Elson-Morgan 改良法
一、实验原理
透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者,透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性,研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性,一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性,因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。
二、试剂和仪器
1、透明质酸酶:浓度500U/ml,现配现用,不能过夜,用醋酸缓冲液做溶剂;
2、透明质酸钠:0.5mg/ml,一次配制,多次使用,用醋酸缓冲液做溶剂;
3、Buffer:溶液A(0.2 mol/L 醋酸 11.55ml冰醋酸溶于1L蒸馏水中)4.8ml
溶液B(0.2 mol/L醋酸钠 16.4g无水醋酸钠或27.2g三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中)45.2ml,混合稀释至100ml,配制成PH=5.6的醋酸缓冲液;
4、乙酰丙酮溶液:50ml 1.0mol/L 碳酸钠溶液和3.5ml乙酰丙酮溶液混合均匀(临用现配)
5、P-DAB显色剂:0.8g 对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。
6、氯化钙溶液CaCl2:2.5mol/L
7、氢氧化钠溶液NaOH:5 mol/L
样品参考浓度1.2mg/ml
三、试验步骤
四、计算
透明质酸酶抑制率(%)=[(C-D)-(A-B)]/ (C-D) ×100%
试中:A—(透明质酸酶+样品+透明质酸钠)试样溶液的OD值
B—(醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液)试样空白的OD值
C—(透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠)对照溶液的OD值 D—(醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液)对照空白的OD值