消毒剂消毒效果的验证
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编号：201412151135
版次：2014 年第 1 版
目录
1．概述 (3)
1.1消毒剂 (3)
1.2消毒剂使用说明 (3)
2．验证目的 (3)
3．验证内容 (4)
4．验证组织 (4)
4.1验证小组 (4)
4.2验证委员会 (5)
5．验证实施步骤 (5)
5.1验证前准备 (5)
5.2验证所需文件资料 (5)
5.3悬液法定量杀灭试验 (6)
5.4对裸手消毒效果试验 (7)
5.5消毒剂对佩戴手套后的消毒效果验证 (9)
5.6消毒剂对物体表面消毒效果验证 (11)
5.7消毒剂消毒效果验证结论 (15)
6．验证主要依据 (15)
7．验证合格标准 (15)
7.1判断标准 (15)
7.2现场考察试验合格标准 (15)
8. 再验证周期 (15)
附录 (16)
附录一验证方案会审记录 (16)
附录二验证方案修改申请及批准书 (17)
附录三漏项和偏差处理记录 (18)
附录四悬液法定量杀灭试验记录 (19)
附录五消毒剂对佩戴手套后人员手现场试验记录 (22)
1．概述
1.1 消毒剂
消毒剂的作用原理：破坏细胞膜类，阻断细胞食物摄取和废物排泄，钝化关键酶。以下是几种常用的消毒剂：
（1）新洁尔灭(苯扎溴铵)：是一种常用的季铵盐类消毒剂，在浓度较低时即可有抑菌的作用；当浓度较高时，可以杀灭多种细菌繁殖体和部分的病毒，但是不能杀灭细菌芽孢，属于低效消毒剂。
（2）75%乙醇：适用于一般物体表面消毒以及手和皮肤的消毒，它无法杀灭细菌芽孢和病毒。
（3）优洁：属于长效、强效、广谱杀菌剂，是一种新型消毒剂，其有效成分为复合季铵盐和六亚甲基四胺，可有效快速地杀灭细菌繁殖体、芽孢、真菌和部分病毒等，各种微生物对其均无抗药性，抑菌时间较长，可用于一般物体表面消毒，稳定性好，无腐蚀性，无毒无害，并且由于杀菌时不受蛋白质及有机物的干扰，故使用衰减周期长，可循环使用，相对使用成本低。
本次验证以优洁消毒剂的杀灭效果为主，同时也可根据此验证方案对75%乙醇、新洁尔灭等消毒剂的杀灭效果进行评价。
1.2 消毒剂使用说明
对于不同的消毒对象，应使用不同的消毒剂，并制订消毒程序，消毒程序中应明确规定：
（1）消毒剂的浓度及配制方法；
（2）消毒剂使用的条件；
（3）消毒使用的设备、设施；
（4）消毒操作的详细步骤；
（5）消毒周期；
（5）消毒效果的监测方法。
制订的消毒程序的消毒效果应经过验证后，才能批准使用。
本验证具体规定了评价消毒剂消毒效力的生物学检测方法及其效果评价方法。
2．验证目的
药品在生产过程中会遭到来自微生物的污染，因此必须要采取一定措施使微生物污染处于受控状态或者完全被消除，这就需要对消毒剂消毒效果进行验证以确定相应的方案来处理这些问题。在对消毒剂进行消毒效果验证的过程中，主要是要用特定的微生物与消毒剂在规定的使用浓度下接触规定的时间后，对微生物进行培养计数，考察该消毒剂的消毒效果，确定消毒剂消毒后的最长有效时间，并对消毒剂对微生物的杀灭效果进行评价。
确认洁净区按照规定的清洁、消毒程序进行清洁消毒后，能够达到防止交叉污染的目的，
并在消毒有效期内能确保达到生产工艺所需要的效果。
本次验证以优洁消毒剂的杀灭效果为主，同时也可根据此验证方案对75%乙醇、新洁尔灭等消毒剂的杀灭效果进行评价。
3．验证内容
消毒剂消毒效果验证包括两项考察：实验室考察和现场考察。实验室考察通常以悬液定量法为主，且试验须重复3次，而现场考察可用来评估消毒剂对相应设施的实际消毒效果。
在消毒剂消毒效果试验中，消毒方法和消毒对象有很多。常用的方法有：喷洒法，浸泡法，擦拭法等。常见的对象有：皮肤，洁净区的地面、墙面，设备表面等。此次试验我们采用的消毒方法为喷洒法，消毒对象为人员裸手皮肤、人员佩戴无菌手套后的手套表面和物体表面。
根据消毒对象所制定相应的试验方案有：悬液法定量杀灭试验、消毒剂对裸手消毒现场试验、载体喷雾定量杀菌试验、消毒剂对佩戴手套后的手消毒现场试验以及消毒剂对物体表面现场鉴定试验。通过以上几种试验来对消毒剂消毒的效果进行验证。
4．验证组织
4.1 验证小组
表4-1 验证小组及职责
4.2 验证委员会
4.2.1人员组成：由企业质量副总、生产副总及生产部、质量保证部、质量检验部、设备动力部经理或主管组成。
4.2.2职责：
负责验证方案的审批；
负责验证的协调工作，以保证验证方案的顺利实施；
负责验证数据及结果的审核；
负责验证报告的审核；
负责确定该项验证的再验证周期；
负责验证证书的发放。
5．验证实施步骤
5.1 验证前准备
在进行消毒剂消毒效果验证前，洁净厂房空气净化系统应经验证合格并正常运行，设备动力部应提供洁净厂房空气净化系统的验证报告、空气净化系统操作程序；与验证相关的各种设备、仪器均需通过相应验证，所需仪表、计量器具均需校验合格并具备校验证书。5.2 验证所需文件资料
表5-1 验证所需的文件资料及存放处
活菌数检测操作规程ZL-03-066 GMP办公室
菌落计数操作规程ZL-03-070 GMP办公室
培养基配制操作规程ZL-03-073 GMP办公室培养基配制、使用管理规程ZL-03-110 GMP办公室消毒剂配制操作规程WS-04-029 GMP办公室
消毒剂的使用操作规程WS-04-030 GMP办公室致病菌阳性菌株传代操作规程ZL-03-075 GMP办公室实验器具清洗操作规程ZL-03-087 GMP办公室实验器具灭菌、消毒及使用操作规程ZL-03-088 GMP办公室进出微生物限度实验室操作规程ZL-03-259 GMP办公室CHK型显微镜操作规程SB-03-153 GMP办公室厌氧罐操作规程SB-03-156 GMP办公室MS1型振荡器操作规程SB-03-381 GMP办公室
BL610型电子天平操作规程SB-03-324 GMP办公室
SKP-02B型电热恒温箱操作规程SB-03-375 GMP办公室
SKP-02B型电热恒温箱清洁规程SB-03-376 GMP办公室微生物实验室清场操作规程ZL-03-064 GMP办公室
破伤风杆菌检测操作规程ZL-03-220 GMP办公室
DELTA-320PH计操作规程SB-03-234 GMP办公室
致病菌阳性菌管理规程ZL-03-112 GMP办公室
微波炉的操作规程SB-03-177 GMP办公室
洁净区情场操作规程ZL-03-112 GMP办公室
设备清洁操作规程SB-03-187 GMP办公室
5.3 悬液法定量杀灭试验
5.3.1 试验所需要用的试剂
中和剂：0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S）
活菌计数用培养基：TSA培养基
稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS 0.03mol/L
消毒剂配制用水：纯化水
有机干扰物质
5.3.2 试验所需要用的仪器
移液器、电动混匀器、计时器、生化培养箱
5.3.3 试验所需要用的菌种
可根据《消毒技术规范》2008年版[4]“细菌定量杀灭试验”中指导，本次试验选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉。再增加车间常见的菌：洋葱伯克霍尔德菌。
5.3.4 试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间
根据优洁消毒液说明书建议浓度为1%-3%，作用时间为1-2min，但根据厂家验证报告0.1%及0.2%的浓度作用5min和15min也能符合规定，因此本次试验浓度选择0.2%，作用时间选择2.5min、5min以及7.5min的条件进行确认，又因车间裸手消毒作用时间可能只有30s，故本次试验同时对0.2%消毒剂作用15s、30s以及45s的条件进行确认。
5.3.5 试验所需要用到的场所
微生物实验室阳性间
5.3.6 悬液定量杀菌试验操作程序
（1）菌悬液：浓度为1×108cfu/ml-5×108cfu/ml
（2）消毒液的配制：用纯化水按体积比配制浓度为0.2%的消毒液500ml
（3）磷酸盐缓冲液的配制：磷酸盐缓冲液（PBS 0.03mol/L）称取无水磷酸氢二钠2.83g、磷酸二氢钾1.36g加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调PH至7.2-7.4，灭菌后使用。
（4）有机干扰物质的配制：按30g牛血清白蛋白中加入1000ml蒸馏水的比例配制约100ml，溶解后用0.45um的无菌滤膜进行过滤除菌后使用，未用完的可于2-8℃冰箱中保存。
（5）试验过程（以浓度为0.2%优洁消毒剂对金黄色葡萄球菌作用2.5min为例）
试验组：取无菌大试管加入0.5ml金黄色葡萄球菌菌悬液，再加入0.5ml的有机干扰物质，分别用无菌吸管吸取0.2%的优洁消毒液4.0ml，加入试管中，迅速混匀并立即计时。待金黄色葡萄球菌与0.2%的优洁消毒液相互作用2.5min时，吸取0.5ml试验菌与消毒剂的混合液，加于4.5ml经灭菌的0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中，混匀。金黄色葡萄球菌与消毒剂混合液经硫代硫酸钠-生理盐水溶液作用10min后，吸取1.0ml样液，按活菌培养计数测定方法测定存活菌数，每管样液接种2个平皿即可。如果菌液浓度较高时，可进行10倍系列稀释后，
在进行活菌培养计数，作为试验组，其计数结果为C X。
阳性对照组：用4.0ml磷酸盐缓冲液代替4.0ml0.2%的优洁消毒液与0.5ml金黄色葡萄球菌菌悬液、0.5ml有机干扰物质混合2.5min后，取0.5ml混合液与4.5ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液反应，作用10min后。计数方法同试验组，计数结果为C0。
阴性对照组：吸取此次试验用的纯化水0.5ml、0.5ml有机干扰物质、4.0ml磷酸盐缓冲液混匀，混匀后取0.5ml混合液与4.5ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液作用10min后，吸取1.0ml 混合液，按活菌培养计数测定方法测定存活菌数，作为阴性对照。
培养：所有用细菌试验的样品均放入30-35℃培养箱中培养，培养48小时观察结果；用真菌试验的样品放入23-28℃培养箱中培养，培养72小时观察结果。
5.3.7 试验要求
作用于不同试验菌不同作用时间后的消毒效果试验均须进行3次，每次进行时应注意所用的试剂等物品均应重新配制，防止系统误差的发生。
5.3.8 活菌计数结果应换算为对数值（N）
按计算公式杀灭对数值KL=阳性对照组平均浓度对数值（N0）-试验组活菌浓度对数值（N X）。计算杀灭对数值的时候，取小数点后两位值，可以进行数字修约。如果消毒试验组消毒处理后平均生产菌落数小于等于1时，其杀灭对数值，即大于等于试验前对照组平均活菌浓度的对数值。
5.3.9 判断标准
阴性对照应无菌生长；细菌各次试验的杀灭对数值均应≥5.00，可判断为对细菌消毒合格；真菌各次试验的杀灭对数值为≥4.00，可判定该产品对真菌污染物消毒合格。
5.3.10 试验记录
附件四悬液法定量杀灭试验记录第一次表5-2
第二次表5-3
第三次表5-4
5.3.11 试验结
作用于不同试验菌不同作用时间后的消毒效果试验进行了3次，且每次试验结果均符合标准，所以判定0.2%优洁消毒剂通过悬液定量杀灭试验，对细菌、真菌消毒合格。
5.4 对裸手消毒效果试验
5.4.1 试验所需要用的试剂
Rodac 碟培养基平板
5.4.2 试验所需要用的仪器
计时器、生化培养箱
5.4.3 试验所需要用的消毒液
浓度为0.2%的优洁消毒剂作用0.5min
5.4.4 试验所需要用到的场所
抗肿瘤粉针车间
5.4.5 试验的操作程序
从车间抽取6名生产人员，均按照标准洗手操作规程进行洗手，将手烘干，用0.2%的优洁消毒剂对双手进行喷洒消毒，自然晾干，于消毒后的0.5min将一手五指尖在Rodac平板上按压取样，于30-35℃培养箱中培养三天，观察最终结果。
5.4.6 试验的判断标准
在消毒剂作用0.5min后6份样品的菌落数均须≤5cfu/皿，可判为合格，本次试验应重复进行三次，用来判断该方法是否稳定。
5.4.7 试验记录
表5-5 对裸手消毒效果试验第一次试验记录
8001 0 2 9 ≤5 不合格
8002 0 39 39 ≤5 不合格
8003 0 1 3 ≤5 合格
8004 0 40 40 ≤5 不合格
8005 0 16 14 ≤5 不合格
8006 0 2 4 ≤5 合格
QA左手0 0 0 0 合格
QA右手0 0 0 0 合格
表5-6 对裸手消毒效果试验第二次试验记录
8001 0 33 31 ≤5 不合格
8002 0 8 6 ≤5 不合格
8003 0 100 105 ≤5 不合格
8004 0 55 51 ≤5 不合格
8005 0 33 36 ≤5 不合格
8006 0 4 3 ≤5 合格
QA左手0 0 0 0 合格
QA右手0 0 0 0 合格
表5-7 对裸手消毒效果试验第三次试验记录
8001 0 107 105 ≤5 不合格
8002 0 60 60 ≤5 不合格
8003 0 4 5 ≤5 合格
8004 0 63 61 ≤5 不合格
8005 0 36 36 ≤5 不合格
8006 0 28 32 ≤5 不合格
QA左手0 0 0 0 合格
QA右手0 0 0 0 合格
5.4.8 试验结论
对车间人员进行了三次（每次6名）裸手消毒试验，试验结果显示基本不符合标准，因此判定0.2%浓度优洁消毒剂对人员裸手消毒0.5min试验不合格。
5.5 消毒剂对佩戴手套后的消毒效果验证
5.5.1 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验
（1）试验所需要用的试剂
中和剂：0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S）；
活菌计数用培养基：TSA培养基；
稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS0.03mol/L）；
消毒剂配制用水：纯化水
（2）试验所需要用的仪器
刻度吸管、数字可调移液器、电动混匀器、计时器、培养箱、无菌手套及无菌剪刀（3）试验所需要用的菌种
本次试验主要是验证该消毒剂对手部微生物的消毒效果，故选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌作为试验菌。
（4）试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间
浓度为0.2%优洁消毒剂作用0.5min
（5）试验所需要用到的场所
微生物实验室阳性间
（6）试验的操作步骤
①菌悬液：浓度为1×108cfu/ml-5×108cfu/ml
②消毒液：用纯化水按体积比配制浓度为0.2%的消毒液500ml
③稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS0.03mol/L）
试验组:取无菌剪刀从无菌手套上剪取三个手指样品，大小为10mm×10mm以三角形阵列，均匀排布于一块未沾有任何消毒剂的无菌平皿内，逐片滴加10d的金黄色葡萄球菌，必要时用无菌接种环涂布均匀。使制备后样品上的菌片浓度在5×105cfu/片-5×106cfu/片，用0.2%的优洁消毒剂对制备好含有金黄色葡萄球菌的样本进行均匀喷雾，喷雾的距离约为10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数量一致。喷雾量以不使样本湿透、流液为度，计时。待金黄色葡萄球菌与消毒剂相互作用至0.5min，取出样本1片，放入一含有5.0ml0.1M 硫代硫酸钠-生理盐水溶液的无菌试管中。将试管用电动混匀器混合20s，使菌片上的细菌被洗脱进入0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数法测定存活菌数，每管接种2个平皿。
阳性对照组：取无菌剪刀从无菌手套上剪取3个大小为10mm×10mm的手指样品，均匀排布于一块未沾有任何消毒剂的无菌平皿内，用制备好的符合菌液浓度的金黄色葡萄球菌滴
加进去，必要时用涂布棒涂布均匀。用磷酸盐缓冲液代替0.2%的优洁消毒剂对制备好的金黄色葡萄球菌的样本进行均匀喷雾，喷雾的距离约为10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数量一致。喷雾量以不使样本湿透、流液为度，计时。待金黄色葡萄球菌与磷酸盐缓冲液相互作用至0.5min，取出样本1片，放入一含有5.0ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液的无菌试管中。将试管用电动混匀器混合20s，使菌片上细菌被洗脱进入0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数法测定存活菌数，每管接种2个平皿。
阴性对照组：取无菌剪刀从同批无菌手套上剪取三个手指样品，大小为10mm×10mm 均匀排布于一块未沾有任何消毒剂的无菌平皿内用。用纯化水代替0.2%的优洁消毒剂对手套样本进行均匀喷雾，喷雾的距离约为10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数量一致。喷雾量以不使样本湿透、流液为度，计时。0.5min后取出样本一片，放入一含5.0ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液的无菌试管中。将试管用电动混匀器混合20s。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管接种2个平皿，作为阴性对照。
培养：所有细菌试验用样本均在30-35℃培养箱中培养，培养至48h，观察最终结果；真菌试验用样本在23-28℃培养箱中培养，培养至72h，观察最终结果。
（7）试验要求及计算
试验重复3次，计算各组的活菌数（cfu/片），并换算为对数值（N），然后按计算公式杀灭对数值KL=阳性对照组平均浓度的对数值（N0）-试验组活菌浓度的对数值（N X）
（8）试验的判断标准
阴性对照组应无菌生长，消毒剂作用于各菌的不同作用时间的杀灭对数值≥3.00，即判定结果合格。
（9）试验的记录
表5-8 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第一次试验记录
金黄色葡萄球菌 5.8×105 5.76 0 0 5.76 ≥3.00 合格大肠埃希菌 1.1×106 6.04 22 1.34 4.70 ≥3.00 合格白色念珠菌 5.4×104 4.73 0 0 4.73 ≥3.00 合格
表5-9 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第二次试验记录
金黄色葡萄球菌 5.8×105 5.76 0 0 5.76 ≥3.00 合格大肠埃希菌 1.1×106 6.04 11 1.04 5.00 ≥3.00 合格白色念珠菌 5.4×104 4.73 0 0 4.73 ≥3.00 合格
表5-10 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第三次试验记录
金黄色葡萄球菌 6.2×104 4.79 0 0 4.79 ≥3.00 合格大肠埃希菌 2.0×105 5.30 12 1.08 4.22 ≥3.00 合格白色念珠菌 2.7×104 4.43 0 0 4.43 ≥3.00 合格
（10）试验的结论
浓度为0.2%优洁消毒剂，三次对无菌手套载体喷雾定量杀菌试验均符合标准，判定手套载体喷雾定量杀菌试验合格。
5.5.2 消毒剂对佩戴手套后人员手现场消毒试验
（1）试验所需要用的试剂
Rodac 碟培养基平板
（2）试验所需要用的仪器
计时器、生化培养箱
（3）试验所需要用的消毒液的浓度及取样时间
取5.5.1中符合规定的消毒剂浓度对人员手套消毒后0.5min、15min、35min分别取样（4）试验所需要用到的场所
抗肿瘤分针车间或普通分针车间
（5）试验的操作步骤
从车间抽取12名生产人员，分别在A级区安排6名，B级区安排6名。各自按照标准洗手操作规程进行洗手，将手烘干。用试验浓度的优洁消毒剂对双手进行喷洒消毒，自然晾干，分别于消毒后0.5min、15min、35min将五指手指尖在Rodac平板上按压取样，取样后于30-35℃培养箱中培养三天，观察最终结果（0.5min取样后生产人员对双手重新进行消毒，之后应尽量模拟生产时的动作进行手部活动。15min取样后无需重新消毒）
（6）试验的判断标准
在消毒剂作用不同时间后的菌落数的合格标准见下表5-11，每个时间段的6份样品必须全部符合标准，才可判断合格，本次试验应重复进行三次，用来判断该方法是否稳定。
表5-11 菌落数的合格标准
A <1 cfu/皿
B ≤5 cfu/皿
（7）试验的记录
附件五消毒剂对佩戴手套后人员手现场消毒试验记录A区第一次表5-12
B区第一次表5-13
（8）试验结论
0.2%优洁消毒剂于三次每个时间段的6份样品全部符合标准，可判断合格。
5.6 消毒剂对物体表面消毒效果验证
5.6.1消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验
车间用于该消毒剂消毒的物体表面主要有不锈钢设备表面、地面、墙面以及呼吸袋，经过小试，将高浓度菌液（>104cfu/ml）涂抹于不锈钢设备表面、地面、墙面及呼吸袋，选择回收率较高的载体作为物体表面消毒效果试验室部分的试验载体。判断标准：回收菌液浓
度：>103cfu/ml。
（1）试验所需要用的试剂
中和剂：0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S）
活菌计数用培养基：TSA培养基
消毒剂配制用水：纯化水
（2）试验所需要用的仪器
刻度吸管、移液器、电动混匀器、计时器、培养箱、规格板（用不锈钢材料制备，中央留一5.0cm×5.0cm的空格作为采样部位）、无菌棉签、无菌接种环
（3）试验所需要用的菌种
本次试验主要是验证该消毒剂对物体表面微生物的消毒效果，故选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌作为试验菌
（4）试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间
0.2%的优洁消毒液作用30s
（5）试验所需要用到的场所
微生物实验室阳性间
（6）试验的操作步骤（以浓度为0.2%的消毒剂对金黄色葡萄球菌作用30s为例）菌悬液：浓度为5×105cfu/ml-5×106cfu/ml
试验组：取大小合适的无菌呼吸袋作为试验样本，将无菌规格板按压在样本上，用无菌棉签沾以菌悬液均匀涂抹被试验表面的6区块（各区块25cm2）。用0.2%的消毒剂对三个区块表面进行喷雾消毒，喷雾的距离约为10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数量一致，消毒后，将无菌棉签在5ml的中和剂试管中沾湿，分别对3个消毒区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各8次。采样后以无菌操作方式将棉签剪入原中和剂试管中，电动混匀器上混匀20s，吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管接种2个平皿，作为试验组，必要时进行稀释。
阳性对照组：从6个区块中选取其他3个区块，用磷酸盐缓冲液代替消毒剂对三个区块表面同法操作，之后将无菌棉签在5ml的中和剂试管中沾湿，分别对3个区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各8次。采样后以无菌操作方式将棉签剪入原中和剂中，电动混匀器上混匀20s，吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数法测定存活菌数，每管接种2个平皿，作为阳性对照组，必要时进行稀释。
阴性对照组：用一只棉签，分别蘸取同批纯化水，以无菌方式将棉签采样端剪入0.1M 硫代硫酸钠-生理盐水溶液中，在混匀器上震荡20s，做适当稀释后，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管接种2个平皿，作为阴性对照。
培养：所有试验样本均在30-35℃培养箱中培养，培养48h观察最终结果。
（7）试验要求及计算
试验须重复三次，计算各组的活菌数（cfu/片），并换算为对数值（N），然后按计算公式杀灭对数值KL=对照组平均浓度的对数值（N0）-试验组活菌浓度对数值（N X）
（8）试验的判断标准
阴性对照组应无菌生长，阳性对照组菌数符合要求，所有样本的杀灭对数值均≥3.00，即判定结果合格。
（9）试验的记录
表5-14 消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第一次试验记录
金黄色葡萄球菌8.1×105 5.91 12 1.08 4.83 ≥3.00 合格大肠埃希菌8.4×105 5.92 0 0 5.92 ≥3.00 合格
表5-15 消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第二次试验记录
金黄色葡萄球菌8.2×105 5.91 1 0 5.91 ≥3.00 合格大肠埃希菌7.9×105 5.88 45 1.65 4.23 ≥3.00 合格
表5-16 消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第三次试验记录
金黄色葡萄球菌 3.2×105 5.51 0 0 5.51 ≥3.00 合格大肠埃希菌 4.8×105 5.68 33 1.52 4.16 ≥3.00 合格
（10）试验结论
浓度为0.2%优洁消毒剂三次物体表面模拟现场鉴定试验（作用0.5min）均符合标准，故判定合格。
5.6.2 消毒剂对物体表面消毒现场鉴定试验
（1）试验所需要用的试剂
Rodac 碟培养基平板、无菌生理盐水、TSA培养基、纯化水
（2）试验所需要用的仪器
计时器、培养箱；
（3）试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间
0.2%的优洁消毒剂作用0.5min
（4）试验所需要用到的场所
抗肿瘤粉针车间
（5）试验操作的步骤（以彩钢板为例）
选择抗肿瘤粉针车间的洁净区表面的彩钢板，选择不易清洁的部位，取一块洁净区医用无菌抹布，用试验浓度的消毒剂，对其表面进行喷洒消毒（按车间消毒规程进行）。消毒后，使用Rodac碟进行取样（对于消毒后的不同时间的采样，应于首次采样的部位比较接近）培养：所有试验样本均在30-35℃培养箱中培养，培养三天观察最终结果。
（6）试验的判断标准
不同级别区域内的不同消毒对象，每次采样三个点，本次试验重复进行3次，结果与下表进行对比，见表5-11。
表5-17 菌落数的合格标准
A级＜3cfu/皿≤5cfu/皿≤1cfu/皿B级≤5 cfu/皿≤5 cfu/皿≤5 cfu/皿C级≤25 cfu/皿≤25 cfu/皿≤25 cfu/皿D级≤50 cfu/皿≤50 cfu/皿≤50 cfu/皿（7）试验结果的记录
表5-18 消毒剂对表面消毒现场鉴定试验第一次试验记录
（A）级面取样点1 0 0 0
≤3
合格取样点2 0 0 0 合格取样点3 0 0 0 合格
（A）级地面取样点1 0 0 2
≤5
合格取样点2 0 0 1 合格取样点3 0 0 0 合格
（A）级设备取样点1 0 0 0
< 1
合格取样点2 0 0 0 合格取样点3 0 0 0 合格
（B）级墙面取样点1 0 0 0
≤5
合格取样点2 0 0 0 合格取样点3 0 0 0 合格
（B）级地面取样点1 0 0 2
≤5
合格取样点2 0 0 1 合格取样点3 0 0 1 合格
（B）级设备取样点1 0 0 0
≤5
合格取样点2 0 1 0 合格取样点3 0 0 0 合格
(C)级墙面取样点1 1 0 1
≤25
合格取样点2 1 1 0 合格取样点3 0 1 1 合格
(C)级地面取样点1 1 0 1
≤25
合格取样点2 0 14 14 合格取样点3 0 14 14 合格
(C)级设备取样点1 1 0 0
≤25
合格取样点2 1 1 0 合格取样点3 0 2 3 合格
(D)级墙面取样点1 3 3 3
≤50
合格取样点2 0 1 0 合格取样点3 0 0 0 合格
(D)级地面取样点1 0 0 0
≤50
合格取样点2 0 1 0 合格
取样点3 0 0 0 合格
(D)级清洗取样点1 0 0 0
≤50
合格取样点2 1 0 0 合格取样点3 0 0 0 合格
由于第二次、第三次试验结果相同，均合格，故此处略去表格。
（8）试验的结论
浓度为0.2%优洁消毒剂对物体表面消毒（作用0.5min）现场鉴定试验共进行三次，结果均符合规定。
5.7 消毒剂消毒效果验证结论
经过本次确认，浓度为0.2%浓度优洁消毒剂可用于车间无菌手套表面和物体表面消毒（作用0.5min），0.2%优洁消毒剂作用0.5min不可用作人员裸手消毒。
6. 验证主要依据
6.1《药品生产验证指南》（2003年版）
6.2《消毒技术规范》（2008年版）
6.3《中国药典》（2010年版）
7. 验证合格标准
7.1 判断标准
在试验结束后，通过判定标准来确定是否合格，判定标准是：在悬液定量杀灭试验中，细菌各次试验的杀灭对数值均应≥5.00时，可判定细菌消毒合格；真菌各次试验的杀灭对数值均应≥4.00，可判定真菌污染物消毒合格；在载体定量杀灭试验中，各次试验的杀灭对数值均≥3.00，可判定消毒合格。
7.2 现场考察试验合格标准
表7-1 菌落数的合格标准
A级＜3cfu/皿≤5cfu/皿≤1cfu/皿
B级≤5 cfu/皿≤5 cfu/皿≤5 cfu/皿
C级≤25 cfu/皿≤25 cfu/皿≤25 cfu/皿
D级≤50 cfu/皿≤50 cfu/皿≤50 cfu/皿
8. 再验证周期
8.1当消毒剂的使用浓度和清洁消毒程序发生变更时应进行再验证。
8.2当环境中出现新类型的微生物时，应以该微生物为挑战菌进行再验证。
8.3当有新的消毒剂被使用时应进行验证。
附录
附录一验证方案会审记录
会审日期：______年_____月_____日
附录二验证方案修改申请及批准书
附录三漏项和偏差处理记录
附录四悬液法定量杀灭试验记录
表5-2 悬液法定量杀灭试验第一次试验记录
金黄色葡萄球菌
15s
2.7×106 6.43
0 0 6.43
≥5.00
合格30s 0 0 6.43 合格45s 0 0 6.43 合格2.5min 0 0 6.43 合格5min 0 0 6.43 合格7.5min 0 0 6.43 合格
大肠埃希菌
15s
4.7×106 6.67
0 0 6.67
≥5.00
合格30s 0 0 6.67 合格45s 0 0 6.67 合格2.5min 0 0 6.67 合格5min 0 0 6.67 合格7.5min 0 0 6.67 合格
铜绿假单胞菌
15s
3.1×106 6.49
1 0 6.49
≥5.00
合格30s 30 1.48 5.01 合格45s 2 0.30 6.19 合格2.5min 0 0 6.49 合格5min 0 0 6.49 合格7.5min 0 0 6.49 合格
洋葱伯克霍尔德菌
15s
3.7×106 6.57
0 0 6.57
≥5.00
合格30s 0 0 6.57 合格45s 0 0 6.57 合格2.5min 0 0 6.57 合格5min 0 0 6.57 合格7.5min 0 0 6.57 合格
表5-3 悬液法定量杀灭试验第一次试验记录
金黄色葡萄球菌
15s
2.3×106 6.36
0 0 6.36
≥5.00
合格30s 0 0 6.36 合格45s 0 0 6.36 合格2.5min 0 0 6.36 合格5min 0 0 6.36 合格7.5min 0 0 6.36 合格
大肠埃希菌
15s
5.6×106
6.75
0 0 6.75
≥5.00
合格30s 0 0 6.75 合格45s 0 0 6.75 合格2.5min 0 0 6.75 合格5min 0 0 6.75 合格7.5min 0 0 6.75 合格
铜绿假单胞菌
15s
5.2×106
6.72
0 0 6.72
≥5.00
合格30s 0 0 6.72 合格45s 0 0 6.72 合格2.5min 0 0 6.72 合格5min 0 0 6.72 合格7.5min 0 0 6.72 合格
洋葱伯克霍尔德菌
15s
1.4×106 6.15
0 0 6.15
≥5.00
合格30s 0 0 6.15 合格45s 0 0 6.15 合格2.5min 0 0 6.15 合格5min 0 0 6.15 合格7.5min 0 0 6.15 合格
白色念珠菌
15s
2.8×105 5.45
0 0 5.45
≥4.00
合格30s 0 0 5.45 合格45s 0 0 5.45 合格2.5min 0 0 5.45 合格5min 0 0 5.45 合格7.5min 0 0 5.45 合格
黑曲霉
15s
2.2×104 4.34
0 0 4.34
≥4.00
合格30s 2 0.30 4.04 合格45s 0 0 4.34 合格2.5min 0 0 4.34 合格5min 0 0 4.34 合格7.5min 0 0 4.34 合格
阴性对照组0 0 合格
阳性对照室臭氧消毒效果再验证方案 VP-WS-18006 起草人：日期： 审核人：日期： 批准人：日期：
目录 1、概述 2、目的 3、验证人员 4、计划验证日期 5、验证方案内容 5.1臭氧消毒方法的确认 5.2臭氧发生器的选择 5.3验证条件确认 5.3.1验证用仪表检验清单确认 5.3.2文件或资料确认 5.3.3检验方法确认 5.4验证内容及步骤 5.4.1臭氧浓度分布测试 5.4.2臭氧浓度分布测试 5.4.3微生物挑战性实验 5.4.4 臭氧消毒有效期确认 6、再验证周期 7、验证总结及结果批准 7.1验证总结 7.2验证结果审查 7.3验证结果批准
1、概述 我公司拟采用臭氧法对洁净区进行消毒。臭氧是一种广谱高效消毒剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将其杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 2、目的 通过对在一定的时间洁净室内臭氧浓度的测试，验证在预定的消毒程序时间内洁净区各洁净间臭氧浓度是否达到标准规定； 通过微生物挑战性试验，确定在预定的消毒程序时间内臭氧对洁净室的消毒效果。 4、计划验证日期 本次验证时限为年月日至年月日。 5、验证方案内容 5.1 臭氧消毒方法的确认：确认阳性对照室无人员，各洁净房间门关闭后，关闭阳性对照室排风系统、新 风系统。在空调控制触摸显示屏中调出臭氧消毒选项，选中后系统自动计时运行。臭氧发生器运行60分钟后，系统自动关闭。打开阳性对照室排风系统、新风系统运行30分钟后，人员方可进入。 结果： 检查人：复核人：日期： 5.2 臭氧发生器的选择 5.2.1臭氧消毒的浓度：按臭氧消毒的效率和卫生部1991年12月颁布的《消毒技术规范》的标准，对空 气中浮游菌，臭氧灭菌的浓度为（2～4）×10-6；对物体表面的沉降菌，臭氧灭菌的浓度为（10～15）×10-6。 5.2.2臭氧的自然半衰期：参比状态下为20min左右；1h衰退率约为62.25%；设计、运用臭氧消毒30min 达到相对浓度后，继续维持一段时间（1h），即可达到机器、设备和建筑物表面沉降菌的杀灭目的。 5.2.3消毒空间体积： 5.2.3.1以选择合适的臭氧发生器为前提，本公司阳性对照室洁净区体积V1，HVAC系统风管容积V2，为保 持洁净区正压所补充的新风的臭氧消耗量为V3。 5.2.3.2 V3的确定根据消毒实践，归纳出较可靠的经验公式：V3=HVAC系统循环总风量2000（m3/h）×25%
1. 概述 2. 验证目的 3. 验证范围 4. 验证内容 5. 再验证周期 6. 验证结果与评定 7. 最终批准 8. 附表
1. 概述臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常 温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧 原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭 氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞 膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子 （O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 我公司现采用山东安丘奥宗麦克斯设备有限公司生产的OZOHD-10B 臭氧发生器对粉针剂车间洁净室（区）进行消毒。 2. 验证目的通过对沉降菌的测试，确定在一定时间内臭氧对洁净室 （区）的灭菌效果。 3. 验证范围验证臭氧的灭菌效果。 4. 验证内容 4.1 验证所需文件：臭氧消毒操作规程进出十万级、万级洁净区更 衣规程洁净区沉降菌检测规程存放地点: 档案室检查结果:符 合要求 检查人：检查日期： 复核人：复核日期： 4.2 试验方法 根据臭氧发生器的生产能力，计算臭氧发生器的最低开机时间（参考：每腔气灭菌，一般可开机1～1.5h；每周以臭氧代替化学试剂熏蒸对物体表面、墙壁、地面及设备灭菌，一般可开机2～2.5h）。 4.2.1 开启净化空调机组和臭氧发生器60 分钟后，分别在百级层流罩、万级、十万级洁净间远离送风口处，摆放培养皿，在每个培养皿中放入枯草杆菌（TESPER-G）试纸，每张试纸上枯草杆菌数量为1×106个，每个培养皿中放2张试纸，1张做无菌试验，一张做含菌数试验。每个房间至少放两个培养皿。 4.2.2 消毒效果确认质量部门取样培养。判断标准：试纸内枯草杆菌数量小于1×103个为合格。 4.2.3开启净化空调机组和臭氧发生器60 分钟后，分别在百级层流罩、万级及十万级洁净间远离送风口处，摆放培养皿，打开平皿盖同时关闭空调的新风阀， 30 分钟后取出培养皿。记录于表1 4.2.4 可接受标准 洁净级别标准 十万级≤10个
传递窗验证方案编号：
日期：2010年5月 批准页 1、起草人签字的含义：你的签字表示你所制订的文件符合现有设计标准并且充分反映该系统的验证任务和可交付使用的必要条件。 2、审核人签字的含义：你的签字表明你已经审核了这份文件，确认此文件能准确全面地反映该系统的验证任务和可交付使用的必要条件。 3、批准人签字的含义：你的签字表明这份文件符合我公司验证主计划的标准，符合验证指南的要求；并且文件及其所含盖的信息符合现行的GMP，同意按此方案实施验证。
目录
1.目的 将臭氧直接打入空调机总送风，通过空调系统将臭氧送到需要灭菌的各个空间。这样既可以达到对洁净区(室) 进行灭菌的目的，同时又对送风和回风管道起到杀菌细菌的作用。 2.范围 通过对在一定的时间洁净室（区）内臭氧浓度的测试，验证在规定的时间内洁净区各洁净间臭氧浓度是否达到标准规定；通过微生物挑战性试验，确定在一定时间内臭氧对洁净室（区）的灭菌效果。 3.职责 3.1设备部： ●制定验证方案； ●执行验证方案，根据需要提供测试数据，供有关部门审查； ●将数据收集到报告中，并上报批准； ●准备工程文件(图纸)； ●核对设备关键参数，提供测试数据供有关部门审查； ●负责设备维护保养；负责起草设备SOP文件； ●编制验证报告。 3.2质量保证部： ●支持验证方案； ●审阅验证方案的格式； ●为书写方案的人员提供指南； ●为方案的实施提供具体的时间； ●审阅验证方案和检验必要的SOP，完成必需的和可提供的培训； ●维护全部受控的法规符合文件，包括验证方案； ●审查和批准验证方案和验证报告。 3.3质量检验部： ●协助确定方案中检测方法；
臭氧消毒效果验证方案 R e t r o s p e c t i v e P r o s p e c t i v e R e-q u a l i f i c a t i o n 下面的签名表示批准本文件及其附件，且表明已经为执行作好了准备。在批准后，任何对本文件的目的或验收标准而进行的改变或修正都必须起到改善的作用，并在执行以前就必须取得批准。
目录 一、概述 (2) 二、验证目的 (3) 三、验证范围 (4) 四、验证日期 (4) 五、验证小组成员及职责 (4) 六、验证参考文件 (5) 七、验证用仪器设备及试剂 (6) 八、验证内容 (6) 九、异常情况及偏差处理 (11) 十、验证结果评定及结论 (11) 十一、拟定再验证周期 (12) 十二、附件 (12) 附件1 (13) 附件2 (14) 附件3 (16) 附件4 (28) 附件5 (40) 附件6 (52)
一、概述 1 臭氧（O ）是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分 3 ）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对子结构不稳定，很快自行分解成氧（O 2 细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其 ），不存在任何有毒细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O 2 残留物，为无污染消毒剂。本臭氧消毒系统的主要用途是取代紫外线灯对各类空间场所进行杀菌消毒、空气净化和对某些物品进行消毒处理。 2 臭氧发生器为我公司洁净区消毒系统，为生产、检验、取样洁净区进行消毒。臭氧消毒是利用HVAC系统的循环风作为臭氧的载体，即将臭氧发生器生产的臭氧由HVAC 系统中的净化风机产生的压力风源，扩散至整个洁净区域，并使空气中的臭氧浓度均匀，即可达到灭菌的目的。消毒时，打开臭氧发生器，臭氧灭菌浓度在开机1小时后，达到10ppm以上。 3 设备基本情况
目录 1. 概述 (4) 2. 验证目的 (4) 3. 验证范围 (4) 4. 验证内容 (4) 4.1. 验证所需文件 (4) 4.2. 可接受标准 (4) 4.3. 准备工作 (4) 4.4. 试验步骤 (4) 5.验证结果与评定 (5) 6. 再验证周期 (5) 7. 验证进度安排 (5) 8. 附表 (6)
1.概述： 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 我公司现采用GJF—F40臭氧发生器对各生产车间洁净室（区）进行消毒。 2.验证目的： 通过对在一定的时间洁净室（区）内臭氧浓度的测试，验证在规定的时间内洁净区各洁净间内臭氧浓度是否达到标准规定；通过微生物挑战性试验，确定在一定时间内臭氧对洁净室（区）的灭菌效果。 3.验证范围： 验证臭氧在洁净室（区）内各洁净间在一定时间内所达到的浓度；验证臭氧的灭菌 效果。 4.验证内容： 4.1.验证所需文件： 臭氧消毒灭菌操作规程（SOP SC0055） 进出万级洁净区更衣规程（SOP SC0012） 洁净区沉降菌检测规程（SOP ZL0006） 容器设备微生物污染检测规程（SOP ZL0008） 4.2.可接受标准： 4.2.1. 臭氧发生器开启60分钟时洁净室（区）内各洁净间臭氧浓度不小于 11ppm。 4.2.2.臭氧发生器开启60分钟时洁净室（区）内微生物全部杀死。 4.3.准备工作： 生物指示剂：金黄色葡萄球菌（6538株）（菌液浓度1×107个/ml）、配制营养琼脂培养基、灭菌平皿、纯化水、20%碘化钾溶液、1.000mol/L硫酸溶液、硫代硫酸钠滴定液（0.0010mol/L）、淀粉指示剂、锥形瓶、采样器、滴定管。
洁净区臭氧消毒效果验证文件
洁净区臭氧消毒效果验证方案 验证方案的起草：日期： 验证方案的审核：日期： 验证方案的审核：日期： 验证方案的批准：日期： 1.概述 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不 稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 公司选购的臭氧发生器是以空气为气源的箱式臭氧发生器，为洁净区进行空气消毒。 消毒方法是利用空调系统的循环风作为臭氧的载体，即将臭氧发生器生产的臭氧由净化空调系统的风机产生的压力风源，扩散至整个洁净区域，并使空气中的臭氧浓度均匀，即可达到灭菌的目的。消毒时，打开臭氧发生器，臭氧灭菌浓度在开机120min后，达到10ppm以上。 2.风险评估 该验证方案是根据风险评估来确定的验证的范围、项目、程度。详见：固体制剂车 间与提取车间洁净区臭氧消毒效果风险评估报告（FX-QA- 2019-02）。 3.验证目的 确认臭氧发生器在正常运行，通过对在一定的时间洁净室（区）内臭氧浓度的测试，验证在预定的消毒程序时间内洁净区各洁净间臭氧浓度是否达到标准规定；通过微生物 挑战性试验，确定在预定的消毒程序时间内臭氧对洁净室（区）的消毒效果及消毒周期。 4.职责 车间：负责起草验证方案和报告，并负责本方案的实施。负责跟踪所有偏差缺陷均已整改。 生产技术部：负责该方案和报告审核。 质量管理部：负责验证方案、验证报告的审核，负责对验证过程的监控和检验，负责对偏差作出处理意见。
1．概述：污染药品常见细菌有霉菌、杂菌、致病菌（沙门氏菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌）这些细菌来源于制药环境未净化空气，不洁净门、窗、制药设备、工具及进行工艺操作的人等，为减少制药环境中微生物污染，常采用的灭菌方法有物理方法和化学方法。对车间空气进行初、中、高效过滤，阻留细菌进入车间，紫外灭菌等均属物理灭菌法。利用甲醛薰蒸、臭氧来杀灭空气中细菌；以75%乙醇擦拭设备表面；4%来苏儿擦门、窗、墙、地面消毒都属化学灭菌法。选用法定检验方法，用上述多种消毒剂，对人员及车间的空气、门、窗、墙、地面、地漏进行消毒效果的验证，优化选择最佳的清洗消毒剂，确认消毒剂的清洁效果。 2．目的：通过用多种清洗消毒剂对车间人员、空气、门、窗、设备设施进行消毒效果的验证确认，优化选择最佳清洗消毒剂。 3．范围：本方案适用于清洗消毒剂消毒效果的验证。 4．验证内容： 4.1消毒剂种类：
75%乙醇；0.2%新洁尔灭；0.5%洗必泰、70%乙醇和2%甘油混合液、臭氧；媒酚皂；84消毒液。 4. 2消毒对象：洁净区的人员、空气、设备、门、窗、墙、地面、地漏、洁具等。 4. 3消毒效果试验方法：各种清洁对象按相应的清洗消毒规程操作后，用预先湿润的无菌棉签擦抹清洁对象表面任意位置25cm2，将擦拭后的棉签置入加有适量灭菌生理盐水的灭菌广口瓶中，振摇15min，取1ml浸出液照微生物限度检查项下细菌、霉菌（酵母菌）计数方法进行试验（药典法），计算菌落数。 4.4清洗消毒剂消毒效果评价标准： 4.4.1空气清洁效果评价标准： 在臭氧发生器开启60分钟后： ①各洁净区域的臭氧浓度≥12ppm（标准10～15 ppm）。 ②生物指示剂细菌（金黄色葡萄球菌6583株，菌液浓度1×107个/ml） 挑战性试验检查不得有细菌生长。臭氧灭菌消毒效果见《臭氧灭菌效果验证方案》。 4.4.2手清洗消毒剂的杀菌效果评价标准： 菌落数<60CFU/25cm2 4.4.3设备清洗消毒剂杀菌效果评价标准： 菌落数≤50CFU/25cm2 4.4.4车间门、窗、墙清洗消毒评价标准： 菌落数≤50CFU/25cm2 4.4.5地面、地漏清洗消毒评价标准：
臭氧消毒验证 纯化水系统消毒和臭氧发生器的杀菌能力验证 消毒：制备大概300L的纯化水，储存在储水罐中，打开纯水罐，开动臭氧消毒器进行管道消毒，并进行臭氧发生器循环时间验证。验证结束后关闭臭氧发生器和纯水泵，将纯水罐和循环管道里的水排尽，然后再制300L，打开纯化水泵循环，边循环边将纯水罐和循环管道里的水排干，如此循环，直至用水点取样的水电导率与消毒前一致。 （1）杀菌前后，通过检测水中臭氧浓度检测臭氧发生器的杀菌能力。在纯化水系统运行情况下，取样，然后打开臭氧发生器循环60、90、120分钟后取样，分别测试结果。臭氧发生器开启后杀菌循环时间有确定，确定储水罐有足够循环的纯化水，打开臭氧发生器进行循环。分别在60、90、120分钟时在总送水口、总回水口、洁具间、检验室、清洗间、浓配间、洗衣间取样，检验水中臭氧浓度，以确定臭氧消毒最强佳时间。 （2）消毒效果标准：按照卫生部《消毒技术规范》关开臭氧消毒的规定，对于二级反渗透制备的纯化水用臭氧消毒，要达到消毒效果需保证水中臭氧浓度达到~L，维持5~10分钟。（3）操作步骤：①把臭氧发生器的开启时间设定为2个小时；②把臭氧发生器的开关度确定为100%；③打开臭氧发生器，并开启计时准备取样检验。 臭氧浓度 取样点 杀菌前 循环60分钟 循环90分钟 循环120分钟 测试结果结论 总出水口 总回水口 纯水罐 洗衣间
洁具间 检验室 清洗间 （4）测试到臭氧浓度达到消毒效果所需浓度（L）后，确定该时间加上25分钟为正常管道臭氧消毒时间，浓度达到后继续循环20分钟，并且按次序打开各个用水点阀门，最少5分钟进行消毒。 （5）臭氧消毒周期的确定：臭氧消毒周期确定为一个质监控周期。 检查人：日期：复核人：日期：（6）冲洗：运行设备进行制水，水量足够后打开纯水泵循环，同时打开储水罐下部排水阀，次序找开各个用水点阀门（最少5分钟），排放罐内循环水；重复上述操作直到各用水点水的电导率与纯化水的电导率一致。
1.概述 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不 ）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极稳定，很快自行分解成氧（O 2 强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜， ），不存在任何有毒残留物，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O 2 为无污染消毒剂。 我公司现采用上海纯帝环保设备有限公司生产的ZCF-WZ100（B）臭氧发生器对滴眼剂车间洁净室（C级区）进行消毒。 2.验证目的 通过对沉降菌的测试，确定在一定时间内臭氧对洁净室（区）的灭菌效果。 3.验证范围 验证臭氧的灭菌效果。 4.验证内容 4.1验证所需文件： 4.2 臭氧消毒器安装确认，见表1 4.3试验方法 4.3.1 根据臭氧消毒的效率和《消毒技术规范》的标准决定臭氧消毒的浓度（C）；对空气中浮游菌，臭氧消毒浓度为（2～4）×10-6g；对物体表面的沉降菌，为（10～15）×10-6g（臭氧消毒浓度参考卫生部1991年12月领布的《消毒技术规范》，臭氧的半自然半衰期（S）参比状态下为20min左右，1小时的衰退率约为62.25%。 ①臭氧发生量的计算：W=19.63×V/1-0.6225（mg/h）(V为消毒空间体积m3)； ②消毒空间体积的计算：V=循环系统点风量×0.944%。 结合①、②根据臭氧发生器的生产能力，计算臭氧发生器的最低开机时间（参考：每腔
气灭菌，一般可开机1～1.5h；每周以臭氧代替化学试剂熏蒸对物体表面、墙壁、地面及设备灭菌，一般可开机2～2.5h）。 4.3.2 开启净化空调机组和臭氧发生器60分钟后，分别在百级层流罩、万级、十万级洁净间远离送风口处，摆放培养皿，在每个培养皿中放入枯草杆菌（TESPER-G）试纸，每张试纸上枯草杆菌数量为1×106个，每个培养皿中放2张试纸，1张做无菌试验，一张做含菌数试验。每个房间至少放两个培养皿。 4.3.3 消毒效果确认 质量部门取样培养。判断标准：试纸内枯草杆菌数量小于1×103个为合格。 4.3.4 开启净化空调机组和臭氧发生器60分钟后，分别在百级层流罩、万级及十万级洁净间远离送风口处，摆放培养皿，打开平皿盖同时关闭空调的新风阀，30分钟后取出培养皿。记录于表1。 4.3.5可接受标准 5. 再验证周期 验证工作小组负责根据臭氧发生器的安装确认、运行情况拟订再验证周期报 验证领导小组审批。 6. 验证结果与评定 验证小组负责根据验证情况，作出评定，写出验证报告。 7. 验证进度安排 车间于200 年月日至200 年月日进行验证。 8. 附表： 表1：臭氧消毒器安装确认记录 表2：滴眼剂车间臭氧消毒效果结果记录。 表3：再验证周期
国药威奇达 编号：VAL-SAI-FA-134718版本号：00执行日期：WEIQIDA PHARMA 原料药车间臭氧消毒 验证方案 部门签字/日期 Department Signature/Date 起草人：原料药车间 Prepared by 审核人：原料药车间 Reviewed by 审核人：工程动力部 Reviewed by 审核人：质量部 Reviewed by 审核人：N/A Reviewed by 审核人：N/A Reviewed by 批准人：质量负责人 Approved by
国药威奇达 编号：VAL-SAI-FA-134718版本号：00执行日期：WEIQIDA PHARMA 文件修订历史： 版本修订原因日期签名 00
国药威奇达 编号：VAL-SAI-FA-134718版本号：00执行日期：WEIQIDA PHARMA 目录 1 目的 (4) 2 概述 (4) 3 适用范围 (4) 4 人员职责 (4) 4.1 验证小组成员的职责 (4) 4.2 验证小组成员签名 (5) 5 验证内容 (5) 5.1 安装确认 (5) 5.1.1 目的 (5) 5.1.2 文件资料 (5) 5.1.3 安装确认方法 (5) 5.1.4 可接受标准 (5) 5.2 运行确认 (6) 5.2.1 目的 (6) 5.2.2 验证所需的仪表 (6) 5.2.3 运行确认内容 (6) 5.2.4 运行确认方法 (6) 5.2.5 可接受标准 (7) 5.3性能确认 (7) 5.3.1 目的 (7) 5.3.2 臭氧浓度测定 (7) 5.3.3 臭氧灭菌效果的测定 (8) 5.3.4 灭菌周期的确定 (8) 5.3.4 可接受标准 (9) 5.3.5 备注汇总 (9) 5.3.6 偏差汇总 (9) 6 验证方法 (9) 7 偏差 (10) 8 结果及评估 (10) 9参考或引用文件 (10) 10 附件 (10)
洁净区臭氧消毒验证方案 1 验证目的 通过对在一定的时间洁净室（区）内臭氧浓度的测试，验证在预定的消毒程序时间内洁净区各洁净间臭氧浓度是否达到标准规定； 通过微生物挑战性试验，确定在预定的消毒程序时间内臭氧对洁净室（区）的消毒效果。 2 验证范围 固体制剂30万级洁净区。 3 责任者 生产部、质量部、固体制剂验证小组。 4 验证小组成员 5 引用资料及标准 在验证过程中，引用《药品生产质量管理规范》（1998）、《药品生产质量管理规范实施指南》（2001）、《药品生产验证指南》（2003）、《消毒技术规范》（1991）作为验证执行标准。 6 验证进度及安排 7 验证内容 7·1概述 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。我公司现采用JY-BX-160A臭氧发生器对各固体制剂车间30万级洁净室（区）进行消毒。 7·2 预确认 7·2·1臭氧发生器的选择 a、臭氧消毒的浓度（C）：按臭氧消毒的效率和卫生部1991年12月颁布的《消毒技术规范》的标准，对空气中浮游菌，臭氧灭菌的浓度为（2～4）×10-6；对物体表面的沉降菌，臭氧灭菌的浓度为（10～15）×10-6。 b、臭氧的自然半衰期（S）：参比状态下为20min左右；1h衰退率约为62.25%；设计、运用臭氧消毒60min达到相对浓度后，继续维持一段时间（1—1.5小时），即可达到机器、设备和建筑物表面沉降菌的杀灭目的。
编号： 洁净区甲醛消毒 效果验证方案 （文件编号：）
一、验证组织与职责 1 二、验证方案概述 1、概述 XX洁净区拟产用甲醛熏蒸和臭氧消毒两种方式交替，甲醛消毒拟定为每月一次，臭氧消毒拟定为每三天一次。 2、目的 确认已选定的消毒剂甲醛对XX洁净区进行熏蒸方式的消毒效果，保证洁净区达到洁净级别要求。 3、验证范围：本验证方案适用于XX洁净区净化空调系统甲醛消毒。 4、验证要求： 验证过程应严格按照本方案规定执行，整个验证过程应在验证小组人员的监督下进行，检查过程中任何与文件或规范的偏差或遇到任何例外的情况都要记录下来，以供文件偏差报告表的审查。记录的偏差要进行调查，而且决定并采取相应的措施。文件偏差报告表中需记录有调查、纠正性措施及其理由。 5、验证时间：
2013 年 8 月 27-9 月 30 日。 三、消毒方式： 按每立方米空间用甲醛 10g 计算消毒剂用量，用蒸汽加热发生罐使甲醛蒸汽随空 调送风进入洁净区，时间 60 分钟，停止送风，焖消 3 小时。开启空调送风、排风，恢 复正常运行。其各洁净区体积及甲醛用量如下表： 风柜名称 洁净区名称 洁净区 体积(m ) 风管体积 (m ) 空调箱 体积(m ) 总体积 (m ) 甲醛消毒剂 用量（g ） 四、验证方案 序号 房间名称 房间编号 洁净区域 1 D 级 2 D 级 3 C 级 1 区 4 C 级 2 区 5 C 级 2 区 6 B 级 序号 目的 验证方法 标准 1 消毒效果 表面微生物 相应级别洁净区的 1/10 2 沉降菌检测 相应级别洁净区的 1/10 3 生物指示剂细菌挑战性试验 应合格 4 甲醛残留量 甲醛残留量检测 <0.55ppm 1、表面微生物判断标准： （1）B 级表面微生物标准 1/10 即[接触（55mm ）1cfu /碟] ； （2）C 级表面微生物标准的 1/10 即[接触（55mm ）3cfu /碟] ； （3）D 级表面微生物标准的 1/10 即[接触（55mm ）5cfu /碟] 2 。 检测记录如下： 3 3 3 3 2 2 序 号 房间名称 房间编号 取样点 洁净区级别 检测结果 表 面微生物标准
×××公司验证文件 备注：
目录 1.概述 2.验证目的 3.验证范围 4.验证内容 5.再验证周期 6.验证结果与评定 7.最终批准 8.附表
1.概述 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压 下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后 者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌 内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的 氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 我公司现采用山东安丘奥宗麦克斯设备有限公司生产的OZOHD-10B 臭氧发生器对粉针剂车间洁净室（区）进行消毒。 2.验证目的 通过对沉降菌的测试，确定在一定时间内臭氧对洁净室（区）的灭菌 效果。 3.验证范围 验证臭氧的灭菌效果。 4.验证内容 4.1验证所需文件： 臭氧消毒操作规程 进出十万级、万级洁净区更衣规程 洁净区沉降菌检测规程 存放地点: 档案室 检查结果:符合要求 检查人：检查日期： 复核人：复核日期： 4.2试验方法 根据臭氧发生器的生产能力，计算臭氧发生器的最低开机时间（参考：每腔气灭菌，一般可开机1～1.5h；每周以臭氧代替化学试剂熏蒸对物体表面、墙壁、地面及设备灭菌，一般可开机2～2.5h）。 4.2.1 开启净化空调机组和臭氧发生器60分钟后，分别在百级层流罩、万级、十万级洁净间远离送风口处，摆放培养皿，在每个培养皿中放入枯草杆菌（TESPER-G）试纸，每张试纸上枯草杆菌数量为1×106个，每个培养皿中放2张试纸，1张做无菌试验，一张做含菌数试验。每个房间至少放两个培养皿。 4.2.2 消毒效果确认
湖南斯奇生物制药有限公司 空气消毒效果验证报告 报告编号：V-GS-007-05-01 起草人：王旭 起草日期：2012年12月24日
报告目录 一、验证报告的审批 (2) 二、系统描述 (4) 三、相关的验证文件 (4) 四、实施验证的人员及职责 (5) 五、验证合格标准 (5) 六、验证内容 (6) 6.1、安装确认 (6) 6.1.1 验证试验项目： (6) 6.1.2 验证实施过程： (6) 6.1.2.1 仪器、仪表的校验： (6) 6.1.2.2甲醛熏蒸用设备的确认 (6) 6.1.2.3 臭氧发生器消毒剂量的计算： (7) 6.1.2.4 臭氧发生器的安装确认： (8) 6.1.3安装确认过程中偏差及漏项情况： (8) 6.1.4 安装确认结果及分析评价 (8) 6.2 运行确认 (8) 6.2.1 验证试验项目： (8) 6.2.2 验证实施过程： (9) 6.2.2.1甲醛熏蒸运行情况检查： (9) 6.2.2.2 臭氧发生器设备运行情况检查： (9) 6.2.3运行确认过程中偏差及漏项情况 (10) 6.2.4 运行确认结果 (10) 6.3性能确认 (10) 6.3.1 验证试验项目： (10) 6.3.2 验证实施过程： (10) 6.3.2.1 甲醛消毒效果的确认： (10) 6.3.2.2 臭氧消毒效果的确认： (13) 6.3.2.3 消毒周期测试： (15) 6.3.3性能确认过程中偏差及漏项情况： (16) 6.3.4性能确认结果 (16) 七、验证变更审批表 (17) 八、再验证注意事项 (18) 九、验证评价、建议 (18) 十、验证总结报告 (19)
臭氧灭菌效果验证报告 臭氧灭菌效果验证 目录 一、证小组成员名单 二、验证方案批准 三、验证方案 四、验证报告 五、验证报告批注书
一、验证小组成员名单
三、验证方案批准
三、臭氧灭菌效果验证方案引言 1、概述 2、目的 3、适用范围 4、验证判定标准 验证条件确认 1、验证用仪表检验清单确认 2、文件或资料确认 3、检验方法确认 验证内容及步骤 1、臭氧浓度分布测试 1-1、臭氧浓度-时间分布测试 1-2、臭氧浓度-空间分布测试 2、微生物挑战性实验 3、沉降菌测试 验证结果记录及分析 验证结论及再验证 验证计划
引言 1、概述 臭氧（O3）是氧的同素异形体，由三个氧原子（O）组成，由于臭氧分子结构不稳定容 易把多出的一个氧原子抛出而成为氧分子—“新生氧”。臭氧的氧化能力非常强，对微生物有极强的杀灭能力，它与微生物细胞中多种成分产生反应，从而产生不可逆转的变化而灭亡。 臭氧消毒是利用HVAC系统的循环风作为臭氧的载体，即将臭氧发生器产生的臭氧体由HVAC系统中的净化风机产生的压力风源扩散至整个洁净区域，同时对HVAC系统（净化空调，初、中效过滤器，送回风管道，高效过滤器等）起到杀灭菌和霉菌的效果。共有3台臭氧发生器，放置在空调机内中效过滤器后面。 消毒时，打开空调机及臭氧发生器，关闭新风和出风，使洁净区内空气保持内循环。 按《臭氧灭菌标准操作程序》进行房间灭菌，连续三次进行微生物挑战性实验、沉降菌测试、测试房间臭氧浓度随时间变化情况。 2、目的 检查并确认臭氧灭菌效果是否符合要求。 3、适用范围 本方案仅适用于臭氧灭菌效果验证。 4、验证判断标准 臭氧浓度—时间分布的标准：在臭氧发生器开启后4min后，所有洁净区域中臭氧浓度 达到10ppm，并且在发生器关闭之前不得低于此浓度。
备注: 目录 1.概述 2.验证目得 3.验证范围 4.验证内容 5.再验证周期 6.验证结果与评定 7.最终批准 8.附表 1.?概述?臭氧就是一种广谱高效灭菌剂,具有强烈杀菌消毒作用。在常温、 常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧(Ｏ2)与单个氧原子(O),后
者具有很强得活性,对细菌有极强得氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内 部氧化葡萄糖所必须得酶,从而破坏其细胞膜,将它杀死。多余得氧原子 则会自行重新结合成为氧分子(O２),不存在任何有毒残留物,为无污染 消毒剂。 我公司现采用山东安丘奥宗麦克斯设备有限公司生产得OＺOＨ D-10B臭氧发生器对粉针剂车间洁净室(区)进行消毒。 2、验证目得 通过对沉降菌得测试,确定在一定时间内臭氧对洁净室(区)得灭菌效 果。?3、验证范围?验证臭氧得灭菌效果。 ４、验证内容 ４、1验证所需文件:?臭氧消毒操作规程 进出十万级、万级洁净区更衣规程?洁净区沉降菌检测规程 存放地点: 档案室 检查结果:符合要求 检查人: 检查日期: 复核人: 复核日期： 4、2试验方法 根据臭氧发生器得生产能力,计算臭氧发生器得最低开机时间(参考：每腔气灭菌，一般可开机1~1、5h;每周以臭氧代替化学试剂熏蒸对物体表面、墙壁、地面及设备灭菌,一般可开机2~2、5ｈ)。?4．2．1开启净化空调机组与臭氧发生器６0分钟后,分别在百级层流罩、万级、十万级洁净间远离送风口处,摆放培养皿,在每个培养皿中放入枯草杆菌（TESＰER-Ｇ）试纸,每张试纸上枯草杆菌数量为1×106个，每个培养皿中放2张试纸，1张做无菌试验，一张做含菌数试验。每个房间至少放两个培养皿。?4、２、2 消毒效果确认?质量部门取样培养。判断标准:试纸内枯草杆菌数量小于1×103个为合格。4?、2、3开启净化空调机组与臭氧发生器６0分钟后,分别在百级层流罩、万级及十万级洁净间远离送风口处,摆放培养皿,打开平皿盖同时关闭空调得新风阀，３0分钟后取出培养皿。记录于表1。?4、２、4可接受标准 洁净级别标准 十万级≤1０个 万级≤３个 百级≤1个
臭氧消毒验证报告
目录 一、概述 (4) 二、验证目的 (4) 三、适用范围 (4) 四、验证小组成员与职责 (4) 五、验证相关文件与参考资料 (5) 六、验证内容 (5) 七、验证结论： (10) 八、最终评价： (11) 九、再验证周期 (11)
洁净区臭氧消毒验证方案 一、概述 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子 ）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，结构不稳定，很快自行分解成氧（O 2 对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部葡萄糖所必须的酶，从而破 ），不存坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O 2 在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 本验证是通过一系列试验数据和文件依据以证明，按照《洁净厂房空气消毒标准操作规程》对厂房进行臭氧消毒，在确保使用臭氧浓度和消毒时间的前提下，对经过消毒后的厂房进行取样，对样品进行细菌培养，并对细菌培养的结果和消毒过程的数据进行分析比较，验证按照标准操作规程进行消毒能够杀灭洁净区空气中的细菌，满足生产环境对微生物控制的要求。 二、验证目的 通过本次验证，提取车间进行臭氧消毒，消毒效果符合生产环境对微生物控制的要求。 三、适用范围 适用于对三十万级固体制剂车间、提取车间洁净厂房消毒效果的验证。 四、验证小组成员与职责 根据验证总计划，针对此验证成立验证小组，其具体职责分工如表：
五、验证相关文件与参考资料 六、验证内容 6.1运行确认（臭氧浓度测试） 6.1.1目的：确认洁净区在臭氧发生器正常消毒时间2小时内，臭氧浓度符合设计 要求。 6.1.2合格标准： 臭氧浓度：在臭氧发生器开启后40min内洁净室内臭氧浓度≥10ppm（19.63mg/m3）；且所有洁净区域中臭氧浓度均≥10ppm。 消毒时间：所有洁净区域内臭氧浓度达到10ppm时开始计时，直到臭氧发生器停止工作臭氧浓度降至10ppm时终止，时间应≥60min；臭氧灭菌后，臭氧浓度衰减至安全标准0.15ppm 所需的时间应≤30min。 6.1.3试验条件 环境条件：环境温度16～28℃；相对湿度45～65%；室内无外界强气流，无强烈阳光照射或其他热辐射。消毒时关闭新风口和回风排放阀门，使整个被消毒的洁净区空气通过净化系统风管形成循环，臭氧发生器开始工作。 测试原理：检测管测试采用化学比色原理，直读分析数据。 臭氧浓度测试方法：割断检测管的两端封口；将检测管插在采样器的进气口上，将采样器手柄拉至第二档位，采样100ml，待检测管中指示剂变色终止，即可从白色柱所致刻度，读出臭氧体积浓度(ppm)数据。臭氧检测浓度单位mg/m3与ppm的关系及换算公式：质量浓度（mg/m3）=臭氧分子量（M）/22.4(标准状态下气体的摩尔体积B)×体积浓度(ppm) ×（273/(273+T)）×（Ba/101325）
类别：验证方案编码：Ⅴ-Y-206-01-C 颁发部门：QA 洁净区臭氧消毒验证方案 河北**药业有限公司
洁净区臭氧消毒验证方案 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 臭氧消毒是利用HVAC系统的循环风作为臭氧的载体，即将臭氧发生器生产的臭氧由HVAC系统中的净化风机产生的压力风源，扩散至整个洁净区域，并使空气中的臭氧浓度均匀，即可达到灭菌的目的。消毒时，打开臭氧发生器，臭氧灭菌浓度在开机1小时后，达到10ppm以上。我公司现采用JY-BX-160A臭氧发生器对各固体制剂车间30万级洁净室（区）进行消毒。 1、验证目的 为确认臭氧发生器能够正常运行，设备各项性能指标符合设计要求，通过对在一定的时间洁净室（区）内臭氧浓度的测试，验证在预定的消毒程序时间内洁净区各洁净间臭氧浓度是否达到标准规定；通过微生物挑战性试验，确定在预定的消毒程序时间内臭氧对洁净室（区）的消毒效果及消毒周期。 2、验证范围 固体制剂30万级洁净区 设备名称：臭氧发生器；设备型号：OZOLT-135B；设备编号：ZD-ET-002 制造厂：安徽麦克斯设备有限公司；安装地点：固体制剂车间一楼空调机房 3、引用资料及验证日期 在验证过程中，引用《药品生产质量管理规范》(2010年版)、《中国药典》(2010年版)、《药品生产质量管理规范实施指南》（2001）、《药品生产验证指南》（2003）、《消毒技术规范》（1991）、《产品使用与维修说明书》。 时间：xxxx年03月07日～xxxx年04月10日 4、验证小组成员
备注：
目录 1.概述 2.验证目的 3.验证范围 4.验证内容 5.再验证周期 6.验证结果与评定 7.最终批准 8.附表
1.概述 臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压 下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后 者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌 内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的 氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。 我公司现采用山东安丘奥宗麦克斯设备有限公司生产的OZOHD-10B 臭氧发生器对粉针剂车间洁净室（区）进行消毒。 2.验证目的 通过对沉降菌的测试，确定在一定时间内臭氧对洁净室（区）的灭菌 效果。 3.验证范围 验证臭氧的灭菌效果。 4.验证内容 4.1验证所需文件： 臭氧消毒操作规程 进出十万级、万级洁净区更衣规程 洁净区沉降菌检测规程 存放地点: 档案室 检查结果:符合要求 检查人：检查日期： 复核人：复核日期： 4.2试验方法 根据臭氧发生器的生产能力，计算臭氧发生器的最低开机时间（参考：每腔气灭菌，一般可开机1～1.5h；每周以臭氧代替化学试剂熏蒸对物体表面、墙壁、地面及设备灭菌，一般可开机2～2.5h）。 4.2.1 开启净化空调机组和臭氧发生器60分钟后，分别在百级层流罩、万级、十万级洁净间远离送风口处，摆放培养皿，在每个培养皿中放入枯草杆菌（TESPER-G）试纸，每张试纸上枯草杆菌数量为1×106个，每个培养皿中放2张试纸，1张做无菌试验，一张做含菌数试验。每个房间至少放两个培养皿。 4.2.2 消毒效果确认 质量部门取样培养。判断标准：试纸内枯草杆菌数量小于1×103个为合格。4.2.3开启净化空调机组和臭氧发生器60分钟后，分别在百级层流罩、万级及十万级洁净间远离送风口处，摆放培养皿，打开平皿盖同时关闭空调的新风阀，
目录1 引言 1·1 概述 1·2 验证目的及范围 1·3 验证小组人员及责任 2 臭氧消毒工艺流程 3 验证准备工作 3·1 文件 3·2 要求 3·3 合格标准 4 验证步骤 4·1 确认内容 4·2 验证实施 5 偏差概述及采取措施 6 再验证周期 7 验证结果及评价 8 验证最终审核批准
1 引言 1·1 概述：我单位现应用苏州市金叶臭氧设备有限公司生产的DHY-K90B臭氧发生器，用于对大容量注射剂一车间HV AC系统及各个洁净区房间进行臭氧消毒。其消毒原理为：由臭氧发生器产生臭氧，臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧分子和单个氧原子，后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，可氧化分解细菌内部氧化葡萄糖所必需的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成普遍氧分子，不存在任何有害残留物。 1·2 验证目的及范围： 按照臭氧消毒SOP步骤，通过HV AC系统对各个洁净区房间进行消毒，以确认消毒后房间各项指标符合大输液生产要求。本验证方案适用于HV AC系统臭氧消毒效果的验证。 1·3 验证小组人员及责任
2臭氧消毒工艺流程： 运行空调净化系统→关闭新风进口→关闭回风排放阀门→打开臭氧发生器→消毒30min→检测消毒效果 3 验证准备工作 3·1 文件 所有与本验证有关的系统标准操作规程和岗位标准操作规程都应具备并归档。 3·2 要求： HV AC系统运行应符合要求，各个洁净区房间洁净度应符合要求，与本程序相关的项目都经过验证而且合格；臭氧发生器的性能及技术参数能符合生产要求。 3·3 合格标准 3·3·1臭氧发生器的臭氧产量、臭氧浓度和时间定时器技术指标应符合要求。 3·3·2臭氧消毒规定时间后，各个洁净区房间沉降菌应符合规定。 4验证步骤 4·1 确认内容： 4·1·1 确认臭氧发生器的臭氧产量、臭氧浓度和时间定时器技术指
臭氧发生器及其消毒灭菌效果验证方案编号：STP-YZ-FA-05-01
臭氧发生器及其消毒效果验证方案 目录 1、概述 1.1、名称及编号 1.2、用途和能力 1.3、工作原理 1.4、简要操作流程 2、验证目的 3、文件检查 4、安装确认 4.1、设备安装 4.2、公共介质的连接 4.3、仪器、仪表的校验 5、运行确认 5.1、灭菌程序的设定 5.2、运转记录 5.3、验证数据记录 5.4、测试结果的初步判定 6、性能及确认的测试 7、验证结论总结
1、概述 1.1、名称及编号 1.1.1、设备名称：臭氧发生器 1.1.2、生产厂商：海门市康达臭氧净化环保设备厂 1.1.3、安装条件：配备1200V A，220V交流电源 1.1.4、设备型号/编号 ――设备型号：CF－96－KH60（H） ――编号： 1.2、用途和能力 1.2.1、用途： 用于药品各剂型生产洁净区域内空气及物体表面消毒灭菌。我厂现有洁净区域主要有：玻璃瓶输液生产线（一万级、十万级）；软袋输液生产线（一万级、十万级）；小容量注射剂生产线（一万级、十万级）；固体制剂生产车间（三十万级）。 1.2.2、灭菌能力 1.3、工作原理 ――臭氧发生器安装在HV AC系统中的洁净空调箱内，配合中央空调净化系统使用；臭氧发生装置将流经臭氧发生管附近的空气电离产生臭氧并由空调系统送风机送往每个洁净区内，利用臭氧的强氧化性能对洁净区内的空气及物体表面消毒灭菌。 1.4、简要操作流程 ――关闭空调系统新风进口，并关闭排风系统→启动空调送风风机→接通发生器控制柜电源→设定程控器开关机程序，设定开机时间（2h）→程控器走时到设定关机时刻关闭臭氧发生器，空调风机继续运行，整个系统处于保洁状态→恢复新风口和排风系统。 2、验证目的 2.1、检查和确认臭氧发生器的运行符合设定的标准，技术要求可达到说明书上的技术指标。