湖南省茶陵县中医院检验科
菌种、毒种管理程序
1．目的
对本中心菌、毒种的申购、保存、保管、领用、处理等各个环节实行有效的监督控制，防止意外事故发生，确保疾病预防与控制检验业务及科研教学工作。
2．适用范围
适用于本科室微生物菌、毒种的管理。
3．职责
3.1 相关实验室负责菌、毒种的出入库保管、保存及处理等日常管理。
3.2 科室必须指定2名菌、毒种库管理人员承担菌、毒种日常管理。
3.3 科室负责人负责一、二类菌、毒种的出入库和向上级索取及对下级发送的审核。
3.4 技术管理层批准本中心实验室一、二类菌、毒种的出入库和向上级索取及对下级发送的审批。
4．工作程序
4.1 报送及入库
4.1.1 当地所检出的地方菌、毒株应及时报送省疾病预防控制中心。
4.1.2 新发现的菌、毒种，要做好原始记录，逐级报送进行复核确认，报送时须2人参加。
4.1.3 一、二类菌、毒种入库前，科室审核，技术管理层批准后入库
4.1.4 个人不得擅自保留菌、毒种，必须由科室进行统一编号、登记入库管理
4.1.5 菌、毒种入库时，2名菌、毒种保管人员须认真做好菌毒种的编号、登记工作。
4.2 日常管理
4.2.1 保管人员应由2名检验人员组成。
4.2.2 菌、毒种入库时，保管人员应及时验收，统一编号，填写《菌、毒种登记表》。
4.2.3 严禁随意将菌、毒种置于非菌、毒种专用保存场所，应做到三专（专室、专柜、专锁）。
4.2.4 菌、毒种库应由2名保管人员双锁管理，铁门与锁必须牢固有效，发现损坏须及时报修。未经各科室负责人同意，不得擅自将钥匙委托他人代管。
4.2.5 菌、毒种保管人员应定期对库内温度、湿度、通风及冰箱、冰柜等菌、毒种保藏设备运转情况进行检查，并做好记录。
4.2.6 菌、毒种保管人员根据菌、毒种的保存期限，及时通知分管病种的检验人员进行传代，定期鉴定，并详细记录在《菌、毒种登记表》（HJK／JL-20）。
4.2.7 菌、毒种保管人员发现菌、毒种发生变异和死亡，应及时向科室负责人报告，并填写《菌、毒种登记表》（（HJK／JL-20）。科室须将变异及死亡的一、二类菌、毒种通报技术管理层。
4.3 索取、领用和发放
4.3.1 因工作需要索取、领用和发放一、二类菌、毒种时，须严格按国家有关的规定，填写《菌、毒种领取申请表》，科室负责人审核，技术管理层批准后方可索取、领用和发放。
4.3.2 三类菌、毒种的领用和发放时，应有2人参加。
4.3.3 一类菌、毒种，须报卫生部批准，二类菌、毒种须经省级卫生行政部门审批。未经上级批准，不得进行国际间各类菌、毒种交流。
4.3.4 进行菌、毒种索取、领用和分发时，须做好记录，填写《菌、毒种使用及销毁记录》。
4.3.5 一、二类菌、毒种不得邮寄，三类菌、毒种在邮寄时，应执行有关规定。
4.4 销毁
4.4.1 菌、毒种使用过程中须接受保管人员的监督，工作结束后，立即做好善
后处理，销毁时应有二人以上参加，并做好销毁记录。因工作需要暂时保留的菌、毒株也应该按规定的时间销毁。
5．支持性文件
5．1 《中华人民共和国传染病防治法》
5．2 《全国疾病预防控制机构工作规范》
5．3 记录控制程序
6．记录
6.1 菌、毒种登记表
6.2 菌、毒种领取申请表
6.3 菌、毒种使用及销毁记录
附件：毒种、菌种管理流程图
毒种、菌种管理流程图
实际流程 相应记录
xxx食品检测中心作业指导书 1.目的 规范实验室菌种的收集、使用、保管程序；确保实验室的安全。 2.范围 本管理细则适用于实验室菌种的使用和管理。 3.职责 3.1菌种保管员：按照本指导书做好菌种的收集、转种、使用、保存和发放以及销毁工作。 3.2科室负责人：负责监督菌种的使用及管理。 4.管理细则 本实验室保存的菌种仅包括一部分致病性较弱的三类细菌、一部分无致病能力的普通细菌和常见真菌。不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体；保存的菌种主要用于各类培养基、检测试剂的性能测试和质量控制。 4.1在本实验室保管的菌种名 4.1.1保留工作菌种：大肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌50013、福氏志贺氏菌2a ATCC12022、副溶血性弧菌200904-1、金黄色葡萄球菌ATCC25923、表皮葡萄球菌ATCC12228溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、普通变形杆菌，克雷伯氏杆菌，小肠结肠炎耶森氏菌ATCC 23715 、单核增生李斯特菌ATCC19111、枯草芽胞杆菌ATCC6633b 、蜡状芽胞杆菌A TCC11778、白色念珠菌A TCC10231、酿酒酵母ATCC9763、黑曲霉菌、展青霉菌、黄曲霉菌。 4.1.2常规检测,科研分离得到的有保留价值的三类/四类菌种根据需要可继续保留；如果在食品中分离到二类/一类菌种,及时送上级单位进一步鉴定,并按规定立即销毁。本实验室不保存一类、二类菌种。 4.2 菌种的保管 4.2.1实验室菌种保存于专用的菌种室。 4.2.2菌种保管员及科室负责人双人双锁负责保管菌种。 4.2.3使用菌种需提出申请、经科室负责人批准后，向菌种保管员领用。 4.2.4菌种应按规定的时间定期转种，一般每转种3代做一次鉴定，如发现污染或变异应及时处理。 4.2.5保管人员工作变动时应作好交接工作。 4.3 菌种的使用和保存 4.3.1菌种的类别 4.3.1.1实验室内的标准菌种根据用途不同，分为储存菌种、传代用菌种和工作用菌种。 ①储存菌种：以冷冻干燥保藏为主，用于菌种的长期保存，一般是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的标准菌株，用符号S表示。一般可保存5年。 ②传代用菌种：采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，用于菌种的传代，用符号G 表示。甘油冷冻管保藏法一般可保存2年； ③工作菌种：保存于半固体内或琼脂斜面培养基中，作为工作用菌种，用符号W表示。一般可保存1～2个月。 4.3.1.2实验室从样品中分离得到的菌株用符号Y表示。
标准菌种管理规程 目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确 保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。 职责： QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员 负责菌种的确认、传代、使用及销毁。 范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传 代、使用及销毁等。 内容： 1术语 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理 中心提供的冷冻干燥菌。 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存 的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养 后，作为日常工作使用的菌种。 菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即 称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。 2.标准： 2.1 检定菌的申购 QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购 买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购
买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制 代数。 2.2 检定菌的接收 菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及 每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表 1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种 的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并 储存于 2-8?C直到需要使用时。储存期最长不超过 5 年。 2.3 检定菌的保存 2.3.1 工作用菌种的保存 工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养 基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。此法仅用于 工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同， 细菌： 1 个月；酵母菌： 2 个月；霉菌及芽胞： 3 个月。 2.3.2 传代用菌种的保存 采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。 2.3.2.1．甘油冷冻管保存法 用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面 的菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到 预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，使其等同于10 号比浊管，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油（浓度 20%），
一、名词解释 生物制品：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品。 GMP: 是英文Good Manufacturing Practice 的缩写，中文的意思是“良好作业规范”，或是“优良制造标准”，是一种特别注重在生产过程中实施对产品质量与卫生安全的自主性管理制度。 疫苗：一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱导机体产生针对特定致病原的特异性抗体或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭该致病原能力的生物制品。 抗原：在机体内能刺激免疫系统发生免疫应答，并能诱导机体产生可与其起特异反应的抗体或效应细胞物质。 灭活疫苗：又称死疫苗，是指利用加热或甲醛等理化方法，将人工大量培养的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持其免疫原性，并结合相应的佐剂而制成的疫苗。 减毒活疫苗：又称弱毒疫苗，是指将微生物的自然强毒株通过物理的、化学的和生物学的方法，连续传代，使其对原宿主丧失致病力或只引起亚临床感染，但仍保持良好的免疫原性、遗传特性，由此制备的疫苗称为减毒活疫苗。 类毒素：细菌外毒素经甲醛作用及加温处理后可以除去毒性而保留其免疫原性。亚单位疫苗：指提取或合成细菌、病毒外壳的特殊蛋白结构及抗原决定簇制成的疫苗。因不是完整病毒而是病毒的一部分物质，故称亚单位疫苗。 基因工程疫苗：也称遗传工程疫苗，是指使用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物或重组体本身制成的疫苗。 抗原提呈细胞：指在免疫应答过程中，能将抗原物质提呈给T细胞的一类辅佐细胞。 免疫佐剂：能非特异地通过物理或化学的方式与抗原结合而增强其特异免疫性的物质。 细菌类疫苗：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌能力的生物制品。 病毒类疫苗：用病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应病毒能力的生物制品。 正常人免疫球蛋白：又称丙种球蛋白或多价免疫球蛋白，是采用低温乙醇蛋白分离法或经批准的其他蛋白质分离方法从健康人血浆中分离制得的免疫球蛋白浓缩剂。 特异性免疫球蛋白：是由对某些病原微生物具有高滴度抗体的血浆制备的特异的高效价免疫球蛋白。 细胞因子：是一组由机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的小分子或中等分子量的可溶性蛋白质（多肽）与糖蛋白。 血液制品：由健康人血浆或特异免疫人血浆分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品，可用于疾病的诊断、治疗或被动免疫预防。基因治疗：通过基因转移技术将外源正常基因直接导入患者病变部位的靶细胞，通过控制目的基因的表达、抑制、校正、替代或补偿缺陷或异常基因，从而恢复受体细胞、组织器官的正常生理功能。 集落刺激因子（CSF)：能刺激多能造血干细胞和不同发育阶段的造血干细胞进行增殖分化, 并在半固体培养基中形成相应的集落的细胞因子。 干扰素（IFN）：机体在病毒感染时合成释放的，能干扰病毒DNA或RNA的复制，
菌（毒）种的管理与操作技术 中国药品生物制品检定所 王国治 中国疾病预防控制中心 王秋娣 摘要：菌（毒）种及样品的运输、保管、在实验中的应用与操作，是生物安全实验室（微生物实验室）安全管理的重要方面，为保证实验室安全和实验操作者免受其害，本文论述了菌（毒）种的管理和监督系统文件制定、微生物操作技术规范、避免感染性物质进入人体的的措施和对意外事故的处理方法。 关键词：生物安全实验室，菌（毒）种管理，微生物操作技术，事故处理 保证生物安全实验室（微生物实验室）安全，对菌（毒）种及样品的运输、保藏、使用等方面的管理是重要内容之一。如何建立和执行有效的管理与监督制度、标准操作规程和实验室操作技术规范是该类实验室的重中之重。菌（毒）种的管理包括样品的运输、保藏、使用等方面的内容，而对管理而言则是保证生物安全实验室安全（包括微生物实验室）的重要内容之一。然而，菌（毒）种的管理应建立规范和严格的管理制度以及对该制度的有效监督，才能真正地防止在传染病防治、科学研究以及生物制品生产过程中造成菌（毒）种的扩散或遗失，同时可避免发生实验室感染或由其引起的相关传染病的传播事件；而规范的菌（毒）种的管理又可避免菌种在使用过程中发生不应出现的差错，同时保证菌毒种保藏的质量以确保试验结果的可靠性。 在日常的实际工作中可以发现：大多数的实验室将“传代过程”与“数量”合并于研究记录中的现象，或者是存在着记录的不完整性，而记录不正确的现象更是较为普遍。我们可以设想，如果在这一过程中缺少真正直接反应实际工作状况、独立的传代与销毁记录，将来则难以追踪培养物的去向，这会不利于研究单位的安全自查和上级有关单位的核查，那么国家级的督察也只能是形式上的监督作用，而事实上却无法真正确保生物安全实验室的安全。因此，要求生物安全实验室应根据所从事的实际工作性质来制定独立的菌（毒）种保藏、开启、传代至销毁的原始记录，其中，记录的内容应包括传代菌（毒）种来源、传代时间、传代数量、传代用途以及备注等；销毁记录应包括销毁方式、销毁物品明细表（培养物、实验用具等）、灭菌温度与时间（开始时间，达到温度时间，停止灭菌时间，取出时间）。当然，实验记录同时应有实验人与复核人并记录在案。另则，实验室负责人应对记录内容负责，上级主管检查人员以及国家督察人员应将该项
菌种管理规定 Ting Bao was revised on January 6, 20021
1 目的 规范检验室用菌种的保存、传代、使用及销毁等工作的管理，以确保菌种和检验人员的安全。 2 范围 适用于质量部菌种的管理。 3 责任人 负责菌种的日常管理工作。 主管负责对菌种使用管理进行监督检查。 4 内容 菌种的定义 标准菌种是指由中国食品药品检定研究院微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养基后，作为日常工作使用的菌种。 菌种的代是指将其接种至新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种（如无特殊说明）一般为第0代。 菌种的购买 微生物检验员根据检验需要量，提出购买计划，填写《采购申请单》，报质量部部长、管理者代表及副总审核，经总经理批准，由物流部购买。 菌种的接收
菌种买回后，由微生物检验员负责与物流部交接，检查其名称和数量是否与采购申请一致，包装是否完好、封口是否严密、标签是否清晰、文字完整、易于辨认。 将菌种的所有信息填写在《菌种接收记录》上，内容包括名称、数量、编号、代数、来源、接收人、接收日期等。 菌种的贮存 标准菌种保存在-20℃的冰箱中，2年内使用即可（或者按照说明书要求贮存）。传代菌种采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，保存在-20℃的冰箱中，1年内使用即可。 工作用菌种采用斜面低温保存法，将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌生长充分后，转移至2~8℃冰箱保存，一个月内有效。 上述所有菌种均需要填写相应的保存台账及取用记录。 菌种的使用 从标准菌种复苏、确认、传代一直到工作菌种的使用都应有记录，且菌种的使用一般不能超过5代。 菌种复苏 将标准菌种（干粉以1ml无菌氯化钠完全溶解后）转种至对应培养基上复苏（选用培养基及培养条件参考《2015版药典》通则1105,金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌和枯草芽孢杆菌转种至胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30-35℃，培养时间18-24h；白色念珠菌转种至沙氏葡萄糖琼脂培养基培养温度20-25℃，培养时间2-3天；黑曲霉转种至沙氏葡萄糖琼脂培养基培养温度20-25℃，培养时间5-7天）。 菌种确认 菌种以液体培养基复苏：用接种环挑取1-2环培养物至洁净的载玻片上，不需要涂布开，空气中自然干燥样品液；菌种以固体培养基复苏：用接种环挑取1环蒸馏水至洁净的载玻片上，挑取一个单菌落与蒸馏水混合均匀，尽可能均匀的涂布载玻片上，且不要太厚，空气中自然干燥样品液。 涂布经火焰固定，加结晶紫溶液，染色1分钟，水洗。
菌种管理制度 1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。 2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。 3、定义 标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干 燥菌。 传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。 菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。 4、职责 4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。 4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。 5、规程 5.1菌种的申购 部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。 5.2菌种的接收 菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4?8°C 冰箱中，在一周内必须完成转种。 5.3菌种的保存 5.3.1工作用菌种的保存 工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4?8C冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同，细
1 目的规范检验室用菌种的保存、传代、使用及销毁等工作的管理，以确保菌种和检验人员的安全。 2 范围适用于质量部菌种的管理。责任人3 负责菌种的日常管理工作。3.1QC 主管负责对菌种使用管理进行监督检查。3.2QC 内容4 菌种的定义4.1 标准菌种是指由中国食品药品检定研究院微生物菌种保藏管理中心提供的冷4.1.1 冻干燥菌。传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，4.1.2 用于传代及制备工作用菌种。工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养基后，作4.1.3 为日常工作使用的菌种。菌种的代是指将其接种至新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即为一代，4.1.4 代。从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种（如无特殊说明）一般为第0 4.2菌种的购买，报质量微生物检验员根据检验需要量，提出购买计划，填写《采购申请单》 部部长、管理者代表及副总审核，经总经理批准，由物流部购买。菌种的接收4.3菌种买回后，由微生物检验员负责与物流部交接，检查其名称和数量是否与4.3.1采购申请一致，包装是否完好、封口是否严密、标签是否清晰、文字完整、易于辨． 4.3.2将菌种的所有信息填写在《菌种接收记录》上，内容包括名称、数量、编号、代数、来源、接收人、接收日期等。 4.4菌种的贮存 4.4.1标准菌种保存在-20℃的冰箱中，2年内使用即可（或者按照说明书要求贮存）。 4.4.2传代菌种采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，保存在-20℃的冰箱中，1年内使用即可。 4.4.3工作用菌种采用斜面低温保存法，将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌生长充分后，转移至2~8℃冰箱保存，一个月内有效。 4.4.4上述所有菌种均需要填写相应的保存台账及取用记录。 4.5菌种的使用 从标准菌种复苏、确认、传代一直到工作菌种的使用都应有记录，且菌种的使用一般不能超过5代。
生物制品生产、检定用菌种、毒种管理规程 1 总则 1.1 本规程所称之菌、毒种系指直接用于制造和检定生物制品的细菌、立克次体或病毒，以下简称菌、毒种。菌、毒种按《中国医学微生物菌种保藏管理办法》第二条分类。菌、毒种的管理由中国药品生物制品检定所(以下简称检定所)负责。 1.2 各生产单位按规程生产或检定生物制品所用之菌、毒种由检定所或卫生部委托的单位保存、检定及分发。各生产单位自行分离或收集的菌、毒种，凡拟用于生产或检定者，均须经检定所审查认可。新生物制品所用的菌、毒种按卫生部《新生物制品审批办法》办理。 1.3 生物制品生产应采用种子批系统。原始种子库应验明其记录、历史、来源和生物学特性。从原始种子库传出、扩增后冻干保存的为生产用种子库。生产用种子批的生物学特征应与原始种子批一致。每批生产用种子批均应按规程要求保管、检定和使用。 1.4 各生产单位应指定专业部门对本单位的菌、毒种施行统一管理，每年向单位领导书面报告管理情况，并抄报检定所。 1.5 凡增加、减少或变更生产及检定用菌、毒种须经检定所审查认可。 2 菌、毒种登记程序 2.1 菌、毒种由检定所统一进行国家菌、毒种编号，各单位不得更改。各生产单位自行分离、收集的菌、毒种，凡正式用于生产和检定者，经检定所审查同意后给予正式国家编号。 2.2 保管菌、毒种应有严格的登记制度，建立详细的总帐及分类帐。收到菌、毒种后应立即进行编号登记，详细记录菌、毒种的学名、株名、历史、来源、特性、用途、批号、传代冻干日期、数量。在保管过程中，凡传代、冻干及分发，均应及时登记，并定期核对库存数量。 2.3 收到菌、毒种后一般应于3个月内进行检定。用培养基保存的菌种应及时检定。 3 菌、毒种的检定 3.1 生产用菌、毒种应按各项制品规程要求定期进行检定。 3.2 所有菌、毒种检定结果应及时记入菌、毒种检定专用记录内。 3.3 不同属或同属菌、毒种的强毒及弱毒株不得同时在同一或未经严格消毒的无菌室内操作。一、二类菌、毒种及芽胞菌、真菌必须在严格隔离的专用实验室及动物室内操作，并应加强对操作人员的防护。活菌、活毒操作必须严格执行《活菌、活毒操作管理制度》。 3.4 三、四类菌、毒种的操作应按各项制品规程的规定在专用或适当的实验室内进行。
第十二章免疫学应用 第三节常用生物制品的制备及检验 生物制品作为一类特殊的药品，其生产环节和质量检验必须按照严格的法规、程序和标准进行。只有这样，才能保证其对动物疾病防治和诊断的可靠性和准确性，以及对人畜和环境的安全性。生物制品种类繁多，生产中用量较大的有疫苗和免疫血清两大类。 一、疫苗的制备及检验 （一）菌种、毒种的一般要求 菌种、毒种是国家的重要生物资源，世界各国都为此设置了专业性保藏机构。用于疫苗生产的菌种和毒种应该符合要求。 1．背景资料完整我国《兽医生物制品制造及检验规程》规定，经研究单位大量研究选出并用于生产的现有菌种、毒种，均由中国兽药监察所或中国兽药监察所委托分管单位负责供应，而且其分离地、分离纯化时间等背景资料必须记录完整。 2．生物学特性典型指形态、生化、培养、免疫学及血清学特性以及对动物的致病性和引起细胞病变等特征均应符合标准。同时，用于制苗的菌种和毒种的血清型必须清楚。 3．遗传性状稳定菌种、毒种在保存、传代和使用过程中，因受各种因素影响容易变异，因此，菌种和毒种遗传性状必须稳定。 （二）菌种、毒种的鉴定与保存。 1．菌种、毒种的鉴定在疫苗生产之前，要鉴定所用菌（毒）种的毒力、免疫原性及稳定性，确定强毒菌（毒）种对本动物、实验动物或鸡胚的致死剂量，弱毒株的致死和不致死动物范围及接种的安全程度，通过强毒攻击免疫后动物，确定制造疫苗所用菌（毒）种的免疫原性；对制造弱毒活苗菌（毒）种需反复传代和接种易感动物，以检查其毒力是否异常增强。 2．菌种、毒种的保存为了保持稳定性，最好采用冷冻真空干燥法保存菌种和毒种。冻干的细菌、病毒分别保存于4℃和-20℃以下，液氮是长期保存菌种的理想介质。 （三）灭活、灭活剂与佐剂 1．灭活与灭活剂疫苗生产中的灭活是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽可能保持其原有免疫原性的过程。灭活的方法有物理法和化学法两种。加热法是一种常见的物理灭活法，但疫苗生产上主要采用化学灭活法。 用来进行灭活的试剂称为灭活剂，如甲醛、苯酚、结晶紫及烷化剂等。其中甲醛应用最为广泛。甲醛的灭活作用是其醛基能够破坏微生物蛋白质和核酸的基本结构，导致微生物死亡而失去感染力。一般需氧菌和厌氧菌所用甲醛的浓度分别为0.1%～0.2%和0.4%～0.5%，37～39℃处理24h以上，如气肿疽灭活苗常用0.5%甲醛37～38℃灭活72～96h；灭活病毒所用甲醛浓度为0.05%～0.4%（多数为0.1%～0.3%），而灭活类毒素多用0.3%～0.5%甲醛。
1、目的：规范微生物试验用菌种的管理，确保菌种的有效使用。 2、适用范围：微生物试验用菌种的管理。 3、责任者：质检科负责人、微生物试验人员、菌种管理人员 4、正文： 概念 a、标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。 b、标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培养物。 c、商业派生菌株：由供应商提供的所有特性与标准菌株等效的菌株。 d、工作菌株：由标准储备菌株经传代得到的培养物。
e、代：将活的微生物接种到新鲜培养基中进行培养，并希望获取新的微生物培养物。这种操作方式，新培养物对接种培养物而言就称为一代。 菌种的采购和接收 菌种的采购 从药检所或菌种保藏中心等外单位购入菌种斜面或冻干菌种。 根据工作需要对购买国内保藏中心提供的菌种斜面提前1个月填写采购申请单，冻干菌种提前2个月申请购买，国外保藏中心提供的菌种应提前3个月申请购买。 菌种的接收 检定菌应设专人保管，管理人员应接受过专业培训，有足够的菌种保存经验。 接收菌种时，应核实菌种的名称、编号、传代代数、数量、有效期等，并调查清楚菌种的保存条件和注意事项。 接收时应填写菌种接收登记表。内容包括：菌种名称、菌种保藏中心编号、传代次数、接收日期、菌种来源等。 对新购入的冻干菌种在使用前应按要求对其进行生物形态确证试验和纯度鉴定，由于新购买的菌种斜面已由菌种提供单位做过生物形态确证试验和纯度鉴定，所以传代5代以内的菌种斜面不需要进行纯度鉴定。 对新购入的斜面菌种应在2～8℃保存，并应在1周内转接。 菌种的复苏 使用人员根据需要应向菌种管理人员领取菌种，仔细核对标签上菌名、编号，并在《菌种接收及领用登记表》上记录菌名、数量、领用人、领用日期等信息。 菌株解冻后不得重新冷冻和再次使用。 菌种复苏应在生物安全柜内操作。 常用菌种接种用培养基和培养条件表 菌种的传代 每株菌种应建立菌种使用及传代记录，斜面菌种应根据其特性决定传代时间间隔。
1 目的 规范检验室用菌种的保存、传代、使用及销毁等工作的管理，以确保菌种和检验人员的安全。 2 范围 适用于质量部菌种的管理。 3 责任人 3.1QC负责菌种的日常管理工作。 3.2QC主管负责对菌种使用管理进行监督检查。 4 内容 4.1 菌种的定义 4.1.1标准菌种是指由中国食品药品检定研究院微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。 4.1.2 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 4.1.3工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养基后，作为日常工作使用的菌种。 4.1.4菌种的代是指将其接种至新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种（如无特殊说明）一般为第0代。 4.2菌种的购买 微生物检验员根据检验需要量，提出购买计划，填写《采购申请单》，报质量部部长、管理者代表及副总审核，经总经理批准，由物流部购买。 4.3菌种的接收 4.3.1菌种买回后，由微生物检验员负责与物流部交接，检查其名称和数量是否与采购申请一致，包装是否完好、封口是否严密、标签是否清晰、文字完整、易于辨认。
4.3.2将菌种的所有信息填写在《菌种接收记录》上，内容包括名称、数量、编号、代数、来源、接收人、接收日期等。 4.4菌种的贮存 4.4.1标准菌种保存在-20℃的冰箱中，2年内使用即可（或者按照说明书要求贮存）。 4.4.2传代菌种采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，保存在-20℃的冰箱中，1年内使用即可。 4.4.3工作用菌种采用斜面低温保存法，将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌生长充分后，转移至2~8℃冰箱保存，一个月内有效。 4.4.4上述所有菌种均需要填写相应的保存台账及取用记录。 4.5菌种的使用 从标准菌种复苏、确认、传代一直到工作菌种的使用都应有记录，且菌种的使用一般不能超过5代。 4.5.1菌种复苏 将标准菌种（干粉以1ml无菌氯化钠完全溶解后）转种至对应培养基上复苏（选用培养基及培养条件参考《2015版药典》通则1105,金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌和枯草芽孢杆菌转种至胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30-35℃，培养时间18-24h；白色念珠菌转种至沙氏葡萄糖琼脂培养基培养温度20-25℃，培养时间2-3天；黑曲霉转种至沙氏葡萄糖琼脂培养基培养温度20-25℃，培养时间5-7天）。 4.5.2菌种确认 4.5.2.1菌种以液体培养基复苏：用接种环挑取1-2环培养物至洁净的载玻片上，不需要涂布开，空气中自然干燥样品液；菌种以固体培养基复苏：用接种环挑取1环蒸馏水至洁净的载玻片上，挑取一个单菌落与蒸馏水混合均匀，尽可能均匀的涂布载玻片上，且不要太厚，空气中自然干燥样品液。 4.5.2.2涂布经火焰固定，加结晶紫溶液，染色1分钟，水洗。 4.5.2.3加碘液，染色1分钟，水洗。 4.5.2.4加脱色液，不时摇动载玻片10-30秒，至无紫色脱落为止，水洗。
生物制品生产检定用菌毒种管理规程 生物制品生产检定用菌毒种管理规程 一、总则 本规程所称之菌毒种，系指直接用于制造和检定生物制品的细菌、立克次体或病 毒等，以下简称菌毒种。菌毒种按《人间传染的病原微生物名录》为基础分类。 生产和检定用菌毒种，包括DNA重组工程菌菌种，来源途径应合法，并经国家药 品监督管理部门批准。菌毒种由国家药品检定机构或国家药品监督管理部门认可的单位保存、检定及分发。生物制品生产用菌毒种应采用种子批系统。原始种子批（Primary Seed Lot）应验明其记录、历史、来源和生物学特性。从原始种子批传代和扩增后保存的 为主种子批（Master Seed Lot）。从主种子批传代和扩增后保存的为工作种子批（Working Seed Lot），工作种子批用于生产疫苗。工作种子批的生物学特性应与原始种 子批一致，每批主种子批和工作种子批均应按各论要求保管、检定和使用。生产过程中应 规定各级种子批允许传代的代次，并经国家药品监督管理部门批准。菌毒种的传代及 检定实验室应符合国家生物安全的相关规定。各生产单位质量管理部门对本单位的菌 毒种施行统一管理。二、菌毒种登记程序 菌毒种由国家药品检定机构统一进行国家菌毒种编号，各单位不得更改及仿冒。 未经注册并统一编号的菌毒种不得用于生产和检定。保管菌毒种应有严格的登记制度，建立详细的总账及分类账。收到菌毒种后应立即进行编号登记，详细记录菌毒种的学名、 株名、历史、来源、特性、用途、批号、传代冻干日期和数量。在保管过程中，凡传代、 冻干及分发，记录均应清晰，可追溯，并定期核对库存数量。收到菌毒种后一般应及 时进行检定。用培养基保存的菌种应立即检定。 三、生物制品生产用菌（毒）种生物安全分类（见本规程附录）以《人间传染的病 原微生物名录》为基础，根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度， 将生物制品生产用菌（毒）种分为四类： 1、第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我 国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 2、第二类病原微生物，是指能够引起人类或者 动物严重疾病， 比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。 3、第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物 或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有 效治疗和预防措施的微生物。 4、第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。四、菌毒种的检定
标准菌种管理规程 生效日期：年月日第1页共17页 目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。 职责：QC主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。 范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。 内容： 1 术语 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。 2.标准： 2.1检定菌的申购 QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。 2.2检定菌的接收 菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于2-8?C直到需要使用时。储存期最长不超过5年。 2.3 检定菌的保存 2.3.1 工作用菌种的保存 工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。 2.3.2传代用菌种的保存
<<生物制品生产>>复习题 一、判断题（正确的打“√”，错误的打“×”） 1、凝集反应所使用的抗原是颗粒性的。 2、类毒素的特点是有毒性，有免疫原性。 3、结核分支杆菌已被证明有佐剂活性。 4、H抗原是指细菌的鞭毛抗原。 5、活疫苗的一个优点就是疫苗稳定，便于制备多价或多联苗。 6、亚单位苗可免除出全菌体和全病毒疫苗的一些副作用。 7、抗毒素的作用机理是特异性的结合毒素，因此在治疗的任何时期效果都一样。 8、从疫区分离的菌毒株是可以直接用来制备生物制品的。 9、低温保存法是目前保存菌毒种最好的方法。 10、人工被动免疫是指通过注射疫苗使动物获得免疫力的免疫方法。 11、亚单位苗不但免除出全菌体疫苗的一些副作用，并且效果优于全菌体疫苗 12、抗血清在用作治疗时应用愈早，效果愈好。 13、冻干保护剂可以保证细菌100%不被冻死 14、冷冻真空干燥法是目前保存菌毒种最好的方法 15、禽流感病毒是可以用鸡胚来培养的。 16、疫苗的使用中期待“一针见效”在实际工作中是不可取的。 17、生物制品的灭活是指彻底将病原体摧毁。 18、佐剂一般无免疫原性。 19、沉淀反应所用的抗原是可溶性的。 20、检出动物体内抗体阳性，证明该动物一定被自然感染过。 三、单项选择题 1．下列关于类毒素的说法，正确的是（） A 有毒性，有免疫原性 B有毒性，无免疫原性 C 无毒性，有免疫原性 D无毒性，无免疫原性 2．按照目前的分类，下列疫苗中哪一种是基因工程疫苗（） A 异源疫苗 B 亚单位疫苗 C 同源疫苗 D重组亚单位疫苗 3．下列细菌已被证明有佐剂活性的是（）
A 结核分支杆菌 B 破伤风梭菌 C 大肠杆菌 D 丹毒杆菌 4．灭活苗的优点不．包括如下（） A 安全 B易于保存、运输 C 疫苗稳定，便于制备多价或多联苗 D对母源抗体的干扰作用敏感 5．下列说法中，不．属于真空冷冻干燥的优点的是（） A 物料在低压下干燥，保护易氧化成分不致氧化变质 B 物料在低温下干燥，营养成分和风味损失很少 C 干制品不失原有的固体结构，保持着原有形状 D 生产成本低 6.下列说法错误的是（） A 亚单位苗可免除出全菌体和全病毒疫苗的一些副作用 B 抗毒素应用愈早，效果愈好 C 疫苗的使用中期待“一针见效”在实际工作中是不可取的 D 低温保存法是目前保存菌毒种最好的方法 7.生物制品效力检验的目的是（） A 评定制品的实际使用价值 B 评定安全性 C 评价灵敏性 D 评价活菌数8．下列说法正确的是（） A 亚单位苗不但免除出全菌体疫苗的一些副作用，并且效果优于全菌体疫苗 B 抗毒素应用愈早，效果愈好 C 冻干保护剂可以保证细菌100%不被冻死 D 低温保存法是目前保存菌毒种最好的方法。 9．按照目前的分类，下列疫苗中哪一种不．是基因工程疫苗（） A 异源疫苗 B 合成肽疫苗 C 基因缺失苗 D重组亚单位10．下列细菌已被证明有佐剂活性的是（） A 结核分支杆菌 B 破伤风梭菌 C 大肠杆菌 D 丹毒杆菌 11．活疫苗的优点不．包括如下（） A 能够刺激机体产生体液免疫和细胞免疫 B免疫力持久 C 疫苗稳定，便于制备多价或多联苗 D生产成本低 12．下列说法错误 ．．的的是（）
程生物制品生产检定用菌毒种管理规 来源：三部 分类：生物制品通则 笔画： 页码：3 生物制品生产检定用菌毒种管理规程 —、总则 1. 本规程所称之菌毒种，系指直接用于制造和检定生物制品的细菌、支原体、立克次体或病毒等，以下简称菌毒种。菌毒种按中国《人间传染的病原微生物名录》为基础分类。 2. 生产和检定用菌毒种，包括DNA重组工程菌菌种，来源途径应合法，并经国务院药品监督管理部门批准。 3. 生物制品生产用菌毒种应采用种子批系统。原始种子应验明其历史、来源和生物学特性。从原始种子传代和扩增后保存的为主种子批。从主种子批传代和扩增后保存的为工作种子批，工作种子批用于生产疫苗。工作种子批的生物学特性应与原始种子一致，每批主种子批和工作种子批均应按各论要求保管、检定和使用。由主种子批或工作种子批移出使用的菌毒种无论开瓶与否，均不得再返回贮存。生产过程中应规定各级种子批允许传代的代次，并经国务院药品监督管理部门批准。 4. 菌毒种的传代及检定实验室应符合国家生物安全的相关规定。 5. 各生产单位质量管理部门对本单位的菌毒种施行统一管理。 二、菌毒种登记程序 1. 由国家菌毒种保藏机构统一编号的菌毒种，使用单位不得更改及仿冒。 2. 保管菌毒种应有严格的登记制度，建立详细的总账及分类账。收到菌毒种后应立即进行编号登记，详细记录菌毒种的学名、株名、历史、来源、特性、用途、批号、传代冻干日期和数量。在保管过程中，凡传代、冻干及分发，记录均应清晰，可追溯，并定期核对库存数量。 3. 收到菌毒种后一般应及时进行检定。用培养基保存的菌种应立即检定。 三、生物制品生产用菌毒种生物安全分类（见本规程附录） 以《人间传染的病原微生物名录》为基础，根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将生物制品生产用菌毒种分为四类。 1. 第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及中国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 2. 第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。 3. 第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 4. 第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 四、菌毒种的检定 1. 生产用菌毒种应按各论要求进行检定。 2. 所有菌毒种检定结果应及时记入菌毒种检定专用记录内。 3. 不同属或同属菌毒种的强毒株及弱毒株不得同时在同一洁净室内操作。涉及菌毒种的操作应符合国家生物安全的相关规定。 4. 应建立生产用菌毒种主种子批全基因序列的背景资料，减毒活疫苗主种子批应进行全基因序列测定。
标准菌种管理规程 ( YBTC-PD-02-506B ) 1.目的规范菌种管理与使用程序，确保实验结果可靠与实验室安全。 2.适用范围 检验用标准菌种如大肠杆菌等。 3.职责标准菌种管理员按本程序规定进行微生物检验用培养基管理，微生物检验室负责人监督检查该程序的执行情况。 4.控制程序 4.1标准菌种由受过专业培训，有足够的菌种保管经验的标准菌种管理员保管。 4.2检验用标准菌种，由标准菌种报关员提出计划，微生物检验室负责人审核，报质量负责人批准后购买。 4.3收到菌种后，应核对品名，菌号数量，检查菌种管有无破损，填写《标准菌种保管与使用记录》 ( YBTC-TR-03-YL17 )。在保存菌种容器外加贴标签，注明编号、名称、购买日期。标准菌种的保存条件：应在4?8C保存，一般可保存2?3年。专用盛具加锁保存于冷冻室内，保藏菌种的冰箱不得存放食物和易挥发性药品。 4.4标准菌株的使用 4.4.1取用时，必须登记使用时间、数量及使用人。 4.4.2启用时，必须在专用净化台内严格按无菌操作进行菌种的传 代。 4.4.3传代后的标准菌株应不少于 2 支，一支专用于菌种传代，一般为4?8C。另一支为工作用菌种。传代工作应予记录。 4.5标准菌种的保存 4.5.1保存用菌株，应两个月接种传代于新鲜的营养琼脂斜面上，每半年分离纯化一次，并按规定的生化试验，检定是否属纯种，发现变异或染菌应及时报告微生物检验室负责人研究处理，并应记录。 4.5.2工作用标准菌株，应在用前将菌种接种于新鲜的营养琼脂斜面上培养后，再接种于新鲜营养肉汤培养基中，保存在4?8 C冰箱内，该液体一般使用三天。
菌种管理规程 目的 规范药品微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种 的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。 范围 本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、验收、保存、传代、使用及销毁等。 责任 ●质量控制处主管：负责菌种的申购。 ●微生物检验人员：负责菌种的验收、保存、传代、使用及销毁等。 ●质量控制处经理：负责菌种申购计划的审核及日常督促检查。 ●质量管理负责人：菌种申购计划的审核。 ●制造中心总监：菌种申购计划的批准。 相关术语 ●标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理 中心提供的冷冻干燥菌。 ●传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存 的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 ●工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养 后，作为日常工作使用的菌种。 ●菌种的代是指将其接种至新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称 为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。 相关文件 无 程序 1菌种的申购 质量控制处主管根据菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出申购计划，由质量控制处经理、质量管理部负责人审核，制造中心总监批准后，向中国药品生物制品检定所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可
以直接向省（市）药检所购买传代用菌种。购买时，需询问和确定菌种的代数，以便传代时控制代数。同时在运输过程中注意严格按照保存条件要求进行。 2菌种的验收 菌种到达实验室后，由质量控制处微生物检验人员验收，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《菌种接收记录》上，内容包括：名称、数量、编号、代数、来源、接收日期、接收人等，新购入的0代原始菌种储存于－20℃，有效期为三年。从上级药检部门购买的已接种好的菌种斜面（3代）应检查菌种管是否完好。储存于2～8 ℃，有效期为3个月。新购进的菌种斜面应在一周内完成传代。 3 菌种的传代：菌种的传代因冻干菌（标准菌种）与传代用菌种而不完全相同。 3.1标准菌种的复苏、确认、传代 3.1.1 标准菌种的复苏步骤如下： 把冻干菌种管、灭菌毛细滴管（1ml）、双碟、镊子、营养肉汤培养基（或其它适宜培养基）数支，移入接种室或超净工作台。 将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒，稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将标准菌种管的封口一端在火焰上， 烧灼红热，用灭菌毛细滴管吸取营养肉汤培养基（或其它适宜的培养 基），滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌毛细滴管，在火焰旁吸取营养肉汤培养基（或其它适宜的培 养基）少许，加至菌种管底部，将冻干菌块搅动促使溶解，随即吸出 管内菌液，接种至营养肉汤培养基（或其它适宜的培养基）内，并根 据不同菌种类型而将其培养于相宜的温度下24～72h（细菌需要 24～ 48h的培养物，酵母菌需要72h的培养物，形成孢子的微生物则宜保 藏孢子）。最后将毛细滴管及菌种管经高温灭菌（121℃，30分钟）。 黑曲霉的菌悬液先室温待菌悬液融化后用无菌吸管吸取管内液体1～2 滴滴在改良马丁琼脂斜面上，用吸管涂布均匀，置23～28℃培养5～7
1. 生物制品的概念：是由微生物（细菌、噬菌体、立克次体、病毒等）或微生物代谢产物、动物毒素、人或动植物主要组织经纯化或现代生物技术加工制成的产品，用于预防、治疗和诊断疾病。广义的生物制品还包括一些保健品，如微生态制剂。 9.生物制品学：是指研究各类生物制品的来源、结构特点、应用、生产工艺、原理、 现状、存在问题与发展前景等诸方面知识的一门科学。 3、研究内容：是研究各类生物制品的结构、功能、制备工艺、开发现状与发展战略 等内容。 4、研究对象：是针对多种恶性传染病的预防、诊断和多种疾病的治疗剂，以及为达 到某种特殊医学目的或保健用的生物制品。 5、生物制品的作用：其主要应用在疾病的免疫预防、诊断及治疗方面： ①.在免疫预防上，许多国家借助生物制品控制或消灭了很多危害严重的传 染性疾病。疫苗可用于有效防制动物和人的疫病。如牛瘟、人的天花病。 ②.在诊断上，很多国家研制成功相应疫病的血清学和分子生物学诊断试剂 盒。如猪瘟等ELISA抗体检测试剂盒在发达国家普遍使用。我国研制的鸡副伤寒玻片凝集抗原等也已得到广泛使用。 ③.在治疗上，如有些动物传染病的高免血清、痊愈血清和卵黄抗体等生物 制品具有帮助动物机体杀死、抑制或消除病原体致病作用，因而成为减少经济损失的重要手段。 6、疫苗：凡接种动物后能产生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂均称为疫苗。 7、疫苗的种类(按疫苗抗原种类、数量、来源可分为)：a.弱毒疫苗 b.重组活疫苗 c.基因工程活载体疫苗 d.病毒抗体复合物疫苗 e.灭活疫苗 f.亚单位疫苗g.基因工程亚单位疫苗h.抗独特型疫苗i.基因疫苗又称DNA疫苗'或核酸疫苗j.单(价)疫苗k.多价疫苗l.混合疫苗m.同源疫苗n.异源疫苗 8、重组活疫苗: 通过基因工程技术，将病原微生物致病性基因进行修饰，突变或缺 失，从而获得弱毒株制成的疫苗。 9、基因工程亚单位疫苗: 将病原体免疫保护基因克隆于原核或真核表达系统，实 现体外高效表达，获得重组免疫保护蛋白所制造的一类疫苗。 10独特型疫苗：根据免疫网络学说原理，利用第一抗体分子中的独特抗原决定簇所制备的具有抗原的“内影像”结构的第二抗体具有模拟抗原的特性 11、基因疫苗：是将编码某种抗原蛋白的基因置于真核表达元件的控制之下，构成 重组表达质粒DNA，将其直接导人动物体内，通过宿主细胞的转录翻译系统合成抗原蛋白，从而诱导宿主产生该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。 12、基因工程活载体疫苗：是指用基因工程技术将致病性微生物的免疫保护基因插 入到载体病毒或细菌的非必需区，构建成重组病毒(或细菌)，经培养后制备的疫苗。 13、按生物制品制造方法和物理性状分类：①普通制品；②精制生物制品；③液状 生物制品；④干燥制品；⑤佐剂制品。 14、生物制品的命名：一般采用“动物种名十病名+制品名称”的形式。诊断制剂则 在制品种类前加诊断方法名称。由两种以上血清型制备的一种疫苗，命名采用“动物种名＋病名＋若干型名＋×价疫苗”的形式。例如：口蹄疫O型、A型双价活疫苗。