编号：（）字号
本科生毕业设计（论文）
题目：银杏叶中黄酮类化合物的
提取工艺研究
姓名：学号：
班级：
二〇一一年六月
中国矿业大学
本科生毕业设计
姓名：学号：
学院：材料科学与工程学院
专业：材料科学与工程
设计题目：银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究专题：
指导教师：职称：
二O一一年六月徐州
中国矿业大学毕业设计任务书
学院材料科学与工程专业年级任务下达日期：2011年3月1日毕业设计日期：2011年3月1日至2011年6月15日
毕业设计题目：银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究
毕业设计主要内容和要求：
银杏叶中除含有黄酮类化合物外，还含有大量的蛋白质、鞣质、糖类和多酚类等水溶性物质。黄酮类化合物在有机溶剂中溶解度较高，可以利用有机溶剂对黄酮类化合物进行提取。
研究表明，实验条件和工艺参数对于银杏中的黄酮类化合物的提取率具有显著的影响。本论文主要研究了银杏叶黄酮类化合物的工艺参数，讨论试验结果得出最佳的提取工艺。
毕业设计任务如下：
1 查阅有关国内外文献资料，了解银杏的营养价值，学习银杏中有关黄酮提取的研究现状和常用的提取方法，具体研究黄酮类化合物的有机溶剂萃取方法。完成开题报告和毕业论文的综述部分（至少30篇文献，其中英文文献不少于5篇）。
1）了解银杏的历史，营养价值，药用价值。
2）了解银杏应用的历史，应用现状，和银杏的应用发展前景。
3）学习提取银杏中黄酮类化合物的常用方法，研究现状和前沿的研究方向。
4）研究本课题的目的和意义。
2 根据查阅文献结果，确定具体采用的实验方法，规划好实验流程做好实验设计。购买实验所需仪器和药品，对实验结果进行分析总结，
1）根据所查文献，设计实验方案，根据方案确定实验流程。
2）购买实验所需的药品和实验仪器，根据拟定的实验方案进行尝试性实验。
3）研究不同溶剂浓度，浸取温度，料液比，浸取温度对黄酮产量的影响。
4）对于通过实验得到的黄酮进行标定，得出最佳的实验方案。
3 翻译一篇与本课题密切相关的英文文献。文献为近五年发表的，中文字数不少于3000，并在文献综述中引用。
进度安排：
2011年3月1日~ 3月15日：查阅相关文献，确定实验方案。
2011年3月16日~ 4月5日：购买实验所需物品，初步实验，优化工艺参数。
2011年4月6日~ 5月31日：系统的对实验结果进行分析，根据实验结果对实验方
案进行必要调整，及时记录实验结果。完成开题报告、论文一般部分和文献翻译。
2011年6月1日~ 6月15日：撰写毕业论文，并补充必要实验。
院长签字：指导教师签字：
中国矿业大学毕业设计指导教师评阅书
指导教师评语（①基础理论及基本技能的掌握；②独立解决实际问题的能力；③研
究内容的理论依据和技术方法；④取得的主要成果及创新点；⑤工作态度及工作量；⑥总体评价及建议成绩；⑦存在问题；⑧是否同意答辩等）：
成绩：指导教师签字：
年月日
中国矿业大学毕业设计评阅教师评阅书评阅教师评语（①选题的意义；②基础理论及基本技能的掌握；③综合运用所学知
识解决实际问题的能力；③工作量的大小；④取得的主要成果及创新点；⑤写作的规范程度；⑥总体评价及建议成绩；⑦存在问题；⑧是否同意答辩等）：
成绩：评阅教师签字：
年月日
中国矿业大学毕业论文答辩及综合成绩
摘要
银杏在植物学和化学上占有重要地位。近年来，国内外学者对银杏提取物(GBE)进行了大量的研究，发现其主要药用成分之一为黄酮类化合物。以银杏叶为原料提取制成的药物，用于对心血管、脑血管、动脉硬化、高血压等疾病的治疗，有其他药物不能达到的特殊疗效。如何从银杏叶中提取有效成分是研究的关键。银杏叶黄酮化合物的提取包括银杏叶黄酮化合物的浸取和浸出液的富集分离两大部分，本文主要讨论银杏叶黄酮类化合物的浸取。目前，提取银杏叶黄酮类化合物的主要方法有：有机溶剂提取法、超临界体流体提取法(SFE)、高速逆流色谱技术提取法(HSCCC)和高效液相色谱(HPLC)分离法。本文主要研究了有机溶剂提取法。
首先，对比研究了银杏绿叶和银杏黄叶中的总黄酮含量。试验结果表明：绿叶的总黄酮含量为1.19%，黄叶的总黄酮含量为0.83%。采摘绿叶作为原料提取黄酮类化合物，可以提高总黄酮的产量。其次，研究了不同浸取剂对银杏叶黄酮类化合物提取率的影响。分别采用乙醇分析纯、乙醇水溶液、碱性去离子水在相同的实验条件下提取银杏叶中的黄酮类化合物。实验结果表明：在60℃时碱性去离子水的提取率为46.82%，乙醇分析纯的提取率为73.41%，乙醇水溶液的提取率介于两者之间，考虑生产成本，使用乙醇水溶液作为浸取剂更合适。最后，对不同的工艺参数对银杏叶黄酮类化合物提取率的影响进行了讨论。实验结果表明：使用体积分数为70%乙醇水溶液提取银杏叶中黄酮类化合物最合适，提取的最佳工艺参数为：浸取温度80℃，浸取时间为4 h，料液比为1:15，此时黄酮类化合物的提取率为87.54%。
关键词：银杏叶；黄酮类化合物；乙醇；提取方法
ABSTRACT
Division of Ginkgo biloba leaves plays an important role in botany and chemistry. In recent years, domestic and foreign scholars have done a lot of research on the Ginkgo biloba extract (GBE) and found one of its main medicinal ingredients of the flavonoids. Ginkgo biloba extract as raw materials to make the drug, used for cardiovascular, cerebrovascular, atherosclerosis, hypertension and other diseases, there are other drugs can not achieve the special effects. How to extract from Ginkgo biloba is the study of the key active ingredient. Flavonoids of Ginkgo biloba Ginkgo biloba extract include flavonoids leaching and leaching liquid enrichment and separation of two parts, the paper focuses on Ginkgo biloba flavonoids leaching. At present, the extraction of flavonoids in Ginkgo biloba main methods are: organic solvent extraction, supercritical fluid extraction method body (SFE), high-speed countercurrent chromatography extraction (HSCCC) and high performance liquid chromatography (HPLC) separation. This paper studies the organic solvent extraction.
First, the comparative study of ginkgo leaves and yellow leaves of Ginkgo Flavonoids. The results showed that: the total flavonoid content of leaves 1.19%, yellow leaves of the total flavonoids was 0.83%. Picking the green leaves as raw material extraction of flavonoids, can increase the yield of total flavonoids. Second, the study of different extraction agents on the flavonoids of Ginkgo biloba extract rate. Were of analytical grade ethanol, ethanol, alkaline deionized water under the same experimental conditions, Ginkgo biloba extract in flavonoids. The results show that: at 60 ℃, extraction of alkaline deionized water was 46.82%, analytical grade ethanol, the extraction rate of 73.41%, the extraction rate of ethanol between the two, consider the cost of production, the use of ethanol as a solvent extraction is more appropriate. Finally, different process parameters on the flavonoids of Ginkgo biloba extraction rate were discussed. The results show that: Using the volume fraction of 70% ethanol extract of Ginkgo biloba flavonoids most suitable to extract the optimum parameters were: extraction temperature 80 ℃, extraction time of 4 hours, solid to liquid ratio of 1:15, At this time the extraction of flavonoids was 87.54%.
Key words : Ginkgo biloba L. leaves ; flavonoids ; alcohol ; extracting technology
目录
一般部分
1 引言 (1)
2 银杏叶的主要化学成分及生物活性物质 (1)
2.1黄酮类化合物 (1)
2.2萜类内酯 (3)
2.3聚戊烯醇 (4)
2.4酚酸类 (4)
2.5其他成分 (5)
3 GBE的药理作用及临床应用 (5)
3.1对视网膜和胃黏膜的保护作用 (5)
3.2抗癌和抗PAF一ACHETER的作用 (6)
3.3改善心脑血循环和抗血小板凝集的作用 (6)
3.4对抗高脂血症和抗脂质过氧化作用 (6)
3.5对肾的保护作用 (7)
3.6抑菌和抗辐射作用 (7)
4 黄酮类化合物的性质 (8)
5黄酮类化合物提取分离常用方法 (8)
5.1有机溶剂提取法和水蒸汽蒸馏法 (8)
5.2超临界流体提取法(SFE) (9)
5.3高效液相色谱和高速逆流色谱提取法 (9)
5.4微波提取法和超声提取法 (10)
5.5生物提取法和酶提取法 (11)
6 黄酮类化合物的分析方法 (11)
6.1络合——分光光度法 (12)
6.2衍生化——气相色谱法 (12)
6.3高效液相色谱(HPLC)法 (12)
6.4超临界流体色谱法(SFC) (12)
6.5双波长吸光光度法 (13)
6.6原子吸收光谱法 (13)
6.7近红外光谱法 (13)
7 选题意义及研究内容 (13)
专题部分
1引言 (15)
2实验部分 (15)
2.1实验所用的仪器及化学药品 (15)
2.2银杏叶黄酮类化合物的分析方法 (16)
2.3银杏中黄酮类化合物的提取实验 (17)
2.4银杏叶黄酮类化合物提取率单因素影响实验 (18)
2.5银杏叶黄酮类化合物提取条件优化 (20)
3 结果与讨论 (20)
3.1银杏叶分析方法的建立 (20)
3.2银杏叶中总黄酮含量的测定和浸取剂的选择 (23)
3.3影响银杏叶黄酮类化合物提取率单因素的确定 (25)
3.4最佳工艺条件的选择 (28)
4 结论 (29)
翻译部分
英文原文 (33)
中文译文 (44)
致谢 (52)
专题部分
翻译部分
一般部分
1 引言
银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba的干燥叶[1]。性味甘、苦、涩、平。归心、肺经。具有敛肺、平喘、活血化瘀、止痛的功效，临床用于改善微循环，防治心脑血管疾病等[2,3]。从上个世纪60年代起，国内开始对银杏叶的化学成分、药理作用进行研究，并相继研制成制剂应用于临床，取得了良好的效果。有研究表明银杏叶提取物(GBE)改善冠心病、心绞痛总有效率为91.33%，改善心电图总有效率为73.99%[4]。由于银杏叶独特的药理和临床治疗效果，近年来在回归大自然的潮流下，人们对绿色产品的渴求更加强烈，因而使其成为全球研究药物的热点。
2 银杏叶的主要化学成分及生物活性物质
银杏叶的化学成分十分复杂，迄今为止，在银杏叶中发现的化合物已达160多种，但其中最重要的活性成分是黄酮类化合物和银杏内酯；此外，还有有机酸类、酚类、聚戊烯醇类、原花青素类和营养成分等。
2.1黄酮类化合物
黄酮类化合物都含有C15核，在GBE中含量约占5.91%，目前从GBE中已分离的黄酮类化合物有40多种[5-7]；根据分子结构不同，可分为四大类:
图1.1单黄酮类化合物的母核结构
Figure 1.1 Single parent flavonoid core structure
2.1.1单黄酮
银杏叶中的单黄酮有7种：山萘素、槲皮素、异鼠李素、洋芹素、木樨草素、三粒麦黄酮、杨梅树皮素，主要是由山萘素、槲皮素和异鼠李素与各种糖基形成的苷，它们的结构中均含有5，7，4-三羟基和连接糖基的3-羟基，而糖基可以是单糖、双糖、三糖，大多数为葡萄糖和鼠李糖，其中大多数是槲皮素、山萘素及其苷，其母核结构如图1.1。前3种
是其主要成分，被作为银杏制剂质量控制的主要指标之一，是治疗心脑血管系统疾病的有效成分[7]。
表1.1 银杏双黄酮的种类
Table 1.1 The types of gingko Biflavones
化合物compounds R
R2R3R4
1
银杏黄素
CH3CH3H H
ginketin
异银杏黄素
CH3H CH3H
isoginketin
阿曼托黄素
H H H H
amentoflavone
白果黄素
CH3H H H
bilobetin
西阿多黄素
CH3CH3CH3 H
ciadopitysin
5'-甲氧基白果黄素
CH3H H OCH3
5'-methoxy-bilobet
2.1.2 双黄酮
银杏双黄酮即二聚体黄酮有6种，见表1.1，分别为银杏黄素、异银杏黄素、阿曼托黄素、白果黄素、西阿多黄素和5'-甲氧基白果黄素。它们以5'，8″-连接，分子中含有1-3个甲氧基此类化合物通常视为裸子植物的特征化学成分，其母核结构如图1.2。
图1.2 双黄酮类化合物的母核结构
Figure 1.2 Double nucleus of flavonoids structure
2.1.3 儿茶素类
儿茶素类根据母核上2位碳原子旋光性的不同及5'位是否含有羟基分为4种：儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素，其母核结构如图1.3。此外，还有二聚体4，8″儿茶素没食子儿茶素、4，8″没食子儿茶素。药理实验表明儿茶素类具有治疗肝中毒和抗肿瘤的作用[7]。
图1.3 儿茶素类化合物的母核结构
Figure 1.3 Catechins parent nuclear structure
2.2 萜类内酯
银杏内酯包括银杏内酯A、B、C、J、M和白果内酯，其母核结构如图1.4，其中银杏内酯M仅存在于银杏的根皮中，因此银杏叶中的有效活性内酯成分主要指银杏内酯A、B、C、J和白果内酯，银杏内酯属二萜类内酯；分子中都含6个五元环，其中含有3个γ2内酯环和1个四氢呋喃环，它们的侧链上均含一个叔丁基;银杏内酯B的活性最强，特异性最高，这是区别其他天然内酯化合物的重要特征，白果内酯属倍半萜类内酯，分子结构中仅含有一个戊烷环，此类化合物在水溶液中易分解，这就是不同生产工艺产品质量不稳定的主要原因[8]。
图1.4 萜类内酯化合物的母核结构
Figure 1.4 The parent terpene lactones nuclear structure
表1.2银杏内酯的组成及其物化特性
Table 1.2 Composition of ginkgolides and physical and chemical properties
化合物compound
分子式
molecular
formular
熔点/℃MP
旋光度
rotation[α]D23E t01-1
银杏内酯A
ginkgolide A
C20H24O9310 -59.4 银杏内酯B
ginkgolide B
C20H24O10300 -52.9 银杏内酯C
ginkgolide C
C20H24O11300 -13.4
银杏内酯M ginkgolide M C20H24O10
> 280(分解
decompostion)
-39
银杏内酯J
ginkgolide J
C20H24O10322 -11.8
白果内酯bibbalide C15H18O8
> 300(分解
decompostion)
-64
2.3聚戊烯醇
聚戊烯醇是银杏叶中具有药用开发前景的生物活性类酯化合物，以同系物的形式广泛存在于动植物体内，其中哺乳动物体内的聚戊烯醇称为多萜醇(dolichols)。1982年日本田中康之等[8]最早从银杏叶中分离聚戊烯醇类酯，其分子中异戊烯基单元数为14~22。国内王成章等[9]1992年从银杏叶中分离出7种聚戊烯醇乙酸酯，均为桦木聚戊烯醇型结(betulapre-nol)，即ω-(trans)2-(cis)n-cis(α)，证明我国银杏叶聚戊烯醇的结构单元数为14~22，其化学结构如图1.5。
图1.5 聚戊烯醇化合物的母核结构
Figure 1.5 Polyprenols structure of compound nucleus
2.4酚酸类
酚酸类化合物成分属于羟基取代的水杨酸衍生物，主要有白果酸、白果酚、D2糖质酸、莽草酸和6-2羟基犬脲喹啉酸、银杏酸等，其化学结构如图1.6，研究表明银杏酚酸具有强烈的杀虫、抑菌杀菌作用以及抗肿瘤、抗炎和抗氧化等多种药理活性，可用于植物农药的开发和新药的研究[10]，而另一方面此类物质具有细胞毒性，可致过敏、致突变，引起阵发性痉挛，神经麻痹[11,12]，其主要毒性成分4'-2甲氧基吡哆酸为维生素B6拮抗剂，抑制大脑中
的谷氨酸转化为γ2氨基丁酸，因此GBE质量规定其含量必须低于5 mg/kg；国内市场上出售的GBE粉末一般酚酸含量都在300～1500 μg/g。
图1.6 酚酸类化合物的化学结构
Figure 1.6 The chemical structure of phenolic compounds
2. 5 其他成分
银杏叶含有17种氨基酸、蛋白质、糖类、多种维生素，如维生素C、维生素E等。还含有游离矿物质Ca、Zn、Cu、P、B、Se，其他微量元素Fe、F、Cr的含量也较高。
3 GBE的药理作用及临床应用
银杏树又称白果树，研究表明[12]，银杏的叶和果具有重要的药用价值。其中研究最多的是GBE，GBE有两大有效成分：黄酮类化合物和萜内酯类化合物。黄酮类化合物主要由单黄酮、黄酮醇及其苷类和双黄酮及儿茶素类等构成。萜内酯类化合物主要有银杏内酯和白果内酯Ⅲ。对动物，人类具有明显的药理活性，是一种药效确切，不良反应较少的天然药物。GBE对视网膜神经细胞、对胃黏膜等有保护作用，能改善哮喘，对抗帕金森病，抗辐射、减轻复发性口疮等均具有实用价值。GBE具有良好的应用前景，值得临床推广应用。
3.1 对视网膜和胃黏膜的保护作用
谷氨酸兴奋性毒性是视网膜神经细胞死亡的重要原因，可引起细胞线粒体膜电位(MMP)下降，功能受损。GBE可直接作用于视网膜神经细胞，提高MMP。改善线粒体功能，保护视网膜神经细胞[13]。沈志军等[14]进行细胞超微形态学观察发现，银杏叶药物组培养的细胞外节段盘膜排列规整，内节段线粒体丰富，细胞核染色质均匀。银杏叶能够较好地促进视网膜神经细胞增生。显著升高视网膜神经细胞的膜电位，对培养的视网膜神经细胞有良好的保护作用。GBE具有胃黏膜保护作用，且与西米替丁在治疗胃溃疡方面具有协同作用。赵维中等[15]采用大鼠束缚-冷冻应激模型和小鼠无水乙醇损伤模型观察GBE对胃黏膜损伤指数的影响，观察GBE对胃液分泌量、胃液酸度和胃蛋白酶活性的影响表明GBE可抑制束缚，冷冻应激和无水乙醇引起的胃黏膜损伤。
3.2抗癌和抗PAF一ACHETER的作用
日本松木武圆[16]用银杏叶粗提物，由正己烷部分分离得到十七碳烯水杨酸；由氯仿部分分离得到白果黄素，这二者对癌细胞均有很强的抑制活性，特别是白果黄素对TPA在57倍的浓度下呈75%的抑制效果，大大超过了具有很强抗致癌启动因子的维生素A酸。研究发现，槲皮素与杨梅黄素在小鼠皮肤中能抑制B代谢和加成物的形成。这说明其对需要代谢激活的致癌物都有抑制作用。德国的一项研究发现银杏叶中分离得到的天然产物银杏内酯A、B、C，特别是银杏内酯B，可用于转移性癌症的治疗。它能使对细胞毒药物耐药的癌细胞对化疗剂敏感有效，从而提高化疗效果，减少副作用。
药理实验表明，GBE有对抗磷酸组织胺引起的豚鼠在体、离体的支气管痉挛作用，亦能对抗磷酸组织胺、乙酞胆碱及氯化钡对豚鼠离体回肠的致痉作用。1985PGBaruqat发现，银杏内酯B及其从银杏中得到的异构体是具有高度专属性的PAF受体阻断剂。实验是用从家兔血小板细胞膜上分离的PAF受体进行的，其中银杏内酯B的活性最强.因此银杏内酯类成分在治疗与PAF有关的疾病，如过敏性疾病、哮喘、皮炎及风湿等具有很好的研究价值。
3.3 改善心脑血循环和抗血小板凝集的作用
药理实验表明，GBE有通过降低血液黏性改善微循环系统的功能。银杏酮可抑制血管紧张素酶(ACE)。ACE的作用是将血管紧张素Ⅰ转变为血管紧张素Ⅱ，而血管紧张素Ⅱ可使外周小动脉强烈收缩使血压升高。ACE被抑制后，不但减少血管紧张素Ⅱ生成和醛固酮及儿茶酚胺的分泌，且延缓了舒缓激肽的降解灭活，从而扩张脑血管、冠状动脉，降低血管阻力。银杏酮用于豚鼠离体心脏灌流，可引起冠状血管扩张，注射于豚鼠后肢动脉，可扩张后肢血管。GBE能改善小鼠的长期记忆功能，并对大鼠的帕金森综合征有一定的疗效。大量实验资料证明，GBE可使小动脉、毛细血管及静脉扩张，血流增加。
明亮等[17]研究GBE对血小板黏附及血栓形成的影响。对血小板黏附性采用旋转玻球法，体内血栓形成采用动一静脉旁路血栓形成法；体外血栓形成采用Chandler法；采用剪尾法观察小鼠尾动脉出血时间。发现GBE明显降低家兔血小板黏附率，减轻家兔动-静脉旁路形成血栓的重量；缩短大鼠体外形成血栓的长度，并减轻其干重，延长小鼠尾动脉出血时间。可得出GBE有一定的抗血小板黏附及血栓形成的作用。
3.4 对抗高脂血症和抗脂质过氧化作用
自由基引起的脂质过氧化作用与人体疾病的发生有着密切的关系。银杏叶中的主要有效成分银杏双黄酮、异银杏双黄酮、白果黄素及槲皮素均有抑制脂质过氧化作用，特别是黄酮醇类化合物槲皮素，具有更强的抑制活性.耿秀芳[18]以大老鼠作实验，发现水提银杏叶总黄酮有较明显的降低脂质过氧化作用<0.05。醇提银杏叶总黄酮有提高血清铜锌SOD活力和降低血粘度的作用。实验中同时测定谷丙转氨酶的活力，发现用药组活力明显低于空白对照组.这提示银杏叶总黄酮的抗自由基抑制脂质过氧化作用保护了肝细胞膜。
选取大鼠60只建立高脂大鼠模型，观察GBE新配方(银杏总黄酮和银杏内酯组成)对高脂血症大鼠血脂水平影响，结果提示GBE新配方可有效地纠正高脂血症的脂质代谢，对高脂饮食所致的高脂血症具有良好的预防作用[19]。药理实验表明，GBE有通过降低血液
银杏叶提取黄酮及分离纯化 组员：李佳辉、黄埔、赵超武 一、实验目的 1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取 2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置 3.学会自主设计实验，培养团队合作精神 二、实验原理 ⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用； ⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm; ⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因 为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。 其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。先用亚硝酸钠还原黄酮类化
合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）
目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。 其工艺流程如下： 银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物 由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。 三．实验材料及器材 1.材料 酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸
银杏叶提取物的作用 【关键词】银杏叶提取物;药理作用;临床应用 银杏叶性甘，味苦、涩、平，归心、肺经，有敛肺、平喘、活血化淤、止痛之功效。银杏叶提取物(Ginkgo Biloba Extract，GBE)主要含有黄酮苷和萜烯酯，黄酮苷主要是山奈酚及槲皮素的葡萄糖苷，萜烯酯主要是银杏内酯和白果内酯[1]，均具有多种药理作用。本文即对GBE在临床中的应用作一综述。 1 中枢神经系统疾病 GBE中的黄酮苷具有扩张脑血管、降低脑血管阻力，降低毛细血管通透性，增加脑血管流量，清除自由基等作用;银杏内酯则是血小板活化因子拮抗剂，能降低血黏度，改善血液流动特性[2]。GBE 在抗脑缺血的作用中，能改善能量代谢障碍和对抗酸中毒，拮抗兴奋性氨基酸(EAA)毒性和自由基损伤，阻止缺血后炎症反应发生，减少神经细胞凋亡，还能明显抑制神经细胞内钙超载，从而减轻缺血缺氧对脑组织的损伤[3]。 1.1 眩晕症戴春富等[4]采用随机对照的方法，选用甲磺酸倍他司汀为对照药，疗程12周，结果研究组患者治疗第12周末眩晕发作频率、持续时间以及眩晕症状总体评分经Wilcoxon秩和检验均明显优于对照组，P值均小于0.05。经12周的治疗，两组患者间治疗总有效率无统计学差异;显效率差异有统计学意义，研究组为44.8%，对照组为1 2.9%。 1.2 帕金森病帕金森病(PD)是一种黑质致密层多巴胺能神经元病变所致的慢性进行性老年变性疾病，临床以震颤、强直、运动迟缓为主要表现。在对银杏叶的基础研究中发现，GBE除了具有扩血管作用、对中枢神经系统缺血缺氧的保护作用、抗自由基作用、抗焦虑及镇静作用外，还有抗帕金森病的作用。刘学文等[5]将帕金森病患者68例分为GBE组36例和对照组32例，治疗组给予 GBE20ml/d静滴，连续2周;2组均给予美多巴125～250mg，2～3次/d，每5～7d调整剂量。2周后2组疗效差异有统计学意义(P<0.05)，GBE组治疗前后Webster评分差异有统计学意义(P<0.05)，这表明GBE 治疗帕金森病有良好疗效，能有效缓解症状，改善患者生活质量。 1.3 脑梗死丁国祥等[6]将132例脑梗死患者随机分为2组。治疗组给舒血宁20ml，脑蛋白注射液60mg,l次/d,静滴，连用14d;对照组单用丹参注射液20ml加人生理盐水250ml中静滴，1次/d,14d 为1疗程。比较治疗前后疗效及血流变指标,治疗组均有明显改善，治疗组总有效率为9 2.64%，对照组总有效率为84.37%，差异有统计学意义(P<0.05)。 1.4 老年痴呆症盛树力[7]使用GBE(120mg/d)和麦角生物碱类(5.9mg/d)及安慰剂对60例轻、中度老年性痴呆进行治疗，每组20例。结果显示GBE和麦角生物碱类都有一定疗效，两组间无统计学差异，安慰剂组无变化。采用随机双盲方法观察GBE(80mg/d，共3个月)对另一组40例老年性痴呆的疗效，经SKT等量表评定发现，治疗组服药1个月后记忆力、注意力比空白对照组有明显改善，其他多项测验也有改善。 2 心血管系统疾病 银杏叶提取物中的总黄酮苷通过抑制缩血管物质内皮素(ET) 发挥体内扩血管作用[8]，银杏苦内酯则具有改善心肌缺血的作用，从而缓解心绞痛，机制可能是通过控制心律不齐和缩减梗死范围来提供对心肌的保护[9]。 武宇洲等[10]将60例老年冠心病患者随机分为GBE治疗组和对照组(给予生理盐水250ml)各30例。治疗组心电图有效率优于对照组(P<0.05)，显示GBE能明显增加老年冠心病患者冠状动脉左前降支舒张期峰值流速、收缩期峰值流速和舒张期时间速度积分(P<0.01);而对照组冠状动脉左前降支血
银杏叶黄酮提取及含量测定 一、实验目的 1、掌握银杏叶中黄酮的提取方法 2、了解银杏叶中黄酮的含量测定 二、实验原理 近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。 １．１有机溶剂浸提法 目前国内外使用最广泛的银杏叶中黄酮的提取方法就是有机溶剂提取法，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇或某些极性较大的混合溶剂，如甲醇－水（１＋１）溶液。由于甲醇的毒性、挥发性较大，因此一般采用乙醇作为提取剂。银杏叶干燥粉碎后用有机溶剂浸泡、提取、过滤，滤液中的溶剂经减压蒸馏除去后得银杏叶浸膏粗提物。徐桂花等［１］提取银杏叶中黄酮类化合物时，采用乙醇（７０＋３０）溶液为提取剂，提取温度为７０℃，料液质量浓度比为１ｇ比４０ｍＬ，提取时间为４ｈ。由于乙醇提取工艺在安全性、溶剂成本、效率及杂质酚酸去除等方面都不能应对日益严酷的市场竞争，张林涛等［1］提出了以硼砂－ 氢氧化钙碱水为溶剂提取银杏叶黄酮，其黄酮提取率与文献值相近，但提取工艺时间缩短为１ｈ。 １．２超声波提取法 超声波提取法是利用搅拌作用、强烈的振动和空间效应、高的加速度等使药物有效成分进入溶剂，从而提高提取率，缩短提取时间，并能消除高温对提取成分影响的一种提取法。刘晶芝等［2］运用了超声波技术与水浸提取相结合的方法得出超声波提取的最佳工艺条件为：超声频率４０ｋＨｚ，超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比１００，提取温度３５℃，静置３ｈ，提取率为８１．９％。郭国瑞等［3］以水为介质，超声波提取银杏叶中黄酮苷，与常规水浸提法比较，超声波提取效率大大提高，确定超声波提取的最佳工艺为：超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比３０，提取温度５０℃，提取率为８２．３％。 １．３超临界流体萃取法 超临界流体萃取法是一种以超临界流体代替常规有机溶剂对有效成分进行萃取和分离的新技术。可作为超临界流体的物质很多，其中二氧化碳临界温度（ＴＣ＝３１．３℃）接近室温，且具有无色、无毒、无味、不易燃、化学惰性、价廉、易制成高纯气体等优点而被广泛应用，特别在中药材及其制剂中更显示出其独特、简便、快速、具有较高的选择性、提取杂质少、可直接进样分析的优点。邓启焕等［4］探讨了超临界萃取银杏叶有效成分的影响因素，最佳条件为萃取压力２０ＭＰａ、时间９０ｍｉｎ、粒度３．９ｍｍ、温度４０℃，经测定银杏叶黄酮的质量分数为２８％，高于国际公认标准。 １．４微波提取法 微波提取法是利用分子或离子在微波场中的导电效应直接对物质进行加热从而提取植物细胞内耐热物质的新工艺。曾里等［5］的研究表明以乙醇溶液作溶剂比以水作溶剂的效果好，最佳条件为以乙醇 （６０＋４０）溶液为提取剂，解冻处理２０ｍｉｎ。张鹏等［6］对微波法提取银杏叶中黄酮类物质进行了研究，最佳提取条件为以乙醇（５０＋５０）溶液
银杏黄酮即银杏叶提取物，它能够增加脑血管流量，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，扩张冠状动脉，防止心绞痛及心肌梗塞，防止血栓形成，提高机体免疫能力。对冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压病人均十分有益。 银杏黄酮 银杏黄酮亦称银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E. [本品来源]本品为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶提取物。 [植物分布]全国大部分地区有产，主产湖北、江苏、广西、四川、河南、山东、辽宁等地。. [产品性状]银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E为浅黄棕色可流动性棕黄色粉末，略有银杏叶香味。 [产品含量]总黄酮甙含量：24-26%（HPLC法）,总萜内酯含量8-10%（HPLC法）白果内酯≥2.5% 银杏内酯A≥1.4% 银杏内酯B≥1.2%，银杏内酯C≥0.9% ，银杏酸≤1-5ppm重金属含量≤20ppm AS≤1PPM 干燥失重≤3%，炽灼残渣≤1.5%，溶济残留≤1%。 [产品用途]适用于制药、保健品、日用品、化妆品等各个领域 [适用范围]增加脑血管流量，降低脑血管阻力，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，免受缺血损害，扩张冠状动脉，防止心绞痛及心肌梗塞，抑制血小板聚集，防止血栓形成，清除有害的氧化自由基，提高免疫能力，具有防癌抗衰功能。对治疗冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压等病有神奇疗效。 1. 促进循环 银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.能同时促进大脑和身体肢体的循环。银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.的一个主要保健功能就是抑制一种称为血小板活化因子（PAF）的物质，PAF是一种从细胞中释放的介质，其会导致血小板聚集（堆积在一起）。高含量的PAF会导致神经细胞损伤，中枢神经系统血流量降低，发炎，和支气管收缩。与自由基非常相似，高PAF 水平也会导致衰老。银杏内酯和白果内酯可在缺血（体内组织缺少氧气）时期内保护中枢神经系统的神经细胞不受损伤。该功能可能能对苦于中风的患者有辅助治疗的作用。除了抑制血小板粘着外，银杏提取物调节血管张力和弹力。换句话说，其可令血管循环更加有效率。该提升循环效率作用对循环系统中的大血管（动脉）和较小血管（毛细血管）都有同样作用。 2. 抗氧化作用 银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.可能在大脑，眼球视网膜和心血管系统中可发挥抗氧化特性。其在大脑和中枢神经系统中的抗氧化作用可能有助于防止因年龄导致的大脑功能衰落。银杏叶提取物在大脑中的抗氧化功能特别使人感兴趣。大脑和中枢神经系统特别易受自由基攻击。自由基
EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0Ginkgo dry extract,re?ned and quanti?ed TESTS Water (2.2.13):maximum 100mL/kg,determined by distillation on 20.0g of the powdered herbal drug (710)(2.9.12). Total ash (2.4.16):maximum 6.0per cent. ASSAY Essential oil (2.8.12).Use 20.0g of the freshly,coarsely powdered herbal drug,a 1000mL round-bottomed ?ask,10drops of liquid paraffin R or other antifoam,500mL of water R as distillation liquid and 0.5mL of xylene R in the graduated tube.Distil at a rate of 2-3mL/min for 4h. 04/2008:1827 GINKGO DRY EXTRACT,REFINED AND QUANTIFIED Ginkgonis extractum siccum raf?natum et quanti?catum DEFINITION Re?ned and quanti?ed dry extract produced from Ginkgo leaf (1828).Content : –flavonoids,expressed as flavone glycosides (M r 756.7):22.0per cent to 27.0per cent (dried extract); –bilobalide :2.6per cent to 3.2per cent (dried extract);–ginkgolides A,B and C :2.8per cent to 3.4per cent (dried extract); –ginkgolic acids :maximum 5ppm (dried extract). PRODUCTION The extract is produced from the herbal drug by an appropriate procedure using organic solvents and their mixtures with water,physical separation steps as well as other suitable processes. CHARACTERS Appearance :bright yellow-brown,powder or friable mass. IDENTIFICATION Thin-layer chromatography (2.2.27). Test solution .Dissolve 20.0mg of the extract to be examined in 10mL of a mixture of 2volumes of water R and 8volumes of methanol R . Reference solution .Dissolve 1.0mg of chlorogenic acid R and 3.0mg of rutin R in 20mL of methanol R .Plate :TLC silica gel plate R (5-40μm)or [TLC silica gel plate R (2-10μm)]. Mobile phase :anhydrous formic acid R ,glacial acetic acid R , water R ,ethyl acetate R (7.5:7.5:17.5:67.5V/V/V/V ). Application :20μL [or 5μL],as bands. Development :over a path of 17cm [or 6cm]. Drying :at 100-105°C. Detection :spray the plate whilst still hot with a 10g/L solution of diphenylboric acid aminoethyl ester R in methanol R ,then spray with a 50g/L solution of macrogol 400R in methanol R ; allow to dry in air for about 30min and examine in ultraviolet light at 365nm. Results :see below the sequence of zones present in the chromatograms obtained with the reference solution and the test solution.Furthermore,other,weaker ?uorescent zones may be present in the chromatogram obtained with the test solution.Top of the plate A blue ?uorescent zone Several faint coloured zones _______ _______ A brown ?uorescent zone A green ?uorescent zone An intense light blue ?uorescent zone sometimes overlapped by a greenish-brown ?uorescent zone Chlorogenic acid:a light blue ?uorescent zone One or two green ?uorescent zones Rutin:a yellowish-brown ?uorescent zone One or two yellowish-brown ?uorescent zones _______ _______Several green and yellowish-brown ?uorescent zones Reference solution Test solution ASSAY Flavonoids .Liquid chromatography (2.2.29). Test solution .Dissolve 0.200g of the extract to be examined in 20mL of methanol R .Add 15.0mL of dilute hydrochloric acid R and 5mL of water R and dilute to 50.0mL with methanol R .Transfer 10.0mL of this solution into a 10mL brown-glass vial.Close the vial with a tight rubber membrane stopper and secure with an aluminium crimped cap.Heat on a water-bath for 25min.Allow to cool to 20°C. Reference solution .Dissolve 10.0mg of quercetin dihydrate CRS in 20mL of methanol R .Add 15.0mL of dilute hydrochloric acid R and 5mL of water R and dilute to 50.0mL with methanol R .Column :–size :l =0.125m,?=4mm;–stationary phase :octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5μm); –temperature :25°C. Mobile phase :–mobile phase A :0.3g/L solution of phosphoric acid R adjusted to pH 2.0; –mobile phase B :methanol R ; Time (min)Mobile phase A (per cent V/V )Mobile phase B (per cent V/V )0-160401-2060→4540→5520-2145→055→10021-250100Flow rate :1.0mL/min. Detector :spectrophotometer at 370nm. Injection :10μL. Relative retention with reference to quercetin (retention time =about 12.5min):kaempferol =about 1.4;isorhamnetin =about 1.5.System suitability :test solution: –resolution :minimum 1.5between the peaks due to kaempferol and isorhamnetin.Determine the sum of the areas including all the peaks from the peak due to quercetin to the peak due to isorhamnetin in the chromatogram obtained with the test solution (see Figure 1827.-1).General Notices (1)apply to all monographs and other texts 1257
由此说明单用雌激素是不够的。 盐酸氟西汀(百忧解)是一种选择性52羟色胺回收抑制剂,可选择性抑制中枢神经元系统突触前52羟色胺释放后的回收再摄取,从而提高突触间隙52羟色胺的浓度,产生明显的抗抑郁效应[7];而雌激素可促进52 H T等神经递质合成[2];二者合用既可改善潮热等症状又可改善抑郁症状。本文结果显示,盐酸氟西汀联合HR T治疗围绝经期抑郁症,效果显著优于单用HR T。 参考文献 [1] 王爱铃,鞠雪涛,石紫云,等.超声在绝经后激素补充治疗 评估中的临床价值.陕西医学杂志,2006,35(10):11672 1168. [2] 张惜阴,戴钟英,于传鑫,等.实用妇产科学.第2版.北京: 人民卫生出版社,2003:846. [3] 孙 静.抗抑郁药的临床应用.临床精神医学杂志,2008, 18(3):216.[4] Soares CN,A l m eida O P,Joffe H,et al.Effcacy of esteadi o l fo r the teratm ent of deperssive diso rders in peri m enopausal w om en:a doubieblind,random ized, p lacebo2contro lled trial.A rch Gen P sych iatry,2001,58: 5292534. [5] Saletu B,B randstatter N,M etka M,et al.Double2blind, p lacebo2con2tro lled ho r monal,syndrom al and EEG m app ing studies w ith transdder m al oestradi o l therapy in m enopausal dep ressi on.P sychopar m co logy(Berl),1995, 122:3212329. [6] Joffe H,Groninger H,Soares C,et al.A n open trial of m irtazap ine in m enopausal w om en w ith dep ressi on unresponsive to estrogen rep lace2m ent therapy.W om ens H ealth Gend Based M ed,2001,10:99921004. [7] 石 玉,王汝娟.百优解治疗抑郁症的双盲对照研究.陕 西医学杂志,2002,31(8):9052908. (收稿:2009203223) 银杏叶提取物治疗脑供血不足临床疗效 西电集团医院(西安710077) 陈风慧 徐 璐 摘 要 目的:探讨银杏叶提取物治疗脑供血不足临床疗效。方法:100例脑供血不足患者,银杏叶和对照组(丹参注射液)各50例,每天静滴1次治疗15d。结果:银杏叶组起效快总有效率94%,对照组起效慢,总有效率70%,两组比较差异有非常显著意义(P<0.01)。结论:银杏叶提取物治疗脑供血不足疗效明显。 主题词 脑缺血 药物疗法 银杏叶 对比研究 脑供血不足是临床常见的急性脑血管病,具有高致残率高致死率,且复发率高,治疗上有一定的难度。我院从2003年7月至2007年12月应用银杏叶提取物治疗脑供血不足50例,取得良好效果,现报告如下。 资料与方法 1 一般资料 本组100例患者均系我院急诊科留观和神经内科住院患者,所有病例均有脑供血不足的症状,全部患者治疗前后均行血常规、尿常规、肝肾功能、血糖、心电图、TCD、CT检查并排除心、肝、肾、内分泌及代谢疾病,随机将患者分为银杏叶提取物组和对照组。银杏叶提取物组50例,男28例,女22例,年龄28～78岁,视物旋转31例,合并高血压34例,冠心病30例,颈椎病23例,糖尿病10例。对照组50例,男27例,女23例,年龄30～72岁,头昏35例,合并高血压25例,冠心病22例,高血压15例,颈椎病26例。两组年龄、性别、病情程度、既往史均无显著性差异(P>0. 05),具有可比性。 2 给药方法 银杏叶提取物组:银杏叶提取物10m l,溶于0.9%氯化钠注射液或5%葡萄糖注射液静 脉滴注,每日1次,共15d。对照组:复方丹参注射液溶于0.9%氯化钠注射液或5%葡萄糖注射液静脉滴注,每日1次,共15d。 3 疗效评定标准 显效:治疗后临床症状、体症完全消失或起效时间≤3d。有效:眩晕等症状减轻,可正常工作或生活,或起效时间3～7d。无效:治疗前后无变化;或起效时间大于7d。 4 统计学处理 采用?2检验。 结 果 两种临床疗效比较见表1,两种药物起效时间见表2。从表1、表2可见银杏叶提取物组疗效优于对照组;在起效时间上银杏叶提取物组也先于对照组。两组比较有非常显著意义。 表1 两组治疗疗效比较[例(%)]组 别n显效有效无效总有效率%银杏叶提取物组504163994对照组5010251570 注:与对照组比较,P<0.01
溶剂提取法提取银杏叶中得黄酮实验报告 小组成员：周璟、胡静、左兵华、刘云飞 2014年5月一、实验目的 ⅰ）掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取 ⅱ）掌握紫外分光光度计的应用，以及origin软件绘图的基本操作ⅲ）学会自主设计实验，培养团队合作精神 二、实验原理 ⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用； ⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm; ⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因 为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。 其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二
酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应） 三、实验药品及仪器 ⑴药品：银杏叶（阴干碾碎储藏备用），芦丁，无水乙醇，亚硝酸钠，氯化铝和氢氧化钠； ⑵仪器：电子天平，旋转蒸发仪，索氏提取器，uv-1800型紫外分光光度计，研钵，比色皿，容量瓶（10ml*6,50ml*1,100ml*2），移液管，量筒，烧杯，玻璃棒。 四．实验步骤 Ⅰ）配制60%的乙醇溶液（黄酮同时具有水溶和油溶性）。 Ⅱ）准确称取10g银杏叶粉末置于索氏提取器中，加入60%的乙醇溶液10ml，回流提取3h，然后用旋转蒸发仪浓缩并回收乙醇溶液，抽滤得到银杏叶黄酮粗提物。再用60%的乙醇定容到100ml。 Ⅲ）芦丁标准液的配置：准确称取芦丁标准品0.005g，用60%的乙醇溶液加热溶解，并转移到50ml容量瓶内用乙醇溶液定容，摇匀，得质量浓度为0.1mg/ml的芦丁标准液。 Ⅳ）分别吸取上部配制的母液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml于6只10ml容量瓶中摇匀，先加入5%的亚硝酸钠0.5ml摇匀，静置6min，再加入10%的氯化铝溶液0.31ml，摇匀，静置6min，再加入4%的氢氧化钠溶液4ml，用60%的乙醇溶液定容到10ml，放置20min。其中，加入
银杏叶提取物
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银杏叶提取物（CBE）的提取工艺 一、概述 银杏Ginkgo biloba L.古代孑遗植物，又名公孙树或白果树，是我国特有树种，主产广西、四川、河南、山东、湖北、辽宁、江苏等地。其叶和果具有重要药用价值，它的提取物（GBE，ＥGb,Extrector of Ginkgo biloba），具有相当强的抗氧化作用，能清除生物体内过剩的自由基，阻止体内脂质过氧化，提高机体免疫力，延缓衰老等。自20世纪60年代开始，许多国家采用现代分离技术对银杏叶的化学成分进行研究，经药理实验和临床验证，发现银杏叶的多方面生物活性与其特定化学成分有关。迄今为止，从银杏叶中已经发现l00多种化学成分。这些化学成分主要有黄酮苷类（flavonoidglycosides）、萜内酯类（terpenoids）、聚异戊稀醇类（polyprenols）、6-羟基犬尿亏磷酸（6-hydroxykykynurenic acid,6HKA）、有机酸、银杏酚酸类（phenolic acids）、4′-甲氧基吡哆醇（4′-O-methypyridoxine）等。 1.GBE(Ginkgo biloba L 1 ext ract, GbE) GBE是以银杏Ginkgo biloba L.的叶为原料，采用适当的溶剂，提取的有效成分富集的一类产品。GBE对常见污染菌种具有良好的抑制生长作用,且抑菌浓度较低,热稳定性强,它的强抑菌作用是因为其中含有多种苦味素,主要成分有长链酚类及内酷类、多豆酸、多草酸、咖啡酸等,这些物质具有抗细菌和消炎作用,其抑菌强度与其浓度大小有关。（雷天堑,2002） 2.银杏叶的提取 通过溶剂（如乙醇）处理、蒸馏、脱水、经受压力或离心力作用，或通过其他化学或机械工艺过程从物质中制取（如组成成分或汁液），得到银杏叶提取物，对其成分进行分析研究。 3.银杏叶提取物主要成分有五种: 3.1黄酮苷类：对心脑血管疾病，高血脂，高血压，清除氧自由基具有显著的疗效，是目前世界上治疗该类疾病最显著的药物。 3.2银杏内酯A、B、C、M类：是血小板活化因子(PAF)拮抗剂，是银杏叶中最重要的活性成分，是治疗神经系统疾病的特效药物。 3.3白果内酯类：白果内酯有很强的生物活性，为神经精神病药物，对因年老的呆傻症有奇异的疗效，它能抗神经末梢的衰老，被誉为真正抗衰老化学物质。
银杏叶中黄酮提取及含量测定 一、实验目的 提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。 二、实验原理 银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 . 4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。 三、实验仪器和试剂 材料：银杏叶粉末50g 试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3（0.1mol/L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。
仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。 四、实验步骤 1.1提取银杏叶中总黄酮 （1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉（2）准确称取10.0g，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。 （3）将圆底烧瓶中提取液倒入烧杯，加入一倍蒸馏水，再加入相同量的乙醚，混合均匀，倒入分液漏斗中，静置20min，分层后，收集下层液体。 （4）减压蒸馏，回收乙醇，得到淡黄色黏液，干燥得到银杏叶中总黄酮提取物。 1.2银杏叶中总黄酮含量测定 （1）芦丁标准溶液的配置：称取0．0100g芦丁标准品，放入烧杯中，加入80%的乙醇溶液使其溶解，置于100ml的容量瓶中，制成0.1g/L的芦丁标准溶液。定容，摇匀备用。 （2）绘制芦丁标准曲线：分别移取0，0.4 ，0.8，1.2，1.6，2.0 ml 芦丁对照品溶液，于6个10ml 容量瓶中，标记1~6，分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0ml的80%乙醇溶液，加入5%NaNO2溶液0.5ml，摇匀，放置6min，加入0.5ml10%AL(NO3)3，摇匀，放置6min，加入4%NaOH
一、银杏叶提取物的主要成分 目前银杏叶提取物质量控制标准主要在两种有效成分（黄酮和内酯）和一种毒性成分（银杏酸）上。中国药典对银杏叶提取物质量标准如下：总黄酮含量≥24%,内酯含量≥6%，银杏酸含量＜10ppm。这是提取物在每次临床试验中提取物显示实质功效的等级。 二、银杏叶提取物市场需求分析 2013年中国银杏叶提取物产量达到348.6吨，下图为2009-2014年中国银杏叶提取物产量统计。 国际市场上银杏叶提取物制剂总销售额估计达20亿～25亿美元，而我国每年出口银杏叶粗提取物金额在2000万美元左右。2012年，国内银杏叶提取物的市场表现出供应稳定的态势，辽宁产含量为100%黄酮的银杏叶提取物出口报价为46美元/公斤。 三、银杏在全国的分布量 中国的银杏资源主要分布在山东、浙江、安徽、福建、江西、河北、河南、湖北、江苏、湖南、四川、贵州、广西、广东、云南等省的60多个县市，另外台湾也有少量分布。从资源分布量来看，以山东、浙江、江西、安徽、广西、湖北、四川、江苏、贵州等省最多，而各省资源分布也不均衡，主要集中在一些县或市，详见下表。 省份市（县） 江苏泰兴、邳州、吴县、泰县、泰州 山东郯城、海阳、文登 广西灵川、兴安、临贵、桂林 湖北随州、安陆、南潭、孝感、京山 河南新县、光山、信阳、峡县、嵩县 浙江长兴、诸暨、临安、富阳、安吉 贵州盘县、正安、务川、道真 安徽金寨、霍山、舒城、歙县、宁国、广德
湖南祁阳、宁远、道县、资兴、新化、洞口、桑植 四川安县、北川、彭州、都江堰 广东南雄 福建浦城、崇安、龙溪、建阳、上杭 江西婺源、德兴、上饶、分宜 河北遵化、易县 辽宁丹东 我国五大银杏基地： 1、邳州是全国五大银杏基地最大种植基地。现有银杏树成片园21万亩，银杏果年产量900吨，占全国的十分之一；银杏士青叶产量1.2万吨，约占全国部产量的60％。银杏酮生产能力250吨，占全国总量的80％。 2、“天下银杏第一乡”的山东省郯城县新村乡。 3、宋店银杏基地为全国五大银杏基地之一。曾被林业部、国家科委誉以“银杏第一园”，“优质高产银杏示范基地”、等各种称号。 4、泰兴，古银杏、银杏定植数、银杏产量、银杏品质均居全国之冠，享有华夏“银杏第一市”美誉。目前泰兴银杏产量约占全国三分之一。 5、中国银杏之乡：广东韶关南雄市。 四、银杏叶提取物的功效 1、促进循环 银杏叶提取物能同时促进大脑和身体肢体的循环。除了抑制血小板粘着外，银杏提取物调节血管张力和弹力，可令血管循环更加有效率。 2、抗氧化 银杏叶提取物可能在大脑、眼球视网膜和心血管系统中可发挥抗氧化特性。其在大脑和中枢神经系统中的抗氧化作用可能有助于防止因年龄导致的大脑功能衰落。 3、抗衰老 银杏叶提取物提升大脑血流量并对神经系统有极好的滋补作用。银杏对许多衰老的可能症状都有很好的效果，例如：焦虑和忧郁、记忆损伤、难以集中注意力、机敏度下降、智力下降、眩晕、头痛耳鸣、视网膜黄斑部退化（成人失明的最普遍原因）、内耳骚动（其会导致部分失聪）、末端循环不良、阴茎血流不良导致的阳痿。 4、抵抗痴呆、阿兹海默症和记忆力提升 银杏在提升记忆力和感知功能方面较安慰剂明显更加有效。银杏在欧洲被广泛用于治疗痴呆。银杏被认为可有助于防止或治疗这些脑部紊乱的原因是其可增加脑部血流量及其抗氧化功能。 5、调解经前不快 银杏明显地减轻月经前不快症状的主要征候，特别是乳房疼痛和情绪不稳。 6、改善性功能 尽管目前没有关于此功能的双盲试验根据，但病例报告和开放研究提出银杏能使因扑洛扎克类药物及其它抗抑郁药物而来的性功能不良好转。 7、眼部问题
Platelet-Activating Factor 即血小板活化因子。 一种强效生物活性磷脂，由白细胞、血小板、内皮细胞、肺、肝和肾等多种细胞和器官产生。PAF通过与靶细胞膜上的PAF受体结合而发挥作用。可引起血小板聚集，中性粒细胞聚集和释放；产生大量活性氧、白三烯等炎性介质。PAF阻断药 PAF通过与细胞膜受体结合发挥作用， PAF受体阻断药能阻止PAF与受体结合，因此对与PAF生成过量有关的疾病如哮喘、败血性休克等应当具有治疗意义。 银杏黄酮 银杏黄酮亦称银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E. [本品来源]本品为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶提取物。 [植物分布]全国大部分地区有产，主产湖北、江苏、广西、四川、河南、山东、辽宁等地。. [产品性状]银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E为浅黄棕色可流动性棕黄色粉末，略有银杏叶香味。 [产品含量]总黄酮甙含量：24-26%（HPLC法）,总萜内酯含量8-10%（HPLC法）白果内酯≥2.5% 银杏内酯A≥1.4% 银杏内酯B≥1.2%，银杏内酯C≥0.9% ，银杏酸≤1-5ppm重金属含量≤20ppm AS≤1PPM 干燥失重≤3%，炽灼残渣≤1.5%，溶济残留≤1% 。 [产品用途]适用于制药、保健品、日用品、化妆品等各个领域 [适用范围]增加脑血管流量，降低脑血管阻力，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，免受缺血损害，扩张冠状动脉，防止心绞痛及心肌梗塞，抑制血小板聚集，防止血栓形成，清除有害的氧化自由基，提高免疫能力，具有防癌抗衰功能。对治疗冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压等病有神奇疗效。 1. 促进循环 银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.能同时促进大脑和身体肢体的循环。银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.的一个主要保健功能就是抑制一种称为血小板活化因子（PAF）的物质，PAF是一种从细胞中释放的介质，其会导致血小板聚集（堆积在一起）。高含量的PAF会导致神经细胞损伤，中枢神经系统血流量降低，发炎，和支气管收缩。与自由基非常相似，高PAF水平也会导致衰老。银杏内酯和白果内酯可在缺血（体内组织缺少氧气）时期内保护中枢神经系统的神经细胞不受损伤。该功能可能能对苦于中风的患者有辅助治疗的作用。除了抑制血小板粘着外，银杏提取物调节血管张力和弹力。换句话说，其可令血管循环更加有效率。该提升循环效率作用对循环系统中的大血管（动脉）和较小血管（毛细血管）都有同样作用。 2. 抗氧化作用 银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.可能在大脑，眼球视网膜和心血管系统中可发挥抗氧化特性。其在大脑和中枢神经系统中的抗氧化作用可能有助于防止因年龄导致的大脑功能衰落。银杏叶提取物在大脑中的抗氧化功能特别使人感兴趣。大脑和中枢神经系统特别易受自由基攻击。自由基导致大脑损伤被广泛认为是导致伴随衰老而来的多种疾病的影响因素，其中甚至包括阿兹海默症。 3. 抗衰老功能 银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.提升大脑血流量并对神经系统有极好的滋补作用。包含上万患者的数百次科学研究证实了银杏叶提取物的功效对包括大脑血流不足和老年患者的智力衰退在内的诸多问题的效力。银杏对许多衰老的可能症状都有很好的效果，例如：焦虑和忧郁、记忆损伤、难以集中注意力，机敏度下降、智力下降、眩晕、头痛、耳鸣（耳中鸣响）、视网膜黄斑部退化（成人失明的最普遍原因）、内耳骚动（其会导致部分失聪）、末端循环不良、阴茎血流不良导致的阳痿。 4. 痴呆，阿兹海默症和记忆力提升 科学家回顾了所有已出版的对银杏和轻微记忆损伤的高质量研究，并得出结论：银杏在提升记忆力和感知功能方面较安慰剂明显更加有效。银杏在欧洲被广泛用于治疗痴呆。银杏被认为可有助于防止或治疗这些脑部紊乱的原因是其可增加脑部血流量及其抗氧化功能。尽管许多临床试验有科学上的缺陷，银杏可能增加阿兹海默症患者思考能力，学习能力和记忆力的证据仍被抱以很大期望。 5. 月经前不快症状 一次评价银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.对有月经前不快症状妇女益处的双盲受控安慰剂研究，该试验包括143名年龄在 18-45岁的妇女，并跟踪她们两个月经周期。在第一个周期的第16天每个妇女都收到银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.（每天
２００６年第１３卷第６期 化工生产与技术ＣｈｅｍｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ !!!!!!" !" !!!!!!" !" 研究与开发 收稿日期：２００６－１０－１０ 以银杏叶提取物（ＧＢＥ）为原料制成的药物具有清除自由基，防止脑缺血和脑水肿，改善脑功能等多种作用。银杏叶制剂还可用于保健食品和化妆品等［１，２］。银杏叶中黄酮类化合物的提取直接决定着银杏叶的药用价值，因而成为国内外的研究热点。 提取方法最早用水浸提法，此方法具有设备简单、成本低且对环境和人类无毒害的特点，但提取率偏低、杂质含量较高，后处理难度大。有机溶剂法尤其酮、醇提取法是相当经典的方法，比如用丙酮作为提取剂的方法有：（１）丙酮提取－四氯化碳萃取法；（２）丙酮提取－氢氧化铅沉淀法；（３）丙酮提取－氨水沉淀法；（４）丙酮提取－硅藻土过滤法。（１）法工艺产品黄酮含量太低，达不到标准，（２）～（４）法工艺虽然能较好地从银杏叶中提取出有效成分含量较高的提取物，但它们存在着很多缺点。例如，使用了丁酮、四氯化碳等有毒害溶剂等，产品中无法避免这些物质的残留；操作复杂和步骤多，导致ＧＢＥ收率低且最终精制品的质量不够稳定。 随着超临界流体提取技术的迅速发展，应用该技术提取植物中活性成分已越来越广泛，与有机溶剂提取法相比，超临界流体萃取方法具有产品收率高、质量好、有效成分破坏少、无溶剂残留、操作方便等优点。但是超临界流体萃取法设备规模较大、技术要求高、投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。乙醇和丙酮对活性成分提取率相近，但考虑到溶剂的成本和操作的安全性，使用乙醇水溶液比丙酮水溶液更合适。因此采用乙醇－水 为提取剂，对影响浸取的主要因素进行了研究。 １ 实验部分 １．１ 主要材料、试剂及仪器 银杏叶：产于连云港花果山，自采；氢氧化钠、无 水乙醇、硝酸铝、芦丁、亚硝酸钠、二氯甲烷和甲醇，均为分析纯。 ７２３可见分光光度计，ＤＦ－１型集热式磁力搅拌 器，ＲＥ－５２８５Ａ型旋转蒸发器，恒温水浴锅，电热鼓风干燥箱，ＳＨＺ－ＣＤ型循环水式真空泵，等。１．２工艺流程 采用有机溶剂提取法，因为甲醇和丙酮具有毒性，所以采用乙醇－水作为提取剂比较合适［３］。 ＧＢＥ的提取工艺流程如下： 干燥银杏叶→粉碎→浸取→过滤→减压蒸馏→银杏浸膏粗提物→二氯甲烷萃取→减压除去溶剂→干燥→产物。 １．３银杏叶中总黄酮含量的测定 将银杏叶洗净，在低温下烘干至恒重，准确称取 ２ｇ，置于索氏提取器中用甲醇回流提取至提取液无色；提取液经浓缩，并转入５０ｍＬ容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，取１ｍＬ按照标准曲线的作法测定吸光度［４］，水浴温度控制在７５℃左右。 银杏叶中总黄酮的质量分数＝５０×ρ１／ｍ１，ρ１为银杏叶中总黄酮的质量浓度，ｍｇ／ｍＬ；ｍ１为银杏叶质 量，ｍｇ。 本实验中银杏叶中总黄酮的质量分数＝５０×０．７／ 银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究 朱平华 （淮海工学院化工系，江苏连云港２２２００５） 摘要 对银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺进行了研究，通过单因素试验和Ｌ９（３３）正交试 验，研究了浸取温度、乙醇含量和固液质量比对黄酮类化合物提取率的影响。结果显示温度是影响提取率的主要因素，最佳工艺为浸取温度８０℃，乙醇的体积分数为７０％和固液质量比１：７，银杏叶中黄酮类化合物的浸出率可达到９２．３％。关键词 银杏叶；黄酮类化合物；乙醇；提取 中图分类号ＴＱ２３４．２＋１，ＴＱ４６０．６＋１文献标识码Ａ文章编号１００６－６８２９（２００６）０６－００２５－０３ ?２５ ?