甲状腺球蛋白抗体测定操作规程

杭州余杭邦尔医院检验科 免疫室项目SOP文件

文件编号：YHBE-JYK-MYS-022 标准操作规程

甲状腺球蛋白抗体测定抗体 编制人：刘凤婷

生效日期：2018年1月1日 审核人：钟剑

版本号/修订号：1/3 批准人：张延亮

发布部门：检验科 页码数：86-89页

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甲状腺球蛋白抗体抗体测定标准操作规程

1 检验申请

单独检验项目申请：甲状腺球蛋白抗体测定 (缩写Anti-Tg)；检验项目申请：甲状腺组合项目测定；临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理

2.1 标本采集

2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本

2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2 对于测定和吸样有干扰的标本：如近期使用鼠源性单克隆抗体诊断后采取。

2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2 标本保存

2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。

2.2.2 标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定48h。需较长时间保存应将血清存放于-20℃。冰冻标本仅可冻融一次。

2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。

2.3 标本采集的注意事项

2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

2.3.2 采血后应使血液充分凝固，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白；可使用选用肝素、EDTA抗凝的血液标本。

3 方法原理

Anti-Tg测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：

第一步：将标本与包被着抗生物素抗体的超顺磁性磁粒（磁珠)以及Tg-生物素标记物添加到反应管中，经过孵化，样本中Tg和Tg-生物素标记物结合，同时Tg-生物素与包被在磁珠上的抗生物素抗体结合。反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合物质。

第二步：将Tg-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，Tg-碱性磷酸酶标记物与结合在磁珠上的Tg抗体结合。反应完成后，磁场吸附磁珠，洗去未结合的物质。

第三步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量。所产生光子数与样本内的Anti-Tg浓度成正比。样本内分析物的量油校准曲 杭州余杭邦尔医院检验科 免疫室项目SOP文件

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87 线来确定。

4 试剂及其他用品

4.1 试剂：专用甲状腺球蛋白抗体测定试剂盒，由深圳迈瑞公司出品。未打开的试剂包保存于2～8℃，有效期18个月。开启的试剂包载入系统中可使用28d。

4.2 试剂盒组分

剂盒组分试剂1磁珠包被物（Ra）：

组分包被着抗生物素抗体的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：包被着抗生物素抗体的超顺磁性微粒，0.2g/L;MES缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。

装量:2×30人份/盒，2×2.7ml；2×50人份/盒,2×3.8ml；2×100人份/盒,2×6.6ml。

4.2.2 试剂2酶标记物（Rb）

组分：甲状腺球蛋白-碱性磷酸酶标记物，稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：甲状腺球蛋白抗体-碱性磷酸酶标记物，3mg/L；PB缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。

装量:2×30人份/盒，2×5.0ml；2×50人份/盒,2×7.8ml；2×100人份/盒,2×14.8ml。

4.2.3 试剂3生物素标记物（Rc）

组分：甲状腺球蛋白抗原-生物素标记物，稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：甲状腺球蛋白抗体-碱性磷酸酶标记物，3mg/L；PB缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。

装量:2×30人份/盒，2×5.0ml；2×50人份/盒,2×7.8ml；2×100人份/盒,2×14.8ml。

4.2.4 试剂4生物素标记物（Rd）

组分：缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：Tris缓冲液，50mmol/L；Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。

装量:2×30人份/盒，2×2.4ml；2×50人份/盒,2×3.5ml；2×100人份/盒,2×6.3ml。

4.2. 试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次，无须特殊准备。

4.3 其他试剂与用品

4.3.1 化学发光底物：发光剂底物液。

4.3.2 清洗缓冲液、反应杯等。

5 校准品与校准模式

5.1 校准品: 深圳迈瑞公司提供的Anti-Tg专用校准液。需贮2～8℃。

5.2 校准类型和校准点数目：非线性模式，4个校准点。

5.3 校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔56d后需要重新校准。每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。

5.4 校准液重建方法：液体试剂，直接使用。

6 质控品与室内质控规则

6.1 质控品：采用深圳迈瑞公司提供配套的质控品。 杭州余杭邦尔医院检验科 免疫室项目SOP文件

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88 6.2 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。

6.3 质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。

6.4 质控规则：采用L-J质控图，以±3s为失控限。标准差由本室实验数据得出。

6.5 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正

并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。

7 适用仪器

深圳迈瑞公司CL-1200i自动发光免疫分析仪。

8 标本检测步骤

装载试剂 → 进行校准 → 进行质控 → 输入标本检测项目 → 加载标本

→标本测定 → 结果复核 → 报告

9 主要分析参数

无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本量15 µL。

10 结果计算

仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以IU/mL表示。

11 检验结果的报告及范围

11.1 结果的报告

11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11.2 报告范围：0.00 ~ 4.00 IU/mL，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。

12 操作性能

12.1 精密度：批内CV＜4.5％，批间CV＜5.0％。

12.2 灵敏度：0.9 IU/mL。

12.3 方法的有限性及干扰因素：胆红素≤400mg/dL、TG≤3000 mg/dL、Hb≤500

mg/dL、总蛋白≤10g/dl时，检测结果的干扰偏差±10%度范围内。

13 参考范围及医学决定水平

参考值（血清）：0.00 ~ 4.00 IU/mL

14 临床意义

14.1 甲状腺球蛋白（TBG）是一种潜在的自身抗原，当进入血液后可刺激机体产生TGA。TGA是甲状腺疾病中首先发现的自身抗体，具有高度种属特异性，是诊断自身免疫甲状腺疾病(AITD)常用指标。

在自身免疫性甲状腺炎患者中可发现TGA浓度升高，出现频率大约是70-80%。Graves病TGA的阳性率约为60%，经治疗后滴度下降提示治疗有效，如果滴度持续较高，易发展成粘液性水肿。甲亢病人测得TGA阳性且滴度较高，提示抗甲状腺药物治疗效果不佳，且停药后易复发。甲状腺癌与TGA呈一定的相关性，阳性率可达13%-65%，TGA值的升高是肿瘤恶化的一种标志。 杭州余杭邦尔医院检验科 免疫室项目SOP文件

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89 15 结果审核以及与相关项目的联系

15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。

15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。

15.3 相关项目：审核与临床用药情况是否相符，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因

16 有关引用程序与文件

16.1CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。

16.2 免疫检验室内质控标准操作程序。

16.3 检验结果审核程序。

16.4 标本送检和接收程序。

17 参考文献

17.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社,

2004.

17.2测定试剂盒说明书。

17.3 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学出版社，2006.

18 本SOP变动程序

任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批准。

19 本SOP涉及的记录与表单

19.1 剂装载记录表

19.2 质控记录

19.3 失控及失控处理记录

19.4 检验结果审校核记录