丙磺舒等药物对双环铂肾排泄的影响及其机理
李秀琴1,3
,陈西敬1Ξ
,任伟超1
,张 辉1
,顾 萱2
,王广基
1
(中国药科大学1药物代谢与动力学研究中心;2分析测试中心南京210009;3青海卫生职业技术学院,西宁810000)
摘 要 目的:比较在大鼠中丙磺舒、甲氨蝶呤、地高辛、维拉帕米等不同药物转运蛋白底物对双环铂肾排泄的影响。方法:采用原子吸收法测定大鼠尿液中铂浓度,计算4h 尿药累积排泄率。结果:合用不同转运蛋白底物后,双环铂在尿中的排泄量均有所降低,双环铂组4h 累积排泄百分率为(7017±918)%,而合用丙磺舒、维拉帕米、地高辛或甲氨蝶呤后其累
积排泄百分率分别下降为(2818±411)%、(3412±1011)%、(4316±218)%和(4714±815)%,肾组织铂浓度则由(27818±11210)μg/g 分别降低或升高为(17916±12212),(30915±8818),(37414±9011),(26610±10715)μg/g 。结论:合用丙磺舒等药
物可抑制双环铂的肾排泄速度,双环铂及其代谢物的肾排泄过程中可能有MRP2,OAT 或OATP 等药物转运蛋白参与。
关键词 双环铂;肾排泄;药物转运蛋白;药物动力学;原子吸收测定法
中图分类号 R962 文献标识码 A 文章编号 1000-5048(2006)05-0447-03
E ffects of probenecid ,methotrexate ,digoxin and verapamil on the renal excre 2
tion of dicycloplatin in rats
LI X iu 2qin 1,3,CHE N X i 2jing 1,RE N Wei 2Chao 1,ZH ANG Hui 1,G U Xuan 2,W ANG G uang 2ji 1
1Center Drug Metabolism o f and Pharmacokinetics ;2Center o f Instrument Analysis ,China Pharmaceutical Univer sity ,Nanjing 210009;3
Qinghai H ealth Vocational &Technological College ,Xining 810000,China
Abstract Aim :T o com pare the effects of the drug transporter substrates such as probenecid ,methotrexate ,dig oxin and verapamil on renal excretion of dicycloplatin in rats.Method :The concentration of dicycloplatin in urine was measured by atom abs orption and cumulate excretion am ount of dicycloplatin in the initial 4h period was evaluated.Re sults :The excretion am ount of dicycloplatin in urine decreased after substrates of the drug transporters were coadministrated.In the initial 4h period ,the total urinal excretion percentage of dicycloplatin after iv injection of dicycloplatin were (7017±918)%,but co 2injection of dicycloplatin with probeneside ,verapamil ,dig oxin and methotrexate was responsi 2ble for the urinal excretion of platin of (2818±411)%,(3412±1011)%,(4316±218)%and (4714±815)%,re 2spectively.M oreover ,renal platin concentration changed from (27818±11210)to (17916±12212),(30915±8818),(37414±9011),(26610±10715)μg/g ,respectively.Conclusion :Drug transporter substrates as probeneside and verapamil reduce the renal excretion of platin when they were used in combination with dicycloplatin.P 2gp ,OAT or OATP may take part in the excretion of platin 1
K ey words dicycloplatin ;renal excretion ;drug transporter ;pharmacokinetics ;atom abs orption spectrophotometry
This project was supported by the National Natural Science F oundation of China (N o.30472060),the National High T echnology Re 2search and Development Program of China (863Program )(N o.2003AA2Z 347A )and the K ey Lab of Drug Metabolism and Pharmackinetics of Jiangsu Province (N o.2001201)
双环铂(又名:安托可金,0325K 121)为一种含铂络合物,是第3代铂类抗癌新药。其特点是比顺铂
和卡铂有更好的水溶液稳定性,体外和动物体内试验表明本品有较强的抗肿瘤活性,对肿瘤细胞有较
7
44Ξ收稿日期 2006204208 3通讯作者 T el :025-******** E 2mail :chenxj @jlonline 1com
基金项目 国家自然科学基金资助项目(N o.30472060);国家高技术研究发展计划(“八六三”计划)资助项目(N o.2003AA2Z 347A );江
苏省药物代谢重点实验室资助项目(N o.2001201)
中国药科大学
学报Journal of China Pharmaceutical University
2006,37(5):447-449
好的靶向作用,且不良反应较小[1],目前已经进入临床研究阶段。通过动物药代动力学研究表明该药主要由肾脏排泄[2]。本试验采用原子吸收法测定大鼠尿液中双环铂的排泄量,通过对合用不同转运蛋白底物后尿液中排泄量的比较,探讨其在肾小管的排泄机制,为临床用药提供参考依据。
1 试验材料
111 仪 器
AA2670原子吸收分光光度计,ASC260G自动进样器,G FA24B石墨炉原子化器,PR24A图示打印机(日本岛津公司)。
112 药 品
双环铂(北京市兴大科学系统公司,纯度: 9917%);1%双环铂注射液(北京制药工业研究所实验厂);丙磺舒、地高辛、氨甲蝶呤、维拉帕米等均为市售药品。
113 动 物
S D大鼠,雄性,体重150g～220g,由东南大学实验动物中心提供。
114 剂量选择依据
根据双环铂的药代动力学研究结果(大鼠iv 10～40mg/kg呈线性动力学)、急性毒性结果(小鼠ip LD50=21015mg/kg)、慢性毒性剂量(大鼠为每日20,15,10mg/kg,犬为每日15mg/kg)和药效学剂量(小鼠为每日20,15,10mg/kg,连续7d)及仪器灵敏度等综合考虑,大鼠的双环铂给药剂量为2613 mg/kg,给药方式为静脉注射。
2 实验方法
211 大鼠尿液中双环铂的浓度测定
21111 样品处理与测定 取大鼠尿液样品50μL,以蒸馏水稀释500倍后,以文献[2,3]建立的石墨炉原子吸收法测定。
21112 尿液标准曲线 大鼠空白尿液各110m L (共7管)分别加入双环铂标准品溶液,使双环铂浓度分别为0,010625,01125,0125,0150,110,210,410μg/m L。按上述条件测定,以吸收度A为纵坐标,浓度c(μg/m L)为横坐标进行回归,得尿液标准曲线:A=012515c-010119(r=019974)。该方法的最小检测浓度为010625μg/m L,线性范围为010625～410μg/m L。空白尿液经测试不干扰双环铂测定。
212 双环铂尿排泄的动物实验
取大鼠25只,随机分成5组,每组5只,分别为双环铂组、双环铂加丙磺舒组、双环铂加维拉帕米组、双环铂加地高辛组、双环铂加甲氨蝶呤组。其中双环铂加丙磺舒组和双环铂加地高辛组在麻醉前15min分别按丙磺舒300mg/kg和地高辛215 mg/kg灌胃给药,双环铂加维拉帕米组和加甲氨蝶呤组在静注双环铂前15min分别按维拉帕米3 mg/kg和甲氨蝶呤10mg/kg静脉注射。实验中对大鼠以20%乌拉坦溶液5μL/g腹腔注射麻醉后,进行颈静脉插管和双侧输尿管插管,然后按2613 mg/kg的剂量从颈静脉迅速注射双环铂。为便于收集尿液,给双环铂前每只大鼠静脉注射50%葡萄糖注射液015m L,给药后分别收集0～0125,0125～015,015～1,1～2和2～4h内的尿液,并于第4小时取出双侧肾脏。尿液和肾脏组织样品于-25℃保存供测试。
213 大鼠尿药累积排泄百分率(%)的计算
将尿中铂浓度和尿液体积与稀释倍数相乘,得尿中累积双环铂排泄量。累积排泄百分率(%)=累积双环铂排泄量/双环铂给药量×100%
3 结 果
311 对尿排泄速率的影响
大鼠静注双环铂2613mg/kg后在尿中4h的累积排泄百分数如图1所示,本实验结果显示,合用不同转运蛋白底物后,双环铂在尿中的排泄量减少。双环铂组4h累积排泄百分率为(7017±918)%,双环铂+丙磺舒组为(2818±411)%,双环铂+维拉帕米组为(3412±1011)%,双环铂+地高辛组为(4316±218)%,双环铂+甲氨蝶呤(MTX)组为(4114±815)%。数据通过统计处理,联合用药组比单用双环铂组尿药排泄量明显减少(P< 0101)。
312 对肾组织中铂浓度的影响
大鼠静注双环铂后4h的肾组织中铂浓度的测定结果如图2所示,可见与丙璜舒联合用药组大鼠的肾组织中铂浓度明显降低(P<0105),甲氨蝶呤组几乎保持不变,而维拉帕米和地高辛组则有升高的趋势。
844中国药科大学学报 Journal o f China Pharmaceutical Univer sity第37卷
—◆—Dicycloplatin ;—□—Dicycloplatin +verapamil ;
—△—Dicycloplatin +methotrexate ;—×—Dicycloplatin +
dig oxin
;—Ξ—Dicycloplatin +probenecid
Fig 11 E ffects of four different drugs on the excretion of dicycloplatin in rat urine (n =5)
Fig 12 E ffects of four different drugs on the renal platin concentration at 4h after iv administration of dicycloplatin (n =5)
4 讨 论
实验结果显示,通过合用不同转运蛋白底物
后,双环铂在尿中的排泄量均有所降低,说明他们对双环铂的肾排泄可能有一定的竞争性抑制作用。其中合用丙磺舒后双环铂的尿排泄最少,其次是维拉帕米和地高辛,最后是甲氨蝶呤。而肾组织铂浓度的测定结果显示,丙磺舒可降低双环铂浓度,维拉帕米和地高辛可升高其浓度,而甲氨蝶呤的影响不明显。
丙磺舒是为有机阴离子转运蛋白OAT 和转运
肽OATP 的底物,这些转运蛋白主要分布在肾脏肾小管上皮细胞的基底侧,丙磺舒可竞争性地抑制有机阴离子底物自血管腔向肾小管细胞的转运,故可降低其肾排泄速度和肾组织浓度;除OAT 和OATP 转运蛋白外,肾小管上皮细胞腔侧面还存在多药耐药蛋白P 2gp 和多药耐药相关蛋白MRP2,其作用为促进药物或内源性底物从肾小管上皮细胞向尿液的排泄。维拉帕米和地高辛为P 2gp 的底物,甲氨
蝶呤为MRP2的底物[5,6],合用这些药物后底物的
肾排泄会受到抑制,同时肾小管上皮细胞中的底物浓度则会有所蓄积。从本实验结果来看,双环铂或其含铂代谢物的肾排泄过程可能有多种转运蛋白参与。
参考文献
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44第5期李秀琴等:丙磺舒等药物对双环铂肾排泄的影响及其机理