47.3.43
AOAC Of f i c ial Method 990.28
Sul f ites in Foods
Op t i m ized Monier–Wil l iams Method
First Ac t ion 1990
Fi n al Ac t ion1994
(Ap p li c a b le of de t er m i n a t ion of 310 ppm (m g/g) sul f ites in foods. Ap p li c a b le in pres e nce of other vol a t ile sul f ur com p ounds; not ap p li c a b le to dried on i ons, leeks, and cab b age.)
See Table 990.28 for the results of the interlaboratory study supporting acceptance of the method.
A.Prin c i p le
Method mea s ures free sul f ite plus re p ro d uc i ble por t ion of bound sul f ites, such as car b onyl ad d i t ion prod u cts, in foods. Test por t ion is heated with refluxing HCl (ca 1M) to con v ert sul f ite to SO2. Stream of N2 in t ro d uced be l ow sur f ace of refluxing so l u t ion sweeps SO2 through wa t er-cooled con d enser and, via bubbler at t ached to con d enser, with 3% H2O2 so l u t ion, where SO2 is ox i d ized to H2SO4. Sul f ite con t ent is di r ectly re l ated to gen e r a ted H2SO4, which is de t er m ined by ti t ra t ion with stan d ard i zed NaOH so l u t ion.For ver i f i c a t ion,sul f ate can be de t er m ined gravimetrically as BaSO4.
B. Ap p a r a t us
(a)Dis t il l a t ion ap p a r a t us.—(Note: In this method, back pres s ure in s ide ap p a r a t us is lim i ted to un a void a ble pres s ure due to height of 3% H2O2 so l u t ion above tip of bubbler (F). Keep back pres s ure as low as pos s i b le to avoid loss of SO2 through leaks. Use thin film of stop c ock grease on seal i ng sur f aces of all joints ex c ept joint be t ween sepa r a t ory fun n el and flask. Clamp to g ether each joint to en s ure com p lete seal through o ut anal y s is.) As s em b le ap p a r a t us (Fig u re 990.28A), which in c ludes (1) in l et adapter (A) with hose con n ec t or (Kontes 183000). Adapter pro v ides means of ap p ly i ng head pres s ure above so l u t ion. Use of pres s ure-equalizing drop p ing fun n el is not rec o m m ended be c ause con d en s ate, per h aps con t ain i ng SO2, is de p os i ted in fun n el and side arm. (2) Sepa r a t ory fun n el (B),3100 mL ca p ac i ty. (3) Round-bottom flask (C), 1 L, with three 24/40 ta p ered joints. (4) Gas in l et tube (D) (Kontes 179000) of suf f i c ient length to per m it in t ro d uc t ion of N2 within 2.5 cm of bot t om of flask.
(5) Allihn con d enser (E) (Kontes 431000-2430), jacket length 300 mm. (6) Bubbler (F), fab r i c ated from glass ac c ord i ng to di m en s ions in Fig u re 990.28B. (7) Ves s el (G), ca 2.5 cm id and
18 cm deep.
(b) Buret.—10 mL (Kimble Glass, Inc., No. 17124-F) with over f low tube and hose con n ec t ions for Ascarite tube or equiv a l ent air-scrubbing ap p a r a t us to per m it main t e n ance of CO2-free at m o s phere over stan d ard i zed 0.010M NaOH.
(c)Chilled wa t er circulator.—Chill con d enser with cool a nt, such as meth a n ol–water (20 + 40, v/v), main t ained at ￡15°C. Cir c u l ating pump, Neslab Coolflow 33 (Neslab In s tru m ents, Inc.,PO Box 1178, Portsmouth, NH 03801, USA), or equiv a l ent, is suit a ble.
C. Re a gents
(a) Aque o us hy d ro c hlo r ic acid.—4M. For each anal y s is, pre p are
90 mL so l u t ion by add i ng 30 mL HCl to 60 mL deionized
(18 meg o hm) wa t er.
(b) Methy l red in d i c a t or.—Dis s olve 250 mg methy l red in 100 mL eth a n ol.
(c) Stan d ard i zed titrant.—0.010M NaOH. Cer t ified re a gent may be used (Fisher SO-5-284). Stan d ard i ze so l u t ion with ref e r e nce stan d ard po t as s ium acid phthalate.
(d) Hy d ro g en per o x i de so l u t ion.—3%. For each anal y s is, di l ute
3 mL ACS re a gent grade 30% H2O2 to 30 mL with deionized (18 megohm) wa t er. Just prior to use, add 3 drops methy l red in d i c a t or and ti t rate with 0.010M NaOH to yel l ow end point. If end point is ex c eeded, dis c ard so l u t ion.
(e) Ni t ro g en.—High pu r ity, used with reg u l a t or to main t ain flow of 200 mL/min. To guard against ox y g en in N2 gas, use GC-type trap (Oxy-Purge N [Alltech-Applied Sci e nce Lab o r a t ories, Inc.; https://www.doczj.com/doc/cb15624349.html,], or equiv a l ent).
Al t er n a t ively,ox y g en-scrubbing so l u t ion,such as al k a l ine pyrogallol, in gas-washing bot t le (Kimble Glass, Inc.) may be used.
? 2005 AOAC IN T ER N A T IONAL
Table 990.28. Interlaboratory study results for sulfites in foods
Matrix Mean,
m g/g s r RSD r, %s R RSD R, %HorRat
Hominy9.17 1.3314.5 1.4215.5 1.36 Fruit juice8.05 1.3616.9 1.6220.1 1.73 Protein (seafood)10.41 1.4714.1 2.7726.6
2.38Fig u r e990.28A.Ap p a r a t us for op t i m ized
Monier-Williams method: A, in l et adapter; B, sepa r a t ory fun n el; C, round-bottom flask; D, gas in l et tube; E, Allihn con d enser; F, bubbler; G, ves s el.
47.3.43 AOAC Official Method990.28 Sulfites in Foods Optimized Monier–Williams Method First Action1990 Final Action1994 (Applicable of determination of≥10ppm(μg/g)sulfites in foods. Applicable in presence of other volatile sulfur compounds;not ap-plicable to dried onions,leeks,and cabbage.) Results of the interlaboratory study supporting the acceptance of the method: Hominy,9.17ppm(μg/g)sulfites: s r=1.33;s R=1.42;RSD r=14.5%;RSD R=15.5% Fruit juice,8.05ppm(μg/g)sulfites: s r=1.36;s R=1.62;RSD r=16.9%;RSD R=20.1% Protein(seafood),10.41ppm(μg/g)sulfites: s r=1.47;s R=2.77;RSD r=14.1%;RSD R=26.6% A.Principle Method measures free sulfite plus reproducible portion of bound sulfites,such as carbonyl addition products,in foods.Test portion is heated with refluxing HCl(ca1M)to convert sulfite to SO2.Stream of N2introduced below surface of refluxing solution sweeps SO2 through water-cooled condenser and,via bubbler attached to con-denser,with3%H2O2solution,where SO2is oxidized to H2SO4. Sulfite content is directly related to generated H2SO4,which is deter-mined by titration with standardized NaOH solution.For verifica-tion,sulfate can be determined gravimetrically as BaSO4. B.Apparatus (a)Distillation apparatus.—(Note:In this method,back pres-sure inside apparatus is limited to unavoidable pressure due to height of3%H2O2solution above tip of bubbler(F).Keep back pressure as low as possible to avoid loss of SO2through https://www.doczj.com/doc/cb15624349.html,e thin film of stopcock grease on sealing surfaces of all joints except joint between separatory funnel and flask.Clamp together each joint to ensure complete seal throughout analysis.)Assemble apparatus(Figure 990.28A),which includes(1)inlet adapter(A)with hose connector (Kontes183000).Adapter provides means of applying head pres-sure above https://www.doczj.com/doc/cb15624349.html,e of pressure-equalizing dropping funnel is not recommended because condensate,perhaps containing SO2,is deposited in funnel and side arm.(2)Separatory funnel(B),≥100mL capacity.(3)Round-bottom flask(C),1L,with three24/40 tapered joints.(4)Gas inlet tube(D)(Kontes179000)of sufficient length to permit introduction of N2within2.5cm of bottom of flask. (5)Allihn condenser(E)(Kontes431000-2430),jacket length 300mm.(6)Bubbler(F),fabricated from glass according to dimen-sions in Figure990.28B.(7)Vessel(G),ca2.5cm id and18cm deep. (b)Buret.—10mL(Kimble Glass,Inc.,No.17124-F)with over-flow tube and hose connections for Ascarite tube or equivalent air-scrubbing apparatus to permit maintenance of CO2-free atmo-sphere over standardized0.010M NaOH. (c)Chilled water circulator.—Chill condenser with coolant, such as methanol-water(20+40,v/v),maintained at≤15°C.Circu-lating pump,Neslab Coolflow33(Neslab Instruments,Inc.,PO Box 1178,Portsmouth,NH03801,USA),or equivalent,is suitable.C.Reagents (a)Aqueous hydrochloric acid.—4M.For each analysis,prepare 90mL solution by adding30mL HCl to60mL deionized(18meg-ohm)water. (b)Methyl red indicator.—Dissolve250mg methyl red in 100mL ethanol. (c)Standardized titrant.—0.010M NaOH.Certified reagent may be used(Fisher SO-5-284).Standardize solution with reference standard potassium acid phthalate. (d)Hydrogen peroxide solution.—3%.For each analysis,dilute 3mL ACS reagent grade30%H2O2to30mL with deionized (18megohm)water.Just prior to use,add3drops methyl red indica-tor and titrate with0.010M NaOH to yellow end point.If end point is exceeded,discard solution. (e)Nitrogen.—High purity,used with regulator to maintain flow of200mL/min.To guard against oxygen in N2gas,use GC-type trap (Oxy-Purge N[Alltech-Applied Science Laboratories,Inc.],or equivalent). Alternatively,oxygen-scrubbing solution,such as alkaline pyrogallol,in gas-washing bottle(Kimble Glass,Inc.)may be used. Prepare trap as follows:(1)Add4.5g pyrogallol to trap.(2)Purge trap with N2for2–3min.(3)Prepare KOH solution by adding65g Figure990.28A—Apparatus for optimized Monier-Williams method:A,inlet adapter;B,separatory funnel; C,round-bottom flask;D,gas inlet tube;E,Allihn con-denser;F,bubbler;G,vessel.
药品微生物检验替代方法验证指导原则 本指导原则是为所采用的试验方法能否替代药典规定的方法用于药品微生物的检验提供指导。 随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：（1)基于微生物生长信息的检验技术，如生物发光技术、电化学技术、比浊法等；(2)直接测定被测介质中活微生物的检验技术，如固相细胞技术法、流式细胞计数法等；（3)基于微生物细胞所含有特定组成成分的分析技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。这些方法与传统检查方法比较，或简便快速，或具有实时或近实时监控的潜力，使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能，同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。 在控制药品微生物质量中，微生物实验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要而采用非药典规定的检验方法（即替代方法）时，应进行替代方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。 微生物检验的类型及验证参数 药品微生物检验方法主要分两种类型：定性试验和定量试验。定性试验就是测定样品中是否存在活的微生物，如无菌检查及控制菌检査。定量试验就是测定样品中存在的微生物数量，如菌落计数试验。 由于生物试验的特殊性，如微生物检验方法中的抽样误差、稀释误差、操作误差、培养误差和计数误差都会对检验结果造成影响，因此，药品质量标准分析方法验证指导原则（附录XIX A)不完全适宜于微生物替代方法的验证。药品微生物检验替代方法的验证参数见表1。 表1 不同微生物检验类型验证参数 注： 尽管替代方法的验证参数与药品质量标准分析方法验证参数有相似之处，但是其具体的内容是依据微生物检验特点而设立的。替代方法验证的实验结果需进行统计分析，当替代方法属于定性检验时，一般采用非参数的统计技术；当替代方法属于定量检验时，需要采用参数统计技术。 进行微生物替代方法的验证时，若替代方法只是针对药典方法中的某一环节进行技术修改，此时，需要验证的对象仅是该项替代技术而不是整个检验方法。如无菌试验若改为使用含培养基的过滤器，然后通过适宜的技术确认活的微生物存在，那么，验证时仅需验证所用的微生物回收系统而不是整个无菌试验方法。 替代方法验证的一般要求 在开展替代方法对样品检验的适用性验证前，有必要对替代方法有一个全面的了解。首先，所选用的替代方法应具备必要的方法适用性证据，表明在不含样品的情况下，替代方法
食品中脂肪的测定 【实验目的】： 1.掌握食品中脂肪存在状态的相关概念和知识； 2.熟练地掌握乙醚、石油醚、乙醇等有机溶剂的安全使用方法，有机溶剂提取、萃取、回流、回收及分离技术。 3.了解各类食品中的脂肪测定方法，掌握索氏提取法的检测技能。 食品中脂肪是重要的营养成分之一，脂肪是人体组织细胞的一个重要成分，量种富含热能的营养素，也是脂肪溶性维生素的良好溶剂，有助于脂溶性维生素的吸收。脂肪与蛋白质结合生成的脂蛋白，在调节人本生理机能、完全生化反应方面具有重要的作用。因此，各种食品中脂肪的含量是重要的质量指标之一。食品中的脂肪有两种存在形式，即游离脂肪和结合脂肪。测定食品中脂肪含量的方法有索氏提取法、酸水解法、碱水解法、皂化法等。 一、标准方法（GB 5009.6-85） （一）索氏抽提法（第一法） 1.原理 样品用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后，蒸去溶剂所得的物质，在食品分析上称为脂肪或粗脂肪。因为除脂肪外，还含色素及挥发油、蜡、树脂等物。抽提法所测得的脂肪为游离脂肪。 2.试剂 （1）无水乙醚或石油醚； （2）海沙；同GB5009.3食品水分的测定方法。 3.仪器 索氏脂肪抽提器。 4.操作方法 （1）样品处理 ①固体样品。精密称取2 -5g （可取测定水分后的样品），必要时拌以海沙，全部移入滤纸筒内。（干样粉碎后过40目筛，肉绞两次，一般样品用组织捣碎机。） ②液体或半固体样品：称取5.0-10.0g ，置于蒸发皿中，加入海沙约20g 于沸水浴上蒸干后，再于95---105℃干燥，研细，全部移入滤纸筒内。蒸发皿及附有样品的玻棒，均用沾有乙醚的脱脂棉擦净，并将棉花放入滤纸筒内。 （2）抽提 将滤纸筒放入抽提管内，连接已干燥至恒量的接受瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的2/3处，于水浴上加热，使乙醚或石油醚不断回流抽提，一般抽提6-12h 。 （3）称量 取下接受瓶，回收乙醚或石油醚，待接受瓶内乙醚剩1-2mL 时在水浴上蒸干，再于95--105℃干燥2h ，放干燥器内冷却0.5h ，称量。 5.计算10020 1?-=m m m X …………………………（3-11） 式中：X---样品中脂肪的含量， % m 1---接受瓶和脂肪的质量，g; m 0---接受瓶的质量，g; m 2---样品的质量（如是测定水分后的样品中，按测定水分前的质量计），g 。 6.说明 （1）本法为索氏（SoxhLet ）提取法，为经典方法，测定准确，但费时、费试剂。 （2）本法要求必须干燥无水，水分有碍有机溶剂对样品的浸润。 （3）本法测得的脂肪中，还含有少量的可溶于脂肪的有机酸、色素、香精、醛、酮等，故只可称为粗脂肪。 （4）索氏提取器如图3-7所示。有机溶剂在接受瓶中受热蒸发至冷凝管中，冷凝后于盛装
食品安全性分析实验四、食品中亚硫酸盐含量测定 一、实验目的 学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚硫酸盐的实验原理，掌握实验的操作要点及测定方法。 二、实验原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应，生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物，此络合物于波长550nm处有最大吸收峰，且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫酸盐的浓度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧化硫的含量表示。 三、仪器与试剂 (一)试剂 1、四氯汞钠吸收液：称取13.6g氯化高汞及6.0g氯化钠，溶于水中并稀释至1000mL放置过夜，过滤后备用。 2、1.2 % 氨基磺酸铵溶液(12g/L)。 3、甲醛溶液（2g/L）：吸取 0.55 mL无聚合沉淀的甲醛（36%），加水稀释至100 mL，混匀。 4、淀粉指示液：称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100 mL沸水中，搅拌煮沸，放冷备用，此溶液临用时配制。 5、亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100 mL 6、乙酸锌溶液：称取22g乙酸锌溶于少量水中，加入3mL冰乙酸，加水稀释至100 mL。 7、盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取0.1g盐酸副玫瑰苯胺（C19 H18 N2CL.4H2O:p-rosaniline hydrochlo-ride）于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至100 mL。取出20mL，置于100 mL 容量瓶中，加盐酸（1+1）充分摇匀后使溶液由红变黄，如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色，再加水稀释至刻度，混匀备用。 8、碘溶液[c(1/2I2)=0.100 mol/L]。 9、硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3·5H2O)=0.100 mol/L]。 10、二氧化硫标准溶液：称取0.5g亚硫酸氢钠，溶于200 mL四氯汞钠吸收液中，放置过液，上清液用定量滤纸过滤备用。 吸取10.0 mL亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液于250mL碘量瓶中，加100 mL水，准确加入
FHZHJSZISO0012 水质亚硫酸盐的测定离子色谱法 F-HZ-HJ-SZ-ISO-012 水质—亚硫酸盐的测定—离子色谱法 1 适用范围 本法适用于水溶液中溶解亚硫酸盐离子的测定。测定范围：亚硫酸盐：0.1～50mg/L。 2 原理概要 使用液相色谱利用分离柱分离离子，用低容量的离子交换器作固定相，用一元、二元弱酸盐的水溶液作流动相。利用导电率、紫外光谱和电流检测器进行检定。 3 主要仪器和试剂 3.1 仪器 离子色谱仪，满足质量要求的分离柱及离子色谱仪附加设备。一个阳离子交换器。 3.2 主要试剂 所用试剂均为分析纯，所用水的电导率要小于0.01mS/m，且不含粒径大于0.45μm的颗粒。 碳酸氢钠，碳酸钠，邻苯二酸，四硼酸二钠（Na2B4O7），葡糖酸钠，甲醇，硼酸，甘油，乙腈，0.1mol/L的氢氧化钠溶液，4-羟基苄腈，三羟甲基甲烷，五水硫代硫酸钠，氯化钠，硫氰酸钾。 亚硫酸钠，37%（V/V）甲醛溶液，氢氧化铝。 4 过程简述 4.1 采样 所采样品要有代表性，在运输和保存过程中不被损坏。要使用玻璃器皿采样，采样后用氢氧化钠溶液调节pH值至10左右，加入甲醛溶液。 4.2 样品制备 使试样经过一个A-型强酸性阳离子交换器，以除去洗出液中溶解的氯化物，再将此滤液流经一个H-型阳离子交换器，以除去洗出液中溶解的银。 4.3 测试 5 准确度及精密度 由实验室间饮用水、工业污水、民用污水的测试数据可知，重复性标准偏差0.044～0.086mg/L，重复性变异系数3.32%～4.54%，重现性标准偏差0.144～0.520mg/L，重现性变异系数6.6%～16.1%。 6 来源 国际标准化组织，ISO 10304-3：1997（E）
9012 生物样品定量分析方法验证指导原则
1. 范围
准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和 制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动 学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此，必须完整地验证和 记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求，也涉及非临床或临床试验样品实 际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。 应该在相应的生物样品分析中遵守 GLP 原则或 GCP 原则。
2. 生物分析方法验证
2.1 分析方法的完整验证
分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析 物浓度的可靠性。此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。一般应对每 个物种和每种基质进行完整验证。当难于获得相同的基质时，可以采用适当基质 替代，但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范 围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液 中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一 个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，验证和 分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质 在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质 中。此外，色谱方法通常使用适当的内标。 应该从可追溯的来源获得对照标准物质。应该科学论证对照标准物质的适用 性。分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并提供储存条件、失效日期和批号。 对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质 不产生干扰。 当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内 标。它们必须具有足够高的同位素纯度，并且不发生同位素交换反应，以避免结 果的偏差。
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脂肪的国标检测方法—索氏萃取法 【GB/T 5009.6—1985】 牛奶中脂肪的测定方法 本标准适用于各类食品中脂肪含量的测定。 第一法索氏抽提法 1原理 样品用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后，蒸去溶剂所得的物质，在食品分析上称为脂肪或粗脂肪。因为除脂肪外，还含色素及挥发油、蜡、树脂等物。抽提法所测得的脂肪为游离脂肪。 2试剂 2.1无水乙醚或石油醚。 2.2海砂：同GB 5009.3—85《食品中水分的测定方法》2.3。 3仪器 索氏提取器。 4操作方法 4.1样品处理 4.1.1固体样品：精密称取2～5g(可取测定水分后的样品)，必要时拌以海砂，全部移入滤纸筒内。 4.1.2液体或半固体样品：称取 5.0～10.0g，置于蒸发皿中，加入海砂约20g于沸水浴上蒸干后，再于95～105℃干燥，研细，全部移入滤纸筒内。蒸发皿及附有样品的玻棒，均用沾有乙醚的脱脂棉擦净，并将棉花放入滤纸筒内。 4.2抽提 将滤纸筒放入脂肪抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒量的接受瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的2/3处，于水浴上加热，使乙醚或石油醚不断回流提取，一般抽提6～12h。 4.3称量 取下接受瓶，回收乙醚或石油醚，待接受瓶内乙醚剩1～2ml时在水浴上蒸干，再于95～
105℃干燥2h，放干燥器内冷却0.5h后称量。 4.4计算 式中：X——样品中脂肪的含量，%； m1——接受瓶和脂肪的质量，g； m0——接受瓶的质量，g； m2——样品的质量(如是测定水分后的样品，按测定水分前的质量计)，g。 第二法酸水解法 5原理 样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。 6试剂 6.1盐酸 6.295%乙醇 6.3乙醚。 6.4石油醚。 7仪器 100ml具塞刻度量筒。 8操作方法 8.1样品处理 8.1.1固体样品：精密称取约2g，置于50ml大试管内，加8ml水，混匀后再加10ml 盐酸。 8.1.2液体样品：称取10.0g，置于50ml大试管内，加10ml盐酸。 8.2将试管放入70～80℃水浴中，每隔5～10min以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完
I. INTRODUCTION This guidance provides recommendations to applicants on submitting analytical procedures, validation data, and samples to support the documentation of the identity, strength, quality, purity, and potency of drug substances and drug products. 1. 绪论 本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用于支持原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。 This guidance is intended to assist applicants in assembling information, submitting samples, and presenting data to support analytical methodologies. The recommendations apply to drug substances and drug products covered in new drug applications (NDAs), abbreviated new drug applications (ANDAs), biologics license applications (BLAs), product license applications (PLAs), and supplements to these applications. 本指南旨在帮助申请者收集资料，递交样品并资料以支持分析方法。这些建议适用于NDA，ANDA，BLA，PLA及其它们的补充中所涉及的原料药和制剂。 The principles also apply to drug substances and drug products covered in Type II drug master files (DMFs). If a different approach is chosen, the applicant is encouraged to discuss the matter in advance with the center with product jurisdiction to prevent the expenditure of resources on preparing a submission that may later be determined to be unacceptable. 这些原则同样适用于二类DMF所涉及的原料药和制剂。如果使用了其它方法，鼓励申请者事先和FDA药品评审中心的官员进行讨论，以免出现这种情况，那就是花了人力物力所准备起来的递交资料后来发现是不可用的。 The principles of methods validation described in this guidance apply to all types of analytical procedures. However, the specific recommendations in this guidance may not be applicable to certain unique analytical procedures for products such as biological, biotechnological, botanical, or radiopharmaceutical drugs. 本指南中所述的分析方法验证的原则适用于各种类型的分析方法。但是，本指南中特定的建议可能不适用于有些产品所用的特殊分析方法，如生物药，生物技术药，植物药或放射性药物等。 For example, many bioassays are based on animal challenge models, 39 immunogenicity assessments, or other immunoassays that have unique features that should be considered when submitting analytical procedure and methods validation information. 比如说，许多生物分析是建立在动物挑战模式，免疫原性评估或其它有着独特特性的免疫分析基础上的，在递交分析方法和分析方法验证资料时需考虑这些独特的性质。Furthermore, specific recommendations for biological and immunochemical tests that may be necessary for characterization and quality control of many drug substances and drug products are beyond the scope of this guidance document. 而且，许多原料药和制剂的界定和质量控制所需的生物和免疫化学检测并不在本指南的范围之内。 Although this guidance does not specifically address the submission of analytical procedures and validation data for raw materials, intermediates, excipients, container closure components, and other materials used in the production of drug
食品中亚硫酸盐测定方法的探讨 发表时间：2014-05-07T13:40:48.890Z 来源：《医药前沿》2014年第5期供稿作者：王美珍 [导读] 通过对盐酸副玫瑰苯胺酸度的调节，二氧化硫标准溶液及碘溶液浓度、用量的调整，得到较满意的标准曲线。王美珍 （云南省红河州食品药品检验所云南蒙自 661100） 【摘要】目的根据亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物与标准系列比较定量。此检验方法的关键就是标准曲线的制备。方法采用盐酸副玫瑰苯胺法。结果通过对盐酸副玫瑰苯胺酸度的调节，二氧化硫标准溶液及碘溶液浓度、用量的调整，得到较满意的标准曲线。结论二氧化硫标准溶液及碘溶液的浓度是绘制准确标准曲线的关键。 【关键词】亚硫酸盐二氧化硫标准溶液盐酸副玫瑰苯胺法标准曲线 【中图分类号】R155.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）05-0199-01 1、实验用试剂 （略） 2、二氧化硫标准曲线的制备 二氧化硫标准使用液（c=2.1544μg/ml) 吸取二氧化硫标准使用液（0.00；0.10；0.20；0.30；0.40；0.50；0.60；0.70；0.80ml）相当于 0.00；0.22；0.43；0.65；0.86； 1.08；1.29；1.51；1.72μg二氧化硫。分别置25ml带塞的比色管中。加入四氯汞钠吸收液至10ml，然后加入1ml氨基磺酸铵溶液（12g/L)，1ml甲醛溶液（2g/L）及1ml盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置20分钟。于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。（吸光度：0.00，0.046，0.115，0.191，0.283，0.347，0.437，0.529，0.692） 制备标准曲线需注意：（1）盐酸副玫瑰苯胺溶液制备加盐酸的量，约5ml左右，配制好的溶液必须不再显红色（呈酸性）。（2）二氧化硫标准溶液浓度的准确标定。（3）碘溶液配制时的浓度，自《中国药典》2005年版前，使用的浓度是1/2I2，自《中国药典》2005年版后，使用的浓度是I2。 3、结果 通过对盐酸副玫瑰苯胺酸度的调节，二氧化硫标准溶液及碘溶液浓度、用量的调整，得到较满意的标准曲线。 4、讨论 多次绘制标准曲线后可以看出，盐酸副玫瑰苯胺必须呈酸性，准确的二氧化硫标准溶液、碘溶液的浓度，才能得到随标准溶液浓度增加颜色渐深的紫红色络合物，并绘制较准确的标准曲线，从而正确检出食品中含有的亚硫酸盐。 参考文献 [1] 中华人民共和国国家标准GB/T5009.1～5009.100—2003，食品卫生检验方法理论部分（一）P267页. [2] 《中国药典》2010年版二部附录P183页.
药品及生物制品的分析方法和方法验证指导原则 目录 1.介绍...................... (1) 2.背景..................... .. (2) 3.分析方法开发. ..................... . (3) 4.分析程序内容.............................................. ......... ..................................... .. 3 A.原则/范围 (4) B.仪器/设备............................................. . (4) C.操作参数.............................................. .. (4) D.试剂/标准............................................. . (4) E.样品制备.............................................. .. (4) F.标准对照品溶液的制备............................................ .. (5) G.步骤......... ....................................... (5) H.系统适应性..... (5) I.计算 (5) J.数据报告 (5) 5.参考标准和教材............................................ (6) 6分析方法验证用于新药，仿制药，生物制品和DMF (6) A.非药典分析方法............................................. (6) B.验证特征 (7) C.药典分析方法............................................. .. (8) 7.统计分析和模型 (8) A.统计 (8) B.模型 (8) 8.生命周期管理分析程序 (9) A.重新验证 (9) B.分析方法的可比性研究............................................ . (10) 1.另一种分析方法............................................... .. (10) 2.分析方法转移的研究 (11) C.报告上市后变更已批准的新药，仿制药，或生物制品 (11) 9.美国FDA方法验证............................................... . (12) 10.参考文献
201507 FDA行业指南：分析方法验证（中英文）（下） VII. STATISTICAL ANALYSIS AND MODELS 统计学分析和模型 A. Statistics 统计学 Statistical analysis of validation data can be used to evaluate validation characteristics against predetermined acceptance criteria. All statistical procedures and parameters used in the analysis of the data should be based on sound principles and appropriate for the intended evaluation. Several statistical methods are useful for assessing validation characteristics, for example, an analysis of variance (ANOVA) to assess regression analysis R (correlation coefficient) and R squared (coefficient of determination) or linear regression to measure linearity. Many statistical methods used for assessing validation characteristics rely on population normality, and it is important to determine whether or not to reject this assumption. There are many techniques, such as histograms, normality tests, and probability plots that can be used to evaluate the observed distribution. It may be appropriate to transform the data to better fit the normal distribution or apply distribution-free (nonparametric) approaches when the observed data are
MM_FS_CNG_0421食品添加剂焦亚硫酸钠 MM_FS_CNG_0421 食品添加剂焦亚硫酸钠 1.适用范围 本方法适用于食品添加剂焦亚硫酸钠，该产品主要用于食品加工中作防腐剂、漂白剂、疏松剂。 分子式：Na 2S 2 O 5 相对分子质量：190.12（按1995年国际相对原子质量） 2.要求 2.1.外观：食品添加剂焦亚硫酸钠为白色或微黄色结晶粉末。 2.2.食品添加剂焦亚硫酸钠应符合表1要求： 表 3. 3.1.鉴别 3.1.1.试剂 碘； 碘化钾：360g／L溶液； 盐酸； 盐酸：1＋3溶液； 碘溶液：取1.4g碘，置于10mL碘化钾溶液中，加两滴盐酸，加水溶解，稀释至100mL，贮存于棕色瓶中避光保存； 硝酸亚汞； 汞； 硝酸：1＋9溶液； 硝酸亚汞溶液：取15g硝酸亚汞，加90mL水、10mL硝酸溶液溶解后，加一滴汞，避光密塞保存待用。 3.1.2.鉴别试验 3.1.2.1.本品呈亚硫酸盐特效反应： 试样的水溶液加入碘溶液后黄色即褪。 试样的水溶液滴入1＋3盐酸溶液后即有二氧化硫气体逸出，以硝酸亚汞溶液浸润的试纸检验，显黑色。 3.1.2.2.本品显钠盐特效反应： 用盐酸浸润的铂丝先在无色火焰上燃烧至无色，再蘸取少许试样溶液，在无色火焰上燃烧，火焰即呈鲜黄色。 3.2.主含量的测定 3.2.1.方法提要 在弱酸性溶液中，用碘将亚硫酸盐氧化成硫酸盐。以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠
标准滴定溶液滴定过量的碘。 3.2.2.试剂 碘标准滴定溶液：c（1／2I2）约0.1mol／L； 冰乙酸：（1＋3）溶液； 硫代硫酸钠标准滴定溶液：c（Na2S2O3）约0.1mol／L； 可溶性淀粉：5g／L溶液。 3.2.3.仪器、设备 一般试验室仪器设备。 3.2. 4.分析步骤 移取50mL碘标准滴定溶液，置于碘量瓶中。称取约0.2g试样，精确至0.000 2g，加入到碘溶液中，加塞后在暗处放置5min。加入5mL冰乙酸溶液，用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定，近终点时，加入2mL淀粉指示剂，继续滴定至溶液蓝色消失为终点。 同时移取50mL碘标准滴定溶液，按同样条件进行空白试验。 3.2.5.结果计算 以质量百分数表示的主含量（以Na 2S 2 O 5 计）X1按式（1）计算： X 1＝ 0.04752×（V0－V1）c ×100 m ＝4.752×（V0－V1）c (1) m 式中：V0 ——空白试验消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL； V 1 ——滴定试样所消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL； c ——硫代硫酸钠标准滴定溶液的实际浓度，mol／L； m ——试料的质量，g； 0.04752——与1.00mL硫代硫酸钠标准滴定溶液[c（Na2S2O3）＝1.000mol／L]相当的以克表示的焦亚硫酸钠的质量。 3.2.6.允许差 取平行测定结果的算术平均值为测定结果，平行测定结果的绝对差值不大于0.2％。 3.3.铁含量的测定 3.3.1.分析步骤 3.3.1.1.工作曲线的绘制 3.3.1.1.1.标准比色液的配制 根据试液中预计的铁含量，按照下表指出的泡围在一系列1OOml容量瓶中，分别加人给定体积的铁标准溶液。
47.3.43 - Food Additives: Direct / Chemical Preservatives AOAC Official Method 990.28 Sulfites in Foods Optimized Monier-Williams Method First Action 1990 Final Action 1994 (Applicable of determination of 10 ppm (µg/g) sulfites in foods. Applicable in presence of other volatile sulfur compounds; not applicable to dried onions, leeks, and cabbage.) Results of the interlaboratory study supporting the acceptance of the method: Hominy, 9.17 ppm (µg/g) sulfites: sr = 1.33; sR = 1.42; RSDr = 14.5%; RSDR = 15.5% Fruit juice, 8.05 ppm (µg/g) sulfites: sr = 1.36; sR = 1.62; RSDr = 16.9%; RSDR = 20.1% Protein (seafood), 10.41 ppm (µg/g) sulfites: sr = 1.47; sR = 2.77; RSDr = 14.1%; RSDR = 26.6% A. Principle（原理：蒸馏3%双氧水吸收，氢氧化钠滴定） Method measures free sulfite plus reproducible portion of bound sulfites, such as carbonyl addition products, in foods. Test portion is heated with refluxing HCl (ca 1M) to convert sulfite to SO2. Stream of N2 introduced below surface of refluxing solution sweeps SO2 through water-cooled condenser and, via bubbler attached to condenser, with 3% H2O2 solution, where SO2 is oxidized to H2SO4. Sulfite content is directly related to generated H2SO4, which is determined by titration with standardized NaOH solution. For verification, sulfate can be determined gravimetrically as BaSO4. B. Apparatus (a) Distillation apparatus.—(Note: In this method, back pressure inside apparatus is limited to unavoidable pressure due to height of 3% H2O2 solution above tip of bubbler (F). Keep back pressure as low as possible to avoid loss of SO2 through leaks. Use thin film of stopcock grease on sealing surfaces of all joints except joint between separatory funnel and flask. Clamp together each joint to ensure complete seal throughout analysis.) Assemble apparatus (Figure 990.28A), which includes (1) inlet adapter (A) with hose connector (Kontes 183000). Adapter provides means of applying head pressure above solution. Use of pressure-equalizing dropping funnel is not recommended because condensate, perhaps containing SO2, is deposited in funnel and side arm. (2) Separatory funnel (B), 100 mL capacity. (3) Round-bottom flask (C), 1 L, with three 24/40 tapered joints. (4) Gas inlet tube (D) (Kontes 179000) of sufficient length to permit introduction of N2 within 2.5 cm of bottom of flask. (5) Allihn condenser (E) (Kontes 431000-2430), jacket length 300 mm. (6) Bubbler (F), fabricated from glass according to dimensions in Figure 990.28B. (7) Vessel (G), ca 2.5 cm id and 18 cm deep. (b) Buret.—10 mL (Kimble Glass, Inc., No. 17124-F) with overflow tube and hose connections for