凝集反应
抗原-抗体反应
分为两个阶段
特异性结合阶段：抗原和抗体迅速识别、结合
可见反应阶段：受电解质、酸碱度、温度等环境因素影响，发生凝集、沉淀、溶解、补体结合介导的溶血等可见现象，反应慢
凝集反应agglutination
颗粒性抗原，或与载体颗粒结合后的可溶性抗原（或抗体），与抗体（或抗原）结合后，在适当条件下，出现肉眼可见的凝集现象。
参与反应的抗原称凝集原，抗体称凝集素。
凝集反应：直接凝集反应
间接凝集反应
凝集反应的影响因素
●电解质：0.85% NaCl溶液，降低颗粒性抗原的电荷
●pH值：合适pH值为6~8，pH在3左右出现细菌的自凝现象，称为酸凝
●温度：过冷反应速度慢，过热破坏蛋白结构
●抗体与抗原的比例什么现象？
一、直接凝集试验
颗粒性抗原直接与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，出现肉眼可见的凝集现象
1、玻片法
简便、快速的定性试验，敏感度低
如：人类ABO血型鉴定，细菌分离株的鉴定与分型
2、试管法
半定量试验：了解抗体及其含量
二、间接凝集试验
将可溶性抗原吸附或偶联在大小适当、与免疫无关的载体微粒上，制成致敏颗粒，再与相应的抗体作用，在适宜电解质存在时，出现特异性凝集现象，也称被动凝集试验
致敏：
将可溶性抗原吸附或偶联到载体微球上的过程称为致敏，致敏后的载体微球称为致敏微球。致敏后的颗粒反应面积增加，敏感性提高。
载体微球的条件
1、不溶于水，理化性质稳定，无化学活性和免疫学活性
2、大小均匀一致，密度与生理盐水等介质相近，短时间内不致下沉
3、可直接吸附或偶联结合抗原或抗体，且不影响其特性
致敏所用的抗原或抗体需要纯度高，且免疫活性较好
常用载体：
红细胞：绵羊、家兔、鸡红细胞，人O型血红细胞
吸附多糖抗原较好，吸附蛋白抗原较差
使用前醛化，可增强吸附蛋白的能力，能耐60℃加热，可长期保存不溶血。
且延长保存期，不易溶血
聚苯乙烯胶乳颗粒：人工合成颗粒，带负电
物理方法吸附蛋白，但结合牢固性较差
羧化后，带化学活性基团，可化学交联蛋白，性能稳定，保存期长
间接凝集反应的类型
1、正向间接凝集试验
用已知抗原致敏载体颗粒，检测样本中的抗体。常用于检测病原微生物相关的抗体
2、反向间接凝集试验
用已知抗体致敏载体颗粒，检测样本中的抗原。可检测新型隐球菌荚膜抗原，乙肝表面抗原等
3、间接凝集抑制试验
用已知抗原致敏载体颗粒，检测样本中是否含有相同的抗原（正向）。亦可用已知抗体
致敏载体颗粒，检测样本中是否含有同样的抗体（反向）。
4、间接血凝试验（IHA）：是以红细胞作为载体的间接凝集试验
5、协同凝集试验
用金葡菌作为载体，其表面A蛋白（SPA）可与IgG的Fc非特异性结合，可看做IgG致敏的金葡菌，检测样本中与IgG结合的抗原。可用于细菌的快速鉴定和分型，细菌中和病毒等可溶性抗原的测定。
凝集反应的特点
●凝集反应所用的抗原是较大的颗粒性物质，在介质中分散成均匀的颗粒悬液
●反应所形成的凝集物主要由抗原物质组成
●由于抗原颗粒大，反应表面积相对较小，为防止抗体过量，试验时需稀释抗体，以
利于合理配比抗原抗体，形成可见凝集
●反应效价多以抗体稀释度来判定
凝集反应的优点
反应敏感、快速，操作简便，无需特殊仪器设备，适应性强
凝集反应的用途
检测各种抗原
检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体
用于青霉素抗体、花粉抗体等抗体的检测
小结
●凝集反应试验是以颗粒性抗原或致敏载体微粒的凝集为判定结果的检验方法，包括
直接凝集法和间接凝集法
●直接凝集试验中的玻片法是一种定性试验，常用于鉴定血型、细菌等；试管法是一
种半定量试验，以效价判定结果.
细胞生物学实验报告 一．实验名称：细胞凝集反应 二．实验原理： 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 凝集素是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素 A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素 (Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们具有的某些“亲合” 特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。 血型鉴别实验，也是凝集反应的一种。 三．实验用品： 土豆块茎 显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离心管2支 PBS缓冲液：称取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g,KH2PO40.43g,加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.2. 4.2%的红细胞 四．实验步骤：
1.称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含 有可溶性土豆凝集素。 2.以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），加生理盐水3ml，在 1000r/min，离心5min，重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。 3.分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴，置双凹片左孔内，充 分混匀。 4.同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片右 孔内，充分混匀，做对照实验。 5.摇晃5—10min后，观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。 图左为PBS缓冲液对照图右为土豆凝集素
科目细胞生物学实验题目细胞凝集反应 细胞凝集反应 【实验目的】 1.了解细胞膜的表面结构； 2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理； 3.学习研究细胞凝集反应的方法。 【实验原理】 1.凝集素 凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖转移结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的为植物凝集素，通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。 在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞凝集。凝集素引起的血细胞凝集，其细胞膜结构没有发生变化，与血液凝固中发生的复杂生物化学过程完全不同；另外，凝集素能与不同的糖蛋白特异结合，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，因此，Ponder提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。 人们利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定。ABO血型鉴定主要用于临床输血，在皮肤、肾等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体；不孕症和新生儿溶血症病因的分析及亲子鉴定等。另外，凝集素在临床疾病防治、机体生理活动调控以及生物工程等方面展示出了十分广阔的应用前景。如：植物凝集素可抑制受精；芸豆凝集素可直接抑制HIV-1反转录酶的活性，减少HIV感染者的病毒载量；细胞膜表面糖复合物的糖链结构与肿瘤细胞增殖、侵染、转移等发展过程密切相关，凝集素芯片技术实现了对癌症的快速、高通量检测，有助于筛选出癌症相关的糖链标志物。 2.细胞凝集 细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为，细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集细胞核刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 3.细胞凝集的反应技术 一、直接凝集反应技术 颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应的抗体血清混合后，在电解质的参与下，经过一定时间，抗原抗体凝聚成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。 血清中的抗体称为凝集素。抗原称为凝集原。 细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状态。抗原与抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在着相互对应的化学基团，因而发生特异性结合，称为抗原抗体复合物。由于抗体与抗原结合，降低了抗原分子间的经典排斥力，抗原表面的亲水基团减少，由亲水状态变为疏水状态，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于例子的作用，中和
实验1 细胞凝集反应 （赵海泉主编基础生物学实验指导细胞生物学分册中国农业大学出版社2008.8.） 一、实验目的与原理 1．目的 学习植物凝集素的提取方法，观察红细胞凝集现象。 2．原理 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为细胞间的联系和识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素（1ectin）是一类含糖并能与糖专一结合的蛋白质（少数例外），它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 二、实验用品 1．材料 土豆块茎，兔血。 2．试剂 0.9 % NaCl溶液，PBS缓冲液（称取7.2 g NaCl、1.48 g Na2HPO4、0.43 g KH2PO4。加蒸馏水定容至1 000 mI，pH 7.2）。 3．器材 离心机，显微镜，天平，注射器，6号针头，载玻片，容量瓶，滴管，离心管等。 三、实验内容与操作 （一）提取凝集素 称取土豆去皮块茎20 g，加100 ml PBS缓液，浸泡2 h，将浸出的粗提液过滤，即为可溶性土豆凝集素提取液。 （二）制备2%的红细胞悬液 以无菌方法抽取兔静脉血液（加抗凝剂）2 mI。加8 mL 0.9 % NaCl溶液，
以2 000 r/min离心5 min，去掉上清液，再加0.9 % NaCl溶液至10 ml，反复洗涤5次。最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。（三）凝集反应 用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各1滴，置载玻片上，充分混匀，静置20 min后于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。 四、注意事项 1．若沉淀压积的红细胞暂时不用，应将其4℃保存。下次使用前，先洗涤再用生理盐水配成2%红细胞悬液。 2．以PBS液加2%血细胞液作对照实验。 五、作业与思考题 1记录血细胞凝集情况。 2实验课程感想或感受。 教学内容： 1实验室安全教育。 2教学方法改革。创新小导师制 3实验报告写作要求 4本次实验内容讲解。 知识点： 实验动物知识。 采血操作。 凝集素。 显微镜。 记录方法。
第五章凝集反应 本章考点 1.概述 2.直接凝集反应 3.间接凝集反应 第一节概述 细菌、红细胞等颗粒抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称凝集反应。 凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。 凝集反应的特点：凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性；也可以进行半定量检测，即将抗体作一系列稀释，与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。由于凝集反应灵敏度高、方法简便，因而在临床检验中被广泛应用。 第二节直接凝集反应 直接凝集反应：其原理是细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称直接凝集反应。参加凝集反应的抗原称凝集原，抗体则称为凝集素。从方法上来讲，有玻片法和试管法两类。 玻片法凝集主要用于抗原的定性分析，短时间便能观察结果，一般用来鉴定菌种或分型；也用于人类AB0血型的测定。 试管凝集反应是用定量抗原悬液与一系列递度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价，可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如Widal反应、Well-Felix反应、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。 第三节间接凝集反应 间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒载体表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象，称间接凝集反应。 根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的方式，间接凝集反应分为4类：①正向间接凝集反应； ②反向间接凝集反应；③间接凝集抑制反应；④协同凝集反应。 图14 （正向）间接凝集反应（查抗体）
【实验题目】 细胞凝集反应 【实验目的】 1、了解细胞的表面结构。 2、掌握细胞凝集的原理。 3、掌握细胞凝集实验的操作方法。 【实验材料与用品】 1. 试剂：PBS缓冲溶液、0.9%的氯化钠溶液（生理盐水） 2. 器具：酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管 3. 材料：兔子静脉血 【实验原理】 1.凝集素 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物、人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的为植物凝集素，通常以其被提取的植物命名，凝集素为它们的总称。 在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（糖萼）。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 2.细胞凝集 细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团，目前认为，细胞间的联系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝状糖分子有关。 3.细胞凝集的反应技术 （1）直接凝集反应技术 颗粒性抗原与相应的抗体血清混合后，在电解质的参与下，经过一定时间，抗原抗体凝集成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集素。抗原称为凝集原。细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状
态。抗原和抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在相互对应的化学基团，因而发生特异性结合，称为抗原抗体复合物，由于抗体与抗原结合，降低了抗原分子间的排斥力，抗原表面的亲水基团减少，此时已有凝集趋势，在电解质参与下，中和了抗原抗体复合物的大部分电荷，使之失去了经典排斥力，分子间相互吸引，凝集成较大颗粒。出现了肉眼可见的凝集反应。 （2）间接凝集反应技术 可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质的参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应技术。 4.载体 具有吸附抗原（抗体）的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。 良好的载体有以下几点基本要求： （1）在生理盐水或缓冲液中无自凝现象； （2）大小均匀； （3）比重与介质相似，短时间内不沉淀； （4）无化学或血清学活性； （5）吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性； 目前使用最广泛的是人的O型红血球和绵羊红血球。后者使用更广，因其来源方便，另外绵羊红血球的表面有大量的糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一致。
医学免疫学实验指导 实验五凝集反应 由长沙达尔锋生物科技有限公司整理
【文章介绍】 实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。 BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。 【实验目的】 1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。 2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。 【实验用品】 1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。 2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。 【内容和方法】 一、玻片凝集试验(slide agglutination) 1.原理 玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。 2.方法 （1）取载玻片一张（平置实验台上），用特种铅笔或记号笔划分为3格，并标明1、2、3。 （2）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取1:10 稀释的伤寒杆菌诊断血清1～2 滴于第1、2 格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水1～2 滴于第3格内。 （3）将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第1、3格内的诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第2格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。 3.结果观察与判定
细胞凝集反应实验报告 【摘要】细胞凝集素可以将不同的细胞粘连在一起，在显微镜下可以观察到最终形成大的细胞团块，可以观察到细胞的凝集现象。通过不同的变量，控制细胞凝集反应因素，观察细胞凝集程度。 【关键字】血细胞凝集素凝集反应 【背景介绍】 细胞凝集指细胞与细胞之间通过某种凝集素的作用而相互粘连在一起的现象，最终形成大的细胞团块，在不用显微镜时即可用肉眼看到的明显的现象。早在1896年，Widal就利用伤寒患者的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。至1900年，Landsteriner在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型，并于1930年获得了诺贝尔奖。凝集实验灵敏度高，方法简便，迄今已成为通用的免疫学实验技术，广泛应用于临床检验。 凝集素是一种能够与糖类物质特异性结合的糖蛋白，具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞识别和粘连，从而将不同的细胞联系起来。常见的凝集素有刀豆素A、麦胚素、花生凝集素、大豆凝集素等。凝集素主要的作用就是凝集细胞和刺激细胞分裂，在细胞间形成“桥”的作用，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 细胞的凝集与细胞的细胞膜有关，细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被，目前普遍认为，细胞间的联系，以及细胞的生长分化，免疫反应等都与细胞表面的糖蛋白有关。 细胞凝集的作用很多，机体免疫中反应中，细菌等颗粒性病原体
会与凝集素结合而产生凝集反应，从而被更好的清除。 细胞凝集在实际中应用广泛，在临床上血细胞的凝集作用可用于血型鉴定，同时凝集素可以作为饲料添加剂，帮助抵御感染。 【实验材料】 1、试剂：土豆凝集素（已制备好）、2%兔血红细胞悬液、PBS缓 冲液、生理盐水。 2、仪器：移液管、离心管、离心机、有凹坑的载玻片、带刻度的 试管若干、显微镜。 【实验方法】 1、检查实验所用的仪器是否完备，完好，准备实验； 2、土豆切片，取2g放入10ml的PBS缓冲液中浸泡2h，获取土豆凝集素（此步骤已有老师准备好）； 3、梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再去一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×； 4、取1ml已制备好的2%的兔血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；（在实验时由于各方面原因，误将已制备好的2%兔细胞悬液当做兔的静脉血，而加入3ml 的生理盐水，进行离心分离，从而重复实验不必要的步骤，需要在以
实验一凝集反应（ABO血型的鉴定） [实验目的] 1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。 2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。 [实验原理] 在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 [实验器材] 1．器材：光学学显微镜，消毒缸 2．材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋 3．试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B [内容与方法] (一)玻片法凝集实验 1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。用干棉球止血。2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。 3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。 4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集 5.记录凝集情况，判定受检者的血型。 （二）试管法凝集实验 1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。用干棉球止血。 2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中 3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集 5．记录凝集情况，判定受检者的血型。 （三）演示实验（包括反定型鉴定法、板式和卡式法的结果判读） 1．实验老师准备0.5%标准红细胞：A型、B型、O型，已分离血浆的抗凝血 2．取洁净试管3支，分别标记上A、B、O字样，将受检者血浆加入已标注A、B、O字样的试管中各1滴。 3．用一次性吸管吸取0.5%标准红细胞血球悬液A、B、O 型，分别加于相应标记的试管内，并充分混匀，放置5－10分钟，（离心后观察结果）。 4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分
影响血液凝固的因素 （一）实验目的：通过本实验来了解血液凝固的基本过程及了解影响血液凝固的一些因素。 （二）实验对象：家兔 （三）实验步骤：（略） （四）实验结果： 1、观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用：实验中可见到静置杯内血液发生凝固。搅拌杯内血液不凝固，但在毛刷上见到红色的血凝块，经水冲洗后毛刷上缠绕有白色丝状物。 2、观察影响血凝的一些理化因素：如下表9-1所示。 表9-3 影响血凝的一些理化因素实验条件 1.加少许棉花 2.用石蜡油均匀涂试管内壁 3.放置37℃水浴 4.放置冰水水浴 5.加肝素10个单位 6.加草酸钾2mg （表9-3文字说明：略） 3、观察内源性及外源性凝血过程：如下表9-2所示 表9-2 内源性和外源性凝血过程的观察 试剂 1、富血小板血浆 2、少血小板血浆 3、生理盐水 4、羊肺悬液 5、0.025mol/l cacl2 血液凝固时间 （表9-2文字说明：略） （五）讨论： 血液凝固是指血液由流动的液体状态变为不流动的冻胶状态血液凝固过程大致分为三个 主要阶段：①凝血酶原激活物形成；②凝血酶原激活成凝血酶，③纤维蛋白原转变为纤维蛋白。在凝血酶原激活物的形成过程中分有两种不同的途径：内源性凝血途径和外源性凝血途径。内源性凝血途径是由凝血因子?启动的，参和血凝的全部凝血因子都在血浆内。凝血因子?可被各种带负电荷的物质等所激活，如血管内膜暴露的胶原纤维、玻璃、陶器等。外源性凝血途径是由存在于血管外组织中的凝血因子ⅲ所启动的，其余参和的凝血因子也在血管内。凝 血因子ⅲ在脑、肺、胎盘组织含量很丰富。 不管是内源性凝血途径或外源性凝血途径，他们最后的是使血纤维蛋白的形成而使血液 发生凝固。在观察纤维蛋白原在凝血过程中作用的实验中，由于参和凝血的全部凝血因子都在血浆中，因此其凝血过程是属于内源性凝血。由于玻璃和毛刷表面都带有负电荷，后者可激活凝血因子?，启动内源性凝血过程。凝血到最后阶段时，在凝血酶的作用下，把纤维蛋白原水解成血纤维蛋白；形成的纤维蛋白不断地交叉成网状结构，把血液中的所有血细胞网凝血时间50’’ 8’15’’ 2’15’’ 6’45’’ 不凝不凝试管1 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 2’15’’ 试管2 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 3’45’’ 试管3 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 45’’ 罗于其中，从而使血液发生凝固。静置杯中的血液，由于发生了上述的血液凝固过程， 所形成的纤维蛋白没有被破坏，所以杯中血液凝固。而搅拌过的杯内血液，虽也发生血液凝固过程，但所形成的纤维蛋白却不断缠绕到毛刷上，当杯内血液的纤维蛋白原全部水解掉后，形成的纤维蛋白也全部缠绕在毛刷上，这时血纤维只能网罗毛刷附近的一些血细胞，在毛刷上见
实验报告
二者均在正常值内，患伤寒的可能性小； H抗体效价超过正常值，O抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应；O抗体效价超过正常值，H抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染； 一般间隔1~2周复查，若抗体效价比前次结果增高2~4倍，则具有诊断价值。 实验报告
任务二：打孔 1.待琼脂板凝固后在琼脂板中间部分打四个孔，孔径3mm，孔距10mm。在左上角打一个孔作为标记。用胶头滴管吸去空上废液。 提示： （1）打孔时要小心，勿使琼脂层脱离载玻片或琼脂板底层开裂，以免加样时顺裂缝或底部散失。一旦出现裂缝或脱离现象，可向孔内滴加少许温琼脂加以弥补或将琼脂板在火焰高处来回通过几次补底。 （2）在琼脂板左上角打上标记孔，有助于确定正负极方向和样本上样位置，通常情况下，有标记孔侧，放置于正极端。 任务三：加样 1.如下图所示加样，用移液枪每个孔加10微升对应液体： C：人待测血清；D：人阳性血清；E：抗人血清抗体/诊断血清 提示： （1）抗原和抗体在一定的pH条件下，由于带电荷量的多少及分子量大小不同，在电场中以不同的速度作定向移动。在pH8.6的缓冲液中，多数蛋白质抗原物质带负电荷，在电场作用下向阳极移动，而其抗体大多为Y球蛋白，等电点较高，带负电荷较少，且分子量较大，电泳速度慢，受电渗作用影响向负极移动。 （2）加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。 （3）抗原、抗体的量应相接近时容易出现沉淀带，反之不易发生，如抗原过多，可造成假阴性结果，可通过稀释抗原加以解决。 任务四：正确放置琼脂板至电泳槽 1.向电泳槽中加入约2/3体积的pH8.6 0.05mol/L巴比妥溶液，将加好样的琼脂板放入电泳槽，有标记孔的一侧放在正极端。 2.用纱布条搭在琼脂板两侧，以便电泳。 提示： （1）电泳时抗原、抗体电极方向不可放反。 （2）搭桥时应注意与凝胶接触紧密，否则会使电流不均匀，致使沉淀线歪斜、不均匀。 任务五：确定电泳电压 1.设置电泳仪Us=6V，Is=4mA，Ts=60：00 提示： 电压、电流增大时，电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形，可将琼脂融化，电流过大抗原抗体蛋自易变性，干扰实验结果；电压过低时沉淀线出现的时间会延长。
. ..血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B 抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B 抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 三 消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5）10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A 型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。
凝集反应题库1-0-8
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]间接血凝可检测的是（） A.直接抗ABO系统抗原 B.不完全红细胞凝集素 C.直接致敏红细胞上的抗原 D.直接抗Rh抗原 E.白细胞表面抗原 血凝试验又称为Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法。它分为直接Coombs试验和间接Coombs试验，直接试验的目的是检查红细胞表面的不完全抗体而间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]直接凝集反应是（） A.颗粒性抗原与相应抗体在适当电解质存在下形成肉眼不可见的凝集现象 B.颗粒性抗原与相应抗体在适当电解质存在下形成肉眼可见的凝集现象 C.可溶性抗原与相应抗体在适当电解质存在下形成肉眼不可见的凝集现象 D.可溶性抗原与相应抗体在适当电解质存在下形成肉眼可见的凝集现象 E.以上均不对 直接凝集反应为颗粒性抗原直接与相应抗体反应，比例合适时出现凝集。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]血清学试验用于急性传染病诊断最可靠的发现是（） A.高抗体滴度 B.抗体滴度逐渐下降 C.抗体滴度逐渐增高 D.阳性补体结合试验 E.没有相应抗体 抗体滴度逐渐增高说明存在急性感染或感染逐渐加剧的可能。 https://www.doczj.com/doc/c3360542.html,/ 旅游管理
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]间接血凝试验阳性（） A.红细胞溶解 B.红细胞不溶解 C.红细胞凝集 D.红细胞不凝集 E.胶乳颗粒不凝集 间接血凝试验是以红细胞为载体的间接凝集试验，用已知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与待测样本中的抗体或抗原反应，出现红细胞凝集者为阳性。
姓名董朔晖系年级生命科学院2011级学号201100230164 科目细胞生物学实验实验题目细胞凝集反应日期2012.2.23 实验一：细胞凝集反应 一、实验目的 1、了解细胞的表面结构。 2、掌握细胞凝集的原理。 3、掌握细胞凝集实验的操作方法。 4、掌握普通光学显微镜的使用方法。 二、实验材料 1、实验材料 家兔（或2%家兔红细胞悬液）、土豆块茎（或由土豆块茎制作的可溶性土豆凝集素粗提取液）、PBS缓冲溶液（磷酸缓冲溶液）、柠檬酸钠溶液、0.9%的氯化钠溶液（生理盐水） 2、实验器材 5ml注射器、酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管 三、实验原理 1、在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（糖萼）。目前认为，细胞间的联系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝状糖分子有关。 2、凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，即糖蛋白，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素能与细胞外
被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的作用，从而凝集细胞。凝集素引起的细胞凝集，其细胞膜结构没有发生改变。与血液凝固中发生的复杂生化反应完全不同。 3、竞争性抑制实验：凝集素能与不同的糖蛋白特异性结合，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞凝集。 四、实验步骤 1、2%家兔红细胞悬液制备：以无菌方法抽取家兔耳缘静脉血液1ml （5ml注射器中先吸取3ml柠檬酸钠溶液），用0.9%的氯化钠溶液洗5次，3000r/s离心5min，最后按沉淀的红细胞体积用0.9%的氯化钠溶液配成2%的红细胞悬液。 2、土豆凝集素制备：称取去皮土豆块茎2g，切成薄片，加10mlPBS 缓冲液，浸泡2h，浸出粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 3、细胞凝集反应：双凹片土左侧滴土豆凝集素1滴，2%家兔红细胞悬液1滴；右侧滴PBS缓冲液1滴，2%家兔红细胞悬液1滴。在双凹片上混匀，摇动。 4、低倍镜下观察。 五、实验结果 1、实验结论 2、实验照片
凝集反应题库1-1-8
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]试管凝集试验常用于（） A.抗原定性 B.抗体定性 C.抗原定量 D.抗体半定量 E.抗体定量 试管凝集是将待检抗血清进行稀释，与一定量的已知抗原反应，以出现明显凝集所需抗血清的量稀释度，判断待检抗体的效价。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]外斐反应的原理是（） A.沉淀反应 B.间接凝集反应 C.交叉凝集反应 D.反向间接血凝反应 E.直接凝集反应 斑疹伤寒等立克次体的脂多糖与变形杆菌某些菌株的O抗原有共同的抗原成分。由于变形杆菌易于制备，其凝集反应结果又便于观察，因此临床检验中常用这类变形杆菌代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，这种交叉凝集反应叫外斐反应，用于检测人类或动物血清中有无相应抗体，供立克次病的辅助诊断。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列试验属于凝集试验的是（） A.WB试验 B.免疫电泳试验 C.RIA试验 D.ELISA试验 E.肥达反应 肥达反应是利用已知的颗粒性细菌抗原检测血清中是否有相应的抗体，属于凝集反应。https://www.doczj.com/doc/c3360542.html,/ 情侣名字
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]玻片法血清凝集反应主要优点是（） A.省钱 B.易操作 C.反应简单 D.报告结果快 E.省抗原 玻片法血清凝集反应出结果较快，给病人带来很大的方便。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]反向间接血凝是检测标本中的（） A.抗体 B.抗原 C.CIC D.不完全抗体 E.凝集素 反向间接凝集试验是检测标本中的抗原。
凝集反应题库1-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]外斐反应的原理是（） A.沉淀反应 B.间接凝集反应 C.交叉凝集反应 D.反向间接血凝反应 E.直接凝集反应 斑疹伤寒等立克次体的脂多糖与变形杆菌某些菌株的O抗原有共同的抗原成分。由于变形杆菌易于制备，其凝集反应结果又便于观察，因此临床检验中常用这类变形杆菌代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，这种交叉凝集反应叫外斐反应，用于检测人类或动物血清中有无相应抗体，供立克次病的辅助诊断。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列试验属于凝集试验的是（） A.WB试验 B.免疫电泳试验 C.RIA试验 D.ELISA试验 E.肥达反应 肥达反应是利用已知的颗粒性细菌抗原检测血清中是否有相应的抗体，属于凝集反应。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]玻片法血清凝集反应主要优点是（） A.省钱 B.易操作 C.反应简单 D.报告结果快 E.省抗原 玻片法血清凝集反应出结果较快，给病人带来很大的方便。(互联网彩票 https://www.doczj.com/doc/c3360542.html,)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]反向间接血凝是检测标本中的（） A.抗体 B.抗原 C.CIC D.不完全抗体 E.凝集素 反向间接凝集试验是检测标本中的抗原。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]间接血凝可检测的是（） A.直接抗ABO系统抗原 B.不完全红细胞凝集素 C.直接致敏红细胞上的抗原 D.直接抗Rh抗原 E.白细胞表面抗原 血凝试验又称为Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法。它分为直接Coombs试验和间接Coombs试验，直接试验的目的是检查红细胞表面的不完全抗体，而间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。
细胞凝集反应 王玉琼201005232142 齐鲁医学班 一实验目的： 1了解细胞膜的表面结构 2了解血细胞凝集原理 3学习研究细胞凝集反应的方法 二实验原理： 细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为，细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集细胞核刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 三实验用品： PBS缓冲液显微镜双凹载玻片滴管 土豆凝集素 土豆凝集素的提取：去皮土豆块茎2g，加10mLPBS缓冲液浸泡24h，所得粗提液中既含有可溶性土豆凝集素. 1%兔血红细胞 2.1%兔血红细胞制备：抽取兔静脉血1mL加抗凝剂，加入3mL生理盐水，1000r/min离心5min，重复洗涤三次。按红细胞压积配成1%红细胞悬浊液。 四实验步骤： 1．分别用滴管吸取土豆凝集素和1%兔血红细胞各一滴，置于双凹片左孔混匀。 2．吸取PBS缓冲液各一滴置于双凹片右孔混匀。 3．摇晃5-10min观察，并以低倍镜镜检。 五实验结果： 反应前反应后 （左为混合了PBS的兔血红细胞，右为混合了土豆凝集素的兔血红细胞）
发生凝集的细胞未发生凝集的细胞 图2 低倍镜（*10）下混合了了土豆凝集素（左）和PBS缓冲溶液（右）的兔血红细胞观察结果分析： 混合土豆凝集素9分钟时细胞开始发生凝集，可以观察到细小沙粒状的细胞团，随时间流逝小细胞团变大。 如图1可看到，混合了土豆凝集素的兔血红细胞（右侧）聚集成块，周围液体较澄清；而混合了PBS缓冲溶液的兔血红细胞（左侧）未发生凝集，液体浑浊。 低倍镜下镜检（图2）可看到，凝集了的细胞聚成一簇不规则的团，而未发生凝集的红细胞很均匀。 六关于实验操作的反思 1 兔子耳缘静脉抽血： 基本操作：按压兔子耳缘静脉的近心端，用酒精棉球擦拭，可以看到耳缘静脉鼓起来。针尖孔朝上，平行进针。看到针尖回血后，抽取血液。拔针止血。 第一次抽血，手还是有点抖，不过还是抽到血。 存在问题：感觉抽不动针的活塞。不习惯拿针管的姿势。 2细胞凝集反应操作反思： 前两次由于滴入的PBS缓冲液太多，致使两边混合在一起。因此，要少滴，摇晃玻璃片时要缓慢。 七关于实验内容的理解体会 一关于实验原理 定义：颗粒性抗原（细菌、红细胞、偶联抗原的乳胶颗粒）与相应抗体结合后出现肉眼可见的凝集现象， 此称
凝集反应 抗原-抗体反应 分为两个阶段 特异性结合阶段：抗原和抗体迅速识别、结合 可见反应阶段：受电解质、酸碱度、温度等环境因素影响，发生凝集、沉淀、溶解、补体结合介导的溶血等可见现象，反应慢 凝集反应agglutination 颗粒性抗原，或与载体颗粒结合后的可溶性抗原（或抗体），与抗体（或抗原）结合后，在适当条件下，出现肉眼可见的凝集现象。 参与反应的抗原称凝集原，抗体称凝集素。 凝集反应：直接凝集反应 间接凝集反应 凝集反应的影响因素 ●电解质：0.85% NaCl溶液，降低颗粒性抗原的电荷 ●pH值：合适pH值为6~8，pH在3左右出现细菌的自凝现象，称为酸凝 ●温度：过冷反应速度慢，过热破坏蛋白结构 ●抗体与抗原的比例什么现象？ 一、直接凝集试验 颗粒性抗原直接与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，出现肉眼可见的凝集现象 1、玻片法 简便、快速的定性试验，敏感度低 如：人类ABO血型鉴定，细菌分离株的鉴定与分型 2、试管法 半定量试验：了解抗体及其含量
二、间接凝集试验 将可溶性抗原吸附或偶联在大小适当、与免疫无关的载体微粒上，制成致敏颗粒，再与相应的抗体作用，在适宜电解质存在时，出现特异性凝集现象，也称被动凝集试验
致敏： 将可溶性抗原吸附或偶联到载体微球上的过程称为致敏，致敏后的载体微球称为致敏微球。致敏后的颗粒反应面积增加，敏感性提高。 载体微球的条件 1、不溶于水，理化性质稳定，无化学活性和免疫学活性 2、大小均匀一致，密度与生理盐水等介质相近，短时间内不致下沉 3、可直接吸附或偶联结合抗原或抗体，且不影响其特性 致敏所用的抗原或抗体需要纯度高，且免疫活性较好 常用载体： 红细胞：绵羊、家兔、鸡红细胞，人O型血红细胞 吸附多糖抗原较好，吸附蛋白抗原较差 使用前醛化，可增强吸附蛋白的能力，能耐60℃加热，可长期保存不溶血。 且延长保存期，不易溶血 聚苯乙烯胶乳颗粒：人工合成颗粒，带负电 物理方法吸附蛋白，但结合牢固性较差 羧化后，带化学活性基团，可化学交联蛋白，性能稳定，保存期长 间接凝集反应的类型 1、正向间接凝集试验 用已知抗原致敏载体颗粒，检测样本中的抗体。常用于检测病原微生物相关的抗体 2、反向间接凝集试验 用已知抗体致敏载体颗粒，检测样本中的抗原。可检测新型隐球菌荚膜抗原，乙肝表面抗原等 3、间接凝集抑制试验 用已知抗原致敏载体颗粒，检测样本中是否含有相同的抗原（正向）。亦可用已知抗体
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑. 实验报告 课程名称：病原生物学与免疫学实验指导老师：陈玮__ _____成绩： 实验名称：凝集反应和吞噬作用______实验类型：_____________同组学生姓名：钟一鸣____ 1.直接凝集反应——ABO血型鉴定 【实验原理】 细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。常用的包括玻片法和试管法两种。 玻片凝集试验为定性实验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒性抗原如菌液或红细胞，各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便、快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。 在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含有A、B抗原而分为A（含A抗原）、B（含B抗原）、AB（含A、B抗原）、O（均不含A、B抗原）型。将受试者的红细胞加入抗B抗体试剂和抗A抗体试剂中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞上有无A、B抗原。 表1 ABO血型鉴定表 血型抗A分型试剂抗B分型试剂 A+- B- + AB++ O- - 【实验现象】 1）.在抗A抗体中，可见红细胞均匀分散，虽有时会见红细胞在圆孔中间沉积，但再加以摇晃便可发现红细胞分散。整体液体较为浑浊 2）.在抗B抗体中，可见红细胞在圆孔中央凝集成块，加以摇晃也不分散，周围液体较为澄清。 【实验结论】 该受试者血液红细胞含B抗原，为B型血 【实验讨论】
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 1）实验时应当注意抗体和抗原的比例。即滴加的血液含量以及抗体含量应适当，而不要一个特别多一个特别少，会影响实验结果 2）当看到有红细胞类似在圆孔中间凝集时，可多加晃动，看其是否会分散——有可能是因为圆圈状离心晃动使红细胞向中间沉积，而不是因凝集产生的现象。若分散则为干扰现象，并不是凝集反应。 2.间接凝集反应——血清类风湿因子测定 【实验原理】 以红细胞为载体，将人丙种球蛋白（可溶性抗原）吸附在载体表面而成为致敏红细胞，然后用此致敏红细胞检测类风湿性关节炎患者血清中的类风湿因子（抗变性IgG抗体），当患者血清中含有类风湿因子时红细胞发生凝集。此方法常用于检测血清中的抗体，辅助诊断疾病。 【实验现象】 理论上第九孔阴性对照中，孔中的红细胞应紧密集中与孔中央，成为一暗红点，孔周围整齐光滑。第十孔阳性对照红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。第1-8孔，若有类风湿因子，则应随着稀释度增加，红细胞由完全凝集于孔四周看不到中央红点，逐渐转变为可看见中央有疏松的红点，若最终稀释过多可致如阴性对照的结果。 本次实验，所有孔中，包括阴性对照，红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。 【实验结论】 十个孔均为“++++”，无法判断凝集效价以及结果是否阳性 【实验讨论】 1）.本次实验阴性对照仍出现完全凝集并均匀铺于孔四周的现象。经分析可能是由于稀释液遭到污染，使得所有孔中红细胞均发生完全凝集。 2）.实验时从恒温槽中取出96孔板时要注意轻拿，防止铺于孔四周已经凝集的红细胞因震动向孔心滑动，出现类似阴性的现象。 3）.加致敏红细胞悬液时应从第9孔阴性对照开始一次从低浓度向高浓度进行。 3.协同凝集实验 【实验原理】 金黄色葡萄球菌细胞壁含有一种蛋白质，称为金黄色葡萄球菌A蛋白SPA。SPA具有