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神经元标记物
1. Patima Tanapat Ph. D.
patima dot tanapat at gmail dot com
Princeton, New Jersey, United States
译者
1. 王秀英博士
mary at labome dot com
美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司(Synatom Research)
DOI
日期
更新: 2013-10-19; 原始版: 2013-06-05
引用
实验材料和方法2013;3:196
简介
神经元是大脑的基本信号组件。因此，一切尝试从整体上了解大脑是如何工作的基本组成部分都要从研究功能不同的各类型神经细胞开始。为此，免疫组化标记已逐渐成为神经科学家最有价值的工具之一。利用各种细胞组分的抗体，研究者能够识别表达神经细胞表型的细胞，而且，就其形态特征和特定蛋白表达收集信息。
在下面的章节中，将讨论可以区分不同神经元细胞类型的方法。此外，由于能够将神经元和其他类型脑细胞区分开来非常重要，也会简要描述这些其他类型细胞。最后，免疫组织化学作为一种工具用于检验神经元群也会有讨论，重点介绍最常用的标记，以及在选择一个标记为一个特定的研究对象时一些关键的考虑因素。
大脑的细胞
神经元
神经元由四个不同形态的部分构成：细胞体（躯干）、树突、轴突和突触前末梢。这些高度特化的细胞结构使它们能够传播电信号或动作电位，是神经元之间通信的基础。细胞体是细胞代谢的中心。它包含含有细胞DNA的细胞核和其他细胞器。从细胞体延伸出两种突起。第一种类型，称为树突，接收传入的信号，而第二种类型，轴突，输出传出的信号。通常情况下，神经元有多个树突。每个树突反过来又都可以包含成千上万的棘状突起，是从其他神经元的轴突输入信号的节点。（应该指出的是轴突也可能突触于胞体或轴突上，尽管这种现象并不常见。）轴突从细胞体上叫做轴突丘的区域延伸出来，负责动作电位的传播。它最终会分为几个分支，终止于突触。尽管突触被说成是神经元之间的接触点，但细胞之间并不互相接触，而是由称为突触间隙的结构分隔开来。在每个轴突分支的末端是突触前末端，其中包含充满神经递质的囊泡。当一个动作电位到达终端，囊泡的内容物被释放到突触间隙从而与突触后细胞的进行化学通讯。
神经胶质细胞
除了神经元，大脑也包含另一类称为神经胶质细胞的细胞。神经胶质细胞为神经元提供结构和代谢支持。它们大致可分为胶质细胞和小胶质细胞两大类。胶质细胞在生理条件下存在于发育和成年阶段。胶质细胞有四大类：星形胶质细胞、少突胶质细胞、室管膜细胞、放射状胶质细胞。星形胶质细胞支持和滋养脑细胞。它们保持了细胞外的离子平衡，为血管内皮细胞提供生化支持，并协助维持血-脑屏障。少突胶质细胞负责生成和长期维护，髓鞘能够隔
离神经轴突和帮助动作电位的传播。室管膜细胞形成心室上皮层，包含脑脊液的空腔，以及脊髓中央管。它们也形成围绕脉络丛的上皮细胞层，脉络丛也产生脑脊液，作为血液和中枢神经系统之间的界面。放射状胶质细胞，其特点是有长的棘状突起，能协助新的神经细胞的迁移，在中枢神经系统的类型和区域特异性分化中发挥作用，并已被确定为生成神经元和神经胶质细胞的前体[1][2]。
小胶质细胞最初来源于骨髓髓系祖细胞，在介导基于细胞的中枢神经系统的免疫功能中发挥了关键作用，包括细胞表面抗原呈现，通过分泌各种细胞因子促进炎症反应[3]。他们能通过吞噬清除杂质，以及分泌细胞因子改变疾病进展[4]。在发育过程中，小胶质细胞被认为在突触重塑、细胞凋亡、吞噬细胞清除和血管生成中发挥作用[5]。在成年后，小胶质细胞被发现参与调控细胞凋亡、突触消除、神经再生、神经监测以及病理条件下重塑中枢神经系统的管脉系统[5][6]。这些观察表明，小胶质细胞对于神经通路的成熟和塑造，以及这些通路调控下的神经活动是至关重要的。按照这个想法，也有人提出小胶质细胞的功能障碍可能是诱导精神和神经系统紊乱的一个原因[4]。
大脑微管脉组织
构成大脑微血管的内皮细胞也与我们讨论的非神经元细胞相关。伴随星形胶质细胞，这些细胞参与形成血-脑屏障（BBB）。血-脑屏障紧密调节离子、分子和细胞在血液和中枢神经系统之间运输，为适当的神经功能以及防止损伤和疾病提供所需的环境。血脑屏障的一个主要作用是防止血液中的有毒物质进入大脑。
鉴定神经细胞的类型
认识到神经家族存在巨大差异的第一个人，是神经生物学的奠基人Santiago Ramon y Cajal。利用高尔基银染法，他观察到了单个神经元高度特异的形态特征。在这样做时，他发现，组成大脑的各种细胞在大小和形状上都有很大差异。而一些神经元如颗粒细胞从一个小胞体的产生呈现出相对简单的过程，其他如小脑浦肯野细胞则是非常绚丽的和复杂的。在Cajal的这一最初发现之后，科学家们已经能够分辨数百种不同的神经细胞类型。然而，仍然缺乏一个统一的分类系统。部分原因在于不同细胞的命名往往在描述精度上各不相同。此外，神经元的类别通常有相互重叠，其结果是，一个特定的细胞类型可以有几个不同的名字。不过，一般情况下神经元可根据一些标准，例如形态、突起模式、电生理特性和生化特性来进行分类。
根据形态分类的实例（例如大小，胞体形状和树突状分支型态），可以说是在科学文献中发现的最常见的。虽然形态提供了一个明显的和易于使用的手段，其应用的更与次原理在于它的功能意义。由于一个神经元的形状是由它接收的输入信号和输出的目标共同决定的，神经元结构是细胞潜在联系的直接反映，因此也是其功能的直接反映。举个例子来说，攀登纤维的形状和小脑颗粒细胞轴突的分支。这里，轴突的形状是由连接浦肯野细胞树突的联系决定的，轴突分支同单一的树突存在大量的联系。同样，不同的形态所揭示的信息也可通过研究典型的锥体细胞来验证。椎体细胞的特点是一个大的、三角状细胞体加上各种不同的锥尖和基底树突。这种组织结构暗示其功能是将不同细胞层的输入信号整合为一个集成的消息并传达到另一个大脑区域[7]。
用到的另一个重要的结构区分是基于一个神经元的轴突预测。那些从分离的神经群延伸出轴突从而连接的细胞成为突出或主要神经元，而只在核内有突触连接的细胞被成为中间神经元，或固有神经元。应该强调的是，这些术语是基于轴突突起，而不是根据输入信号的来源来命名的。因此，投射神经元可能只接收本地信号，相反固有神经元可接收从其他神经核传来的输入信号。鉴定这些形态的连接很重要，因为它提供了认识这些细胞功能的内在信息处理过程的基础。实际上，这一重要概念成为近年来整理大脑内神经联系网络图工作的基础，该网络图被称为的“连接组”。
神经细胞类型也可通过其电生理特性得到区分。例如，新皮层神经元，其动作电位反应模式表现出显着的差异，通常为规则峰（RS），快峰（FS）以及大爆发（IB）的细胞。RS细胞在保持刺激上适应极强，FS细胞维持高激活频率与很少或根本没有适应，而IB细胞能单独或重复生成集群尖峰[8][9]。这些细胞放电模式的多样性是有意义的，它表明这些细胞对刺激的响应可被调节。
关于迄今已有的区分标准，免疫组化可被用于提供关于细胞形态，以及在一定程度上提供的形态提供不同的神经元群的轴突突起的信息。然而，该方法在神经元表型分类上的真正能力在于它可以根据生化特性帮助区分细胞。事实上，这将在以下各节中所述，通过关联与一个特定的神经递质系统或一个特定的基因或蛋白质的表达来对神经元进行识别也是一个经常采用的策略。
免疫组化用于鉴定神经细胞类型
虽然高尔基染色法仍然是鉴定神经细胞类型一个有用的工具，但与之相关的技术仍有一定的弊端。其中最大的弊端是，即使实验成功了，染色结果也倾向于是可变的。虽然可以实现完全浸渍树突树，轴突分支和末端分支很难完全标记到[10]。此外，由于一些未知原因，浸渍作用仅能在1-10％的细胞中实现[11][12]。而这方面恰恰造成了Cajal的最初发现神经元在实际中是独立的这一发现，它使得很难针对特定的细胞，要满足样本大小要求，需要的组织的量也增加了。
伴随着1970年代出现的免疫组化技术用于鉴定细胞类型，研究人员能够规避一些老方法，如高尔基染色相关的技术问题。到那个时候，研究人员已经开始使用免疫组化来确定神经元含有单胺合成酶酪氨酸羟化酶（TH），多巴胺β-羟化酶（DBH）以及色氨酸羟化酶（TRH）[13][14][14]。然而，在运用神经元特异性烯醇化酶（NSE）和非神经元特异性烯醇化酶（NNE）分别为神经元和神经胶质细胞特异标记的报道出来后，免疫组化用来鉴定细胞的技术才开始真正蓬勃发展起来[15]。紧随其后的是一些不同神经元类型中特异性表达的多种不同抗原标记，如NGF-介导的大外部糖蛋白（NILE-GF）[16]，胆碱乙酰基转移酶[17]，小白蛋白[18]，神经丝蛋白[19][20]作为了标记物。虽然这些并没有全部继续用于这方面的研究中，但方法学上的技术的影响仍然是重要的。
通常，我们用到神经元抗原的分子性质和功能特性在发现它们的时候是未知的。然而，它们仍然有用的，因为它们能够在特定的神经元群中可靠表达。此外，采用免疫组化的优势也很显着。免疫组化技术上是非常容易实现的，组合免疫组化还能够用于检测与神经元标记共定位的多种其他功能的标记分子。
最近，用于阐明神经元特性的分子生物学方法得到发展。利用转录调节子和位点特异性重组酶来标记特定的神经元群体的方法已经能够被研究者使用了[21]。然而，免疫组化仍是研究神经细胞类型的主要方法，因为它相对低的成本，只需要很少的专门设备，用到的试剂也是被广泛使用的。此外，常规显微方法可被用来搜集数据，并根据可视化方法，免疫标记组织可被保存以供将来参考。
目前，研究人员在研究中有大量的免疫组化标记物来帮助区分大脑中细胞的表型。在以下部分中，将要讨论一些最常用的用来鉴定神经元和神经胶质细胞的标记物。
图 1.成年大鼠C6神经元用NSE（绿色）免疫标记，以及用DAPI（蓝色）复染图。比例尺= 20 μm. 源自[72]图5A.
神经细胞标记物
神经元特异性烯醇化酶(NSE)
NSE, 也简称为γ-烯醇或烯醇化酶2，是由成熟神经元和神经元起源细胞持续表达的胞质蛋白（图1）。它是一种脑特异性的糖酵解酶，在细胞内能量代谢中起着重要的作用[22]。在发育过程中，NSE的水平非常低，但在神经元形态和功能成熟过程中增加[23]。
虽然NSE作为神经元标记物得到广泛使用，但重要的是需要注意，它已被证明仅在特定条件下在神经胶质细胞中表达。具体来说，在培养的少突胶质细胞中检测到的NSE活性水平、蛋白和mRNA水平与培养的神经细胞相似[24]。少突胶质细胞分化过程中其表达增加，细胞成熟后受到抑制。在病理情况下，神经胶质肿瘤和反应性胶质细胞中也能检测到NSE [25]。
神经核(NeuN)
1992年，Mullen等人报道了能够识别脊椎动物神经元特异的核蛋白单克隆抗体的产生（图2）[26]。该蛋白被称为神经核（NeuN），能够在成年小鼠中枢和外周神经系统的多数神经细胞类型中检测到。NeuN的出现暂时与神经细胞退出细胞周期和/或终末分化开始一致。该蛋白质在胚胎和成年神经细胞中，除小脑浦肯野细胞、嗅球僧帽细胞、视网膜感光细胞、黑质中的多巴胺能神经元外的其他细胞中都能够检测到[27][28]。
图 2.小鼠大脑新皮层用NeuN标记的神经元的例子. 源自[73]图3B.
尽管NeuN的免疫组化检测已经被广泛使用，其功能知道最近才被了解清楚。研究人员现在已经能够将NeuN鉴定为Fox-3，Fox-3蛋白质参与调控的mRNA剪接[29]。由于Fox-3由神经系统特异性表达，人们发现它在调节神经细胞分化和神经系统发育中发挥作用[29]。微管相关蛋白 2 (MAP-2)
MAP-2是一个神经元特异性的细胞骨架蛋白，能够作为神经细胞的表型的标记物[30]。它在脊椎动物胚胎和成年神经系统的组织中表达。在神经前体中表达较弱，但在随后显著提高（大约在神经元特异性微管蛋白亚型βIII一天后表达）[31]。在大鼠的研究已表明MAP-2至少包括2a、2b和2c三个亚型。MAP-2c似乎在早期发育过程中特异性表达，只在轴突中表达。MAP-2c在成熟过程中被MAP2a所替代。与此相反，MAP2b被发现整个生命过程中都有表达。
MAP-2蛋白被认为参与微管组装，通过与中间纤丝和其他微管的交联作用稳定微管生长。具体来说，它可能在神经发育过程中决定和稳定树突形状中发挥作用，因此只有在树突轴心
中能够观察到[32]。在一般情况下，它的表达似乎局限在神经元和反应性星形胶质细胞中[33]。
?III 微管蛋白(TuJ1)
TuJ1是一种被认为参与神经元细胞类型特异性分化的微管蛋白[34]。微管蛋白是微管的主要结构，是细胞骨架的组成成分，在细胞结构的维护，有丝分裂，减数分裂，细胞内的运输等等方面发挥作用。因此，免疫组化染色发现TuJ1存在于未成熟的神经元胞体，树突，轴突和轴突末端。使用免疫组化检测TuJ1的显着优点之一是其展现轴突和末端细节的能力（图3）。事实上，已经发现它在检测细胞骨架元件受损后的变化中是有用的[35]。虽然某种β-微管蛋白的结构在胶质细胞中也有发现，但它却并不能被TuJ1抗体识别[35]。
图 3.标记细胞在成年小鼠齿状回区用双肾上腺皮质激素抗体标记的细胞。源自[74]图5.
双肾上腺皮质激素(DCX)
DCX在迁移神经元中广泛表达，在神经元发育早起也能观察到[36]。它是一种微管相关蛋白，在有丝分裂后的神经元表达，在细胞前缘的神经元突起生长中可能发挥作用[37]。与这一作用相关，DCX的免疫染色主要出现在神经突起的极端以及生长核的近侧区，而在尖端并不表达。
临床上重要的神经细胞标记物
值得注意的是，有一些神经细胞表型的标志物能够引起人们特别的兴趣，因为它们可用在了解临床疾病的病理上。其中两个是胆碱乙酰基转移酶和酪氨酸羟化酶。
胆碱乙酰转移酶(ChAT)
ChAT是催化乙酰胆碱合成的酶。因为它在绝大多数的胆碱能神经元中表达，ChAT的免疫反应性经常被用来作为在各种神经退行性疾病中认知能力下降的标志物。它的检测已经被用于研究阿尔茨海默氏病（AD）的典型神经性变化中，这是与基底前脑胆碱能神经元的大量损失相关的疾病。为了说明问题，验尸报告研究已经利用ChAT免疫组化揭示认知功能受损患者的高级额叶皮层和杏仁核的纤丝密度下降和轴突静脉瘤中[38][39]。此外，在动物模型中，免疫组化已被用于评价改变内侧隔核和布罗卡区域的ChAT阳性神经元数量的实验操作能力[40][41]。在扣带皮层、机动区和感觉皮质、基底前脑等区域，免疫标记也被用于评价ChAT纤维网的胆碱能神经元损坏和整体形态的变化[42][43]。
酪氨酸羟化酶(TH)
同样，酶TH免疫组化一直是研究帕金森氏病的一个重要工具，帕金森氏病是伴有黑质多巴胺能细胞损失的运动障碍疾病。TH能够限制多巴胺（以及肾上腺素和去甲肾上腺素）的合成速度。在验尸研究中，TH免疫组化已被用来量化帕金森氏症患者的多巴胺细胞损失
[44]。为了研究这种类型的损失能否通过干预得到缓解，TH免疫组化已作为检测多种帕金森氏病的动物模型研究中保护作用的一种手段[45][46]。
更多神经元标记物
除了上述的标记物外，还有许多其他神经细胞相关的标记物也可以购买的到（表1）。
标记物定位功能相关神经元
唾液酸神经细胞黏附分子(PSA-NCAM) 细胞膜
神经细胞粘附分子在调节细胞形态，发
育过程中细胞生长迁移中发挥作用；被
认为参与成年后激活的突触塑造[47]
神经分化1 (NeuroD
or Beta2) 细胞质和细胞
核
在脑中部分区域表达的转录因子；参与
神经系统分化；是后生微神经正确分化
所必需的，其缺失会导致细胞死亡
[48]
在不成熟的神经元中表达
Tau 轴突的远端部
分，在树突中
不存在*
高度可溶的微管相关蛋白，相比非神经
元细胞大多存在于神经元中[49];调节
细胞骨架的稳定性，提供轴突的适应性
[50]
在中枢神经系统中丰富；
在中枢神经系统的星形胶
质细胞和少突细胞中也少
量表达
钙结合蛋白-D28k 细胞体、树突
和棘状突起；
细胞质基质
钙结合蛋白;在钙快速缓冲中发挥作用
[51]
浦肯野神经元，神经内分
泌细胞中表达
钙网膜蛋白细胞质基质29kDa的蛋白，与钙结合蛋白-D28存
在58%同源性；在脊椎动物中枢神经
系统中表达的第一个钙结合蛋白[52]
广泛分布于不同的神经元
群体，包括皮质中间神经
元
神经丝蛋白(NFP) 轴突神经元细胞骨架蛋白；中间纤维；为轴
突提供结构支持并调节轴突的直径
[53]; [22]
广泛存在与不同的神经元
群体；在一些神经元中含
量相对较低
表1. 其他常用中枢神经系统免疫组化标记物。
神经胶质细胞标记物
胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
毫无疑问，最广泛使用的星形胶质细胞的标记之一是GFAP（图4）。GFAP是一种中间丝在细胞中形成网络，为细胞提供支持和力量。GFAP被认为可控制它们的形状、运动和功能。在受伤的情况下（创伤或疾病），星形胶质细胞迅速增加GFAP表达[54]。最近，一些GFAP亚型已经确定[55]，包括GFAPδ，它在增生性放射状胶质细胞以及成年后的神经干细胞中表达[56]。
图 4.大鼠海马体中用GFAP标记的细胞比例尺= 15 μm. 源自[75]图6D1.
S100β
S100β蛋白是一种由部分包围血管的成熟星形胶质细胞以及NG2-表达细胞表达的蛋白质，被认为是少突胶质细胞和星形胶质细胞的亚群的前体[57][58]。S100β参与许多不同的功能，包括突起延长，星形胶质细胞增生，轴突增殖，抑制微管组装[59][60]。此外，S100β蛋白已经被发现在发育过程中可作为神经营养因子，会在成年后的损伤中表达量升高[59]。波形蛋白
中间丝波形蛋白是星形胶质细胞细胞骨架的组成部分。它也被放射状神经胶质细胞表达，在发育过程中起着重要的作用。更具体地说，它被认为通过磷酸化机制组织附着，迁移和细胞信号通路相关的关键蛋白[61]。在的损伤的条件下，波形蛋白参与胶质细胞的激活[62]，并与反应性星形胶质细胞迁移近端局灶性损伤的部位相关[63]。在一般情况下，波形蛋白已用作神经胶质细胞的可靠标记。然而，应该指出的是，也有报道其在发育期间和神经元损害的条件下也由表达[64]。
2'，3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)
CNPase是一种在中枢和外周神经系统中高水平存在的酶。它几乎只存在于少突胶质细胞（和雪旺细胞）[65]，被认为对中枢神经系统的髓鞘形成很重要[66]。CNPase出现在少突胶质细胞发育早起，与许多其他髓鞘蛋白相比，能够成年动物的少突胶质细胞中持续表达[67]。膜结合的蛋白可以将微管蛋白连接到膜上，也可调节胞质微管的分布[68]。
微血管标记物
内皮屏障抗原(EBA)
在一般情况下，形态特征能将微脉管内皮细胞分开。然而，微脉管系统的标记物EBA明确建立了对这些细胞鉴定的标记。与脉管系统其他标志物不同的是，EBA是正常的中枢神经系统微血管的免疫组织化学标志物，即它选择性地在神经系统中表达。蛋白质本身位于微血管内皮细胞的质膜中。在创伤性脑损伤以及表达由于血脑屏障破坏导致血浆蛋白漏出的情况下，EBA的表达量显着减少。目前，EBA在血-脑屏障功能中的作用尚不完全清楚。然而，研究表明，在大鼠中EBA免疫中和导致的血脑屏障破坏，表明了它在保持完整的血脑屏障中的重要性[69]。
选择一个合适的免疫组化标记物
适当的神经元标记物的选择取决于某一特定的研究目标。如果首要目标是建立一个神经细胞的表型，可用到如NEUN和MAP-2标记。对这些标记的抗体已被广泛使用，其标记特性和分布特征已经得到了很好的研究[70][31][26][29]。虽然这两个标记可用于需要评估神经元总数或神经元密度的研究中，但NeuN往往更倾向于是用于此目的的选择标记。这可能是由于其紧凑的核染色模式，相比分散的树突标记MAP-2，这可能更有利于足够量的数据的收集。此外，由于细胞计数的应用，由紧凑模式带来的高对比度（即信噪比）也是有帮助的。
标记物蛋白序列
号基因序列
号
文章
数
前三大供应商
NSE P091042026 11 Dako (3), Life Technologies Corporation (2), Thermo Scientific Pierce Products (1)
NeuN A6NFN3146713 8 EMD Millipore (7), Dako (1)
MAP2 P111374133 48 Sigma-Aldrich (15), EMD Millipore (11), BD Biosciences (3) Tuj1 Q1301510962 7 Covance (4), EMD Millipore (1), Sigma-Aldrich (1) DCX O436021641 6 Santa Cruz Biotechnology (5), EMD Millipore (1) GFAP P141362670 85 Dako (35), Sigma-Aldrich (19), EMD Millipore (11)
S100beta P042716285 20 Dako (10), Life Technologies Corporation (2), Sigma-Aldrich
(2)
波形蛋白P086707431 71 Dako (23), Sigma-Aldrich (13), Santa Cruz Biotechnology
(4)
CNPase P095431267 9 Sigma-Aldrich (2), Abcam (1), Thermo Scientific Pierce
Products (1)
表2. 在10,113篇来邦网评估的文章中，用到神经元和神经胶质细胞的免疫组化标记物的文章数(num)。有时，一项研究可能涉及其他目标，需要满足额外的标记要求。例如，根据某一特定的神经递质对神经元作进一步区分时，神经递质受体或神经递质相关酶的抗体就可能被使用到。许多也是可用的，其中包括一些标记谷氨酸能的，GABA能的，胆碱能的或者血清胺神经元。在其他实例中，某一兼容免疫组织化学标记或其他方法的标记物可能是必要的。而这种情况在神经再生研究中经常出现，神经再生研究通常涉及联合标记细胞检测细胞增殖，如溴脱氧尿苷或氚标记胸苷，以及大脑区域的神经元标记。此外，根据细胞分裂的阶段，这些研究一般需要那种在细胞周期中某一特定时间段表达的标记。因为蛋白的表达依赖于细胞分化的阶段，标记的选择将显着影响需鉴定的新神经元数量。在新生细胞分化比例在组间变化的情况下，可能会用到一系列标记物来检测神经元在分化的不同阶段之间的差异。
除了建立神经细胞的表型，免疫组织化学标志物可能也揭示了有关神经元的形态特征的信息。神经元特异性的抗体可用于揭示细胞结构。然而，标记是由靶蛋白在细胞内的分布决定的，在细胞核，胞体，树突和轴突中会有所不同。因此，可以获取的信息依赖于目标蛋白的定位。先前的研究报道了使用抗一种定位于整个树突树神经纤丝的抗体，该抗体进一步证实了树突状分支的变化[71]。这种方法有关的一个有趣发展是泛神经标记，其中包括了多种标记的组合，能够一次性的使神经元的整个细胞结构呈现出来。
技术考虑
用于免疫标记分析的显微镜的类型可能在一定程度上决定不同标记物的可行性。亮视野显微镜的优点是设置简单，对大多数研究者来说也很方便。此外，免疫标记在亮视野显微镜的组织处理是相对稳定的，在数据收集过程中不会淬灭。然而，亮视野显微镜相对于其他显微方法在分辨率方面存在不足，对同一平面而不仅仅是重叠的样品不能有效区分。因此，在使用这种方法时，共标记的标记物需要定位于细胞的不同区域才行。
一般来说，免疫组化标记物建立共标记最好是用荧光显微镜来完成。除了允许在XY平面上共标记的鉴定为，这种类型的显微镜还能够生成连续的图像实现YZ平面上共标记唔的鉴定（图5）。荧光标记最显着的缺点是它不是永久标记的。长时间查看组织样品会导致荧光光漂白和褪色。同样，每通过一次共聚焦激光扫描都会导致漂白作用，因此相同的视野只能制造有限的扫描断面。幸运的是，用最新一代的荧光染料，这已变的不是问题了。事实上，一些与强荧光染料如Alexa-488和Alexa-555共轭的神经元标记物的抗体也能够获得了。
[放大]
图 5.成年大鼠大脑中用巢蛋白（绿色）和βIII-微管蛋白（红色）双标记的细胞共聚焦图像。源自[76]图6A.
另一个需要考虑的重要因素是实验组织保存和进行分析处理的方式。根据组织标本是否被石蜡包埋和用于保存的化学固定剂的不同的，某些抗体会产生更有效的标记。供应商有时会提供针对相同抗原的不同抗体，这些抗体在某一特定实验中的表现可能会大相径庭。此外，研究人员也可以采用一系列的策略提高信号的信噪比，包括使用血清阻断非特异性结合或利用过氧化氢淬灭内源过氧化物酶。组织固定中用福尔马林或其他醛会导致蛋白质交联，这样抗原位点被屏蔽，造成阴性或弱免疫标记。打破这些交联的抗原修复技术可以使用盐酸或甲酸，热，蛋白水解酶（蛋白酶K，胰蛋白酶，胃蛋白酶，链霉蛋白酶，蛋白酶），或去污剂（SDS，Triton-X）。
虽然将上述因素考虑在内可以促进免疫标记实验的成功实施，但这并不能取代在给定研究条件下重新验证抗体特异性的需要。一种可能的策略是将免疫标记的数据与目标蛋白的mRNA原位杂交获得的数据进行比较。考虑到mRNA存在于细胞体内，但目标蛋白可能会定位于细胞其他地方，因此在这种方法中，验证的目标只能被限定为在同一细胞中对共标记的验证。除此之外，对一种蛋白质不同抗原决定簇的抗体标记也可以用来验证抗体的特异性。但是，证明特异性的最权威手段依然是在基因突变的动物模型中缺少标记，原本用于产生假定抗原的基因被敲除了（全局性或者组织特异性的方式均可）。
多年来市售抗体的数量不断增加，研究者已经不再需要自己开发和验证抗体了。尽管如此，应该牢记的是抗体在高浓度或含有复杂的蛋白质混合物（如脑部分的特征）的条件下使用时，可能会与非靶抗原产生交叉反应。最终，无论抗体如何广泛使用特性多良好，对抗体进行验证的任务终将属于研究者本人。
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免疫组化常用标记物 免疫组化常用标记物 一、常用标志物 1. CD15(LeuM1)---（阳性部位：细胞膜）。是一种由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原，又称半抗原χ，是粒/单核细胞相关抗原。免疫组织化学表达：成熟粒细胞、激活的淋巴细胞（主要是T淋巴细胞）、R-S细胞、大多数腺癌等。 2. 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）(CD66e)---（阳性部位：细胞膜/浆）。癌胚抗原是表达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白，分子量为180kDa。存于某些恶性肿瘤组织尤其是内胚层来源发肿瘤中，大多数胃肠道（包括胰腺）和肺腺癌均有表达，少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。CEA主要用于标记上皮性肿瘤，尤其是腺上皮来源的腺癌。 3.嗜铬素A（chromogranin A，CgA）---（阳性部位：细胞浆）。嗜铬素是位于神经分泌颗粒内的酸性糖蛋白家族，是一组可溶性酸性蛋白，分子量为76～1 20 kDa，分布广泛。含量最丰富的是嗜铬素A，另两个是嗜铬素B和嗜铬素C。几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞的分泌颗粒中，也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞。此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端的片段，而不与氨基末端的片段反应，主要用于标记神经内分泌细胞及其来源的肿瘤。对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性。 4.细胞角蛋白（cytokeratin pan，广谱CK）--- AE1/ AE3（阳性部位：细胞浆）。此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白（Ⅰ型/低分子量）和碱性细胞角蛋白（Ⅱ型/高分子量）。用于标记上皮及上皮来源的肿瘤，特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义。 5.细胞角蛋白5/6（cytokeratin 5/6，CK5/6）---（阳性部位：细胞浆）。在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。因此，可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。支气管上皮基底细胞、间皮；鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。大多数腺癌为阴性。 6. 细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）---（阳性部位：细胞浆）。CK7是分子量为54 kDa的一种碱性细胞角蛋白，存在于大多数正常组织的腺上皮和移行上皮细胞中，一般非上皮来源的细胞无表达。在卵巢、乳腺和肺的腺癌呈阳性反应，而胃肠道的腺癌阴性。 7. 细胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）---（阳性部位：细胞浆）。CK20（46kDa）存在于正常的胃肠道上皮、移行上皮、Merkel细胞及其来源的肿瘤，而乳腺癌、肺癌和神经内分泌肿瘤不表达。CK7positive CK7 negative CK20 positive uninformative colorectum CK20 negative lunguninformative 8. 细胞角蛋白（高分子量）（cytokeratin，HMW）---（阳性部位：细胞浆）。高分子量细胞角蛋白抗体（34βE12）可以识别68kDa、58kDa、56.5kDa和50kD a的细胞角蛋白。
常见肿瘤标记物意义： 1、甲胎蛋白（AFP）AFP是胚胎期肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白，在正常成人血循环中含量极微＜20μg/L。AFP是诊断原发性肝癌的最佳标志物，诊断阳性率为60%～70%。血清AFP＞400μg/L持续4周，或200～400μg/L持续8周者，结合影像检查，可作出原发性肝癌的诊断。急慢性肝炎，肝硬化患者血清中AFP浓度可有不同程度升高，其水平常＜300ug/L。生殖胚胎性肿瘤（睾丸癌，畸胎瘤）可见AFP含量升高。 2、癌胚抗原（CEA）癌胚抗原是从胎儿及结肠癌组织中发现的一种糖蛋白胚胎抗原，属于广谱性肿瘤标志物。血清CEA正常参考值＜5μg/L。CEA在恶性肿瘤中的阳性率依次为结肠癌（70%）、胃癌（60％）、胰腺癌（55％）、肺癌（50％）、乳腺癌（40％）、卵巢癌（30％）、子宫癌（30%）。部分良性疾病直肠息肉，结肠炎，肝硬化，肺病疾病也有不同程度的CEA水平升高，但升高程度和阳性率较低。CEA属于粘附分子，是多种肿瘤转移复发的重要标志。 3、癌抗原125（CA125）CA125存在于上皮卵巢癌组织和病人血清中，是研究最多的卵巢癌标记物，在早期筛查、诊断、治疗及预后的应用研究均有重要意义。CA125对卵巢上皮癌的敏感性可达约70%。其他非卵巢恶性肿瘤（宫颈癌、宫体癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、结/直肠癌、乳腺癌）也有一定的阳性率。良性妇科病（盆腔炎、卵巢囊肿等）和早期妊娠可出现不同程度的血清CA125含量升高。 4、癌抗原15-3（CA15-3）CA15-3可作为乳腺癌辅助诊断，术后随访和转移复发的指标。对早期乳腺癌的敏感性较低（60%），晚期的敏感性为80%，转移性乳腺癌的阳性率较高（80%）。其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，如：肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、原发性肝癌等。 5、糖类抗原19-9（CA19-9）CA19-9是一种与胃肠道癌相关的糖类抗原，通常分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠及正常成年人胰腺、胆管上皮等处。检测患者血清CA19-9可作为胰腺癌、胆囊癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标，对监测病情变化和复发有很大意义。胃癌、结/直肠癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌等患者的血清CA19-9水平也有不同程度的升高。某些消化道炎症CA19-9也有不同程度的升高，如：急性胰腺炎、胆囊炎、胆汁淤积性胆管炎、肝炎、肝硬化等。 6、癌抗原50（CA50）CA50是胰腺和结、直肠癌的标志物，是最常用的糖类抗原肿瘤标志物，因其广泛存在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫，它的肿瘤识别谱比CA19-9广，因此它又是一种普遍的肿瘤标志相关抗原，而不是特指某个器官的肿瘤标志物。CA50在多种恶性肿瘤中可检出不同的阳性率，对胰腺癌和胆囊癌的阳性检出率居首位，占94.4%；其它依次为肝癌（88%）、卵巢与子宫癌(88%)和恶性胸水（80%）等。可用于胰腺癌、胆囊癌等肿瘤的早期诊断，对肝癌、胃癌、结直肠癌及卵巢肿瘤诊断亦有较高价值。 7、糖类抗原242（CA242）CA242是与胰腺癌、胃癌、大肠癌相关的糖脂类抗原。血清CA242用于胰腺癌，大肠癌的辅助诊断，有较好的敏感性（80%）和特异性（90%）。肺癌，肝癌，卵巢癌患者的血清CA242含量可见升高。 8、胃癌相关抗原（CA72-4）CA72-4是目前诊断胃癌的最佳肿瘤标志物之一，对胃癌具
神经元轴突标志物
Tau: Neuro n Type of MAP; helps main tai n structure of the axon 神经元树突标志物Drebrin、MAP SAP102 微管相关蛋白Microtubule-associated protein-2(MAP-2) : Neuron Den drite-specific MAP;prote in found specifically in den dritic branching of neuron 是组成神经元细胞骨架的重要组成成分，包括：MAP5 MAP1.2和MAP1 三种不同类型。在神经系统发育、形成和再生过程的不同时期扮演着重要的角色。其中MAP5为早期微观相关蛋白，在胚胎期和新生动物大脑中有较高表达，并随大脑的逐渐成熟而退化，对神经元突起的生长具有重要的引导作用。MAP2包括三种亚型：MAP2a MAP2I和MAP2c其中MAP21和MAP2(出现较早。随着年龄的增长MAP2被组织蛋白酶D所降解，在不同类型的神经元中表达量存在差异。 神经元早期标志物Tubulin、b-4 tubulin : Neuron Important structural protein for neuron; identifies differentiated neuron Nervous System微管蛋白为球形分子,分为两种类型:a 微管蛋白(a-tubulin) 和B微管蛋白(B -tubulin), 这两种微管蛋白具有相似 的三维结构，能够紧密地结合成二聚体，作为微管组装的亚基，能够聚合并且参与细胞分裂。a和B微管蛋白各有一个GTP结合位点，位于a亚基上的GTP结合位点，是不可逆的结合位点，结合上去的GTP不能被水解，也不能被GDP替换。位于B亚基上的GTP结合位点结合GTP后能够被水解成GDP所以这个位点又称为可交换的位点(exchangeable site,E 位点)-III Tubulin 又名tubulin B -4，是原始神经上皮中所表达的最早的神经元标志物之一。其作为神经元特有标志物，被广泛应用于神经生物学研究。 Noggin: Neuron A neuron-specific gene expressed during the development of n euro ns Neurosphere Embryoid body (E ⑨： ES Cluster of primitive n eural cells in culture of differentiating ES cells; indicates presence of early neurons and glia 星型胶质细胞标志物Astrocyte 、S-100、Microglia Markers Glial fibrillary acidic protein (GFAP) : Astrocyte Protein specifically produced by astrocyte 属于三型中间丝蛋白家族成员，在星型胶质细胞中大量特异性表达。在外周神经系统中的卫星细胞和部分雪旺氏细胞中也有少量表达。神经干细胞也会频繁并大量的表达GFAP因此，GFAP抗体经常被作为星型胶质 细胞的标志物用于神经生物学研究。另外，对于一些来源于星型胶质细胞的脑源性肿瘤，GFAP的表达量也较高。最近研究表明：在位于肝脏的枯否细胞、镜上皮细胞、唾液腺肿瘤细胞和红细胞中亦有GFAP的表达。
常用肿瘤标志物参考值 甲胎蛋白AFP: (0 --- 7.2 ng/ml) 癌胚抗原CEA: (0 --- 4.6 ng/ml) 糖类抗原CA72-4: (0 ---- 5.3 U/ ml) 糖类抗原CA15-3: (0 --- 30. 0 U/ ml) 糖类抗原CA19-9: (0 --- 37.0 U/ ml) 糖类抗原CA125: (0 --- 35.0 U/ ml) 糖类抗原CA50: (0 --- 24.0 U/ ml) 前列腺特异抗原PSA: (0 ---- 4.0 ng/ml) 游离前列腺特异性抗原FPSA: ( fpsA/tpsA > 0.16) 神经元特异性烯醇化酶NSE: (0 ------ 15.2 ug/ l) 细胞角质素片断CrFRA21-1: (0.1--- 3.3 ng/ml) SCC鳞癌相关抗原：0-2 ng/ml 肺癌抗原LT-A：阴性 铁蛋白FER: (13.0-400.0 ng/ml) 恶性肿瘤相关物质TSGF：33.88-70.57 U/ml 组织多肽抗原（TPA）：＜55U／L β2微球蛋白（β2M）：血清＜24mg／L，尿＜160ug／L。常用肿瘤标志物的分类和用途
word 编辑版． 肿瘤标志物的联合应用能提高其正确性，临床常选择以下组合：
肿瘤标志物组合肿瘤 CA199 、AFP原发性肝癌 CA50 、CA199、CEA 胃癌、CA724CEA 、、CA199胰腺癌、胆囊癌 CA242 CA50 CA199、CA724CEA、结直肠癌、卵巢癌 CA125、铁蛋白乳腺癌、铁蛋白CA153、CA125 前列腺癌F-PSA PSA 、word 编辑 版． （此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容，供参考，感谢您的配合和支持） word 编辑版．
泥炭沉积的类脂化合物（正构烷烃、脂肪醇、脂肪酸、甾酮、三萜类化合物和类异戊二烯、直链酯类等）、纤维素中C，H，O 同位素，以及泥炭腐殖化度和孢粉、生物化石等都是恢复古环境的良好指标。虽然泥炭的这些气候代用指标能够反演古环境的相对干湿、冷暖，但并不能定量地给出温度值的大小。 1、GDGTs（甘油二烷基甘油四醚脂） 研究较多的GDGTs化合物主要包括类异戊二烯类（GDGT-0~GDGT-4）和支链类（I~III）两大类，类异戊二烯GDGTs被认为是古菌细胞质膜中所特有，是古菌存在的生物标志化合物。 与该指标的相关内容： （1）CBT：环化指数（the Cyclisation ratio of Branched Tetraethers） （2）MBT：甲基化指数（the Methylation index of Branched Tetraethers （3）研究发现支链GDGTs 结构中甲基个数（MBT指数）主要受当地年平均大气温度（MAAT）影响，其次受环境pH影响；支链GDGTs结构中环戊烷个数（CBT指数）主要受环境pH控制。 （4）环化指数（CBT）/甲基化指数（MBT）是近年来根据支链四醚膜类脂（GDGTs）提出的定量化重建土壤pH和陆地年平均大气温度（MAAT）的生物标志物指标。 （5）Weijers等人提出的MBT/CBT 指标在近海、湖泊沉积中都得到了较好应用，并依此将MBT/CBT 指标应用到泥炭沉积中，讨论了指标在泥炭沉积中的适用性和应用潜力。文章发表在2007年的《Geochimica et Cosmochimica Acta》上。 （6）许云平等利用GDGTs来重建全新世渤海湾有机碳的来源及沉积能量（2010年国家自然科学基金项目）。由GDGTS衍生出的指标BIT比值可用作湖相、河口、滨浅海环境沉积物中判识有机质来源的重要指标。 （7）高效液相色谱-质谱仪（HPLC-MS）进行GDGTs分析（当前存在的主要问题）。 2、脱-A-三萜烯系列化合物（属脂肪族） 脱-A-三萜类是地质体中重要的生物标志化合物，已在石油和各种沉积物中多有报道，认为是高等植物三萜类经光化学和/或微生物氧化使得A环丢失的降解产物。该系列化合物在沉积物中的出现一方面说明被子植物的输入，另一方面显示A环的丢失是高等植物五环三萜类较为普遍的转换途径。 与该指标的相关内容 （1）可反映气候的干湿、温度高低以及沼泽水位的高低； （2）研究发现，该指标在泥炭中的积累与沼泽发育期生物群落结构组成差异密不可分；（3）脱-A-三萜烯变化序列与植被群落结构演替具有相关性（可以与孢粉、植物大化石的结果相互验证） （4）GC-MS分析采用惠普6890气相色谱与HP5973质谱联用仪
肿瘤标志物的解读 ［血清肿瘤标志物］是判断恶性肿瘤治疗的疗效、预后及选择治疗方案的有力依 据，但它只能作为辅助手段。如果体检中发现［血清肿瘤标志物］升高，不要过于恐慌，因为在机体存在炎症、某些慢性疾病发作时，某些［血清肿瘤标志物］也可能会上升，还需进一步检查来鉴别诊断。 肿瘤标志物升高未必是得了癌症 ［血清肿瘤标志物］是机体对肿瘤细胞反应产生（或）升高的、可预示肿瘤存在的一类物质，通过人体的血液、体液、肿瘤组织或细胞可以检测到。 ［血清肿瘤标志物］升高可能会是多方面原因导致的。如AFP，除原发性肝癌外，怀孕、活动性肝炎和生殖系统肿瘤等都可能出现升高的情况；因检测仪器或试剂的不同，有时也会有假阳性现象的出现，具体情况要结合临床来确定。因此，肿瘤标志物升高不一定就是得了癌症。 并非每位癌症患者肿瘤标志物都高 很多恶性肿瘤的标志物升高早于临床症状而引起人们的警惕，一些早期的病例因此得以发现，经过及时的治疗获得了很好的疗效。但值得注意的是，并不是每位癌症病人的肿瘤标志物都会增高。临床有些确诊的晚期卵巢癌病人CA125 —直正常，手术前 后也没有明显变化。 有几类肿瘤标志物的敏感度比较高，如原发性肝癌中70% —90%有AFP升高， 前列腺癌PSA总体阳性率约为70%。其有助于这两种肿瘤的早期发现，但是目前还没有100%敏感的肿瘤标志物。 对于单项标志物轻度升高者，不用过于恐慌。可以定期复查监测指标的数值变化情 况，有条件的尽量复查全部的常用标志物，一旦体内有恶性肿瘤存在，可能会 有几种标志物异常。如果复查后数值一直维持在参考值上限的临界水平，则意义不大。
但是有以下几类情况要特别重视：一是单次检查升高特别明显，数倍于正常值的上限。二是反复检查，数值动态持续升高。三是有家族性遗传史，肿瘤筛查时肿瘤标志物增高。前两种情况先查该标志物最常见的某种疾病，如CA724升高，可以先 查有无胃肠道的疾病，若胃肠道没有异常，还需 检查肝脏、食道、乳腺、妇科等。有家族性遗传史者如出现标志物升高，即便没有症状和体征，也必须复查和随访。对于60岁以上、有家庭肿瘤史、长期慢性乙型 肝炎患者或肿瘤高发期的高危人群要进行肿瘤标志物筛查。 肿瘤标志物可判断治疗效果和预后 肿瘤标志物被广泛应用于判断恶性肿瘤的疗效，成为选择治疗方案的有力依据之一。标志物的含量与肿瘤的恶性程度、转移、复发等息息相关。临床上一般会以初次治疗达到 疗效后的标志物水平作为其特定的“个体参考值”，根据其动态变化情况来判断疗效。如果下降到参考值范围内或下降95%以上，提示治疗有效；如果下降但仍持续在参考值以上，提示有肿瘤残留和（或）转移;下降到参考值内一段时间后重新升高，则提示复发或转移。标志物的检测有助于医生及时为肿瘤病人选择个体化治疗方案。 长期随访检测应选同一家医院 与可以同城检查互认的CT、B超等结果不同，建议需要随访的病人尽量选择同一家医院或同一个临床实验室。因为目前肿瘤标志物的国际标准化尚未完善，不同医院使用不同方法、不同试剂检测同一项标志物时，其结果可能出现差异；不同生产商的检测试剂和仪器所得到的检测结果也会有不同；试剂采用不同的抗体标记、不同的定标品、分析仪器选择性差异都会导致检测结果的差异。所以，不同医院的检
生物标志物 科技名词定义 中文名称：生物标志物 英文名称：biomarker 定义：用于监测和评价能够导致生物有机体的生物化学和生理学改变的化学污染物。 所属学科：海洋科技（一级学科）；海洋科学（二级学科）；环境海洋学（三级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 生物标志物：在亚个体和个体水平上既可以测定污染物暴露水平，也可以测定污染物效应的生理和生化指标。 对于疾病研究，生物标志物一般是指可供客观测定和评价的一个普通生理或病理或治疗过程中的某种特征性的生化指标，通过对它的测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。检查一种疾病特异性的生物标志物，对于疾病的鉴定、早期诊断及预防、治疗过程中的监控可能起到帮助作用。寻找和发现有价值的生物标志物已经成为目前研究的一个重要热点。 自1994年蛋白质组概念提出，定量蛋白质组学已经成为蛋白质组学研究的热点和中心。定量蛋白质组学便是检测正常与疾病状态下组织全部表达蛋白质在量上的差别。 定量蛋白质组学中的蛋白质定量技术也成为发现生物标志物的重要途径。 生物标志物是生物体受到严重损害之前，在不同生物学水平（分子、细胞、个体等）上因受环境污染物影响而异常化的信号指标。它可以对严重毒性伤害提供早期警报。 这种信号指标可以是细胞分子结构和功能的变化、可以是某一生化代谢过程的变化或生成异常的代谢产物或其含量，可以是某一生理活动或某一生理活性物质的异常表现，可以是个体表现出的异常现象，可以是种群或群落的异常变化，可以是生态系统的异常变化。 生物标志物分类 从功能上一般分为: 接触（暴露）生物标志物 （biomarker of exposure）; 效应生物标志物
免疫组化常用标记物 一、常用标志物 1. CD15(LeuM1)---（阳性部位：细胞膜）。是一种由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原，又称半抗原χ，是粒/单核细胞相关抗原。免疫组织化学表达：成熟粒细胞、激活的淋巴细胞（主要是T淋巴细胞）、R-S细胞、大多数腺癌等。 2. 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）(CD66e)---（阳性部位：细胞膜/浆）。癌胚抗原是表达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白，分子量为180kDa。存于某些恶性肿瘤组织尤其是内胚层来源发肿瘤中，大多数胃肠道（包括胰腺）和肺腺癌均有表达，少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。CEA主要用于标记上皮性肿瘤，尤其是腺上皮来源的腺癌。 3.嗜铬素A（chromogranin A，CgA）---（阳性部位：细胞浆）。嗜铬素是位于神经分泌颗粒内的酸性糖蛋白家族，是一组可溶性酸性蛋白，分子量为76～120 kDa，分布广泛。含量最丰富的是嗜铬素A，另两个是嗜铬素B和嗜铬素C。几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞的分泌颗粒中，也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞。此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端的片段，而不与氨基末端的片段反应，主要用于标记神经内分泌细胞及其来源的肿瘤。对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性。 4.细胞角蛋白（cytokeratin pan，广谱 CK）--- AE1/ AE3（阳性部位：细胞浆）。此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白（Ⅰ型/低分子量）和碱性细胞角蛋白（Ⅱ型/高分子量）。用于标记上皮及上皮来源的肿瘤，特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义。 5.细胞角蛋白5/6（cytokeratin 5/6，CK5/6）---（阳性部位：细胞浆）。在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。因此，可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。支气管上皮基底细胞、间皮；鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。大多数腺癌为阴性。 6. 细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）---（阳性部位：细胞浆）。CK7是分子量为54 kDa的一种碱性细胞角蛋白，存在于大多数正常组织的腺上皮和移行上皮细胞中，一般非上皮来源的细胞无表达。在卵巢、乳腺和肺的腺癌呈阳性反应，而胃肠道的腺癌阴性。 7. 细胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）---（阳性部位：细胞浆）。CK20（46kDa）存在于正常的胃肠道上皮、移行上皮、Merkel细胞及其来源的肿瘤，而乳腺癌、肺癌和神经内分泌肿瘤不表达。 CK7 positive CK7 negative CK20 positive uninformative colorectum CK20 negative lung uninformative 8. 细胞角蛋白（高分子量）（cytokeratin，HMW）---（阳性部位：细胞浆）。高分子量细胞角蛋白抗体（34βE12）可以识别68kDa、58kDa、56.5kDa和50kDa的细胞角蛋白。 9.上皮膜抗原（epithelial membrane antigen，EMA）(MUC1)---（阳性部位：细胞浆）。上皮膜抗原是一种高分子量（400 kDa）跨膜糖蛋白，广泛分布于各种上皮细胞及其来源的肿瘤。癌细胞过表达MUC1与肿瘤侵袭有关，有意义的免疫反应性为膜阳性，如为纯粹的胞浆着色则为假阳性。此抗体可以用于标记上皮及上皮源性肿瘤，EMA阳性表达的肿瘤包括大多数的癌、间皮瘤、滑膜肉瘤和上皮样肉瘤等，淋巴瘤、黑色素瘤和软组织肿瘤阴性表达。 10.HBME1---（阳性部位：细胞膜）。该抗体与间皮细胞表面的抗原反应，染色方式呈现一种特殊的“厚膜”方式，在鉴别间皮瘤与腺癌时有一定的参考价值：间皮瘤为厚膜型，腺癌为薄膜型或胞浆着色。 11.突触素（synaptophysin，Syn）---（阳性部位：细胞浆）。突触素是分子量为38kDa的糖蛋白，主要存在于神经元突触前囊泡膜，是神经性和上皮性神经内分泌肿瘤的特异性标志之一，用于标记神经内分泌肿瘤。 12.甲状腺转录因子1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）---（阳性部位：细胞核）。TTF-1表达于甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞中。大多数肺的小细胞癌、腺癌、少部分大细胞癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF-1阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTF-1阴性。
肿瘤抗原（cancer antigen 19-9，CA19-9） 是一种单涎酸神经节苷酯，是表达在一高分子量黏蛋白上的糖类位点，同其他肿瘤抗原相似，CA199不是器官特异性的，在多种腺癌中都见升高。CA199可存在于胎儿胃上皮细胞、肠道和胰腺细胞中，成人胰腺、肝、肺细胞中也可见少量。CA199是许多黏细胞的成分，在胰腺癌患者血清中可见明显升高，胃肠癌、胆道癌、肺癌等也可见升高。CA199是与消化道肿瘤相关的一种糖蛋白，胚胎期分布于胎儿的胰腺、肝胆和肠等组织;在成人的胰、胆等部位也有少量存在。当患胰腺癌、肝胆和胃肠道癌时血中CA199的水平可明显升高。它属肿瘤相关抗原，其在进展期和转移性消化道肿瘤患者阳性率较高，已被临床用作消化道肿瘤外科治疗效果评价参数以及术后转移与复发等的重要随访指标，患者血清CA199水平的变化与消化道肿瘤状态变化相平行。此外，CA199水平增高的消化道肿瘤患者发生转移的时间较CA199正常的患者要早许多。CA199具有对消化道肿瘤转移起监视的作用，如其血清水平持续升高，则应开始或加强化、放疗等。消化道肿瘤患者血清CA199水平变化还与肿瘤的复发有关。据研究发现，术前异常增高的CA199水平和阳性率在术后明显下降，趋于正常范围;而术后癌肿复发的患者，其CA199水平再度升高，说明消化道肿瘤病情与CA199水平的变化也具有密切相关性。在消化道肿瘤术后随访中动态观察，即使每次CA199水平均在正常范围内，但其值若逐步升高，也提示转移或复发的存在，而且多处转移患者CA199水平比单个转移者也要高的多，当然转移癌并非总伴有CA199的升高，但可依据其他肿瘤标记物来诊断。 CEA 中文名称：血清癌胚抗原 化验介绍：化验介绍:CEA是首先在结肠癌病人的血清中发现的一种球蛋白，在胎儿3－6个月的血清中可以检测到，所以称作癌胚抗原。 临床意义：临床意义:（1）原发性结肠癌患者CEA增高占45－80%。（2）除原发性结肠癌以外，腺胰癌、胆管癌、胃癌。食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤阳性率也很高，一般在50－70%。（3）结肠癌患者手术切除以后，在1－3周内血中CEA可下降到正常水平。如手术切除不完全，术后CEA还持续阳性，说明病人预后较差或癌肿发生了转移，或者有复发的可能。（4）良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎和酒精性肝硬变病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20μg/L。 参考值：酶联免疫吸附试验（ELISA）〈25ng/ml放射性免疫测定〈25ng/ml 相关疾病：膀胱肿瘤、胃癌、食管癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌 糖链抗原19-9（CAl9-9）是一种糖蛋白。胚胎期分布于胎儿的胰腺、肝胆和肠等组织；在成人的胰、胆等部位也有少量存在。 【参考值】<37单位／毫升（u／ml）。 【临床意义】 （1）胰腺癌、肝胆和胃肠道疾病时血中CAl9—9的水平可明显升高。其阳性率胰腺癌为85％～95％，胆囊癌和胆管癌为85％左右，胃癌、结肠癌为40％，直肠癌为30％～50％；但无早期诊断价值，对早期病人的敏感度仅为30％。 （2）连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有重要价值。 （3）急性胰腺炎、胆汁淤积型胆管炎、胆石症、急性肝炎、肝硬化等，血清CA19-9也可出现不同程度的升高。 （4）若结合CEA检测，对胃癌诊断符合率可达85％。
倍,经χ2检验,差异均有显著性;二项分布拟合与Edward检验均显示,扬中胃癌的发病存在明显的家庭聚集性,符合多基因遗传方式;先证者家庭成员发生胃癌的危险性显著高于均衡可比的对照家庭成员,核心家系成员间患病率的差异,可能与胃癌遗传易感性和家庭内环境因素暴露的差异有关[5,6]。 分析胃癌家族史在家庭聚集性中的作用,结果显示(资料未列出):先证者家系有胃癌家族史的比例为28134%(761/2685),对照家系胃癌家族史的比例为2170%(69/2557),两者差异有极显著性,χ2 =64612,P=01001;同样,胃癌病例有家族史的比例为41175%(291/697),也显著高于非胃癌对照家族史的比例11186%(539/4545),表明遗传易感性因素在胃癌发生中有重要地位。 同时,也应该看到,以肿瘤发病率为观察研究的终点指标,对遗传易感性作用相对较弱的散发性肿瘤而言,敏感性较低,出现一些难于解释的阴性结果,需要借助分子遗传学、分子生物学技术,准确判断肿瘤早期生物学表型与遗传易感性(基因型)之间的关系。根据国内外现有流行病学资料:胃癌是在多种环境和遗传因素长时间、多步骤、交互作用下的结果[2,7],无论是外源性致癌物,或是机体产生的内源性致癌物,都要通过宿主遗传易感性因素(研究比较成熟的是各种代谢酶基因多态性)的作用,才能最终导致癌变,因此,有必要采用分子流行病学方法,进一步阐明在致癌物代谢的各条通路中,易感基因及其多态性所起的作用[8212],我们已经利用在扬中胃癌高发区获得的环境暴露与基因多态性资料,对此进行了探讨。有关结果将另文报道。 参考文献 1李茂森,耿昌友,朱阳春,等.扬中市1991～1995年恶性肿瘤发病及死亡情况调查研究1肿瘤,1997,17:47724781 2C orrea P1Human gastric carcinogenesis:a multistep and multifactorial process2first American cancer s ociety award lecture on cancer epidemiology and prevention1Cancer Res,1992,52:6735267401 3Perera FP1Environment and cancer:who are susceptible?Science, 1997,278:1068210731 4S tadtlander CT,W aterbor JW1M olecular epidemiology,pathogenesis and prevention of gastric cancer1Carcinogenesis,1999,20:2195222081 5Nagase H,Ogino K,Y oshida I,et al1Family history2related risk of gastric cancer in Japan:a hospital2based case2control study1Jpn J Cancer Res,1996,87:1025210281 6La Vacchia C,Negri E,Franceschi S,et al1Family history and the risk of stomach and colorectal cancer1Cancer,1992,70:502551 7T oy oshima H,Hayashi S,Hashim oto S,et al1Familial aggregation and covariation of diseases in a Japanese rural community:com paris on of stomach cancer with other diseases1Ann E pidemiol,1997,7:44624511 8K ato S,Onda M,M atsukura N,et al1G enetic polym orphisms of the cancer related gene and Helicobacter pylori in fection in Japanese gastric cancer patients1An age and gender matched case2control study1Cancer, 1996,77:1654216611 9K ato S,Onda M,M atsukura N,et al1Helicobacter pylori in fection and genetic polym orphisms for cancer2related genes in gastric carcinogenesis1 Biomed Pharmacother,1997,51:14521491 10Ng EK,Sung JJ,Ling TK,et al1Helicobacter pylori and the null genotype of glutathione2S2trans ferase2mu in patients with gastric adenocarcinoma1Cancer,1998,82:26822731 11National Institute of Environmental Health Science.Research on environment2related disease1Environmental G enome Project119981 Available from:http://w w w1niehs1nih1g ov/envgenom1 12沈靖.人类基因组计划与肿瘤预防研究面临的机遇.肿瘤,2000, 20:682721 (收稿日期:2000202220) (本文编辑:邵隽一) ?名词小词典? 生物标志物(biological marker) 能够反映致病因素或毒物从暴露到效应过程各个环节性质的特异性生物分子,如DNA、蛋白质、酶、脂质、糖类等。生物标志物的确定和检测是流行病学研究中的关键问题,因为这种确定和检测可被用来进行病因探讨、危险因素的评价、致病因子致病机理的研究、人群易感性评估、疾病流行规律的掌握、疾病防治措施的研究和评估等。 生物标志物大致上可分为两大类,一类是根据表型和基因型的特点分为表型生物标志物和基因型生物标志物,前者包括蛋白质、多肽、脂质、糖类和其他在血清和体液中可检测到的特异性分子,后者主要包括基因类型及突变型、DNA加合物、DNA多态性等;另一类是根据致病因子作用机体的过程,可划分为暴露生物标志物、作用生物标志物、效应生物标志物等。 随着分子生物学理论和技术的深入发展,研究生物标志物的技术手段日趋先进、完善。现可用先进的核酸研究技术、蛋白质研究技术、酶学研究技术、免疫学研究技术等检测和研究生物标志物。 (方福德100005北京市中国医学科学院基础医学研究所) (收稿日期:2000209219) (本文编辑:邵隽一) ? 6 3 ?中华预防医学杂志2001年1月第35卷第1期 Chin J Prev M ed,January2001,V ol35,N o. 1
20种常见肿瘤标记物的意义 本文转自：好大夫在线本文原题：常见肿瘤指标的意义1.甲胎蛋白（AFP）AFP是早期诊断原发性肝癌最敏感、最特异的指标，适用于大规模普查，如果成人血AFP值升高，则表示有患肝癌的可能。AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌，70～95%患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高，但阴性并不能排除原发性肝癌。AFP水平在一定程度上反应肿瘤的大小，其动态变化与病情有一定的关系，是显示治疗效果和预后判断的一项敏感指标。AFP值异常高者一般提示预后不佳，其含量上升则提示病情恶化。通常手术切除肝癌后二个月，AFP值应降至20 ng/ml以下，若降的不多或降而复升，提示切除不彻底或有复发、转移的可能。在转移性肝癌中，AFP值一般低于350～400 ng/ml。 妇产科的生殖腺胚胎癌、卵巢内胚窦癌AFP也会明显升高。AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg 携带者。某些消化道癌也会出现AFP升高现象。孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂、无脑症、食管atresia或多胎，AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down’s 综合征的危险性。正常参考值：≤7 ng/ml2.癌胚抗原（CEA）在正常成人的血液中CEA很难测出。CEA是一种重要的肿瘤相关抗原，70～90%的结肠腺癌患者CEA高度阳性，在
其它恶性肿瘤中的阳性率顺序为胃癌（60～90％）、胰腺癌（70～80％）、小肠腺癌（60～83％）、肺癌（56～80％）、肝癌（62～75％）、乳腺癌（40～68％）、泌尿系癌肿（31～46％）。胃液（胃癌）、唾液（口腔癌、鼻咽癌）以及胸腹水（肺癌、肝癌）中CEA的阳性检测率更高，因为这些肿瘤“浸泡液”中的CEA可先于血中存在。CEA含量与肿瘤大小、有无转移存在一定关系，当发生肝转移时，CEA的升高尤为明显。 CEA测定主要用于指导各种肿瘤的治疗及随访，对肿瘤患者血液或其他体液中的CEA浓度进行连续观察，能对病情判断、预后及疗效观察提供重要的依据。CEA的检测对肿瘤术后复发的敏感度极高，可达80%以上，往往早于临床、病理检查及X光检查。 大量临床实践证实，术前或治疗前CEA浓度能明确预示肿瘤的状态、存活期及有无手术指征等。术前CEA浓度越低，说明病期越早，肿瘤转移、复发的可能越小，其生存时间越长；反之，术前CEA浓度越高说明病期较晚，难于切除，预后差。在对恶性肿瘤进行手术切除时，连续测定CEA将有助于疗效观察。手术完全切除者，一般术后6周CEA回复正常；术后有残留或微转移者，可见下降，但不恢复正常；无法切除而作姑息手术者，一般呈持续上升。CEA浓度的检测也能较好地反映放疗和化疗疗效。其疗效不一定与肿瘤体积成正比，
. 近期整理了一些据说可以作为神经干细胞和早期神经元标记物的资料，不知是否可靠，贴出来大家指点一下， 家族的成神经元基因，bHLH与神经元的分化有关。ASH1是转录调控因子1. ASH1：属于前神经转录因子，广泛表达于发育中的中枢和外周神经系统，在神经元特定亚型的选择性分化中发挥中心调控作用。见于细胞核。 最初是在果蝇中发现的一种原神经(Atonal)，Ath1。无调基因2. ATOH1：无调同源物1(atonal homolog 1)螺--环。属于转录因子的碱性螺旋基因，负责调控果蝇弦音器的形成；在小鼠的同源物为Math1和Math5的小鼠有听觉、本体感觉和觉Math1(bHLH)家族、前神经转录因子，是后脑发育的关键因子之一。缺乏旋醒系统障碍，生后不久即死于不能呼吸但呼吸道和外周神经正常。见于细胞核。 细胞可以分化为神经元CD133+5个跨膜区。3. CD133：一种独特的干细胞标志，分子量为120kDa，具有细CD133+ 和神经胶质，表明这群细胞有自我更新的能力，有多系分化潜能。体外实验证实外周血来源的胞可以分化为神经细胞。isoforms8种不同的主要存在于星形胶质细胞内，胶质纤维酸性蛋白。GFAP是一种中间丝蛋白，有4. GFAP：GFAP。标记细胞的不同亚群，神经干细胞也能表达 (bHLH)-螺旋-5(hairy and enhancer of split-5)。属转录因子的碱性螺旋-环5. HES-5：发状分裂相关增强子特异性在发育中的神经系统中表达，随着神经家族、前神经转录因子，与神经元的分化有关。小鼠Hes5会使神经前体细胞继续留在脑室区而不Hes 5元分化程度升高，其表达水平降。在脑室区持续高水平表达向外部迁移，严重干扰神经元与胶质细胞的分化。见于细胞核。 抗原，脊椎动物神经元中Hu：果蝇的胚胎致死与异常视觉基因Elav在人类的同源物被称为HuD6. HuC、结合RNA和HeI-N1,均是神经元特异性有三个抗原均能与抗-Hu抗体发生反应，分别是HuD、HuC/ple21 蛋白，表达于所有的新生神经元。见于细胞核。 神-L1神经粘附分子，不依赖钙离子的神经粘附分子之一。参与了神经元7. L1neural adhesion molecule：结合而AβL1能与经元之间的粘附、神经突起束化与生长、小脑颗粒细胞迁移等功能，AD小鼠过表达的AD小鼠的病理特征。见于细胞膜。降低 。是早期微管相关蛋白，胚胎期及新生动物大脑，或称微管相关蛋白5(MAP5)8. MAP1B：微管相关蛋白1B 的共同底物。caspase和calpain也是凋亡蛋白内细胞质、细胞体、树突均有较高表达。参与促进轴突再生， 9. MAP-2：微管相关蛋白-2 (microtubule-associated protein-2)，属于结构性微管相关蛋白家族, 其分子量很大,SDS-PAGE 电泳分析可分为MAP-2A和MAP-2B两条带。在正常脑组织中MAP-2主要存在于神经元的胞体、树突和树突棘。是脑内最丰富的蛋白之一，参与突起生长、胞浆蛋白运输、神经元塑形等功能。 10. Musashi-1：musashi-1简称MSI-1，是一种分子量为39KD的RNA结合蛋白。通常在CNS干细胞和前体细胞上表达，在分化后的细胞表达下调。它是一种转录抑制因子，其可以直接调节靶蛋白Numb和P21(CIP-1)的表达。见于神经干细胞，也可见于其它组织的干细胞；最近研究发现musashi-1在缺血性神经损伤中发挥调节细胞凋亡的作用。 1 / 3 . 仅在胚胎发育早期的神经上皮表达，特异性表达于神经上皮干细胞，11. Nestin：巢蛋白。一种中间丝蛋白，有时也在非神经干细胞群表达，如胰岛祖细胞出生后表达就停止。为神经干细胞的特征性标志物。Nestin 及造血祖细胞。 的大多数分化后神CNS(neuron-specific nuclear protein)，见于成年小鼠12. NeuN：神经元特异性核蛋白经元的细胞核，但小脑蒲肯野细胞、视网膜光感受器似乎不表达。一般认为在神经细胞发育过程中，最早、；细胞定型后，这两种基因表达减弱，取而代之的是一些tubulin的可能先出现nestin，往后是vimentin NSE等。 家螺旋(bHLH)，属转录因子的碱性螺旋-环-13. NeuroD：神经源性分化蛋白D(Neurogenic differentiation)在视网膜发育中个成员，NeuroD1NeuroD 家族共有4族、前神经转录因子，与神经元的分化有关。小鼠能够直接将非神经细胞转变成神经细胞，其表达一开始是在整个正在发育的神经系统发挥作用，NeuroD4家族成NeuroD家族成员，称为Cnd1；
1．甲胎蛋白（AFP） AFP是早期诊断原发性肝癌最敏感、最特异的指标，适用于大规模普查，如果成人血AFP 值升高，则表示有患肝癌的可能。 AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌，70~95%患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高，但阴性并不能排除原发性肝癌。AFP水平在一定程度上反应肿瘤的大小，其动态变化与病情有一定的关系，是显示治疗效果和预后判断的一项敏感指标。AFP值异常高者一般提示预后不佳，其含量上升则提示病情恶化。通常手术切除肝癌后二个月，AFP值应降至2 0ng/ml以下，若降的不多或降而复升，提示切除不彻底或有复发、转移的可能。在转移性肝癌中，AFP值一般低于350-400ng/ml。 妇产科的生殖腺胚胎癌、卵巢内胚窦癌AFP也会明显升高。AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。某些消化道癌也会出现AFP升高现象。孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂、无脑症、食管atresia或多胎，AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down’s综合征的危险性。 正常参考值：0～15 ng/ml 2．癌胚抗原（CEA） 在正常成人的血液中CEA很难测出。CEA是一种重要的肿瘤相关抗原，70-90%的结肠腺癌患者CEA高度阳性，在其它恶性肿瘤中的阳性率顺序为胃癌（60-90％）、胰腺癌（70-80％）、小肠腺癌（60-83％）、肺癌（56-80％）、肝癌（62-75％）、乳腺癌（40-68％）、泌尿系癌肿（31-46％）。胃液（胃癌）、唾液（口腔癌、鼻咽癌）以及胸腹水（肺癌、肝癌）中CEA的阳性检测率更高，因为这些肿瘤“浸泡液”中的CEA可先于血中存在。CEA含量与肿瘤大小、有无转移存在一定关系，当发生肝转移时，CEA的升高尤为明显。 CEA测定主要用于指导各种肿瘤的治疗及随访，对肿瘤患者血液或其他体液中的CEA浓度进行连续观察，能对病情判断、预后及疗效观察提供重要的依据。CEA的检测对肿瘤术后复发的敏感度极高，可达80%以上，往往早于临床、病理检查及X光检查。 大量临床实践证实，术前或治疗前CEA浓度能明确预示肿瘤的状态、存活期及有无手术指征等。术前CEA浓度越低，说明病期越早，肿瘤转移、复发的可能越小，其生存时间越长；反之，术前CEA浓度越高说明病期较晚，难于切除，预后差。 在对恶性肿瘤进行手术切除时，连续测定CEA将有助于疗效观察。手术完全切除者，一般术后6周CEA回复正常；术后有残留或微转移者，可见下降，但不恢复正常；无法切除而作姑息手术者，一般呈持续上升。CEA浓度的检测也能较好地反映放疗和化疗疗效。其疗效不一定与肿瘤体积成正比，只要CEA浓度能随治疗而下降，则说明有效；若经治疗其浓度不变，甚至上升，则须更换治疗方案。 CEA检测还可对经手术或其他方法治疗使CEA恢复正常的病人，进行长期随访，监测其复发和转移。通常采用以下方案：术后第六周一次；术后三年内，每月一次；3-5年每三月一次；5-7年每半年一次；7年后一年一次。若发现升高，两周后再测一次，两次都升高则提示复发和转移。 正常参考值：0～5 ng/ml 3．癌抗原125（CA125 CA125是卵巢癌和子宫内膜癌的首选标志物，如果以65U/ml为阳性界限，Ⅲ-Ⅳ期癌变准确率可达100%。CA125迄今为止是用于卵巢癌的早期诊断、疗效观察、预后判断、监测复发及转移的最重要指标。CA125测定和盆腔检查的结合可提高试验的特异性。对输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、乳腺癌和间皮细胞癌诊断的符合率也很高，良性病变阳性率仅2%。CA125水平的升高是女性生殖系肿瘤复发的信号。 动态观察血清CA125浓度有助于卵巢癌的预后评价和治疗控制，经治疗后，CA125含量可