湖南天济草堂制药有限公司洁净区消毒灭菌方法验证报告
目录1概述
2验证目的
3适应范围
4责任者
5验证小组成员
6验证依据
7验证小组成员培训确认
8验证内容
8.1 概述
8.2 消毒方法
8.3消毒效果的确认(挑战性实验)
8.4 臭氧消毒周期评价
9 消毒周期的验证结果分析与评价
10 消毒周期的验证结论
11 附录：
附录1臭氧消毒挑战性实验结果记录表
附录2臭氧消毒挑战性实验结果记录表
附录 3 消毒后沉降菌及浮游菌监测结果
洁净区消毒灭菌方法验证报告
1、概述:为保证药品质量，需要对洁净区内定期进行消毒，根据验证管理规程制定实施计划，对洁净区的设备、设施进行臭氧消毒及甲醛-高锰酸钾法，评价其消毒效果及消毒周期。臭氧消毒是利用 HVAC 系统的循环风作为臭氧的载体，即将臭氧发生器产生的臭氧体由HVAC 系统中的净化风机产生的压力风源扩散至整个洁净区域，同时对 HVAC 系统（净化空调，初、中效过滤器，送回风管道，高效过滤器等）起到杀灭细菌和霉菌的效果。臭氧发生器放置在空调机内中效过滤器后面。消毒时，打开空调机及臭氧发生器，关闭新风和出风，使洁净区内空气保持内循环进行房间灭菌。甲醛具有使菌体蛋白质变性凝固和溶解菌体类脂，可以杀灭物体表面和空气中的细菌繁殖体、芽胞下真菌和病毒,所以经一定时间后可杀死病原微生物。
2、验证目的：通过实施消毒效果及消毒周期的验证，确定消毒剂的消毒效果及消毒周期，检并确认消毒效果是否符合要求。
3、验证范围：固体制剂D级洁净区消毒效果及消毒周期验证。
4、责任者：生产部、质量部、固体制剂验证小组。
5、验证小组成员：
6. 验证依据：
《药品生产质量管理规范（2010年修订）》
《组合式净化空调机组操作规程》 TJCT-SB-GZ-01-008 00
《LSD-340冷水机组操作规程》 TJCT-SB-GZ-01-009 00
《组合式净化空调机组维护保养操作规》 TJCT-SB-GZ-05-003 00
《LSD-340冷水机组维护保养操作规程》 TJCT-SB-GZ-05-004 00
《洁净室（区）环境监测标准操作规程》 TJCT-ZL-GZ-08-011 00
《洁净空调系统（洁净区空气）消毒标准操作规程》 TJCT-WS-GZ-01-017 01 《GJF-F臭氧发生器操作规程》 TJCT-SB-GZ-01-006 00
7验证小组成员培训确认：
本方案批准后，在生效执行之前，应对验证小组成员进行培训，培训考核合格后验证小组成员方可进行设备的验证工作。
8、验证内容：
8.1概述：
8.1.1臭氧（O3）是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分
子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。我公司现采用GJF-F臭氧发生器对各固体制剂车间D级洁净室（区）进行消毒。
8.1.2甲醛-高锰酸钾法是通过高锰酸钾具有强氧化性，但和甲醛常温下反应较慢，但是反应放热，反应加快促进甲醛的挥发,产生甲醛气体，甲醛能使菌体蛋白质变性凝固和溶解菌体类脂，可以杀灭物体表面和空气中的细菌繁殖体、芽胞下真菌和病毒,所以经一定时间后可杀死病原微生物。
8.2 消毒方法：
8.2.1 臭氧消毒方法：
8.2.1.1将空调机组新风阀关闭90%、排风管完全关闭、直排风门，与一般区相通的所以门、传递窗关闭。
8.2.1.2按《GJF-F臭氧发生器操作规程》进行空气臭氧发生器操作，实施消毒。洁净区空气灭菌时间根据各级洁净区空气灭菌验证报告确定：臭氧浓度保持10—15 ppm，保持120 min，达到灭菌效果；
8.2.1.3消毒满2小时以后，开启空调系统排风管风门和新风管风门，对消毒臭氧进行充分排放和置换，时间不低于2小时。
8.2.1.3将空调机组新风阀、排风阀恢复至空调机组正常运行状态，运行120分钟后，停机待用。
8.2.2 甲醛-高锰酸钾消毒方法：
8.2.2.1消毒剂和消毒器具的准备：按每立方米空气用37～40%的甲醛10ml,高锰酸钾2～3克。按提取车间洁净区体积520 M3，制剂洁净区体积1970 M3，计算需要甲醛、高锰酸钾用量，将上述消毒剂均分成多份，另准备不锈钢桶，里面各套1个厚塑料袋；
8.2.2.2将洁净区缓冲间与二更之间的门（与一般区相通的所有门传递窗）关闭，内包其余各门全部打开。制剂车间分8份，将8个小不锈钢桶经过洁净处理后从穿递窗递入，分别置于制粒、总混、压片1、2室、充填1、2室、制丸、粉碎功能操作间；提取车间分为3份，分别置于收膏1、2室、粉碎功能操作间；
8.2.2.3关闭空调系统排风管风门和新风管风门、直排风门，将消毒剂中的甲醛分别倒入小不锈钢桶中的塑料袋内，然后将高锰酸钾加入，开始熏蒸，人迅速离开。
8.2.2.4开启主风机运行约30分钟，使消毒气体在空调系统、送、回风管和洁净区组成的密闭系统内均匀分布，以获得最佳的消毒效果。停止空调，空调系统、洁净区熏蒸
消毒，熏蒸消毒的时间为12小时；
8.2.2.5消毒满12小时以后，开启空调系统排风管风门和新风管风门，对消毒蒸汽进行充分排放和置换，时间不低于12小时；
8.2.2.6将前述不锈钢桶取出洁净区，将塑料袋连同残渣弃去，不锈钢桶清洁后放回定置位置。
8.3 消毒效果的确认(挑战性实验)：
8.3.1目的：确认预定的消毒程序在洁净区空间消毒后，微生物杀灭率≥90%。 8.3.2 金黄色葡萄球菌挑战性试验：
8.3.2.1生物指示剂的制备：取金黄色葡萄球菌制备菌液；培养48小时后，稀释成约50～100cfu /ml 。临用前在营养琼脂培养基平皿中加入1ml 上述菌液，并使之在培养基表面均匀分布。
8.3.2.2 选取关键房间进行测试。每个房间放置2碟。
8.3.2.3 消毒的同时打开注有菌液的培养皿上盖，至臭氧消毒程序结束。
8.3.2.4 把培养皿放入30～35 ℃恒温箱中培养48 h ，进行菌落计算。同时以未经处理的培养皿做空白对照。
8.3.2.5计算杀灭率：
杀灭率（%）=数消毒前对照组平均菌落消毒后平均菌落数
数消毒前对照组平均菌落 ×100%
8.3.2.7 测试结果：
8.3.2.7.1 臭氧消毒挑战性实验结果：见附录1
8.3.2.7.2 甲醛-高锰酸钾熏蒸消毒挑战性实验结果：见附录2 8.3.2.8 测试结果评价：
记录人： 时间： 复核人： 时间： 8.3.2.8 结果分析及消毒效果的评价：
记录人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日
8.4 臭氧消毒周期评价：
8.4.1 消毒后每隔一周对主要功能间取样进行检测，微生物数量应呈上升趋势，当微生物数量达到纠偏限度时，再次对系统进行消毒，确定消毒周期。
8.4.2 限度要求：依据 2010 版《药品生产质量管理规范》和《药品生产验证指南》
8.4.3 取样位置及取样方法：
8.4.3.1 取样位置每个操作间各取2个点。
8.4.3.2 取样方法：按照《洁净室（区）环境监测标准操作规程》取样。
8.4.4 沉降菌及浮游菌检测结果：见附录3～4
8.4.5 沉降菌及浮游菌检测结果统计表：
表一
臭氧消毒法消毒效果统计
表二
甲醛-高锰酸钾熏蒸消毒效果统计
9 消毒周期的验证结果分析与评价