混匀成乳状液。5000rpm 离心15min ，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿﹕异戊醇（24﹕1），上下转动混匀，5000rpm 离心15min ，用大口吸管小心吸取上层粘
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稠水相，移至另一离心管中。重复一次。
4、加入1/5体积的3mol/LNaAc 及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA 出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA ，转入另一 离心管中，加70%乙醇，以5000rpm 离心5min 。洗涤DNA ，弃上清，去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA 完全干燥。加TE 液20ul 溶解DNA 置于摇床平台缓慢摇动，DNA 完全溶解通常需12-24h 。制成的DNA 液-20℃冰箱保存备用。 六，真核细胞DNA 的制备
一般真核细胞基因组DNA 有107-9bp ，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA 以及SDS 等试剂存在下用蛋白酶K 消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA 不仅经酶切后可用于Southern 分析，还可用于PCR 的模板、文库构建等实验。根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA 提取方法大体类似，但都应考虑以下两个原则：
1、防止和抑制DNase 对DNA 的降解。
2、尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏。试剂准备： 1、TE:10mMTris-HCl;1mMEDTA 。
2、TBS:25mMTris-HCl;200mMNaCl;5mMKCl 。
3、裂解缓冲液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K 至100mg/ml 。
4、20%SDS
5、2mg/ml 蛋白酶K
6、Tris 饱和酚（）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿
7、无水乙醇、75%乙醇 试验步骤： 材料处理：
1、新鲜或冰冻组织处理：
1)取组织块-0.5cm 剪碎，加，转移到匀浆器中匀浆。 2)将匀浆液转移到 离心管中。
3)加20%SDS25ml ，蛋白酶K(2mg/ml)25ml ，混匀。 4)60 C 水浴1-3hr 。 2、培养细胞处理：
1)将培养细胞悬浮后，用TBS 洗涤一次。 2)离心4000g 5min ，去除上清液。 3)加10倍体积的裂解缓冲液。 4)50-55 C 水浴1-2hr 。 DNA 提取：
1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀3min 。
2、离心5000g 10min ，取上层水相到另一 离心管中。
3、加等体积饱和酚，混匀，离心5000g 10min ，取上层水相到另一管中。
4、加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5000g 10min ，取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重复此步骤数次。
5、加等体积氯仿，轻轻混匀，离心5000g 10min ，取上层水相到另一管中。
6、加1/10体积的3M 醋酸钠（）和倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀。
7、待絮状物出现后，离心5000g 5min ，弃上清液。 8、沉淀用75%乙醇洗涤，离心5000g 3min ，弃上清液。 9、室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50-100mlTE 溶解过夜。