细菌分离培养方法及操作步骤
无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。
平板划线接种法
这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作：
1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌；
图1 病料采集图2 接种环灭菌
2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。）
图3 平板划线接种法
4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。
注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤
药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。
1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
图4 接种环划线
2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
3、添加药物：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
图5 添加药物
药敏试验结果：
图6 药敏试验结果
影响药敏结果的因素：
1、培养基:应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时,厚度合适，约56mm，不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基1820m为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胞腺密啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磷胺药和TMP的活性
2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精硫配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
4、培养时间:一般培养温度和时间为37℃8-18小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好抗菌药的平板培养基,先置4℃泳箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较大的抑菌圈。温培养箱中培养18-24h后备用。
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细菌分离培养方法及操作步骤无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基,37℃恒温培养24 h,观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法与实验动物分离法。 平板划线接种法 这就是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落(有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌),以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作: 1、右手持接种环,在酒精灯上火焰灭菌; 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后,挑取被检料少许,左手持琼脂平板,以食指为
支点,用拇指与无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时,迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。 3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。(注意:划线时,以腕力使接种环在琼脂平板表面划动,尽量不要划破培养基,划的线条要密,但不能重复旧线,以免培养物形成菌 苔。) 图3 平板划线接种法 4、划线完毕,合上平皿盖,将琼脂平板倒置,放入37℃温箱内培养
18－24小时。 注意:分离培养用的平板培养基应表面干燥,可于临用前置37℃孵育箱内30分钟,这样表面即干燥有利于分离培养,又使培养基预温,对培养某些较娇弱的细菌有利。 细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验就是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节,一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药,减少抗菌素使用的盲目性,从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中,用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式; 用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二点划线至平皿的1/2,依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线
肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析 发表时间：2018-02-02T15:22:23.477Z 来源：《临床医学教育》2017年12月作者：邹单东韦柳华程红革[导读] 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。 广西医科大学第四附属医院广西柳州545005 [摘要] 目的：了解肺泡灌洗液中细菌种类及耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法：美国Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定及药敏试验。结果：灌洗液细菌培养阳性率56.2%；195例细菌中革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%；主要细菌依次是铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌。主要革兰阴性菌对亚胺培南耐药率为0～15.1%，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰 胺酶 (ESBLs)阳性率为62.5%、64.1%，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为60.0%，细菌多药耐药现象严重。结论：不同细菌对抗菌药物的耐药性不同，灌洗液细菌培养及药敏试验可为临床合理用药提供依据。 [关键词] 肺泡灌洗液；细菌分布；耐药性 [Abstract] Objection: in order to understand the type of bacteria and susceptibility test results in irrigating solution, and provide an according to rational use of drug for clinical.Methods: the instrument of identification and susceptibility test is Microscan Autoscan-4, USA.Result: the positive rate of irrigating solution is 56.2%; the Gram-negative bacteria has 90.8% in these 195 bacterias, and Gram-positive bacteria has 9.2%; the main type of these bacteria are Pseudomonas aeruginosa, Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii . the tate of the bacterias, which resist to imipenem, is 0~15.1% in these Gram-negative bacterias; the rate of Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii, which product ESBLs, is 62.5%、64.1%,respectively; and the rate of MRSA is 60.0%. and the phenomenon of multidrug resistant is Very serious.Conclusion: the drug resistance of bacteria is differrent, the bacterial culture and susceptibility test results of irrigating solution can provide basis of rational drug use for clinical. [Key words] irrigating solution; Bacteria distribution; drug resistanc 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。目前病原诊断普遍采用痰培养，但因其易污染，痰液质量难以保障，临床价值有限。肺泡灌洗液与痰液相比，对下呼吸道感染诊断具有更高特异性和敏感性，同时细菌药敏结果对临床抗感染治疗更具价值【l】。因此，我们对2010年从肺泡灌洗液中分离到的195例细菌的药敏结果进行回顾性分析，以期为临床抗感染治疗提供依据，现将结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本来源 251例灌洗液为2010年我院住院患者予以纤支镜支气管肺泡灌洗治疗后采集所得。同一患者多次分离到的细菌不重复计入。 1.2 细菌鉴定和药敏试验采用Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定和药敏试验。药敏试验判断标准、结果解释、MRSA、ESBLs检测参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准【2】。定期用标准菌株做药敏质量控制。 1.3 数据处理数据均由WHONET 5.4软件分析处理所得。 2 结果 2.1 细菌分布 251例灌洗液细菌培养阳性率为56.2%(141/251)。共分离细菌195例，革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%，细菌构成比见表1。 2.2药敏结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs株为10例、25例，阳性率为62.5%、64.1%，MRSA 6例，检出率为60.0%。主要细菌对抗菌药物的耐药率，见表2。
特殊细菌药敏试验的规范化操作 一、目前我国细菌药敏试验现状 20年以来，我国在卫生部和各地临床检验中心和检验学会的共同努力下引进CLSI药敏系列标准，使全国微生物实验室能在同一标准下进行质量控制活动。当前，微生物实验室对常见临床分离细菌的药物敏感试验的水平已有了显著的提高，但对特殊细菌的药敏试验的各个环节的规范操作还不能得到普及，对目前还无折点的细菌能否做药敏试验，以及如何判断细菌的药物敏感和耐药，仍然概念模糊，有待进一步规范和普及。 目前常见错误做法： （一）铜绿假单孢菌的药敏判断标准用于其他非发酵细菌；嗜血杆菌的标准用于卡他莫拉菌等的错误做法时有发生。 （二）借用同属细菌敏感标准 （三）借用同类抗生素的敏感标准 二、各菌属的药物敏感性报告及试验方法的CLSI药敏标准 （一）“嗜麦芽”菌属药敏报告标准 1.CLSI对“嗜麦芽”纸片药敏判断标准 药物名称纸片含量ug/片耐药 R 中介I 敏感S 米诺环素30 ≤1415-18 ≥19 左氧氟沙星 5 ≤1314-16 ≥17 复方新诺明 1.25/23.75 ≤1011-15 ≥16 2.CLSI对“嗜麦芽”稀释法判断标准 药物名称S I R 替卡西林/棒酸≤16/232/2-64/2 128/2 头孢他定≤816 ≥32 米诺环素≤48 ≥16 左氟沙星 2 4 ≥8 复方新诺明≤2/38- 4/76 氯霉素≤816 ≥32（二）无折点细菌的药物敏感试验报告 1. 其他药物的敏感性报告: CLSI推荐的药物可以报告MIC值和敏感度（S、I、R），临床需要的其他药物的药敏试验报告可以直接报告MIC值但不报告S、I、R。 2. 不要用认为相近细菌的折点代替报告S、I、R，这会误导医生用药。
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参
考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
细菌分离培养方法及操作步骤 无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。 平板划线接种法 这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作： 1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌； 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。） 图3 平板划线接种法 4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。 注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤 药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线 2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
实训细菌的药物敏感性试验 教学目标 使学生掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。 材料准备 1．器材：温箱、天平、打孔机、滤纸、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。 2．试剂：蒸馏水。 3．培养基：普通琼脂平板。 4．菌种：金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。 5．药品：链霉素、金霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。 6．硫酸钡标准管：取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，用前充分振荡。 方法步骤 将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。 （一）含药纸片的制备 1．滤纸片最好选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径6mm的滤纸片，放在小瓶中或平皿中，在121.3℃灭菌15min，再置100℃干燥箱内烘干备用。 2．药液的配制用无菌蒸馏水将各药稀释成以下浓度：磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素、金霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000μg/ml。 3．含药纸片的制备将灭菌的滤纸片用无菌的镊子摊布于灭菌平皿中，按每张滤纸片饱和吸水量为0.01ml计算，50张滤纸片加入药液0.5ml。要不时翻动，使纸片充分吸收药液，浸泡1~2h后于37℃温箱中烘干备用。对青霉素、金霉素纸片的干燥宜采用低温真空干燥法，干燥后立即放入瓶中加塞，放干燥器内或置-20℃冰箱中保存。纸片的有效期一般为4~6个月。 （二）测验方法 1．钩取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于肉汤培养基中，37℃培养4~6h。 2．用灭菌生理盐水稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应用前需充分振动。 3．用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表面均匀涂抹。每种细菌分别接种1~2个琼脂平板。
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识 微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。 一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义 药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确： 实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 二、具体的专业要求 (一)标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。
细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理
体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。
临床细菌培养结果与药敏试验敏感性和耐药分析 发表时间：2016-07-09T12:43:14.773Z 来源：《医师在线》2016年5月第9期作者：夏芳 [导读] 通过对药材水分、灰分及浸出物的考察，制定了土五加的检查成分，有效地控制药材质量，从源头进行监控，保证药材的来源。夏芳 河南省南阳油田总医院河南南阳 473132 摘要：目的了解我院临床所送标本分离菌株的特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据。方法收集2015年1月—2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果与药敏实验作分析。结果 1782份标本由21个科室所送标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌检出116株，占分离菌的20%。革兰氏阴性杆菌中以大肠埃希菌分离率最高，为25.4%，依次为铜绿假单胞菌11.5 % ，阴沟杆菌9.1% 肺炎克雷伯菌8.6% ，鲍曼不动杆菌5.2%； 革兰式阳性球菌以表皮葡萄菌为主，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌阳性率为23.8%，耐甲氧西林凝固酶阴性球菌为44.1%，大肠埃希菌产ESBLS为66%，肺炎克雷伯菌产ESBLS为39.6%，奇异变形杆菌产ESBLS为50%，革兰氏阴性菌耐药相当严重，大部分耐药在50%以上。结论定期对临床所选标本的细菌培养和药敏鉴定结果进行分析，有助于临床合理用药，减少耐药菌的发生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。 关键词：细菌培养药敏试验 抗生素的合理使用已是人们关注的焦点，而合理使用抗生素的前提对于临床医生来说，基于两点出发：一是经验性用药；二是在细菌培养后，在药敏的指导下用药。而我们所说的“经验”性用药，是建立在细菌培养和药敏的回顾性总结的基础上而言的，所以检验科的微生物室应及时的总结临床所送标本分离菌构成特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据，为减少耐药菌的产生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。基于这一目的，我们收集了2015年1月至2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果及药敏试验结果，报告如下： 材料与方法 一、标本来源：住院与门诊共计21个科室，所送检的标本包括：血、尿、便、痰、分泌物、引流物、穿刺液、胸腹水等共计1782份。 二、材料与试剂：BACTEC9120全自动血培养仪、DL-96细菌鉴定系统、使用配套鉴定及药敏分析卡。 三、方法：各种标本以无菌方法接种于相应的培养基中，至于全自动培养箱孵育，如有细菌生长则进行鉴定和药敏试验，细菌的分离、鉴定严格按全国临床检验操作规程进行，药敏试验采用纸片法和MIC法。 四、统计学处理：用WHONET5.4统计软件进行处理和分析。 结果 一、1782份标本细菌的检出率 1782份标本由21个科室送检标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。临床各科送检标本数与检出率 本次分离出的555株细菌，革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌116株，占分离菌的20.9%。
医院细菌培养及药敏试验中常见问题 范文 Common problems in hospital bacterial culture and dru g sensitivity test 编订：JinTai College
医院细菌培养及药敏试验中常见问题范文 前言：毕业论文是普通中等专业学校、高等专科学校、本科院校、高等教育自学考试本科及研究生学历专业教育学业的最后一个环节，为对本专业学生集中进行科学研究训练而要求学生在毕业前总结性独立作业、撰写的论文。本文档根据毕业论文内容要求和特点展开说明，具有实践指导意义，便于学习和使用，本文下载后内容可随意调整修改及打印。 感染性疾病较常见，其中大多数为细菌感染和病毒感染，除病毒病原检测较困难未普及外，细菌培养及药敏试验是一项成熟普及的技术。详细内容请看下文毕业论文范文：医院细菌培养及药敏试验中常见问题。 按理所有感染性疾病均应根据培养及药敏结果选用抗生素，即细菌感染性疾病的病原学培养率应达到100%才是最理想的，由于有的病例需多次培养，故按培养次数占病例数百分比还应超过100%，只有这样，该试验指导临床的价值才能真正体现。 然而，由于许多原因，许多医院的感染性疾病的病原微生物标本送培养率都在50%以下，应当重复送检的标本更少，
同时，有限的送培标本还存在标本合格率低即采集时机、方法、采集途径、采集量的不科学问题，及时采集后的保护、送检时间、条件也有不当造成污染或病原体破坏而影响培养阳性率的情况，故在临床工作中正是由于感染性疾病病原送培率低、送培质量难保证，故造成了培养结果难以指导临床选药、经验性使用抗生素的现象极为普遍的情况，遇疗效不好则频繁更换，不仅疗效不佳，而且这又是产生和促进细菌耐药性增加的因素之一。 固定化、商品化的药敏试剂盒限制了抗生素药敏试验范围， 有时结果形同虚“试”。 微生物室把临床标本中的细菌培养出来后，做药敏试验 是购买商品化的药敏试验盒来进行的，而生产商家在药敏试剂板中只随机或意向性固定了近20中左右的抗生素，也就是说，药物敏感范围只能按药敏板中的抗生素种类做，不可能在本院使用时改变，如果这20种抗生素的种类均耐药，那么20种以外抗生素又哪些敏感呢?指导作用甚微，临床上又只得经验性 用药。 -------- Designed By JinTai College ---------
微生物培养、药敏试验的流程及意义 一、微生物培养及药敏试验的总述 微生物培养就是使用体外试验的方法检测可能导致感染的病原菌，并给以药敏结果，为临床医生针对某一特定的临床感染提供依据。而药敏试验则是承接微生物培养的一项工作，即对于培养得到的病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物的耐药性，来预测抗菌药物的临床治疗效果，从而为临床医生提供选用抗菌药物的依据来治疗感染。 对于检测到的可能的致病菌进行药敏试验时选择的药物是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定的药敏组合，不是人为可以随意添加或减少的。 （一）微生物的培养和药敏试验的流程基本为： ①将标本进行处理（不是所有的标本都需要处理）； ②将标本接种于不同的培养皿中在不同条件的培养箱中进行培养（不同的标本所含菌的种类不同，不同菌的生长条件不同，因此需要接种于不同的培养皿中）； ③24h后观察培养皿中细菌的生长情况： a.此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具的时间为48h以后。 b.若有细菌生长，要根据形态和气味等对细菌进行初步的判定，若能判定出细菌的种类，则进行相应的药敏试验。贴有药敏片的培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果的解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具的时间就是48h以后。 由于不同的细菌的生长的速度不同，有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h 培养后无法观察到明显的细菌生长的则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落的形态、气味等来观察判定细菌的种类然后进行药敏试验。这种微生物培养和药敏试验结果出具需要72h以后。 而血液、骨髓等标本则是利用不同于上述培养方式的方法进行培养。它有专门的培养瓶和仪器。这种仪器会自动监测培养瓶中的变化来判定有无细菌生长，若有细菌生长仪器会发出警报。在培养5天内任何时间发出警报的培养瓶都要抽取瓶中的物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报的培养瓶则视为阴性结果。因此血培养出具结果的时间为5～7天。 菌落的鉴定需要有雄厚的工作经验和熟练的相关基础知识。常规鉴定的方法有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应。在微生物室学习时发现，很多时候在不太确定细菌的种类时，检验人员也会结合理化特性来判定细菌种类。 （二）革兰氏染色、应用及意义 由于微生物的生长有时间限定，因此微生物培养和药敏试验没有急查的说法。最快的结果也只能是通过涂片来判定有无细菌生长和细菌染色后的颜色和形态，来给临床医生的用药提供依据。 革兰氏阳性菌和阴性菌因为细胞壁的结构不同，在革兰氏染色时染成不同的颜色。革兰氏阳性菌显示紫色、革兰氏阴性菌显红色或粉色。由于细胞壁的结构不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面均有较大差异。一般情况下，大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们差生内毒素，靠内毒素使人致病。 在治疗上，大多数革兰氏阳性菌对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感），革兰氏阴性菌对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中德流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），
细菌药敏试验实验报告解读 “医院有的药物不做药敏实验，医院没有的药物做什么药敏实验？”在临床上经常能听到临床医生们抱怨。“药敏报告显示敏感的药物，而临床治疗无效？”有时也让大夫们感到不解。这些问题使得临床医师不知道如何选择抗菌药物，那么如何正确解读药敏报告，合理选择抗菌药物报告呢。 我们先来了解几个概念： 最低抑菌浓度（MIC）：测量抗菌药物的抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18至24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度。 最小杀菌浓度（MBC）：抗菌药物能能使受试菌最初的活菌总数减少99.9%以上所需要的最低抗菌药物浓度。 折点：是最低抑菌浓度或者抑菌圈直径，用于区分离株为敏感、剂量依赖性敏感、中介、非敏感还是耐药 敏感（S）：通过折点来定义，指当对感染部位采用推荐剂量时，具有MIC值等于或低于敏感折点（或抑菌圈等于或高于敏感折点）的菌株通常可被抗菌药物所达到的浓度水平所抑制，产生可能的临床疗效。 中介（I）：通过折点来定义，包括这些MlC或者抑菌圈直径在中介范围内的菌株，其抗菌药物MIC接近于血液和组织中通常可达到的水平，而抗菌药物治疗的疗效可能低于敏感株。耐药（R）：通过折点来定义，指按常规用药方案，在药物通常可达到的浓度水平时，菌株不能被抑制，表明MIC值或抑菌圈直径可能在一个产生了某种特殊的耐药机制(如β-内酰胺酶）的范围内，而且治疗研究显示该药的临床疗效不可靠。 多重耐药（MDR）：是指有多重耐药性的病原菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨基糖苷类、大环内酯类、β－内酰胺类、喹诺酮类等）或三类以上抗菌药物同时耐药，而不是同一类的三种。 泛耐药(XDR)：广泛耐药细菌指细菌对常用抗菌药物几乎全部耐药，革兰氏阴性杆菌仅对黏菌素和替加环素敏感，革兰氏阳性球菌仅对糖肽类和利奈唑胺敏感。 全耐药（PDR）：泛耐药细菌指对所有分类的抗菌药物全部耐药，革兰氏阴性杆菌对包括黏菌素和替加环素在内的全部抗菌药物耐药，革兰氏阳性球菌对包括糖肽类和利奈唑胺在内的全部抗菌药物耐药。 药敏试验目的 使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物临床治疗效果并为临床医生针对某一特定感染问题选用药物提供依据。 判断标准
教你看懂药敏和菌培报告单！ 药敏试验是如何测定的根据美国临床标准委员会 推荐的纸片扩散法测定。将含有一定量抗菌药的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板表面，35℃培养过夜，测量纸片周围抑菌圈的大小确定细菌对药物的敏感性，抑菌圈越大敏感性越高。不同细菌对不同抗菌药敏感性的判定标准不同，例如头孢噻肟对肠杆菌科细菌的抑菌圈≤14 mm为R, 15 mm-22 mm为I,≥23 mm为S；苯唑西林对金黄色葡萄球菌抑菌圈≤10 mm 为R, 11 mm-12 mm为I, ≥13 mm为S。药敏试验报告中S、I、R 指的是什么S（susceptible），是指细菌对抗菌药敏感，使用常规剂量时的平均血浓度超过MIC 5倍以上，用常规剂量通常有效； I（intermediate）是指细菌对抗菌药中度敏感，常规剂量时平均血浓度等于或略高于MIC，需用高剂量或对体内药物浓缩部位的感染可能有效； R（resistance）是指细菌对某种抗菌药耐药，药物对细菌的MIC 高于应用常规剂量时的血浓度，应用常规剂量治疗通常无效。测试抗菌药物的品种是如何选定的抗菌药有近200种，药敏试验中没必要也不可能包括每种抗菌药。所测试的抗菌药纸片的种类是根据各类细菌对抗菌药的敏感性 及临床可能选用的药物而确定的，同类药物通常只选择1-2
个代表品种。NCCLS对各种细菌的药敏试验中宜测试的药物品种进行了推荐，如测定葡萄球菌属的药敏试验应包括苯唑西林、青霉素、红霉素、克林霉素、复方磺胺甲噁唑（SMZ-TMP）和万古霉素；此外可根据情况增加其他品种如氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、利福平和呋喃妥因等。为什么肠球菌属细菌药敏报告的测定药物这么少对头孢菌素类和多种抗菌药天然耐药，故药敏试验中所包括的抗菌药品种较少，NCCLS 推荐的测试品种为氨苄西林或青霉素、万古霉素（去甲万古霉素），此外亦可增加庆大霉素、氯霉素、红霉素、利福平、环丙沙星和呋喃妥因等，后两者适用于尿标本。 细菌对多种抗菌药物敏感时，如何选择最有效药物应根据感染部位、病情严重程度、药物的抗菌作用及药动学特点选择抗菌药。是否所有阳性培养均有临床意义 并非所有阳性培养都是真正的病原菌，原因可能有： ①所报告细菌为污染菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关，如为关节液、胸腔积液、等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌，据报道单次血培养凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、肠球菌阳性，污染可能性分别为85%、52%、22%。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。②可能为应用抗菌药后的菌群交替，
一、试验步骤 1.试验材料： 1.1普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 1.2药敏试纸：购买或自制。 1.3细菌：待做药敏试验的细菌。 1.4接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯。 1.5移液器、滴头。 2.试验准备： 2.1药敏片的准备：购买或自制。 2.1.1药敏片的制备：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅高压、15-20分钟消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.2.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。 2.2药液的制备(用于商品药的试验)：按商品药使用治疗量的比例配制药液；如商品药“百病消”按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此稀释液即为用于做药敏试验的药液。 3.试验操作方法： 3.1药敏片法 3.1.1在“超净台”中，用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。(另可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面，涂布均匀致密)。 3.1.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有
个人对细菌培养及药敏试验中常见问题的改进对策和建议 【关键词】细菌培养及药敏试验；改进对策和建议 【中图分类号】R470 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）03-01136-02 医院微生物室的细菌培养及药敏试验是防治感染性疾 病和监测耐药菌株、防范医院感染的重要手段和方法，对临床工作应该具有准确指导作用。然而，其实存在的问题较多，根据我们科多年的调研和体会，与此相关的若干不良现状却导致了药敏试验结果难以准确指导临床合理选用抗生素的 局面。现个人分析如下： 常见问题： 1：感染性疾病的微生物培养送检率低，且送检标本质量堪忧。 许多感染性疾病的病原微生物标本送培养率都在50% 以下，应当重复送检的标本更少，同时，有限的送培标本还存在标本合格率低即采集时机、方法、采集途径、采集量的不科学问题，及时采集后的保护、送检时间、条件也有不当造成污染或病原体破坏而影响培养阳性率的情况，故在临床工作中正是由于感染性疾病病原送培率低、送培质量难保证，故造成了培养结果难以指导临床选药、经验性使用抗生
素的现象极为普遍的情况，遇疗效不好则频繁更换，不仅疗效不佳，而且这又是产生和促进细菌耐药性增加的因素之一。 2：医院所购进使用的抗生素谱有一定的差异，与商品化药敏板中的抗生素谱较难一致。 3：医院内部缺乏科学系统的细菌耐药性评估和由此决定的抗生素退出医院机制。 通常是检验科（微生物室）、药剂科、院感科各管一段，没有形成合力，药剂科只管购进抗生素，检验科只出培养和药敏结果，院感科也只将一些数字通报出来，成为缺少深入分析的“死”数字。虽然大多数医院能将培养和药敏结果报告给临床医师，医师们也仅限于单对单地决定病人抗生素的选择，而很少有人对医院乃至全地区的细菌耐药性宏观上系统、科学地动态地分析评比，得出某一时期内的总趋势，以进一步指导医院建立起抗生素因耐药明显而定期退出医院 的机制，以利促进抗生素的合理使用和防止耐药性进一步加剧。 问题5：医院使用最多的前20 位抗生素品种与药敏试剂盒的品种吻合率低。 现在不少医院使用抗生素频率最多的抗生素往往不一 定是药敏试剂盒中的抗生素种类，而是盲目性或经验性使用的抗生素。从上述问题的调研不难看出，这个系列问题的解
德州市中医院2018年第一季度 细菌培养及药敏分析 2018年第一季度全院细菌培养送检165次（非重复送检），检出50株病原菌，标本阳性率为30.3%。其中革兰阴性菌35株（70%），主要为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌；革兰阳性菌11株（22%），主要为葡萄球菌。酵母菌4株（8%），主要为热带假丝酵母菌。 一、主要致病菌分布 二、送检标本分布
三、主要致病菌科室分布 四、主要致病菌耐药率 1、主要肠杆菌科耐药率
7株大肠埃希菌药敏分析 11株肺炎克雷伯菌药敏分析 2、主要非发酵菌耐药率
12株铜绿假单胞菌药敏分析 3、主要阳性球菌耐药率 7株屎肠球菌药敏分析
五、分析 （一）致病菌构成2018年第一季度细菌培养阳性致病菌以革兰阴性菌为主（35株），占70 %，主要为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌；其次为革兰阳性菌（11株），占22%，主要为屎肠球菌；最后为真菌（4株），占8 %。全院前三位致病菌依次为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌。 （二）主要致病菌耐药率分析 1、肠杆菌科细菌：肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物敏感率为100%，大肠埃希菌对碳青霉烯类药物敏感率为87.5%。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对阿米卡星敏感性均能达到100%。本季度培养出的11株肺炎克雷伯菌对氨苄西林已经100%耐药，对大多数头孢类药物敏感性尚可，能达到60%以上。而培养出的7株大肠埃希菌对氨苄西林也已经100%耐药对，对头孢类药物敏感性不一，其中头孢他丁87.5%敏感、头孢西丁100%敏感，但是对头孢唑林耐药率达100%，对环丙沙星的耐药率也为100%，对左氧氟沙星和复方新诺明的耐药率均达到87.5%。临床医生经验用药时应注意。 2、非发酵革兰阴性菌：2018年年1季度分离出12株铜绿假单胞菌，数量有增多的趋势。但其对对碳青霉烯类敏感度尚可，其中对泰能的敏感率为75%，对美罗培南的敏感率为91.7 %。对头孢类药物敏感度也可以，其中对三代中的头孢他啶敏感度达91.7%，对马斯平的敏感率达83.3%。 2018年第一季度细菌培养和耐药性分析提示：主要致病菌对头孢类抗菌药的耐药率呈现不一致，对左氧氟沙星、复方新诺明等药物的耐药性也逐渐增多。多重耐药菌的比例依然有增高趋势，各临床医师还是应注意细菌耐药情况，重视细菌培养，根据药敏结果合理选择抗菌药物，提高诊疗效果，减缓细菌耐药的发生。
我院常规细菌培养和药敏实验 培养，就是将收集到的标本放在特制的培养基里，使细菌生长、繁殖，然后，通过它的生长特点判断细菌的种类，从而选择适当的抗菌药物治疗。但是，抗菌药物的杀菌作用并不是一成不变的。许多细菌在繁殖、传播的过程中能产生耐药性，使原本有效的药物变为无效。所以，只了解到细菌的种类是不够的，必须作药物敏感试验，通过药敏试验，可以观察到哪种抗菌药物对该致病菌有较好的杀灭作用，也可观察到该致病菌对哪种抗生素有了抗药性。 1.痰培养的临床意义 人体的肺部或支气管发生细菌性感染时，痰液量明显增加，痰液细菌培养，分离出病原菌，有助于对下呼吸道感染性疾病的诊断和治疗。了解在治疗基础疾病长期应用广谱抗生素、激素、细胞毒药物继发霉菌性肺炎的发病情况。指导临床根据痰培养及药敏结果决定使用抗生素，可有效防止抗生素滥用、错用的情况。 痰液培养常见的致病菌： 革兰阳性菌：有肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌、放线菌、奴卡菌、白喉棒状杆菌等。 革兰阴性菌：卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌、假单胞菌、军团菌等。 培养分离出一些真菌，有助于真菌性感染的诊断。 做病毒分离：可分离到某些病毒，如分离到禽流感病毒H5N1，甲型H1N1，有较大的临床意义。 2．粪便培养的临床意义 正常人的肠道中栖居的微生物种类和数量繁多，组成了对人类健康极为重要的体内微生态环境——微生态菌膜屏障，参与营养、消化、吸收及清洁肠道、维护健康的作用。当致病菌和病毒在肠道内繁殖，就会引起腹痛、腹泻。对粪便进行细菌培养，可以从肠道大量细菌中分离出引起腹痛、腹泻的病原菌，以便及时进行治疗。 粪便中常见的肠道致病菌： 革兰阳性菌：有金黄色葡萄球菌、厌氧链球菌、产气荚膜梭菌、难辨梭菌等。 革兰阴性菌：有伤寒及其他沙门菌、痢疾志贺杆菌、致病性大肠杆菌、弧菌属、产气单胞菌、邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森菌、弯曲菌等。 3．尿液培养（计数）的临床意义
医院细菌培养及药敏试验中常见问题调研及改进对策探讨 发表时间：2010-12-21T15:22:51.400Z 来源：《中国健康月刊》2010年第11期供稿作者：刘勇 [导读] 故以下建议侧重以问题解决角度提出，同时也涉及了部分具体部门和科室。 刘勇（四川省自贡市第三人民医院 643020） 医院微生物室的细菌培养及药敏试验是防治感染性疾病和监测耐药菌株、防范医院感染的重要手段和方法，对临床工作应该具有准确指导作用。然而，其实存在的问题较多，根据笔者的调研和体会，当前医院细菌培养及药敏技术虽本身已普及到县级医院，但是与此相关的若干不良现状却导致了药敏试验结果难以准确指导临床合理选用抗生素的局面。本文试就对这些问题的调研结果进行剖析后提出改进对策和建议。 1 与细菌培养和药敏试验相关的问题现状简析 问题1：感染性疾病的微生物培养送检率低，且送检标本质量堪忧。 感染性疾病较常见，其中大多数为细菌感染和病毒感染，除病毒病原检测较困难未普及外，细菌培养及药敏试验是一项成熟普及的技术。按理所有感染性疾病均应根据培养及药敏结果选用抗生素，即细菌感染性疾病的病原学培养率应达到100%才是最理想的，由于有的病例需多次培养，故按培养次数占病例数百分比还应超过100%，只有这样，该试验指导临床的价值才能真正体现。 然而，由于许多原因，许多医院的感染性疾病的病原微生物标本送培养率都在50%以下，应当重复送检的标本更少，同时，有限的送培标本还存在标本合格率低即采集时机、方法、采集途径、采集量的不科学问题，及时采集后的保护、送检时间、条件也有不当造成污染或病原体破坏而影响培养阳性率的情况，故在临床工作中正是由于感染性疾病病原送培率低、送培质量难保证，故造成了培养结果难以指导临床选药、经验性使用抗生素的现象极为普遍的情况，遇疗效不好则频繁更换，不仅疗效不佳，而且这又是产生和促进细菌耐药性增加的因素之一。 问题2：固定化、商品化的药敏试剂盒限制了抗生素药敏试验范围，有时结果形同虚“试”。 微生物室把临床标本中的细菌培养出来后，做药敏试验是购买商品化的药敏试验盒来进行的，而生产商家在药敏试剂板中只随机或意向性固定了近20中左右的抗生素，也就是说，药物敏感范围只能按药敏板中的抗生素种类做，不可能在本院使用时改变，如果这20种抗生素的种类均耐药，那么20种以外抗生素又哪些敏感呢？指导作用甚微，临床上又只得经验性用药。 问题3：每家医院所购进使用的抗生素谱都有一定的差异，与商品化药敏板中的抗生素谱较难一致。 不同地区、不同级别的医院，由于各种原因，所使用的抗生素品种谱存在差异，而常用抗生素品种超过200 种以上，不同的医院常用抗生素选择可达其中的几十种或百多种；而商家生产的药敏板只固定了20 种左右的抗生素，也就是说药敏板试验结果的指导价值不仅只限于这20 来种抗生素的使用，而且这20 种抗生素谱与医院所有抗生素谱的吻合度还很低（“谱-谱脱节”现象），尤其药敏抗生素谱与医院用量最多的前20 位抗生素谱吻合率更低，经常是培养结果出来却是敏感的抗生素医院没有、而医院现有与药敏试验吻合品种的抗生素均属不敏感种类，这时医院只好临时又去到处紧急购买所缺敏感抗生素，有时就会出现“等待”现象影响治疗。 问题4：医院内部缺乏科学系统的细菌耐药性评估和由此决定的抗生素退出医院机制。 大多数医院通常是检验科（微生物室）、药剂科、院感科各管一段，没有形成合力，药剂科只管购进抗生素，检验科只出培养和药敏结果，院感科也只将一些数字通报出来，成为缺少深入分析的“死”数字。虽然大多数医院能将培养和药敏结果报告给临床医师，医师们也仅限于单对单地决定病人抗生素的选择，而很少有人对医院乃至全地区的细菌耐药性宏观上系统、科学地动态地分析评比，得出某一时期内的总趋势，以进一步指导医院建立起抗生素因耐药明显而定期退出医院的机制，以利促进抗生素的合理使用和防止耐药性进一步加剧。问题5：医院使用最多的前20 位抗生素品种与药敏试剂盒的品种吻合率低。 现在不少医院使用抗生素频率最多的抗生素往往不一定是药敏试剂盒中的抗生素种类，而是盲目性或经验性使用的抗生素，比如使用最多的前20位抗生素品种与药敏试剂盒品种的吻合率仅20～50%左右，如何能即时满足和指导临床需要呢？因此，有待把这两个“谱”做相互“靠近运动”，逐渐达到完全吻合的目标。 2 科学利用药敏试验更好地指导临床用药的策略讨论 从上述问题的调研不难看出，这个系列问题的解决不是一个简单工作，而是一个社会性系统工程，社会大系统涉及到药企、生物制品开发公司、医院以及可能需要出来协调的卫生行政部门甚至政府；而医院内问题的解决也不是一个科室能完成的，院内的小系统工程必须由院感科、医务科、护理部、药剂科、临床微生物室、临床各科共同协作完成，还需要医院行政管理干预才能完整调节，故以下建议侧重以问题解决角度提出，同时也涉及了部分具体部门和科室。 对策1：多方努力提高感染性疾病和医院感染病例的病原学送培率。 送培病原学的标本少，临床经验性、盲目性用抗生素就更普遍，易造成耐药现象，故提高病原学送培率是感染性疾病针对性治疗的最起码要求，故应力求最大限度完成，建议医院采取管理措施实现对抗生素使用“用药必检”或对感染性疾病“逢菌必检”的双重战略，以促进现有不良局面的改善。 对策2：建议药敏试验盒（板）的生产、购进、使用试行个体化的订单制。 由于不同地区或医院使用抗生素品种与观念习惯、地区经济水平等多因素有关，比如三级医院与二级医院之间，大城市与中小城市医院间，城市与农村医院间的抗生素使用都有较大差异，故目前市售商品化、固定抗生素的药敏盒（板）很难完全吻合某一家医院，“众口难调”现象明显，而某一家医院很难购到与本院抗生素谱完全一致的“本土化药敏试剂盒”，故笔者建议有关部门协调，采取由各家医院申报自家个体化的药敏试剂盒抗生素谱，以订单制邀请生产商家量身定做个性化、本土化的药敏试剂盒，彻底解决前述问题。 对策3：引导临床医师“谱对谱”用药。 提高临床病原送培率以及医院抗生素谱—药敏抗生素谱相吻合对应后，必须严格规范临床医师“谱对谱”选用抗生素的行为，即医院不仅定期公布耐药菌谱和抗生素耐药谱，而且强化和引导医师经常把医院耐药菌谱熟记于心，选药时与相应耐药率高的抗生素谱相比对，尽量选择较少耐药的抗生素针对性给药，既提高疗效，又减少耐药。 对策4：动态调整“本土抗生素谱”和“本土药敏试剂盒抗生素谱”。 医院的抗生素谱应不断调整，这不仅有当前医疗保险和新型农村合作医疗政策对医院抗生素目录的管理要求，更重要的是十分必要用