［收稿日期］2013-02-14
［基金项目］安徽省教育厅自然科学研究资助项目（KJ2013A191）［作者单位］1．安徽医科大学第二附属医院肾内科，安徽合肥
230601；2．蚌埠医学院第一附属医院肾内科，安徽蚌埠233004
［作者简介］王静（1980－），女，硕士研究生，主治医师．［通信作者］郝丽，硕士研究生导师，主任医师，教授．E-mail ：139********@163．com
［文章编号］1000-
2200（2013）10-1229-06·基础医学·
普罗布考对糖尿病肾病大鼠肾组织
转化生长因子-β1及血红素加氧酶-1表达的影响王
静1，2
，郝
丽1，陈卫东
2
［摘要］目的：观察普罗布考（PB ）对糖尿病肾病（DN ）大鼠肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）及血红素加氧酶-1（HO-1）表达的影响，探讨PB 延缓肾间质纤维化的机制。方法：50只雄性SD 大鼠随机分为实验组及对照组。实验组行高糖高脂饮食，并以
链脲佐菌素腹腔注射建立DN 大鼠模型，
将造模成功的大鼠随机分为DN 组和PB 组。PB 组经口灌胃PB 500mg ·kg －1·d －1
。实验结束称大鼠体质量并查24h 尿蛋白定量及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG ）；处死大鼠抽取血液，观察血清生化指标，摘除肾脏行组织切片，观察肾间质纤维化程度，免疫组织化学学检测肾组织内HO-1、TGF-β1的表达，ＲT-PCＲ检测肾组织内TGF-β1、HO-1核酸表达。结果：PB 能减轻DN 大鼠蛋白尿，降低尿NAG 水平，改善血清总胆固醇；降低血清肌酐、尿素氮水平。上调肾组织HO-1mＲNA 水平，下调TGF-β1mＲNA 水平。结论：PB 可延缓肾组织纤维化，其机制可能与PB 考上调HO-1的表达，进而下调TGF-β1的表达相关。
［关键词］糖尿病肾病；普罗布考；肾纤维化；血红素加氧酶-1；转化生长因子-β1；大鼠［中国图书资料分类法分类号］Ｒ692．39
［文献标志码］A
Effect of probucol on the expression of transforming growth factor-β1
and hemeoxygenase-1in the renal tissue of diabetic nephropathy rats
WANG Jing 1，2
，HAO Li 1，CHEN Wei-dong 2
（1．Department of Nephrology ，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University ，Hefei Anhui 230601；2．Department of Nephrology ，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College ，Bengbu Anhui 233004，China ）
［Abstract ］Objective ：To observe the effect of probucol （PB ）on the expression of transforming growth factor-β1and hemeoxygenase-1（HO-1）in the renal tissue of diabetic nephropathy （DN ）rats ，and investigate the mechanism of PB in delaying renal interstitial fibrosis．Methods ：Fifty male Sprague-Dawlay （SD ）rats were randomly divided into experimental group and control group．The rats in the experimental group were given high-sugar ，high-fat diet and intraperitoneal injection of streptozotocin to establish DN rat models ，the model rats were then randomly divided into DN group and PB group．The rats in the PB group were treated by oral gavage of PB 500mg ·kg －1·d －1．At the end of the experiment ，the rats were weighed and the 24h urinary protein and urinary N-acetyl-β-D-glucosaminidase （NAG ）were checked ，
the rats were killed to collect the blood ；and the serum biochemical parameters were observed ，the kidney of the model rats was removed and performed tissue section to observe the renal interstitial fibrosis ，the expression of renal tissue HO-1and TGF-β1was detected by immunohistochemistry ，the nucleic acid expression of the renal tissue TGF-β1and HO-1was detected by ＲT-PCＲ．Ｒesults ：PB could relieve the proteinuria in the rats with DN ，degrade the urinary NAG level ，improve the serum total cholesterol ，and reduce the serum creatinine and blood urea nitrogen level．It could also upgrade the level of HO-1mＲNA kidney tissue and downgrade the level of TGF-β1mＲNA．Conclusions ：PB can delay renal fibrosis ，the mechanism of which may be that PB could up-regulate the expression of HO-1and down-regulate the expression of TGF-β1．
［Key words ］diabetic nephropathy ；probucol ；renal interstitiadl fibrosis ；hemeoxygenase-1；transforming growth factor-β1；rat
随着生活水平的提高，糖尿病的患病率迅速增
加。糖尿病肾病（diabetic nephropathy ，
DN ）是DM 的常见并发症。DN 的发病机制十分复杂，氧化应激被认为是中心环节；它不仅促进高级糖基化终末产物的形成，还能导致DNA 损伤、一氧化氮合成减
少和失活，以及促进蛋白激酶C 丝裂原、活化蛋白激酶激活［1］
，应用抗氧化剂治疗DN 成为临床研究
热点
［2］
。血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1，HO-1）
是血红素降解的起始酶和限速酶，是一种拮抗氧化
应激的抗氧化酶，也是细胞氧化应激过程一个非常
9
221蚌埠医学院学报2013年10月第38卷第10期
DOI:10.13898/https://www.doczj.com/doc/d12911637.html,ki.issn.1000-2200.2013.10.027
敏感的指标。正常生理状态下，肾脏仅在肾髓质有低水平的HO-1表达，起到维持肾髓质微循环的作用。病理状态下，HO-1可被显著诱导［3］。普罗布考（PB）可在动物体内外上调HO-1mＲNA的表达［4－5］；诱导HO-1的表达［6］。HO-1可通过下调转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达，起到抗纤维化抗炎症反应的作用［7］，但在肾脏纤维化中的作用尚不明了。本研究通过高糖高脂饮食，并以链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型，并应用PB干预治疗，观察肾组织损伤过程中HO-1、TGF-β1表达的变化，以及PB在防治肾间质纤维化中的作用。
1材料与方法
1．1动物与试剂实验动物：清洁级6周龄雄性SD大鼠50只，体质量200 220g，购自蚌埠医学院实验动物中心。试剂和药物：链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）购自Sigma公司，PB（每片0．125g，购自齐鲁制药有限公司，批号：108038KL），兔抗大鼠HO-1多克隆抗体、兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体、免疫组织化学（免疫组织化学）试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司，ＲNAsimple总ＲNA 提取试剂盒、ＲT-PCＲ两步法试剂盒、PCＲ引物购自天根生化科技有限公司。上海生工生物技术公司合成引物。
1．2动物模型的建立与分组SD大鼠50只，适应性喂养1周，测鼠体质量，进入实验。随机分为正常对照组（NC组）10只和造模组40只。NC组喂食基础饲料，造模组喂食高糖高脂饲料（饲料组成：10．0%猪油，20．0%蔗糖，3．0%胆固醇，0．5%胆酸盐，66．5%常规饲料）。4周后腹腔注射40mg/kg STZ（用pH4．2的0．1mol/L枸橼酸盐缓冲液配制），NC组腹腔注射枸橼酸盐缓冲液作为对照；72h 后尾静脉采血测血糖、血脂。随机血糖≥16．7 mmol/L，24h尿蛋白定量≥30mg/d为DN大鼠造模成功。其中，4只造模失败，2只因血糖过高死亡。造模成功34只大鼠，再随机分为DN组17只，PB 组17只。PB组予PB注射液500mg·kg－1·d－1灌胃，PB以0．5%羧甲基纤维素钠（NaCMC）配制成5%混悬液。NC组和DN组以等量0．5%NaCMC 溶液灌胃，总用药时间为12周。所有大鼠均分笼按清洁级动物饲养，整个实验周期为20周（造模8周，造模后干预治疗12周）。实验过程中，又因感染死亡3只；最终进入统计分析的大鼠DN组15只，PB 组16只，NC组10只。在造模前及造模后测鼠体质量，并将大鼠放入代谢笼中，禁食、自由饮水，收集
24h尿，用分光光度法测量尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）。实验结束处死大鼠，20%乌拉坦麻醉后，5ml注射器从腹主动脉采血及取右肾组织放入10%甲醛溶液固定备检；摘取左肾，0．9%氯化钠注射液洗去血迹后称质量，测肾质量/体质量，计算肾质量指数（KI）；左肾液氮速冻后放入－80?冰箱保存。
1．3观察指标
1．3．1一般状态观察观察大鼠的精神状态、体质量、体毛、饮水量、大小便及活动情况等。1．3．2生化指标测定采用免疫比浊法测24h尿蛋白定量；快速血糖测定仪测定血糖；自动生化分析仪测定血清胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、C 反应蛋白（CＲP）。
1．3．3肾组织病理检查（1）组织学：将10%甲醛溶液固定的肾组织石蜡包埋，常规组织切片（3μm），HE染色，观察肾组织病理变化。肾间质纤维化定量分析借助HMIAS-2000高清彩色病理报告分析系统，每个标本在光镜400倍视野下分别观察10个不含肾小球的皮质视野；计算纤维化面积占整个视野的百分比。彩色摄像机提取图像，输入ImageJ 图像分析软件测量肾小球平均截面积（MGA），公式计算肾小球平均体积（MGV=1．25?（MGA）3/2）。（2）免疫组织化学染色：常规脱腊，3%H
2
O
2
处理，微波修复抗原后滴加封闭液和兔抗大鼠HO-1多克隆抗体、兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体。次日加生化素，山羊抗兔IG在37?孵育30min，加SABC工作液，DAB显色，苏木精复染。阴性对照组以PBS 缓冲液代替一抗。每个标本随机抽取10个高倍视野，计算阳性细胞的百分比。
1．3．4肾组织HO-1、TGF-β
1
核酸表达以ＲT-
PCＲ检测肾组织HO-1、TGF-β
1
核酸表达。取冻存各组大鼠肾皮质组织100mg，用Trizol抽取总ＲNA，紫外分光光度计测定总ＲNA浓度及纯度（A260/A280值在1．8 2．0之间）。取3μg总ＲNA，按照M-MLVＲeverse Transcriptuse试剂盒说明书进行逆转录合成cDNA，取适量cDNA在PCＲ扩增仪上进行扩增，总反应体积25μl。PUBMED的gene中查得目的基因和内参照基因，由上海生工生物工程公司合成。TGF-β1：上游引物5-'TGA ACC AAG GAG ACG GAA TA-3'，下游引物5-'CAC GCA GCA CGC TGA TG-3'；退火温度58．4?，扩增片段长度449
0321J Bengbu Med Coll，October2013，Vol．38，No．10
bp。HO-1：上游引物5-'TGG AAG AGG AGA TAG AGC GAA A-3'，下游引物5-'GTA GTG CTG TGT GGC TGG TGT-3'；退火温度54．2?，扩增片段长度161bp。内参β-actin：上游引物5-'CTC TGG TCG TAC CAC TGG CAT TG-3'，下游引物5-'CCT GCT TGC TGA TCC ACA TCT GC-3'；退火温度60．8?，目的片段长度650bp。扩增条件为94?，预变性3min，95?变性50s，63．6?退火50s，72?延伸60s，经30个循环后72?再延伸10min。取PCＲ产物5μl与上样缓冲液充分混匀后，经2%琼脂糖凝胶电泳，紫外线透射检测仪上，紫外线灯下照相，通过VDS450型凝胶成像系统扫描并进行图像分析。再用GIS软件进行吸光度扫描，用目的基因的吸光度与内参吸光度的比值代表目的基因的相对表达含量。
1．4统计学方法采用方差分析和q检验。
2结果
2．1大鼠生长情况DN组大鼠均有不同程度的摄食减少，精神不振，活动迟缓，尿量增多，体质量减轻，体毛杂乱无光泽。PB干预后以上情况有所改善。实验结束PB组大鼠体质量（334．74?31．46）g 与DN组（316．68?43．60）g及NC组（523．20?21．54）g，差异均有统计学意义（F=123．47，P＜0．01，MS
组内
=1200．925）。
2．2生化指标比较与NC组比较，实验结束时，DN组和PB组随机血糖、TC、LDL、SCr、BUN和24h 尿蛋白、尿NAG明显升高，HDL明显降低（P＜
0．01）；PB组的TC、LDL、SCr、BUN和24h尿蛋白、尿NAG均较DN组降低（P＜0．05 P＜0．01）；PB 组HDL较DN组明显升高（P＜0．01）；但PB组血糖和DN组差异无统计学意义（P＞0．05）（见表1、2）。
2．3肾组织病理改变光镜下，NC组未见肾小球、肾小管及间质病变；DN组多数肾小球面积和体积均较NC组明显增大（P＜0．01），肾小球基底膜增厚，肾小球系膜细胞增生、系膜区增宽，部分出现局灶肾小球硬化性改变；部分肾小管上皮细胞浑浊、空泡变性，管腔变窄；PB组病变较DN组减轻，部分肾小球毛细血管襻基膜增厚，肾间质炎性细胞浸润及纤维化减少（P＜0．01）（见表3）。免疫组织化学：TGF-β
1
免疫组织化学结果显示，NC组肾小管上皮细胞细胞质少量褐色颗粒沉积；DN组及PB组大鼠肾小管上皮细胞细胞质褐色颗粒表达增多；PB组表达较DN组减弱。HO-1免疫组织化学结果显示，NC 组肾小管上皮细胞细胞质少量褐色颗粒沉积；DN 组及PB组大鼠肾小管上皮细胞细胞质褐色颗粒表达增多；DN组表达较PB组减弱（见图1 3）。
2．4肾脏组织TGF-β
1
、HO-1的核酸表达DN组和PB组肾组织TGF-β1核酸表达均明显高于NC 组，但PB组低于DN组（P＜0．01）；DN组和PB组肾组织HO-1核酸表达均较NC组显著升高，但PB 组高于DN组（P＜0．01）（见表4及图4）。
表1各组大鼠实验结束生化指标的比较（x?s）
分组n血糖/（mmol/L）TC/（mmol/L）HDL/（mmol/L）LDL/（mmol/L）CＲP/（mg/L）NC组105．80?1．102．01?0．330．99?0．180．58?0．173．39?0．74 DN组1526．05?4．04＊＊10．73?2．83＊＊0．45?0．12＊＊1．12?0．30＊＊9．78?1．05＊＊
PB组1624．28?4．27＊＊4．87?2．68＊＊
##0．76?0．14＊＊
##
0．82?0．14*##6．43?0．78＊＊
##
F—105．6343．9744．3119．05161．81 P—＜0．01＜0．01＜0．01＜0．01＜0．01 MS
组内
—13．4975．8120．0210．0480．776
q检验：与NC组比较*P＜0．05，＊＊P＜0．01；与DN组比较##P＜0．01
表2各组大鼠实验结束肾功能及尿检指标的比较（x?s）
分组n SCr/（μmol/L）BUN/（mmol/L）尿NAG/（u/L）尿蛋白/（mg/d）NC组1030．30?6．114．72?0．9253．18?12．574．10?1．35
DN组1568．07?7．17＊＊31．97?5．74＊＊166．66?30．98＊＊45．19?10．48＊＊
PB组1638．83?6．76＊＊
##16．14?3．59＊＊
##
113．53?13．17＊＊
##
28．81?4．65＊＊
##
F—114．66134．6484．71102．470 P—＜0．01＜0．01＜0．01＜0．01 MS
组内
—45．82117．427459．48549．431 q检验：与NC组比较＊＊P＜0．01；与DN组比较##P＜0．011321
蚌埠医学院学报2013年10月第38卷第10期
表3
各组大鼠肾组织病理变化比较（x ?s ）
分组n 肾小球面积/（?103
μm 2
）肾小球体积/（?105
μm 3
）肾间质纤维化/%NC 组104．26?0．3911．04?1．51
1．62?0．29
DN 组156．14?0．56＊＊19．08?2．55＊＊22．18?2．67＊＊PB 组165．29?0．60＊＊##
15．26?2．61＊＊##15．13?2．54＊＊##
F —40．4634．79245．49P —＜0．01＜0．01＜0．01MS 组内
—
0．294
5．625
5．193
q 检验：与NC 组比较＊＊P ＜0．01；与DN 组比较##P ＜0．01
表4
各组大鼠肾组织TGF-β1、
HO-1核酸表达（x ?s ）分组n TGF-β1/β-actin HO-1/β-actin NC 组100．249?0．0270．247?0．029DN 组150．490?0．028＊＊0．347?0．046＊＊PB 组160．374?0．025＊＊##
0．401?0．024＊＊##
F —248．67960．61P —＜0．01＜0．01MS 组内
—
0．001
0．001
q 检验：与NC 组比较＊＊P ＜0．01；与DN 组比较##P ＜0．
01
3讨论
DN 是糖尿病最常见的慢性并发症之一，已成为
导致终末期肾衰竭的重要原因［8］
。蛋白尿是DN 肾
小球损害的标志，
也是加重肾脏损害的因素［9］
。本研究发现，PB 治疗后，DN 大鼠尿蛋白明显减少，尿
NAG 下降，肾脏病理显示肾小管损伤减轻，肾间质纤维化减轻，说明PB 可以减少蛋白尿，改善肾小管损伤，从而改善肾间质纤维化的进展。
DN 的发病机制尚未完全明了。近年，氧化应激的发病机制，成为DN 进展的中心环节。肾脏是对氧化损伤敏感器官，氧化应激造成肾组织细胞及线粒体DNA 损伤［10］
，产生大量细胞外基质成分，加速肾硬化。活性氧还可刺激足细胞，引起足细胞损伤，
蛋白尿形成［11］
。PB 化学名为4，4'-［（1-甲基亚乙
基）双（硫代）］双［2，6-双（1，1-二甲基乙基）苯酚］
，是目前可用于临床的抗氧化作用最强的人工合成抗
氧化剂；可以降低总胆固醇和低密度脂蛋白，
PB 还2
321J Bengbu Med Coll ，
October 2013，Vol．38，No．10
可诱导HO-1的表达［6，12］，发挥其抑制脂质过氧化作用，进而发挥抗氧化抗炎作用。血红素氧合酶（HO）是血红素降解的起始酶和限速酶，是机体最重要的抗氧化酶；有抗氧化应激、抗凋亡等作用。HO-1是HO的诱导型，是细胞氧化应激过程一个非常敏感的指标。糖尿病时，肾脏组织以糖代谢紊乱为主的多种因素，造成肾组织中活性氧产生过多，HO-1被显著诱导，起到拮抗氧化应激的作用；而HO-1可能通过下调TGF-β1的表达，起到抗纤维化抗炎症反应的作用［13］。TGF-β1是目前发现的最强的促肾间质纤维化的因子；可能通过下列途径促肾间质纤维化［14］：（1）抑制肾小球系膜细胞、上皮细胞及内皮细胞增殖分化。（2）刺激肾小球系膜细胞增生，促进细胞外基质的合成和沉积，参与肾小球硬化的发生发展。（3）损伤足细胞，破坏滤过膜的完整性。（4）在肾小管间质纤维化过程中经smad信号转导通路调节表达肌成纤维细胞表型的基因转录，促发肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化，促肾间质纤维化。Hill-Kapturczak等［15］研究了TGF-β
1
对HO-1mＲNA 和蛋白的影响，用剂量依次增加的TGF-β1刺激人肾小球近端小管上皮细胞4h，HO-1mＲNA呈现明显地、剂量依赖地增加，HO-1蛋白表达也明显增加。单侧输尿管梗阻大鼠肾内HO-1表达和TGF-β1表达也存在相关性［16］。据此，我们推测，PB可以通过干预HO-1途径，达到干预DN氧化应激，进而干预肾间质纤维化的进程。
采用PB干预至12周时，DN大鼠肾小管上皮细胞浑浊、空泡样变和坏死，肾间质炎症细胞浸润；肾组织TGF-β1和HO-1的核酸表达增加，肾间质纤维组织增生，局灶纤维化。PB治疗后，TGF-β1的核酸表达增高趋势被抑制，HO-1核酸表达增加，肾组织纤维化减轻。DN组及PB组肾组织TGF-β1表达较NC组增加；与DN组比较，PB组TGF-β
1
表达下降。DN组及PB组肾脏组织HO-1表达增加；与DN组比较，PB组HO-1表达明显增加；与Hill-Kapturczak［15］等研究结果一致。说明PB作为一种新型抗氧化剂，可以上调DN大鼠肾组织HO-1表达，下调DN大鼠肾组织TGF-β1表达，从而改善肾间质纤维化，但具体作用机制有待进一步探讨。
［参考文献］
［1］DaＲosＲ，AssaloniＲ，Ceriello A．Molecular targets of diabetic vascular complications and potential new drugs［J］．Curr Drug
Targets，2005，6（4）：503－509．
［2］Endo K，Miyashita Y，Sasaki H，et al．Probucol delays progression of diabetic nephropathy［J］．DiabetesＲes Clin Pract，2006，71
（2）：156－163．
［3］Jarmi T，Agarwal A．Heme oxygenase and renal disease［J］．Curr HypertensＲep，2009，11（1）：56－62．
［4］MidwinterＲG，Maghzal GJ，Dennis JM，et al．Succinobucol induces apoptosis in vascular smooth muscle cells［J］．FreeＲadic
Biol Med，2012，52（5）：871－879．
［5］Wu BJ，Kathir K，Witting PK，et al．Antioxidants protect from atherosclerosis by a Heme oxygenase-1pathway that is
independent of free radical scavenging［J］．J Exp Med，2006，203
（4）：1117－1127．
［6］赵水平，王星，洪绍彩，等．普罗布考对动脉粥样硬化兔血红素氧合酶-1表达的影响［J］．中国动脉硬化杂志，2008，16（6）：
440－444．
［7］Zariou A，Aqarwal A．Heme oxygenase-1as a target for TGF-βin kidney disease［J］．Semin Nephrol，2012，32（3）：277－286．［8］曾彩虹．糖尿病肾病肾活检的临床意义及指征［J］．肾脏病与透析肾移植杂志，2011，20（4）：346－347．
［9］徐鹏杰，李航，徐亚兰，等．2型糖尿病并发慢性肾脏病临床病理特点分析［J］．中华肾脏病杂志，2010，26（10）：731－735．［10］Palmeira CM，Ｒolo AP，Berthiaume J，et al．Hyperglycemia decreases mitochondrial function：the regulatory role of
mitochondrial biogenesis［J］．Toxicol Appl Pharmacol，2007，225
（2）：214－220．
［11］Greiber S，Muller B，Daemisch P，et al．Ｒeactive oxygen species alter gene expression in podocytes：induction of granulocyte
macrophage-colony-stimulating factor［J］．J Am Soc Nephrol，
2002，13（1）：86－92．
［12］Deng YM，Wu BJ，Witting PK，et al．Probucol protects against smooth muscle cell proliferation by upregulating heme oxygenase-1
［J］．Circulation，2004，110（13）：1855－1860．
［13］Traylor A，Hock T，Hill-Kapturczak N．Specificity protein1and Smad-dependent regulation of human heme oxygenase-1gene by
transforming growth factor-beta1in renal epithelial cells［J］．Am J
PhysiolＲenal Physiol，2007，293（3）：F885－F894．
［14］SamarakoonＲ，Overstreet JM，Higgins SP，et al．TGF-β1→SMAD/ p53/USF2→PAI-1transcriptional in ureteral obstruction-induced
renal fibrosis［J］．Cell TissueＲes，2012，347（1）：117－128．
3321
蚌埠医学院学报2013年10月第38卷第10期
［收稿日期］2013-09-24
［基金项目］安徽省高校省级自然科学研究项目（KJ2012B210）［作者单位］1．安徽医科大学基础医学院，安徽合肥230032；2．皖
西卫生职业学院基础部，安徽六安237005［作者简介］张磊（1982－），男，讲师．
［通信作者］吴继锋，教授，硕士研究生导师．E-mail ：jifengwu824@yahoo．com．cn
［文章编号］1000-
2200（2013）10-1234-04·基础医学·
胃癌组织中Twist 、
STAT3和E-cad 的表达及其临床意义张
磊1，2，吴继锋1，孙雪竹2，孙景洲
2
［摘要］目的：观察扭曲蛋白（Twist ）、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、上皮钙黏素（E-cad ）在胃癌组织及癌旁组织中的表达，探讨三者与胃癌临床病理参数之间的相关性及三者的表达对判断胃癌预后的意义。方法：采用免疫组织化学方法链霉亲和素－生物素复合物（SABC ）法检测手术切除胃癌组织及癌旁组织标本中的Twist 、STAT3、E-cad 表达，分析其与胃癌患者年龄、
性别、肿瘤的组织学类型、转移及TNM 分期等参数的关系。结果：在胃癌组织中Twist 、STAT3、E-cad 的阳性率分别为57．3%、64．7%、12．0%，癌旁组织中的阳性率分别为17．3%、10．8%和68．0%，差异均有统计学意义（P ＜0．01）。Twist 的表达在肿瘤远处转移、
淋巴结转移、TNM 分期和浸润深度间差异均有统计学意义（P ＜0．05 P ＜0．01）；STAT3的表达在肿瘤淋巴结转移、浸润深度及TNM 分期间差异均有统计学意义（P ＜0．05 P ＜0．01）。Twist 、STAT3表达与E-cad 表达均呈明显负相关关系（P ＜0．01）。结论：胃癌组织中Twist 、
SATA3表达与肿瘤的生物学特征均有一定关系，SATA3的激活可能会增强Twist 、E-cad 的表达，检测Twist 、STAT3、E-cad 对预测肿瘤侵袭转移、判断预后具有一定价值。［关键词］胃肿瘤；信号转导和转录激活因子3；扭曲蛋白；上皮间质转化［中国图书资料分类法分类号］Ｒ735．2
［文献标志码］A
Clinical significance and expressions of Twist ，STAT3and E-cad in gastric cancer
ZHANG Lei 1，2
，WU Ji-feng 1，SUN Xue-zhu 2，SUN Jing-zhou 2
（1．Basic Medical College of Anhui Medical University ，Hefei Anhui 230032；
2．Department of Basic ，West Anhui Health Vocational College ，Lu'an Anhui 237005，China ）
［Abstract ］Objective ：To investigate the expressions of Twist protein （Twist ），signal transducer and activator of transcription 3（STAT3），epithelial mesenchymal transition related factor （E-cad ）in gastric cancer tissue and peritumoral tissue ，analyze their correlations and explore their significance in judging the prognosis of patients with gastric cancer．Methods ：The expressions of Twist ，STAT3and E-cad in gastric cancer tissue and peritumoral tissue were detected by immunohistochemistry streptavidin-biotin complex （SABC ），their relationships with age ，gender ，histological type of tumor ，metastasis and TNM stage of patient were analysed．Ｒesults ：The positive rate of Twist ，STAT3and E-cad in gastric cancer tissue were 57．3%，64．7%and 12．0%，respectively．The positive rate of Twist ，STAT3and E-cad in peritumoral tissue were 17．3%，10．8%and 68．0%，the expression differences of which were not statistical significance （P ＜0．01）．The differences of Twist expression in different tumor metastasis ，lymph node metastasis ，TNM staging and depth of invasion were statistical significance （P ＜0．05－P ＜0．01）．There was statistically significant in the expression of STAT3between node metastasis ，
depth of invasion and TNM stage （P ＜0．05－P ＜0．01）．They were negative correlation in Twist and STAT3expressions and E-cad expression （P ＜0．01）．Conclusions ：The expressions of Twist and SATA in gastric cancer tissue have a certain relationship with tumor biological characteristics ，the expression of SATA3may activate the expression of Twist and E-cad．The detection of Twist ，
STAT3and E-cad can predict the tumor invasion ，metastasis and prognosis of patient．［Key words ］gastric carcinoma ；signal transducers and activators of transcription 3；twist protein ；epithelial mesenchymal transition
上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition ，
EMT ）是指上皮细胞的形态转化，即获得间充质细胞表型和迁移能力，在胚胎发育早期较常见。研究
［1］
表明，
EMT 与多种肿瘤的发生及转移密切相关。EMT 相关蛋白上皮钙黏素（E-cad ）在胃癌组织中低表达，而神经钙黏素（N-cad ）往往高表达。櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚
扭曲蛋
［15］Hill-Kapturczak N ，Truong L ，Thamilselvan V ，et al ．Smad7-dependent regulation of heme oxygenase-1by transforming growth factor-βin human renal epithelial cells ［J ］．J Biol Chem ，2000，275（52）：40904－40909．
［16］Mark A ，Hock T ，Kapturczak MH ，et al ．Induction of heme
oxygenase-1modulates the profibrotic effects of transforming growth factor-beta in human renal tubular epitheltal cells ［J ］．Cell Mol Biol ，2005，51（4）：357－362．
(本文编辑章新生)
4
321J Bengbu Med Coll ，
October 2013，Vol．38，No．10