新型抗HER2嵌合性抗原受体的构建及其体外、体内功能的评价研究背景基因工程化T细胞过继性免疫治疗肿瘤是目前免疫系统抗肿瘤研究中的热点,主要包括基因工程化T细胞受体(T cell receptor, TCR)和基因工程化嵌合性抗原受体(chimeric angtigen receptor, CAR)两种方法。T细胞识别肿瘤细胞发生免疫反应的过程,是由T细胞表面表达的TCR与肿瘤细胞表面表达的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)提呈的肿瘤相关抗原相(Tumor associated antigen, TAA)结合引发的。
TCR基因是由α-和β链组成的,这两条链可以来源于肿瘤特异性的T细胞。比如,将病人的肿瘤细胞与T细胞共培养,从与肿瘤细胞发生反应的T细胞中克隆出TCR基因。
α和β链与CD3复合体中的Y-、6-、ε-、<-链相关。当TCR与肿瘤细胞表面MHC复合体提呈的肿瘤相关抗原片段结合后,免疫受体酪氨酸基活化基序发生磷酸化,引起胞内信号传导,导致T细胞释放细胞因子和毒性复合体。
TCR基因的优点在于TAA可以从肿瘤细胞中整个蛋白克隆出来,包括胞内部分。所以,无论肿瘤相关抗原发生变异与否,TCR基因工程化T细胞抗肿瘤细胞的反应接近于体内真实的免疫反应反应过程。
但是,应用TCR的局限性在于,因为MHC限制的存在,每个TCR基因只能用于一部分病人。因此,为了扩大基因工程化T细胞的适应症,非MHC限制性的基因重组CAR的方法就诞生了。
CAR主要由胞膜外抗原结合区、铰链区和胞内信号传导区三部分构成。膜外区是一段单链可变区结构域(single chain Fv domain,scFv),具有特异性识别并结合TAA的功能。
其构成是将单克隆抗体的重链可变区(the variable region of heavy chain, VH)和轻链可变区(the variable region of light chain, VL)用一可弯曲的多肽接头(Linker)将VH和VL连接起来,构成VH-Linker-VL或VL-Linker-VH。铰
链区通常是由免疫球蛋白超家族组成,比如CD8, CD28和IgG。
胞内信号传导区主要是由CD3复合体中的ζ-链组成。近年来,随着研究的深入,人们发现,在胞内区的信号传导区加入共刺激分子如CD28或／和CD137,可以加强T细胞的抗肿瘤免疫反应活性,因此,出现了二代及三代的CAR。
表达CAR的T细胞可以直接识别并结合肿瘤细胞表面的TAA, CAR将信号传入T细胞内,激活T细胞分泌细胞因子包括穿孔素、颗粒酶、INF-γ、TNF-α等,从而发挥杀伤肿瘤细胞作用。因此,CAR T细胞是MHC非限制性的。
CAR T细胞将抗体-抗原特异性结合能力以及T细胞介导的杀伤功能结合于
一体,制作简单,应用广泛,是免疫抗肿瘤治疗的重要方法。嵌合性抗原受体方法应用的关键是确定一种肿瘤相关性抗原,在肿瘤细胞表面高表达,而在正常组织
中无表达或者低表达。
原癌基因人上皮生长因子受体2(human epidermal growth factor
receptor2, Her-2/neu)又称HER2或C-erbB2基因,在多种肿瘤的发病及临床进程中发挥重要作用,体外与动物实验已明确显示HER2/neu基因扩增、蛋白过度表达在致瘤转化和肿瘤发展中起着关键作用。研究证实：30%以上的人类肿瘤组织中,如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、宫颈癌、前列腺癌、胃癌、唾液腺癌、舌癌、头颈部鳞癌、非小细胞性肺癌等,均伴有Her2/neu基因的扩增及p185蛋白的过度表达,而正常组织中p185蛋白为阴性或微量表达。
而在乳腺癌中,大约有1/3的病人过表达HER2蛋白。过表达HER2蛋白使肿
瘤的侵袭性更强,是乳腺癌病人预后不良的独立的危险因素。
尽管抗HER2单克隆抗体如曲妥株单抗在临床的应用使部分病人获益,但是其价格昂贵,很大程度上限制了其大规模临床应用。HER2蛋白位于细胞表面,容易被抗体识别,因此,HER2蛋白可作为表达嵌合性抗原受体T细胞抗肿瘤治疗的一个理想靶点。
中国科学技术大学免疫学研究所刘兢教授课题组采用表面表位包埋法(surfaceepitope masking method, SEM)生产的人源化单克隆抗体A21是一种新型的抗ErbB2抗体,它具有很强的结合特异性和抑瘤活性；可特异性识别HER2胞外区C-端的第Ⅰ结构域,远离HER2受体二聚化功能位；而帕妥珠单抗及曲妥珠单抗分别识别第Ⅱ及第Ⅳ子域。因此,chA21是不同于曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的新型的抗HER2的单克隆抗体,可以无空间限制性的识别p185蛋白的同源二聚体。
以这种新型的抗HER2的抗体为基础的CAR T细胞过继性免疫治疗肿瘤目前尚无人研究。本研究中的人源化的抗HER2的ch A21scFv由中国科技大学刘兢教授惠赠。
目的本研究旨在以ch A21scFv为基础构建靶向HER2的第二代
(chA21scFv-28ζ)嵌合性抗原受体,利用慢病毒载体将嵌合性抗原受体基因转染至T淋巴细胞；观察表达嵌合性抗原受体的T淋巴细胞的生物学特点；评价表达嵌合性抗原受体的T淋巴细胞体外的抗肿瘤的作用。方法1.重叠PCR法构建靶向HER2的嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ,并制备成慢病毒颗粒。
2.利用流式细胞仪技术检测肿瘤细胞表面HER2抗原的表达。
3.利用慢病毒载体将嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ基因转导至T淋巴细胞,利用流式细胞仪
技术检测T淋巴细胞表面嵌合性抗原受体的表达效率以及生物学特点。
4.检测表达嵌合性抗原受体的T淋巴细胞在体外抗HER2+肿瘤功能：ELISA 法检测细胞因子释放,51Cr释放实验检测CART细胞杀伤肿瘤细胞的能力。结果
1.成功构建了靶向HER2的嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ并进行测序。
2.流式细胞仪分析表明人乳腺癌细胞SKBR3、T47D、MCF-7、MDA-MB-231和卵巢癌细胞株SKOV3, OVCAR3, A2780和A1847都不同程度的表达HER2,其中SKBR3、SKOV3为高表达,其他细胞株为中表达或者低表达。人乳腺癌细胞株MDA-MB-468为HER2阴性的肿瘤细胞株,小鼠肺癌细胞株TC-1也不表达人HER2抗原。
3.靶向HER2的嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ基因通过慢病毒载体成功转入T淋巴细胞并高表达,培养扩增后约75%的淋巴细胞为CD8+T淋巴细胞,并大部分(约80%)呈中央记忆型(CD45RO+CD62L+)。
4.表达靶向HER2的chA21scFv-28ζ嵌合性抗原受体的T细胞在体外能够特异性识别HER2(+)的肿瘤细胞,并大量释放细胞因子IFN-γ和IL-2。
表达靶向HER2的chA21scFv-28ζ嵌合性抗原受体的T细胞能够杀伤并裂解HER2(+)的乳腺癌及卵巢癌细胞系,但不能裂解HER2(-)的肿瘤细胞系。结论
1.chA21scFv-28ζ CAR设计成功,并能制备成慢病毒颗粒；
2. chA21scFv-28ζCAR可以成功转染T细胞并在T细胞内稳定的表达；
3. chA21scFv-28ζ CAR转染T细胞分化为中央记忆型,并能大量增殖,其中绝大多数为CD8+T细胞；
4.chA21scFv-28ζ CAR T细胞可以高效裂解HER2阳性的肿瘤细胞并分泌大量的细胞因子INF-γ和IL-2。
研究背景尽管一代的CAR T细胞在实体瘤中基本上没有取得明显的临床效果,
但是以二代及三代CAR为基础的T细胞过继免疫抗肿瘤治疗已在多种肿瘤的临床实验中显示成效,在血液系统肿瘤中有更明显的优势。Pule等对8例晚期神经母细胞瘤患者中应用CAR T细胞治疗,4例病人的肿瘤出现了坏死,其中1例病人获得完全缓解。
Kochenderfer等对4例晚期淋巴瘤患者进行CART细胞治疗,3例病人获得部分缓解。美国宾夕法尼亚大学的Carl June教授研究组利用CAR T细胞治疗3例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者,发现CAR T细胞可以在体内扩增1000倍以上,维持有效抗肿瘤活性、清除CLL细胞达6个月以上。
部分CAR T细胞甚至可以以记忆细胞形式存在,在病人体内再次接触CLL细胞时产生快速反应。其中,2例患者治疗后病情达到完全缓解。
该研究结果刊登于《Sci Transl Med))和《N Engl JMed》上。因此,CAR T 细胞过继免疫抗肿瘤治疗具有十分广阔的临床应用前景,而Maus在等更是把CART细胞形容成血液系统肿瘤中的“第一把交椅”。
CART细胞在实体肿瘤中的重要性也被大家所认识,针对多种肿瘤相关抗原的临床实验也在进行当中。前期HER2特异性的CART细胞主要是是曲妥珠单抗为基础,并已经在许多的肿瘤模型中取得成功,包括乳腺癌,卵巢癌,髓母细胞瘤,胶质母细胞瘤和骨肉瘤。
本研究中所采用的chA21为新的抗HER2的单克隆抗体,它与HER2蛋白的结合位点不同于曲妥珠单抗及帕妥珠单抗。我们已经从体外实验发
现,chA21scFv-28ζCAR可以成功转染T细胞并在体外高效裂解HER2阳性的肿瘤细胞,所以,以chA21为基础的HER2特异性的chA21scFv-28ζ CAR T细胞的抗肿瘤效果值得进一步研究。
目的本研究旨在观察表达chA21scFv-28ζ CAR T淋巴细胞在HER2+R乳腺癌小鼠肿瘤模型中的作用特点,评价chA21scFv-28ζ CAR T淋巴细胞对HER2+乳腺癌肿瘤生长的影响。方法1.利用NOD-SCID小鼠和HER2+乳腺癌细胞株SKBR3来构建小鼠乳腺癌肿瘤模型。
2.小鼠成瘤后,利用尾静脉注射的方法向小鼠体内注射2x107chA21scFv-28ζ CART淋巴细胞,每周一次,共2周。以未转染的激活T细胞作为对照。
3.游标卡尺记录小鼠肿瘤体积的变化。
4.小鼠肿瘤体积达到2mm3时,处死小鼠,获取小鼠肿瘤组织,称重,并免疫组化法检测肿瘤组织内人CD3+T淋巴细胞。
结果1.成功构建HER2+小鼠乳腺癌SKBR3肿瘤模型。2.小鼠体内注射未转染T细胞及chA21scFv-28ζ CAR T淋巴细胞后小鼠位出现腹泻、体重下降、皮疹等不良反应。
治疗组小鼠肿瘤体积逐渐缩小,对照组小鼠肿瘤组织生长迅速。3.免疫组化结果显示,治疗组小鼠肿瘤组织内可以检测到大量CD3+的人T淋巴细胞,对照组只检测到少许CD3+的人T淋巴细胞。
结论1. chA21scFv-28ζCART细胞可以有效抑制HER2阳性乳腺癌肿瘤在NOD-SCID小鼠体内的生长。2. chA21scFv-28ζ CAR T细胞通过定位于HER2阳性的肿瘤组织内发挥抗肿瘤作用。
嵌合抗原受体（CAR）治疗的安全性 摘要：输注基因定向改造的嵌合抗原受体T细胞来识别并杀灭肿瘤，已经在许多I期临床试验中取得成功。由于会产生非肿瘤靶向和细胞因子释放综合征，所以需要有预防或减轻严重不良反应的对策。目前正积极研究通过药物治疗、自杀基因或其他新的办法，使其只针对恶性肿瘤有细胞毒性。在这篇综述中，我们调查总结了嵌合抗原受体改造的T细胞的毒性，并重点发布这充满前景的细胞治疗方法的安全性策略。 关键词：嵌合抗原受体，自杀基因，安全开关，过继免疫治疗，细胞治疗 1. 引言 同种异体造血干细胞移植（allo-HCT）是免疫治疗中一种有效方法，通过天然免疫系统和获得性免疫系统协同产生抗肿瘤作用。通过识别肿瘤相关抗原（TAAs）或次要组织相容性抗原（mHags），供体淋巴细胞输注（DLI）给移植后白血病复发的患者可介导抗肿瘤作用。 然而，由于大多数TAA自身蛋白表达异常，以致T细胞表达低亲和力T细胞受体（TCR），排斥反应可能比移植物抗肿瘤效应（GVT）更强。虽然用于治疗慢性粒细胞性白血病效果很好，而急性白血病异体淋巴细胞输注疗效有限，其2年生存率不到20%。 此外，并发症移植物抗宿主病（GVHD）造成病人死亡或生活质量下降占显着比例，有报道显示接受匹配供体的造血干细胞移植的患者GVHD发生率高于50%。虽然有报道称产生植物抗肿瘤效应（GVT）而没有发生移植物抗宿主病（GVHD）的情况，本文编译作者爱康得Paul认为两种机制的重叠，次要组织相容性抗原（mHags）介导了移植物抗肿瘤效应（GVT）和移植物抗宿主病（GVHD），可同时作用于造血和非造血组织。 临床试验中将次要组织相容性抗原（mHags）特异性T细胞扩增并过继输注到移植后疾病复发的患者身上，部分患者可获得暂时性完全缓解（CR），然而此方案因果规律复杂，并且T细胞在体外扩增长达12周。长期的培养可导致T 细胞衰竭，这可能是其在患者体内持续性有限的一个潜在原因。 另一个方法是利用转基因TCR或嵌合抗原受体（CAR）基因修饰的T细胞。然而TCR转导的T细胞受HLA限制，TCR和内源性TCR错配可导致亲和力降低或表达不期望的特异性。而CAR可作为免疫治疗的通用平台，因为它不受HLA 限制。在T细胞单链杀伤装置上负载特异性抗体，这种错配的风险很低。另外，HLA识别抗原的独立机制，可以防止CAR-T细胞在抗原的处理加工中出现免疫逃避机制。 通常CAR-T只在正常细胞与肿瘤细胞间非多态地识别表面分子，以提高对其安全的正当关切。事实上，输注CAR-T细胞使难治性白血病得到完全缓解的同时，也会伴有细胞因子释放综合征，在靶向肿瘤相关抗原（TAAs）的实体瘤时甚至可出现致命的非肿瘤靶向毒性。这些问题促使美国国立卫生研究院重组DNA咨询委员会提供了一些临床建议，包括实施小剂量递增方案，共表达自杀基因来阻断不可控毒性的或控制远期毒性。
第十章抗原递呈细胞及抗原递呈 第一部分：学习习题 一、填空题 1．根据APC提呈抗原的来源不同，可将抗原分为________和________，前者来源于抗原APC之外，如吞噬的细胞、细菌或某些自身成分等；后者是APC合成的抗原，如病毒感染细胞所合成的病毒蛋白、肿瘤细胞合成的肿瘤抗原以及胞内某些自身成分等。 1．内源性抗原由广义抗原提呈细胞（靶细胞）经________途径提成，此途径又称为_________途径；提呈的抗原肽由_________T细胞识别。 2．外源性抗原由专职抗原提呈细胞经________途径提成，此途径又称为 _________途径；提呈的抗原肽由_________细胞识别。 3．专职APC包括________、________和________ 二、多选题 [A型题] 1. 能提呈外源性抗原的细胞有一个重要标记,它是 A.表达MHC-I类分子 B.表达MHC-II类分子 C.FcR D.C3bR E.抗原特异性受体 2. 淋巴结中能提呈抗原的细胞有 A.B淋巴细胞和T淋巴细胞 B.T细胞和巨噬细胞 C.巨噬细胞 D.巨噬细胞和树突状细胞 E.巨噬细胞和Th细胞 3.抗原提呈细胞所不具备的作用是： A.促进T细胞表达特异性抗原受体 B.降解抗原为小分子肽段
C.使MHC分子与抗原肽结合 D.为T细胞活化提供第二信号 E.将抗原肽-MHC复合物提呈给T细胞 4.关于DC提呈抗原的叙述，下列哪项是错误的？ A. DC是重要的专职APC B．FDC滞留抗原-抗体复合物于细胞表面，有利于B淋巴细胞摄取抗原 C. DC提呈外源性抗原能力强 D．DC提呈内源性抗原能力强 E．DC是激活初始T细胞最重要的APC 5．下列哪种物质与MHC- II 类分子抗原提呈有关 A. Ii B.LMP C.TAP1 D.泛素 E. TAP2 6．关于APC提呈抗原，下列哪项是错误的？ A. 内源性抗原经APC处理后，形成抗原肽-MHC- II 类分子复合物形式提呈给CD4+T细胞 B．内源型性原经APC处理后，形成抗原肽-MHC- I 类分子复合物形式提呈给CD8+T细胞 FDC向B淋巴细胞提呈抗原-抗体复合物 C. 脂类抗原与CD1结合，由APC提呈给CD4+T、CD8+T、CD4-CD8-和NK1.1T 细胞。 D. 记忆性B细胞将抗原肽-MHC- II 类分子复合物提呈给Th2细胞 E. TAP参与外源性和内源性抗原的处理 7．抗原提呈细胞膜上与提呈外源性抗原密切相关的表面标志是： A. MHC- I 类分子 B. MHC- II 类分子 C. BCR D. TCR E.Fc R 8. 抗原提呈细胞膜上与提呈内源性抗原密切相关的表面标志是：
嵌合抗原受体T细胞免疫疗法 王晨璇 简介 CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。这是一个多年前被研发，但是近几年才被改良使用到临床上的新型细胞疗法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。 技术原理 【T细胞的改造】CAR-T（嵌合抗原受体T细胞）疗法的基本原理即利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞。这项技术通过嵌合抗原受体(CAR)这一CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen，TAA）结合区（通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段），一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。 【目标抗原的选择】理想的目标抗原是仅在肿瘤细胞表面表达的肿瘤特异性抗原。但由于肿瘤表达的大多数抗原不具备肿瘤特异，为了避免“脱靶”，应避免选择分泌型抗原。现阶段常用的靶点除CD19以外，也有相关报道以ERRB2（HER-2/neu）治疗肺部和前列腺癌，瞄定前列腺特异性抗原治疗前列腺癌，瞄定CAIX治疗肾细胞癌，瞄定Lewis Y以治疗肺癌和卵巢癌等等。 技术应用 近日，美国食品药品监督总局（FDA）批准诺华制药“CAR-T”疗法治疗复发性或
难治性儿童、青少年B-细胞急性淋巴细胞白血病。 同时，CAR-T技术治疗非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴瘤治疗白血病、胰腺间皮瘤、卵巢癌、B细胞癌症、成神经细胞瘤等技术也都在临床试验阶段。 CAR-T的治疗流程大致如下： 1、分离：从癌症病人身上分离免疫T细胞。 2、修饰：用基因工程技术给T细胞加入一个能识别肿瘤细胞并且同时激活T细胞的嵌合抗体，也即制备CAR-T细胞。 3、扩增：体外培养，大量扩增CAR-T细胞。一般一个病人需要几十亿，乃至上百亿个CAR-T细胞（体型越大，需要细胞越多）。 4、回输：把扩增好的CAR-T细胞回输到病人体内。 5、监控：严密监护病人，尤其是控制前几天身体的剧烈反应。 技术优点 CAR-T细胞治疗技术具有如下优势： 1、治疗更精准。由于CAR-T 细胞是应用基因修饰病人自体的T细胞，利用抗原抗体结合的机制，能克服肿瘤细胞通过下调MHC分子表达以及降低抗原递呈等免疫逃逸，让肿瘤细胞无所逃遁； 2、多靶向更精准。CAR既可以利用肿瘤蛋白质抗原，又可利用糖脂类非蛋白质抗原，扩大了肿瘤抗原靶点范围，CAR-T细胞作用过程不受MHC的限制； 3、杀瘤范围更广。鉴于很多肿瘤细胞表达相同的肿瘤抗原，针对某一种肿瘤抗原的CAR基因构建一旦完成，便可以被广泛利用； 4、杀瘤效果更持久。新一代CAR结构中加入了促进T细胞增殖与活化的基因序列，能保证T细胞进入体内后还可以增殖，CAR-T细胞具有免疫记忆功能，可以长期在体内存活。 技术缺点 【副作用】 1、细胞因子释放综合症：大量的细胞因子快速流入血液，进而会导致危险的高烧和血压剧降。副作用可通过标准的支持疗法(包括类固醇)进行处理。 2、IL-6水平过高：一些反应严重的患者具有特别高的IL-6水平，IL-6是由T 细胞和巨噬细胞在对抗炎症时分泌的细胞因子。 【改进与演化】
嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）制剂制备质量管理规范（征求意见稿） 中国医药生物技术协会发布 目次 前言II 引言III 1 范围1 2 术语和定义1 3 基本要求2 3.1 基本原则2 3.2 人员的要求2 3.3 场所和设施2 3.4 物料2 4 载体制备3 4.1 质粒制备3 4.2 非病毒载体制备的基本要求3 4.3 病毒载体制备的基本要求3 5 细胞制备过程中的要求3 5.1 样本的要求3
5.2T细胞的采集和分离4 5.3 操作的要求4 5.4 细胞转导及扩增的要求4 5.5 安全性及有效性检测5 5.6CAR-T细胞制剂的质量要求5 5.7CAR-T细胞冻存、运输与复苏的要求5 6CAR-T制剂的质量控制与放行5 7 追溯5 8 保密原则6 9 附则6 参考文献7 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中国医药生物技术协会制定，由中国医药生物技术协会实施。 本标准起草单位：中国医药生物技术协会医药生物技术临床应用专业委员会。 本标准主要起草人：。 本标准为首次发布。 引言
近年来，免疫治疗经历了一系列突飞猛进的发展，以特异性过继免疫细胞疗法及免疫检查点抗体疗法为代表的新型免疫治疗技术因其在临床研究中取得的显著疗效而成为学术界和产业界共同关注的焦点。其中，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T疗法）因其在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤的治疗中展现出显著的治疗效果而成为国内外研究的热点。随着我国对CAR-T技术的研究不断深入，国内企业的积极布局和产业链的延伸，我国的CAR-T细胞治疗技术也在紧随国际趋势的发展。 然而，目前国内关于CAR-T细胞的制备和质量控制缺乏统一的标准和管理规范，各制备机构或应用机构之间无法进行正常的评估和交流，一定程度上不利于细胞治疗产业的专业化发展。只有确立了安全、规范、稳定、可追溯的行业规范，才能从源头保证整个CAR-T细胞治疗产业的规范性和安全性。 为了适应我国CAR-T细胞治疗产业的需要，加强CAR-T细胞治疗的管理，规范细胞制备过程，保证CAR-T细胞制品在临床应用的安全性，促进国际间同行的交流，有必要制定中国医药生物技术行业的CAR-T细胞制剂制备质量管理规范。 嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）制剂制备质量管理规范 1 范围 1.1 为协助CAR-T细胞制剂制备机构（以下简称机构）在制备过程中避免污染、交叉污染、混淆及差错，且保证CAR-T细胞制剂的安全性、生物学效应，参照《免疫细胞制剂制备质量管理自律规范》等相关规定和指导原则，制定本规范。 1.2 本规范所称的CAR-T指用于治疗的、经体外基因导入后表达嵌合型抗原受体的人源T
第三部分成熟淋巴细胞受体库的发育 第六章免疫系统受体介导的信号转导 跨膜信号转导的基本原理 抗原受体的结构和信号转导通路 参与淋巴细胞作用的其他信号通路 第七章淋巴细胞的发育和生存 骨髓和胸腺中淋巴细胞的产生 抗原受体基因片段的重排调控淋巴细胞的发育 与自身抗原的作用可选择一些淋巴细胞存活并清除其余的细胞周围淋巴组织中淋巴细胞的生存和成熟
第六章免疫系统受体介导的信号转导 细胞通过多种细胞表面受体与周围环境进行交流，这些细胞表面受体可识别并与胞外环境中存在的分子结合。T淋巴细胞和B淋巴细胞的主要功能是对抗原产生应答，所以抗原受体就显得尤为重要，研究得也最为透彻。抗原与这些受体结合后会产生胞信号，改变细胞的行为，其机制将是本章讨论的主要容。由于在正常淋巴细胞类群中抗原受体存在着多样性，因此我们了解的有关淋巴细胞胞信号转导的大多数信息来源于肿瘤性的淋巴样细胞系，用相应的受体抗体刺激这些细胞的抗原受体时，细胞可以活化。然而，越来越多的信息来源于对转基因动物正常细胞的研究，这些转基因动物的B细胞或T细胞上只表达单一类型的抗原受体。当成熟的初始淋巴细胞与其特异性抗原结合后，就可以活化并进行克隆扩增，进而分化为功能性效应细胞，由此我们可以推测其中的信号转导通路。此外，我们也会根据细胞发育的阶段以及配体的性质，来探究抗原受体和其他淋巴细胞受体所转导的信号是如何导致其他应答的，如细胞失活或死亡。 B淋巴细胞和T淋巴细胞的抗原受体是以多蛋白复合物的形式存在于细胞表面。它们由克隆分布的可变抗原结合链与具有信号转导功能的恒定附属链共同构成。B细胞抗原受体和T细胞抗原受体由不同的蛋白组成并具有不同的识别特性，这些已在第三章和第四章介绍过了。然而，当B细胞受体和T细胞受体与其相应配体结合后，由受体介导的胞信号转导通路却非常相似。并且这些胞信号都可传至细胞核、改变基因的表达，由此引发淋巴细胞的应答。 本章我们将首先讨论一些细胞信号转导的基本原理，并介绍涉及胞信号转导通路的共同机制，重点介绍抗原受体的信号转导通路。本章的第二部分，我们将概述从抗原受体到细胞核的信号转导通路，并讨论当这些受体同时接受来自其他受体的信号时，这些信号转导通路是如何被增强或抑制的。本章的第三部分和最后一部分将讨论在不同时间由不同受体介导的其他信号是如何影响淋巴细胞和其他免疫系统细胞的发育、生存和应答的。 所有对外界刺激可以产生应答的细胞都会面临这样的挑战：就是如何使细胞外表面受体所识别的刺激信号能够在细胞引起变化。受体蛋白作为工具可以将胞外配体结合的信号转换成胞的生化事件，从而将胞外信号转导跨过质膜。将信号从一种形式转换成另外一种形式即称为信号转导（signal transduction），在本章的这部分我们将讨论细胞信号转导的几种不同的机制。细胞表面受体可激活胞信号转导通路，由此将胞外信号转换成胞信号并继续向传递。此信号可被转换成不同的生化形式，分布于细胞的不同部位，信号抵达不同部位时可以维持不变并被放大。胞信号转导的一种结果是引起细胞骨架和具分泌功能的细胞器发生改变。这可见于效应T细胞的活化过程中，效应T细胞在其抗原受体与靶细胞抗原的结合位点处可直接释放分泌囊泡。胞信号转导的终点通常为细胞核，在核激活转录因子，启动新基因的表达，并可诱导细胞分裂。 6-1 淋巴细胞与抗原结合可导致其抗原受体聚集 所有具有信号转导功能的细胞表面受体，有些自身就是跨膜蛋白，有些也可与细胞外的蛋白相连成为复合物中的一部分。许多受体在与配体结合时可改变其蛋白构象。对某些类
抗原 1.抗原：能与淋巴细胞抗原受体(TCR/BCR)特异性结合的物质，具有刺激机体产生特异性免疫应答的潜能，并且能与应答产物(抗体或效应细胞)在体内外发生特异性反应 2.免疫原性：指能刺激机体产生特异性免疫应答的能力，即能刺激淋巴细胞产生抗体和效应细胞 3.抗原性：又称免疫反应性，指能与免疫应答的产物（抗体或效应T细胞）发生反应的能力 4.完全抗原：同时具有免疫原性和反应性，多为分子量较大的蛋白质 5.半抗原(不完全抗原)：只具有反应性(抗原性)，而不具备免疫原性，多为小分子化合物 5.抗原特异性：决定抗原特异性的物质基础是抗原决定基（表位）7表位：抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。是抗原与BCR/TCR 结合的基本单位。 8.胸腺依赖抗原(TD-Ag)：刺激B细胞产生抗体有赖于T细胞辅助，参与免疫应答的绝大多数Ag属于TD-Ag 9.抗原提呈:Ag被抗原提呈细胞摄取、加工、处理形成抗原多肽片段，与自身MHC分子结合成Ag肽: MHC分子复合物，转运至APC表面供TCR识别
1.T细胞与B细胞抗原表位的特性比较 2.异嗜性抗原(Forssman抗原)：不同物种间共有的抗原物质。 大肠杆菌O86----B血型物质 肺炎球菌14型----A血型物质 溶血性链球菌----肾小球及心肌 大肠杆菌O14型脂多糖--结肠粘膜
3. TD-Ag和TI-Ag的比较
4.外源性Ag的加工处理和提呈 外源性Ag→与APC结合→吞噬/吞饮→内体→内体溶酶体→10~17氨基酸残基的多肽→结合MHC Ⅱ类分子→细胞表面→CD4+T细胞识别 5.内源性Ag的加工处理和提呈 细胞内Ag→细胞内蛋白酶体→多肽→内质网腔→结合MHCⅠ类分子→细胞表面→CD8+T细胞识别 6.蛋白抗原加工提呈两种途径的比较
第十章抗原呈递细胞和抗原呈递 第一部分:学习练习 一、填空 1.根据抗原呈递来源的不同，抗原可分为_ _ _ _ _ _和_ _ _ _ _ _，前者来自抗原呈递细胞之外，如吞噬细胞、细菌或其自身的某些成分等。后者是由APC合成的抗原，如由病毒感染细胞合成的病毒蛋白、由肿瘤细胞合成的肿瘤抗原以及一些细胞内成分。 1.内源性抗原通过_ _ _ _ _ _ _ _途径从广义抗原呈递细胞(靶细胞)获得，也称为_ _ _ _ _ _ _ _途径；提出的抗原肽被______T细胞识别。 2.外源抗原通过_ _ _ _ _ _ _ _途径从专职抗原呈递细胞中扣除，也称为_ _ _ _ _ _ _ _途径；提出的抗原肽被_ _ _ _ _ _细胞识别。 3.全职APC包括_ _ _ _ _ _ _ _、_ _ _ _ _ _ _和_ _ _ _ _ _ _ _ _ 第二，多主题选择 [A类问题] 1.能够呈递外源抗原的细胞有一个重要的标记，即 A.丙型肝炎病毒ⅰ类分子的表达乙型肝炎病毒ⅱ类分子的表达丙型肝炎病毒FcR D.c3br e .抗原特异性受体 2.淋巴结中能呈现抗原的细胞有 A.B淋巴细胞和T淋巴细胞 D.巨噬细胞和树突细胞 3.抗原呈递细胞不具备的功能有: A.促进特异性抗原受体的t细胞表达 b .将抗原降解成小分子肽段 C.将MHC分子与抗原肽结合 D.提供用于T细胞激活的第二信号 E.向t细胞呈递抗原肽-MHC复合物 4.下列关于DC抗原呈递的陈述中哪一项是错误的？
A.DC是一个重要的全职装甲运兵车 B.树突状细胞在细胞表面保留抗原抗体复合物，有利于B淋巴细胞吸收抗原。 C.DC有很强的呈递外源抗原的能力。 D.dc具有很强的呈递内源性抗原的能力。 E.dc是激活初始t细胞的最重要的APC。 5.下列哪种物质与MHC-2分子抗原呈递有关 A.ii b.lmpc.tap1d .泛素E. TAP2 6.关于抗原呈递，以下哪一项是错误的？ A.内源性抗原经抗原处理后形成抗原肽-MHC-2分子复合物，呈递至CD4+T细胞 B.在APC处理后，内源性原原体形成抗原肽-MHC-1分子复合物，呈现给CD8+T细胞树突状细胞向B淋巴细胞传递抗原抗体复合物 脂质抗原与CD1结合，并由APC呈递至CD4+T、CD8+T、CD4-CD8-和NK1.1T细胞。 D.记忆b细胞向Th2细胞呈递抗原肽-MHC- II分子复合物 E.TAP参与外源性和内源性抗原的治疗 7.与抗原呈递细胞膜上外源抗原呈递密切相关的表面标记有: A.MHC一号分子MHC二号分子BCR一号分子 8.与抗原呈递细胞膜上内源性抗原呈递密切相关的表面标记有: A.MHC一号分子MHC二号分子碳三溴代二苯甲烷 9.用于呈递低浓度抗原的最有效的APC是 A.巨噬细胞b树突细胞c上皮细胞d b淋巴细胞e成纤维细胞 10.下列关于DC抗原呈递的陈述中哪一项是错误的？ A.树枝状形态 B.MHC-2分子的高水平表达 成熟的DC抗原呈递能力强，抗原摄取能力弱