现代农药２００２年第１期３３双（三氯甲基）碳酸酯的合成及在“三药＂合成中的应用
沈国平
（浙江嘉化实业股份有限公司浙江嘉兴３１４００６）。嘉纛纛㈣砾８
（嘉兴职业技术学院）
…
摘要本文介绍了双（三氯甲基）碳酸酯（简称ＢＴＣ）的制备方法厦其在有机合成中的应用。ＢＴＣ作为剧毒的光气和双光气在合成中的低毒替代物，在制备一些重要类型有机化合物时，其反应条件温和，选择性好，收率高。
关键词双（三氯甲基）碳酸酯合成应用
光气是一种重要的化学试剂。在农药、医药、高分子材料的合成方面用途十分广泛；但是，光气是高毒气体，有窒息性气味，遇水缓慢分解，生成一氧化碳和氯化氢；加热分解，产生有毒和腐蚀性气体；其沸点低（８．２＇ｔ２），挥发性大，是非常危险的化学品。因此，光气的生产、贮存、运输和使用很不方便。
氯甲酸三氯甲酯因其在适当的条件下能分解成两个分子光气，故俗称双光气。双光气在常温常压下是液体（沸点１２８。Ｃ），因此双光气在运输、贮存和使用中比光气安全、方便，但还存在不少的危险性。
双（三氯甲基）碳酸酯（即固体光气）于１８８０年由Ｃｏｕｎｃｌｅｒ首次合成，已有１００多年的历史。１９８０年以后，由于原料碳酸二甲酯的生产工艺得到简化，客观上为固体光气的合成提供了物质条件＋一些适于实验室和工业制备固体光气的方法相继报道。固体光气可在大多数化学合成中代替光气和双光气使用，其储存、运输及使用过程较安全，仅当一般有毒物质处理。
固体光气与光气、双光气相比，具有以下优点：
（１）便于贮运，其性质很稳定，只有在有机胺（如ＤｒＹ）、活性炭存在下才分解；
（２）便于计量，可以称量投料；
（３）使用较安全，毒害性低；
（４）可实现气体光气无法实现的反滴加反应；
（５）等当量反应，气体光气无法做到；
（６）反应条件温和，选择性好，产品质量好，收率高。
１固体光气的性质
固体光气，又名三光气，化学名称为碳酸双（三氯甲酯），具有下列结构式：
Ｃ１３ＣＯＣＯＯＣＣｌ３
固体光气外观为白色结晶固体，熔点８ｌ一８３０ｃ．沸点２０３—２０６℃；有类似光气的气味；不溶于水，可溶于乙醚、四氢呋喃、苯、氯仿等有机溶剂。
固体光气在常温、密闭保存下比较稳定；热稳定性高，在蒸馏温度时有极少量分解，生成光气和氯甲酸三氯甲酯；作为一般有毒物质处理。
固体光气具有较高的反应活性。
２固体光气（ＢＴＣ）的制备
眦是以碳酸二甲酯为原料，通过光引发的氯化反应制备的。
２．１溶剂法
本法适于实验室或小规模少量制备。
１９８７年，Ｅｃｋｅｒｔ等报道的方法是将０．５ｔｏｏｌ碳酸二甲酯溶于２５０ｒａｌ四氯化碳中，在搅拌并冷却（１０—２０℃）条件下光照通入氯气，约需４８ｈ反应完成，然后减压蒸出溶剂，得到晶体产品１４３９，产率９７％，熔点７９＇ｔ２。
１９９３年，Ｆａｌｂ等改进了Ｅｃｋｅｒｔ的方法，改用内部冷却装置，使反应温度保持在５—１０℃，增大氯气的溶解度，反应时间缩短为１８ｈ，得到定量的产率。
１９９４年，刘天麟等报道在普通三口瓶中回流条件下光照氯化的方法，产率９９％，熔点７９～８１℃。２．２非溶剂法
本法适于中等规模工业生产。
１９８５年，Ｒａｅａｌｏｇｌｕ等报道在内部装有石英玻璃管保护紫外光源的恒温光氯化装置中，加入碳酸二甲酯和引发剂ＡＩＢＮ，在２０～６０℃下以２５０Ｌ／ｈ的流量通人氯气，氯化后反应物体积明显增大，反应后期可将温度提高到８０。Ｃ，使反应完全，以防产品结晶析出；反应完全后，冷却过滤，用冷的、干燥无水的四氯化碳洗涤，减压干燥，得到产品，收率９５％。
万方数据
常用免疫组化标记物公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
常用免疫组化指标的意义 Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。 多数腺癌表达CEA Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。 E-Ca，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。 PS2（雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。 CK18，低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。 CK19，分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应 Hep par 1,肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。 CK20，用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。 CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。 Villin 绒毛蛋白，正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。 乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极
DNA亚硫酸氢盐修饰和纯化操作步骤修饰设计：使用CpGenome TM kit使胞嘧啶转化为尿嘧啶的步骤如下。中等温度碱性pH下使DNA变性成为单链形式暴露出碱基。试剂一，一种包含亚硫酸氢根的钠盐，可使未甲基化的胞嘧啶磺化和水解脱氨，产生一种尿嘧啶磺酸盐中间产物。然后DNA在另一种盐﹙试剂二﹚存在的条件下与一种微粒载体﹙试剂三﹚结合，并通过重复离心和在70%的乙醇中重悬浮脱盐。向尿嘧啶的转化是通过在90%的乙醇中反复碱性脱磺酸基作用和脱盐完成的。DNA最终在TE缓冲液中通过加热从载体上洗脱下来。 第一步：试剂准备 （1）3 M NaOH原料（用前现配） 把1g干NaOH片剂溶解在8.3mL水中。使用此类腐蚀性碱，注意小心谨慎和实验操作。 （2）20 mM NaOH/90% EtOH（用前现配） 配制1mL该溶液需：900μl 100%的乙醇，93.4μl水，6.6μl 3M的氢氧化钠。 （3）溶解试剂Ⅰ（用前现配） 打开前将试剂瓶加温至室温。对每份待修饰的样本，称取0.227g DNA修饰试剂Ⅰ加入0.571mL水中。充分涡旋振荡混合。使用该试剂时要小心谨慎，因为它对呼吸系统和皮肤有刺激性。用大约20μl 3M NaOH调整pH至5.0，用pH试纸检测pH值。试剂Ⅰ避光保存以免分解。为了最佳效果，试剂应在配置后立即使用。 （4）溶解试剂Ⅱ 打开前将试剂瓶加温至室温。将1μl β-巯基乙醇加入20mL去离子水中。每份待修饰的DNA样本需将750μl该溶液加入到1.35g DNA修饰Ⅱ。充分混合确保完全溶解。过量的试剂可用箔纸包裹的容器、2℃-8℃、避光保存长达6周。 第二步：DNA修饰程序 1、在带有螺旋形瓶盖的1.5-2.0mL的微量离心管中：将7.0μl 3M NaOH加入到含有1.0 μg DNA的100μl水中（10ng/μl），混匀。 注意：如果样本含有的DNA量不到1.0μg，就向样本DNA中加入2 μl DNA修饰试剂Ⅳ并加水至总体积100μl。再加入7.0μl 3M NaOH并混匀。 2、50℃ DNA孵育10分钟（加热块或水浴）
DNA甲基化——试剂盒+抗体解决方案 DNA甲基化（DNA methylation）为DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5号碳位共价键结合一个甲基基团。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。 一、DNA甲基化修饰相关产品 DNA甲基化修饰研究手段——DNA亚硫酸盐转化，使用亚硫酸氢钠将胞嘧啶转化为尿嘧啶，而5-甲基胞嘧啶（5-mC）保持完整。即未甲基化的胞嘧啶残基被脱氨成尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶（5-mC）残基不受影响，这使PCR扩增可将尿嘧啶视为胸腺嘧啶，将5-mC或5-hmC识别为胞嘧啶。这样便能够区分甲基化和未甲基化的胞嘧啶残基，从而提供有关DNA甲基化区域的单核苷酸分辨率信息。 要成功地进行DNA甲基化研究，必须进行完全转化，并减少通常由于严酷的化学反应而导致的DNA降解量。基于亚硫酸氢盐和亚硫酸氢钠的方法是用于研究DNA甲基化并帮助制备基因组DNA进行基因特异性DNA甲基化分析的常用方法。亚硫酸氢盐转化后通常是下游应用，在基因特异性基础上分析DNA甲基化的流行下游方法包括亚硫酸氢盐测序，甲基化特异性PCR（MS-PCR）和基于甲基化的微阵列。 整个转换过程中，高质量的DNA是至关重要的，因为转换过程中的酸性物质会破坏DNA。而对于大规模亚硝酸氢盐转化实验，高通量选择对于节省时间和降低成本至关重要。 此外，还有高通量DNA修饰试剂盒，EpiNext高灵敏度亚硫酸氢盐测序试剂盒（Illumina），一步法DNA 修饰试剂盒，Methylamp通用甲基化DNA试剂盒，Methylamp全细胞亚硫酸氢盐修饰试剂盒等。
第17卷 第1期 2003.3 沈 阳 化 工 学 院 学 报 JOURNAL OF SHEN YAN G INSTITU TE OF CHEMICAL TECHNOLO GY Vol.17 No.1 Mar.2003 文章编号: 1004-4639(2003)01-0001-03 用碳酸二甲酯和环戊二烯制备甲基环戊二烯的研究 张建西, 张大洋, 刘瑞祥, 赵鸣玉 (沈阳化工学院,辽宁沈阳110142) 摘 要: 以碳酸二甲酯为甲基化试剂,在二乙二醇二甲醚溶剂中,进行环戊二烯催化甲基化的研究.通过实验考察反应温度、反应时间、物料配比、催化剂量及碘化钾试剂对甲基环戊二烯产率的影响,确定反应最佳条件,甲基环戊二烯产率达8518%. 关键词: 碳酸二甲酯; 甲基环戊二烯; 环戊二烯; 合成中图分类号: TQ23112 文献标识码: A 收稿日期: 2002-07-12 作者简介: 张建西(1978-),男,山西原平人,硕士,主要从事精细化学品和有机化工产品的合成研究. 甲基环戊二烯是一种重要的有机化工原料,可用来制备环氧树脂固化剂MNA [1],也可用于合成MM T (甲基环戊二烯三羰基锰)[2].但是,甲基环戊二烯与环戊二烯相比,在乙烯裂解所产生的C 52C 6组分中含量很少.因此,以环戊二烯为原料,经过甲基化反应制备甲基环戊二烯的研究,具有十分重要的意义. 碳酸二甲酯(简称DMC )是近年来发展起来的一种新型“绿色”化工产品.它能代替剧毒的光气生产多种异氰酸酯、聚碳酸酯等及各种医药农药中间体.作为甲基化试剂,可代替剧毒的硫酸二甲酯.近年来,实验表明它是一种优良的甲基化、羰基化试剂[3].对于碳酸二甲酯,文献报道一般为在其它杂原子(如氧、氮等杂原子)上甲基化,而在碳原子上甲基化报道很少. 以碳酸二甲酯为甲基化试剂,与环戊二烯和钠反应制备甲基环戊二烯.结果表明:此方法具有反应时间短、产物产率高、无污染物排放、后处理方便、无污染等优点.这是一条与环境友好的符合可持续发展战略的工艺路线. 1 实验部分 111 主要仪器与药品 仪器:阿贝折光仪WZS 2Ⅰ型,上海光学仪器 厂;SP501型气相色谱仪;CDMC 21B 色谱数据处 理器,上海计算技术研究所. 药品:金属钠,分析纯,天津丽东区大东化工厂;双环戊二烯,83%工业品,辽化;二乙二醇二甲醚,分析纯,苏州工业园区正兴化工研究院;碳酸二甲酯,化学纯,上海石油化工有限公司. 分析条件:色谱柱:Φ3mm ×3m ;固定液:聚乙二醇20mol 10%;担体:Chromosorb G AW 2DMCS ,60～80目;柱温:70℃;汽化室:190℃;热导池检测器:150℃;桥电流:190mA ;氢气流速:60mL/min ;进样量:013μL.112 反应方程式 反应方程式如下: 113 甲基环戊二烯的制备 在通有氮气的干燥的250mL 圆底三口烧瓶中分别加入140mL 二乙二醇二甲醚,810g 金属钠,加热至钠呈熔融的液体状态时,立即开动搅拌器,将钠打成细小微粒,制成钠砂.将45g 新蒸环戊二烯滴入钠砂中,很快便可以观察到有大量气
甲基氯硅烷生产技术的若干讨论 陈其阳 （中国蓝星化工集团江西星火有机硅厂） 1前言 有机硅材料以其防水、耐高低温、耐气候老化、电气性能好、环境友好等独特优异性能倍受人们青睐，在各个领域应用日益广泛。因其优越性能和在国民经济及尖端科技方面的卓越贡献，世界各国均十分重视有机硅产业的发展。有机硅产业的技术支柱是甲基氯硅烷（俗称甲基单体）生产，2005年全球甲基氯硅烷产量达到225万吨，其技术水平高低是其竞争力的体现，直接影响有机硅产业的兴衰，因此，世界各大公司给予特别的关注。上世纪40年代，由E.G.Rochow发明的直接法合成甲基氯硅烷技术，至今仍是工业生产该单体最成功的方法，即采用硅粉与氯甲烷在铜催化剂存在下反应生成甲基氯硅烷系列单体。国外各大了公司经过数十年研发，至上世纪90年代，工业化生产技术已相当完善成熟，单台反应器能力达十万吨以上，生产技术经济指标水平高（见表）。近年来，重点在亚洲地区扩建单体生产装置，加大开发亚洲市场的力度。各大公司对单体技术高度保密，予以垄断。 我国有机硅技术研发起步于1952年，上世纪八十年代产品应用由军用向民用拓展，促进了有机硅产业的发展，1997年蓝星公司星火有机硅厂国内第一套万吨级单体装置生产成功达标，1999年改扩为两万吨装置；2001年又建成国内第一套五万吨装置，2005年，经过“填平补齐”配套设施上述两套装置又提升生产能力分别达到三万吨和七万吨。今年年底，新建十万吨装置将投入生产，届时，星火厂单体产能达二十万吨。国内同行在“十一五”期间，新建多套单体生产装置，预计期末我国有机硅单体生产能力将接近一百万吨。 国内同行多年持续技术攻关，并以研究成果产业化支撑了我国有机硅单体民族工业的发展，在造“大”的同时如何造“强”，本文仅就若干技术与化工同仁交流探讨，期望专家给予指导并在感兴趣的技术领域予以合作，进一步提高我国有机硅单体生产水平，增强有机硅产业在全球同业中的竞争力。 2 技术概况 直接法反应示意式：
甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰测序法） 基本原理在于：样本经亚硫氢酸盐处理后,甲基化的胞嘧啶（C）保持不变,但非甲基化的胞嘧啶被转化成脲嘧啶,因此在利用该处理产物作为模板的PCR产物中,甲基化的胞嘧啶还是胞嘧啶,但非甲基化胞嘧啶变成了脲嘧啶（胸腺嘧啶）,此时检测到的胞嘧啶（C）即是样品中本身的甲基化位点. 第一部分基因组DNA的提取。 DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。 此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。 使用两者的细节： 1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml； 2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。两者均于-20度保存。 验证提取DNA的纯度的方法有二： 1：紫外分光光度计计算OD比值； 2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。 我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。 第二部分亚硫酸氢钠修饰基因组DNA 如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。 1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul； 2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH； 3：42℃水浴30min； 水浴期间配制： 4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色） 5：3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。 6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。 7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。 8：50℃避光水浴16h。 一般此步在4pm开始做，熟练的话不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am以后收，时间上很合适。 这一步细节： 1：基因组DNA的量不需十分精确，宁多勿少，因为在以后纯化回收步骤中会有丢失，且此方法修饰最多可至4ug。
一种开发价值高的精细化学品)固体光气 孙勇X (盐城市蓝晶有机化工有限公司,江苏盐城224003) [关键词]三氯甲基碳酸酯;合成;应用 [摘要]三氯甲基碳酸酯是一种新型的可替代光气及双光气的精细化工产品,介绍了其合成方法及在医药、农药等领域中的应用,指出其具有广阔的发展前景,有条件的厂家应加快该产品的开发步伐。 [中图分类号]TQ225.51[文献标识码]A[文章编号]1008-133X(2001)05-0024-02 A kind of fine chemical worth developing)trichloromethyl carbonate SU N Y ong (Lanjing Organic Chemical Co.,Ltd.of Yancheng City,Yancheng224003,China) Key wor ds:trichloromethyl carbonate;synthesis;application Abstr act:Trichloromethyl carbonate is a ne w kind of fine chemical to substitute phosgene and diphosgene. I ts production method and application in the fields of medicine,pesticide and so on are introduced.It is pointed out that it has good prospects,and qualified plants should quicken its development. 固体光气的化学名称为碳酸二(三氯甲酯)或三氯甲基碳酸酯,其作为新型化学试剂成功地在有机合成等方面得到应用。由于1分子三氯甲基碳酸酯可在一定条件下产生3分子光气,所以又称/三光气0。光气(沸点为8e)是重要的化工原料,它的应用范围极其广泛。但由于其为剧毒性气体,故在使用、运输及贮藏过程中具有很大的危险性。工业上尽管其装置安全性不断改进,但灾难性泄漏事故在国内外仍屡屡发生,且许多小批量产品往往因需使用光气而难于投产。因此,不论在工业上还是实验室中应尽量避免走光气路线,能找到光气的安全替代品一直是很令人关注的课题。 20世纪80年代开发生产的氯甲酸三氯甲酯可替代光气应用于实验室和工业生产。氯甲酸三氯甲酯沸点为128e,因其能分解成为2分子的光气,故其俗称/双光气0(/二光气0)。双光气在运输、贮存和使用方面均较光气方便、安全,但是作为液体,其运输、贮藏仍具有相当大的危险性。近年来,新开发的三氯甲基碳酸酯(/三光气0)是一种稳定的固体化合物(熔点77~83e、沸点205~206e),即使在沸腾时,也仅分解出微量的光气,因而在运输、贮藏和使用过程中极为安全、方便,仅当一般有毒物处理。1固体光气的合成 固体光气的合成原料为碳酸二甲酯,其合成工艺有四氯化碳溶剂法和碳酸二甲酯本体法。由于四氯化碳溶解氯能力强,又能吸收光电子自由基引发 样通过精馏可得纯度大于98.5%的均三甲苯。 3结论 用氯代烷对均三甲苯进行精制,不但方法可行,还使甲乙苯的转化率在99%以上,同时也使偏三甲苯高效地异构化成均三甲苯,有助于对均三甲苯进行精馏分离。 参考文献 [1]陈萍.炼厂重芳烃的利用[J].金陵石油化工,1996,(1): 24-30. [2]赵开鹏,等.重整C9芳烃综合利用[J].石油化工,1999, 28:483-493. [编辑:高旭东] 24第5期 2001年5月氯碱工业 Chlor-Alkali Industry No.5 M ay,2001 X[收稿日期]2000-10-10
DNA 甲基化重亚硫酸氢盐修饰法（DNA METHYLATION BISULFITE MODIFICATION） 实验操作原理及方法 一、实验目的： 通过本实验，可以检测特定DNA序列的甲基化状态。 二、实验原理： DNA 甲基化是指由S-腺苷甲硫氨酸（SAM）提供甲基基团，在DNA 甲基转移酶（DNA methyltransferases，DNMTs）的作用下，将CpG 二核苷酸的胞嘧啶（C）甲基化为5-甲基化胞嘧啶（5-m C）的一种化学反应。DNA 甲基化是调节基因转录表达的一种重要的表观遗传的修饰方式。 DNA 甲基化主要在转录水平抑制基因的表达。DNA 甲基化引起基因转录抑制的机制可能主要有以下3 种：（1）DNA甲基化直接干扰特异性转录因子与各基因启动子中识别位置的结合。（2）序列特异性的甲基化DNA 结合蛋白与启动子区甲基化CpG 岛结合，募集一些蛋白，形成转录抑制复合物，阻止转录因子与启动子区靶序列的结合，从而影响基因的转录。（3）DNA 甲基化通过改变染色质结构，抑制基因表达。 重亚硫酸氢盐修饰法检测DNA甲基化的基本原理是基于DNA变性后用重亚硫酸氢盐处理，可将未甲基化胞嘧啶修饰成尿嘧啶。此反应的步骤是：1、在C-6位点磺化胞嘧啶残基；2、在C-4处水解去氨基来产生尿嘧啶磺酸盐；3、在碱性条件下去硫酸化。在这个过程中，5-甲基胞嘧啶由于甲基化基团干扰了重亚硫酸氢盐进入到C-6位点而保持着未反应的状态。在重亚硫酸氢盐处理后，使用针对每个修饰后DNA链的引物进行PCR反应。在这个PCR产物中，每5-甲基胞嘧啶显示为胞嘧啶，而由未甲基化胞嘧啶转变成的尿嘧啶则在扩增过程中被胸腺嘧啶所取代。 BSP(bisulfate sequencing PCR) ：重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，进行PCR扩增。最后，对PCR产物进行测序，并且与未经处理的序列比较，判断是否CpG位点发生甲基化。
免疫细胞化学常用试剂 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m
配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH 或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。 4．Zamb oni’s(Stefanini’s)液 试剂：多聚甲醛20g 饱和苦味酸 150ml Karasson-Schwlt’s PB至1000ml 配制方法：称取多聚甲醛20g，加入饱和苦味酸150ml，加热至60℃左右，持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后，加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后）。 该固定液适于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存较纯甲醛为优，也适于光镜免疫细胞化学研究，为实验室常用固定剂之一。我们在应用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸，以增加其对组织的穿透力和固定效果，保存更多的组织抗原。固定时间为6～18h。 5．PLP液PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液 （Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative）
Data Supplement Title: Circulating methylated SEPT9 DNA in Plasma is a Biomarker for Colorectal Cancer. Theo deVos1, Reimo Tetzner2, Fabian Model1,3, Gunter Weiss2,Matthias Schuster2, Jürgen Distler2, Kathryn V. Steiger1 , Robert Grützmann5, Christian Pilarsky5, Jens K. Habermann6, Phillip R. Fleshner7, Benton M. Oubre8, Robert Day1, Andrew Z. Sledziewski1, Catherine Lofton-Day1 1) Detailed m SEPT9 Assay Protocol: DNA Extraction: DNA was extracted from 5 mL of blood plasma using a modified viral DNA/RNA extraction kit (chemagen AG, Baesweiler Germany). Plasma samples were thawed at room temperature and extracted following the directions of the kit with modifications. Samples were lysed and treated with protease at 56?C for 10 min in a 50 mL Falcon tube. 100 μL of magnetic particles and 15 mL of binding buffer were then added, and binding was performed for 60 min at room temperature on a rotator. Magnetic particles were captured for 4 min, the supernatant discarded and the pellet was resuspended in 3 mL of wash buffer. 1.5 mL of particle solution were transferred to a 2 mL SafeLock, the beads captured and the supernatant discarded. This was repeated to complete the 3 mL transfer. Tubes were briefly centrifuged and the residual wash buffer was removed by pipetting after bead separation. The tubes were then placed in a 56?C dry block for 5 min, 100 μl of elution buffer was added, the tubes incubated at 65?C with shaking on a thermomixer for 15 min, the particles separated on a magnetic stand and the eluted DNA transferred to a 0.5 mL SafeLock tube (Eppendorf). A 5μl aliquot of the DNA sample was transferred to 45 μl of elution buffer for the measurement of genomic DNA. Bisulfite Conversion: The sample input for bisulfite treatment was 95-100 μl of extracted DNA in elution buffer. The bisulfite reagents (for 25 reactions) were prepared as follows. Bisulfite solution: Sodium bisulfite (4.71gm) and sodium sulfite (1.13gm) were dissolved in 10 mL of ddH2O in a falcon tube, by vigorous shaking and heating to 50?C if required, and the pH adjusted to 5.4-5.5 with 0.2M NaOH as necessary. DME-radical scavenger solution: 188 mg of 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethyl-chroman-2-carboxylic acid was dissolved in 1.5 mL diethyleneglycoldimethylether (DME), vortexing to ensure an uniform solution. Bisulfite Reaction: 190 μL of bisulfite solution and 30μl DME-radical scavenger solution were added to the 95-100 μl DNA sample in 0.5 mL SafeLock tubes. The tubes were incubated in a Eppendorf Mastercycler (Eppendorf)according to the following protocol: 5 min 99°C, 25min 50°C, 5 min 99°C, 1h 25min 50°C, 5 min 99°C, 4h 55min 50°C, hold 20°C. This protocol allowed overnight bisulfite conversion. Bisulfite Purification: Following bisulfite conversion, DNA was purified using a customized kit from chemagen AG. The bisulfite reaction (320 μL) was transferred to a 2 mL SafeLock tube, and 1 μLof polyA (500 ng/μL) and 1.5 mL of binding buffer were added. 10 μL chemagen magnetic particles were added and the sample was mixed by vortexing. The samples were incubated at room temperature on a thermal mixer at a rotation of 1000 rpm for 60 min. Magnetic particles were separated on a magnetic stand, the liquid discarded, the tubes briefly centrifuged and the residual liquid removed following magnetic separation. The particles were washed twice with wash buffer II from the kit, and once with 70% ethanol. Following the ethanol wash, the tubes were centrifuged again, and the residual liquid removed following magnetic
锂离子电池电解液的碳酸酯溶剂与氟代溶剂的安全性分析比较 集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-
锂离子电池电解液的碳酸酯溶剂与氟代溶剂的安全性分析比较第一章绪论1.1引言能源、环境和信息技术是2l世纪科技发展的三大主题。从人类文明开始，能源的开发和利用就与人们的生活方式及生活质量密切相关。人类进入工业化社会以来，矿物能源(煤与石油)的消耗巨大，内燃机车辆每年所消耗的石油占全球能源年消耗量的I／3．伴随着矿物燃料的巨大消耗和资源的日益枯竭，温室效应和空气污染以及对入类的生存环境构成了严重的威胁。因此，研究和开发高效、安全、无污染的新型能源成了世界各国政府和科技工作者共同关心的课题。此外近年来。随着微电子技术的迅猛发展，电子仪器设备在不断地小型化和轻便化，如笔记本电脑、数码照相机、手机和无绳电话等，这对电池行业提出了更高的要求，迫切要求电池高容量、长寿命、高安全和环境友好。锂离子电池就是在这个背景下发展起来的，并在短短的十几年内，迅速的成为了能源行业的关注焦点。 1.2锂离子电池简介锂离子电池相对传统的水溶液二次电池而言，具有比能量高，循环寿命长和对环境友好的显着优点，是一种很有发展潜力的电池体系，目前已经在移动电话、笔记本电脑等便携式电子产品上得到了广泛应用。随着2007年6月欧盟电池指令草案的通过，锂离子电池也开始逐步进入无绳电动工具市场。同时，近年来由于环境和石油等问题日益突出，以各种二次电池为动力的电动车和混合动力车越来越受
到了人们的重视，由于以磷酸铁锂为正极材料的锂离子电池具有相当好的安全性和比能量，因此成为各种电动车电源的首选。同时由于价格便宜，使得磷酸铁锂锂离子电池单位能量的价格大幅下降，这样相对氢镍电池受镍价格大幅波动的影响以及铅酸、镉镍电池的高污染而言，锂离子电池表现出越来越强劲的竞争力。图1至图4为几种不同的锂离子电池 1.21锂离子电池的工作原理与锂二次电池相比，锂离子电池正负极材料均采用锂离子可以自由嵌入和脱出的具有层状或隧道结构的锂离子嵌入化合物，充电时，Li+从正极逸出，嵌入负极，放电时，Li+则从负极脱出，嵌入正极，即在充放电过程中，Li+在正负极间嵌入脱出往复运这种电池被称为“摇椅”或“羽毛球”电池(“Shuttlecock”battery)。实质上，锂离子电池是一种浓差电池，在充电状态下负极处于富锂态，正极处于贫锂态，随着放电进行，Li+从负极脱出，经过电解质嵌入正极；放电时，正极处于富锂态，负极处于贫锂态，随着放电的进行，Li+从正极脱出， 经过电解质嵌入负极。锂离子电池的电极反应表达式如下：
免疫组化 免疫组化是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 免疫组化试剂盒： Vector Laboratories公司VECTASTAIN@ ABC免疫组化试剂盒： Vector公司于1977年率先开发出了生物素-亲和素系统，该产品系列是检测方法上的重要革命。其后，公司发展出ABC技术（Avidin : Biotinylated Enzyme Complex Technology，亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术），并建立了著名的VECTASTAIN?ABC系统，目前，该系统被视为最灵敏、最可靠与最有效的染色系统，并被广泛应用于免疫组织化学、免疫电镜、原位杂交与凝集素化学中。ABC技术利用生物素和卵白素具有极高亲和性的生物学特征，将卵白素和生物素化辣根酶按照一定的比例混合，形成ABC复合物。该法亦被称作三步法，第一步为biotin化二抗和一抗结合，第二步为avidin（亲和素，A液）和二抗上的biotin结合，第三步为HRP偶联的biotin（B液）和avidin结合，而HRP再催化底物显色完成染色。试剂盒组份： 2ml试剂A（Avidin DH溶液） 2ml试剂B（生物素化的酶） 1ml生物素化的二抗（1.5mg anti-IgG/0.5mg anti-IgM抗体/2.1mg通用抗体） 3ml阻断血清 其中standard试剂盒只含有试剂A和试剂B VECTASTAIN?ABC系列产品 VECTASTAIN?ABC-HRP Kits（辣根过氧化物酶）最通用的系统，使用范围广VECTASTAIN?ABC-AP Kits（碱性磷酸酶）灵敏度较高，染色密度较低，适于形态学染色非常重要的组织 VECTASTAIN?ABC-GO Kits（葡萄糖氧化酶）灵敏度较低，适用于组织内源性HRP或AP 含量比较高的组织，常与HRP或AP系统配合进行双染。 VECTASTAIN?ABC Kits（辣根过氧化物酶）灵敏度高，特别适用于神经组织
化学品安全技术说明书 第一部分化学品及企业标识 化学品中文名：甲基三氯硅烷；三氯甲基硅烷 化学品英文名：methyltrichlorosilane；trichloromethylsilane 企业名称： 生产企业地址： 邮编: 传真: 企业应急电话： 电子邮件地址： 技术说明书编码: 第二部分成分/组成信息 √纯品混合物 有害物成分浓度CAS No. 甲基三氯硅烷75-79-6 第三部分危险性概述 危险性类别：第3.2类中闪点液体 侵入途径：吸入、食入、经皮吸收 健康危害：对呼吸道和眼结膜有强烈刺激作用。接触者可有流泪、咳嗽、头痛、恶心、呕吐、喘息等症状。吸入后可因喉、支气管的痉挛、水肿，化学性肺 炎、肺水肿而致死。食入腐蚀消化道。液体可致眼和皮肤灼伤。 环境危害：对环境有害。 燃爆危险：易燃，其蒸气与空气混合，能形成爆炸性混合物。遇水产生刺激性气体。 第四部分急救措施
皮肤接触：立即脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗20～30分钟。如有不适感，就医。 眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗10～15分钟。如有不适感，就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。呼吸、心跳停止，立即进行心肺复苏术。就医。 食入：饮水，禁止催吐。如有不适感，就医。 第五部分消防措施 危险特性：易燃，遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧爆炸的危险。受热或遇水分解放热, 放出有毒的腐蚀性烟气。具有腐蚀性。 有害燃烧产物：一氧化碳、氧化硅、氯化氢、光气。 灭火方法：用二氧化碳、干粉、干砂灭火。 灭火注意事项及措施：消防人员必须佩戴空气呼吸器、穿全身防火防毒服，在上风向灭火。尽可能将容器从火场移至空旷处。处在火场中的容器若已变色或 从安全泄压装置中产生声音，必须马上撤离。禁止用水、泡沫和酸碱灭火 剂灭火。 第六部分泄漏应急处理 应急行动：消除所有点火源。根据液体流动和蒸气扩散的影响区域划定警戒区，无关人员从侧风、上风向撤离至安全区。建议应急处理人员戴正压自给式呼吸 器，穿防静电、防腐、防毒服。作业时使用的所有设备应接地。穿上适当 的防护服前严禁接触破裂的容器和泄漏物。尽可能切断泄漏源。防止泄漏 物进入水体、下水道、地下室或密闭性空间。严禁用水处理。小量泄漏： 用干燥的砂土或其它不燃材料覆盖泄漏物。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收 容。用碎石灰石(CaCO3)、苏打灰(Na2CO3)或石灰(CaO)中和。用防爆、耐 腐蚀泵转移至槽车或专用收集器内。 第七部分操作处置与储存
三光气的反应机理和应用 季宝，翟现明，许毅 （山西省建筑科学研究院太原030024） 摘要：三光气作为剧毒的光气和双光气在合成中的替代物，不但毒性低，使用安全方便，而且反应条件温和，选择性好，收率高。由于固体光气的化学性质，使其有着极广泛的应用。本文举例介绍了三光气的反应机理，并且介绍了其在一些合成领域的应用。 关键词：三光气；反应机理；异氰酸酯；氯甲酸酯 三光气又称固体光气，三光气的是化学名为二(三氯甲基)碳酸，其英文命名为Bis (Triehloromethyl)Carbonate(简称BTC)，俗名Triphosgene，分子式为 CO(OCCl3) 2，CA登记号为：32315-10-9。三光气为白色晶体，有类似光气的气味，分子量为296.75，熔点为81-83℃，沸点为203-206℃，固体密度为1.78g/cm3，熔融密度1.629 g/cm3，可溶于乙醚、四氢呋喃、苯、乙烷、氯仿等有机溶剂。它的物理性质在1887年就有报道，但它晶体结构直到1971年才被报道[1]。 光气是应用很广的化工原料，可用于制备氯甲酸酯、异氰酸酯等化工产品。但是光气是高毒性的气体，使用、运输和储存很困难，并且应用中难以准确计量，产生的一些副反应也给实验室或小规模使用带来极大的不便。三光气是稳定的固体结晶化合物，其使用、运输和储存都比光气安全，且可准确计量，这样可减少副反应的产生。三光气作为剧毒的光气和双光气在合成中的替代物，不但毒性低，使用安全方便，而且反应条件温和，选择性好，收率高。由于固体光气的化学性质，使其有着极广泛的应用，三光气可替代光气，用于各种规模的化工生产，应用前景十分广阔。 1 三光气的反应机理 三光气在三乙胺、吡啶、二异丙基乙基胺和二甲基甲酰胺等亲核试剂(Nu) 作用下，与作用物发生如下的反应：
甲基化DNA定量试剂盒与羟甲基化DNA定量试剂盒产品特点 --Epigentek 启维益成提供---甲基化DNA定量试剂盒(比色法) MethylFlash Methylated DNA Quantification Kit (Colorimetric) 产品优点： 1、整个比色法检测实验的操作简单易学，方便快捷，能定量检测全基因组的DNA甲基化 水平，只需要4小时就能完成实验。 2、新颖的试剂盒组分使背景信号极低，去掉了平板封闭并使分析更加地简单、精确、可靠、 稳定。 3、灵敏度高，能在50ng的基因组DNA中检测出低至0.2ng的甲基化DNA。 4、优化的抗体和增强溶液对检测5mC具有高度特异性，不会对未甲基化的胞嘧啶产生交 叉反应，且在指定的样品DNA的浓度范围内与羟甲基胞嘧啶无交叉反应或有轻微的交叉反应 5、试剂盒提供通用阳性和阴性对照，能用于定量检测任何物种来源的甲基化DNA，包括 哺乳动物、植物、真菌、细菌以及病毒； 6、96孔板模式使分析具有灵活性，您可以根据自己的需要选择用手工或者高通量分析。 启维益成提供---甲基化DNA定量试剂盒(荧光法) MethylFlash Methylated DNA Quantification Kit （Fluorometric） 产品优点： 甲基化定量试剂盒荧光法的产品优点与比色法基本相同，不同点为灵敏度不同，比色法能在50ng的基因组DNA中最低检测出0.2ng的甲基化DNA；荧光法能在20ng的基因组DNA中最低检测出50pg的甲基化DNA。 启维益成提供---羟甲基化DNA定量试剂盒(比色法) MethylFlash Hydroxymethylated DNA Quantification Kit (Colorimetric) 关于5-hmC 5-hmC是近年来在动物组织中发现的，由胞嘧啶修饰而来。5-hmC在表观遗传学上的功能可能与5-甲基化胞嘧啶(5-mC)不同，尽管到现在为止还不确知其功能。有研究者猜测它在调控基因的表达与关闭过程中起着重要的作用。5-mC的发现让我们不得不重新评估DNA