阿戈美拉汀（Agomelatine）的合成设计分析
Xxx
（南京工业大学药学院，江苏南京210009）
摘要：本文综述了褪黑激素类抗抑郁药－阿戈美拉汀（Agomelatine）的合成设计与分析。
关键词：阿戈美拉汀；抗抑郁药；合成方法
Synthesis design analysis of agomelatine
Xxx
(School of Pharmaceutical Nanjing University of Technology, Jiangsu Nanjing 210009)
Abstract: A brief historical survey and recent development in total design synthesis of agomelatine.
Keywords: agomelatine; antidepressant; methods of synthesis
1.前言
阿戈美拉汀（agomelatine）是由法国Servier（施维雅）公司研发的褪黑激素激动剂，它是第一个褪黑激素类抗抑郁药，能有效治疗抑郁症，改善睡眠参数[1]，于2009年2月19日经欧洲EMEA批准上市。(剂型为片剂)
中文化学名称：N-[2-(7-甲氧基-1-萘基)乙基]乙酰胺；
英文化学名称：N-[2-(7-methoxynaphth-1-yl)-ethyl]-ace amide；
商品名：V aldoxan（或Thymanax）
分子式：C15H17O2N；
分子量：243.3；
CAS RN：138112-76-2；
结构式为：
图1 阿戈美拉汀的结构式
阿戈美拉汀的作用机理与目前普遍采用的抗抑郁药物完全不同，它既是全球首个褪黑激素受体的激动剂，同时也是五羟色胺（5-HT2c）受体的拮抗剂。药物分子直接与神经突触后膜的5-HT2c受体结合，从而发挥抗抑郁疗效，且不增加突触间隙的5-HT2c浓度。动物实验与临床研究表明阿戈美拉汀具有抗抑郁、抗焦虑、调整睡眠节律及调节生物钟作用，同时不良反应少。因此研究和开发阿戈美拉汀具有重要意义。[2]
2.阿戈美拉汀的逆合成分析
从阿戈美拉汀的结构式可以看出，主体结构是7-甲氧基萘和1位的取代基,我们可以从两处切断，A切断得到是乙酰基和7-甲氧基-乙氨基萘；B处切断得到N-乙基乙酰胺和β-甲氧基萘。
A
B
图2 阿戈美拉汀的逆合成分析
因此，阿戈美拉汀进行逆合成分析，主要切断方法有两种：
（1）从A处切断（策略一）：
图3 逆合成分析一
第一步，酰胺键可以断开，该步为反应最后一步，很易上乙酰基，考虑采用乙酸酐；
第二步，母核将1位的乙氨基氧化为乙氰基，这步反应可考虑氰基还原为氨基的反应。
第三步，乙氰基可考虑由卤代烃发生氰基的取代而来；
第四步，7-甲氧基-1-卤甲基萘可由7-甲氧基-1-萘甲醇经卤化物取代而来。（2）从B处切断（策略二）：
图4 逆合成路线二
第一步，从B处把阿戈美拉汀拆分成N-（2-氯乙基）乙酰胺和β-甲氧基萘，这一步可通过在β-甲氧基萘α位发生卤代获得，要考虑到取代位置的选择性；
第二步，β-甲氧基萘可以由β-萘酚制得；
第三步，N-（2-氯乙基）乙酰胺可拆分成乙酰基和2-卤代乙胺；
第四步，2-卤代乙胺可以考虑由卤乙腈还原而来。氯乙腈是一种常用合成中间体，还可以进一步拆分。
3.合成路线
3.1 合成路线一[2,4]
唐家邓等人提出了如图所示的合成路线，与策略一大致相同，可实现策略一。该合成路线中将7-甲氧基四氢萘-1-酮与氰乙酸反应制得（7-甲氧基-3,4-二氢-1-萘基）乙腈；再以2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌（DDQ）为脱氢试剂，室温下于二氯甲烷中反应制得（7-甲氧基-1-萘基）乙腈；4经还原和乙酰化，生成产物阿戈美拉汀。
具体步骤为：
第一步，7-甲氧基四氢萘-1-酮、氰乙酸、苄胺和庚酸投入甲苯中，回流水分24h，冷却至室温，反应液经洗涤、干燥、过滤。滤液蒸除甲苯，制得（7-甲氧基-3,4-二氢-1-萘基）乙腈；
第二步，DDQ投入反应液中，20℃下滴加二氯甲烷溶液，之后保温搅拌1h，反应液过滤，滤液经洗涤、干燥、过滤、重结晶等制得（7-甲氧基-1-萘基）乙腈；
第三步，（7-甲氧基-1-萘基）乙腈、乙酐和Raney-Ni投入高压氢化釜中，加入四氢呋喃，加热至35℃，通入H2，于1.1MPa氢压下搅拌10h，反应液冷却至室温，降至常压，过滤，滤液浓缩，经洗涤，重结晶等步骤制得阿戈美拉汀。
3.2合成路线二[2,3]
张桂森等于2010 年提出（7-甲氧基-1-萘基）甲醇与磺酰化试剂反应，经低级醇重结晶; 重结晶产物与邻苯二甲酰亚胺钾盐反应得N-[2-(7-甲氧基-1-萘基)-乙基]邻苯二甲酰亚胺; 上一步产物经水解、酸萃取、碱中和、非极性溶剂萃取等处理后与HCl /乙酸乙酯成盐; 再经酰化合成阿戈美拉汀。
具体步骤为：
第一步，7-甲氧基-1-萘乙醇与苯璜酰氯反应；
第二步，第一步产物再与邻苯二甲酰亚胺钾盐反应得N-[2-(7-甲氧基-1-萘基)-乙基]邻苯二甲酰亚胺；
第三步，上步产物用氢氧化钠水解后与HCl/乙酸乙酯成盐；
第四步，将第三步生成的盐和对应量乙醇钠溶于乙醇后加入乙酸酐后加热回流，经一定方法重结晶得阿戈美拉汀。
3.3合成路线三[5]
该合成路线将（7-甲氧基-3,4-二氢萘-1-基）乙腈在DDQ存在下脱氢得阿戈美拉汀中间体（7-甲氧基-1-萘基）乙腈，再在氯化镍，硼氢化钠的乙醇溶液中还原氰基为氨基，最后经乙酰氯酰化得阿戈美拉汀。
具体步骤为：
第一步，（7-甲氧基-3,4-二氢萘-1-基）乙腈在DDQ，氯仿溶液中加热回流脱氢得（7-甲氧基-1-萘基）乙腈；
第二步，第一步产物采用氯化镍/硼氢化钠的乙醇溶液还原得（7-甲氧基-1-萘基）乙酰胺；
第三步，将第二步生成产物在二氯甲烷，三乙胺和乙酰氯的混合溶液中反应得阿戈美拉汀。
4. 讨论与结论
4.1讨论
上面三条合成路线，经对比列表如下:
表1 各个路线的比较
通过上述表格中各个合成路线的比较，可以看出三种合成路线均比较短，操作较容易。
对于反应条件而言，路线一不太可行，因为需要比较高的压力，而路线二、路线三反应条件较温和。
从收率上看，合成路线一、路线三的收率均为75%左右，而合成路线二为60%，收率均比较高。
综合合成步骤、反应条件、操作难易程度及收率等因素，路线二及路线三比较好，均适合工业化生产。优选路线六。
注意：以上合成路线均有专利保护，我们可以考虑改变中间体来合成阿戈美拉汀，以便避开专利。
4.2结论
综上所述，同一种药物能通过文献查阅找到多条合成路线，它们各自有相应的特点和优缺点，应进行深入细致地综合比较，结合实验条件制定出具体的研究方案，最终确定最优的合成路线。主要从经济性、收率、反应的可操作性、安全性等几个方面考虑：（1）合成步骤少、收率高；（2）原料易得，价格合理；（3）反应条件温和；（4）操作较容易；（5）中间体易纯化，质量可控，可连续操作
参考文献
[1] 唐家邓, 岑均达. 阿戈美拉汀的合成[J]. 中国医药工业杂志,2008, 39(3): 161-162.
[2] 王德才, 葛恒平, 刘竺云, 等. 阿戈美拉汀的合成方法介绍[J]. 合成化学, 2011,
19(3): 287-290.
[3]张桂森,陈道鹏等.阿戈美拉汀的制备方法及其中间体[P]. CN: 101638376, 2010.02.03.
[4] Jean-Claude Souvle, Isaac Gonzalez Blanco. Process for the synthesis and crystalline
form of agomelatine [P].US:20050182276, Aug.18, 2005.
[5] 张志强,李萍等. 一种阿戈美拉汀的制备方法[P]. CN: 101735091, 2010.06.16.
文献查阅方法
（1）首先在百度百科上用关键词“阿戈美拉汀”对该药进行了搜索，了解了它的一些基本信息，如英文名、化学名、商品名、CAS号等；在Google上以英文名‘agomelatine’为关键词搜索，了解了它的剂型、适应症、服用方法及其作用机制。
（2）再进入南京工业大学中文数据库，在维普数据库中使用“阿戈美拉汀”作为检索词，得到22篇中文文献（其中有5篇与合成路线有关）。
（3）进入Scinfinder，用CAS号检索，选择preparation，得到79篇文献（或专利），选择其中2篇（专利）作为参考。
另外，本文中的所有图形均是由化学软件ChemBioDraw Ultra12.0画的。
原代海马神经元细胞培养 溶液的配制： (1) 4%多聚甲醛溶液：4g多聚甲醛溶于100ml pH=7.4的0.01mol/l PBS中，混匀过滤， 室温保存。 (2)磷酸盐缓冲液（PBS）（0.01mol?l-1）：KH2PO4，0.1g；Na2HPO4?12H2O，1.7g；KCl， 0.1g；NaCl，4.0g，双蒸水加至500ml，pH=7.2～7.4。用0.2μm滤膜过滤，4℃保存。 (3) 1%蛋白酶的配制：用磷酸缓冲液（pH=7.2～7.4）配制成浓度为1%的胰蛋白酶母液 冻存。使用时，用解剖液稀释至0.25%。 (4) 培养皿涂被多聚赖氨酸：配制0.01%的多聚赖氨酸，分装冻存。将上述多聚赖氨酸 放入培养皿中涂两遍，自然晾干后备用。 (5) 解剖液：葡萄糖，3.0g；蔗糖，7.5g；NaCl，8.0g；KCl，0.4g；Na2HP04?7H20，0.18g； KH2PO4，0.03g；HEPES，2.14g；加双蒸水1000ml，调pH=7.0～7.4，过滤，4℃保存。 (6) 种植液：DMEM 79%，胎牛血清，10%；马血清，10%；谷氨酰胺培养液1%。 (7) 饲养液：Neurobasal培养基，97%；谷氨酰胺培养液，1%；B-27，2%。 (8) 阿糖胞苷：用双蒸水配制成浓度为l mg?ml-1的母液储存。用0.2μm滤膜过滤，-20℃ 储存。使用时，取6μl母液加入2ml培养液中，终浓度为3μg?ml-1。（根据实验情况调整浓度） 大鼠原代海马神经元细胞的培养 (1) 新生SD大鼠（＜12h），75%酒精浸泡消毒后断头，剥离出全脑并将其放入盛有解 剖液的培养皿中。 (2) 在解剖液中解剖大脑，分离出海马，移入另一盛有解剖液的培养皿中。在分离出全 部的海马后，去除血管等组织，然后用剪刀将海马分成数小块，放入盛有0.25%胰蛋白酶的培养皿中，将培养皿放入9%CO2、37℃消化20min。 (3) 将培养皿中的海马碎片移入离心管中，去除含胰蛋白酶的液体并用种植液将海马碎 片冲洗2～3遍，终止酶的消化作用。
一、桂圆——第一补脑的灵丹 《易经》中第一补脑的灵丹,每当疲劳、熬夜、用脑过度时，我立即煮一碗桂圆水喝，或者剥2、30颗干桂圆吃，这样，脑子立即就能恢复清醒，仿佛碧蓝的天回到了身体里一样。 二、吃桂圆能根除头晕、头胀、头痛 经常头晕、头胀、头痛的好方法，你可能想象不到吧，治头部不适的灵丹，竟然是——桂圆。 一斤干桂圆，取30颗，剥去外壳，把桂圆肉（带核的）加水煮，水开后继续煮20分钟，然后把桂圆水倒出，放温后喝下。不到2个小时，人就觉得特别神清气爽。 疲劳、熬夜、用脑过度时，就立即煮一碗桂圆水喝，或者剥2、30颗干桂圆吃，这样，脑子马上就能恢复清醒，仿佛碧蓝的天回到了身体里一样。 、桂圆能治长期失眠、高度近视，还能提高人的智力 长期失眠就像一个炸弹一样，让人痛不欲生。桂圆补心养脾，所以对睡眠有很大的帮助。 桂圆又名龙眼。据民间传说，很像龙的眼睛。但不管是否真的像龙的眼睛，桂圆对眼睛确实有好处。 建议有近视眼的朋友不妨经常喝用桂园核、桂圆肉、枸杞一起煮的汤，这种汤，对眼睛有较好的保健效果。 四、桂圆营养价值高，然而不同时间、不同吃法功效又不同。 中医认为，桂圆肉性味甘平，入脾、心经，能补益心脾，养血安神，是常用的补益中药食材，下面介绍几种桂圆补益的方法，不妨一试。 1、每晨用龙眼10枚取肉，煮荷包蛋2个，加适量白糖，空腹吃。补脾养心，生血益气。 2、每晚睡前吃10个桂圆，可养心安神，治疗心悸失眠。 3、桂圆肉20克，放进300毫升的沸水浸泡约5分钟后食肉喝汤。可补血醒神，为经常熬夜，快节奏生活人士等人士提神的首选。 4、桂圆肉30克，放进500毫升水中煮沸约10分钟，加鸡蛋2个，稍煮片刻即可食用。经常食用可护肤养颜、抗衰老、增强人体免疫力调节功能。尤适用于女士。 5、桂圆肉200克，加高梁白洒500毫升，泡1个月。每晚临睡时饮15毫升。可恢复疲劳，减轻亚健康症状，安神定志。 6、龙眼30个取肉，红枣10枚撕破，用粳米100克，煮粥2碗，加适量红糖，早晚各吃1碗。可补脾生血，养心增智，老年人尤宜。
海马神经干细胞激活疗法简介世界卫生组织最新的一份统计调查报告显示，全世界86%的患有心理障碍、精神障碍疾病的患者久治不愈，其首要原因就是他们在接受治疗的初期就没能得到迅速精准的诊断，在这种病因不明、病理不合、病灶不准的情况下，该患者所接受的一切个性化诊疗都缺乏了严谨科学的准绳，以至于治疗的方向南辕北辙，治疗的最佳时机不断延误，治疗的成果微乎其微，患者们非但病情得不到有效缓解，而且还要饱经痛苦，高频率的遭受病情的恶化和反复! 国际脑组织权威机构研究发现：人体大脑海马区的功能性休眠、损伤、病患以及萎缩，都能导致各类心理障碍、精神障碍疾病的产生!而不同程度、不同位置的人体大脑海马区的病患，所诱发的疾病种类也各不相同!因此，如果能够成功精确的检测出人体大脑海马区的健康状态，并且有针对性对其进行康复性治疗，那么各种心理障碍、精神障碍类的疾病就毋庸置疑的拥有了彻底痊愈、不再反复的条件!而辽宁省精神卫生防治基地的“海马神经干细胞激活疗法”正是在这样一种需求背景下应运而生。 辽宁省精神卫生防治基地介绍该疗法体系传承自国医精华，结合现代西方医学尖端科技，利用国际先进的诊疗仪器产生电流，通过激活大脑海马区萎缩的神经干细胞产生神经递质受体，并利用中、西药的神经递质受体酶激活神经递质受体，通过药物
平衡患者体内分泌紊乱的神经递质，自神经类疾病的源头疏理，纠正脑细胞的功能元，营养大脑长期处于休眠状态的脑细胞，改善其活性，提高其自身代谢力，最终实现脑细胞的正常兴奋态，使患者的神经干细胞在平衡的神经递质环境中恢复到正常，达到彻底痊愈。 随着我国经济的高速发展和社会压力的加剧，精神疾病状况也愈发严峻。根据最新精神疾病流行病学调查，我国精神疾病总患病率高达15%，世界卫生组织(WHO)保守估计，我国各类精神疾病患者已达一亿人以上，精神病在我国疾病总负担中排名首位，约占中国疾病总负担的20%。在各类精神疾病中，抑郁症患者约有3000万。研究精神疾病、寻找战胜精神疾病的方法是全世界医学界的共同目标。 “海马神经干细胞激活疗法”是从中医学、基因学、病理学、心理学等众多学科角度科学诠释了精神疾病的发病机理以及针 对性的治疗措施，能够有效的从源头上根治精神疾病，是广大心理障碍、精神障碍疾病患者的首选技术，它的疗效值得肯定，它的出现使各种失眠、抑郁、神经衰弱、精神障碍等精神类疾病，真正实现了彻底痊愈、不再反复。
氟西汀对海马神经元生长的影响 各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢 【关键词】氟西汀;细胞培养;海马神经元;大鼠 氟西汀是5-羟色胺（5-HT）再摄取抑制剂之一，是应用较广的抗抑郁药。氟西汀除有抗抑郁作用外，尚可治疗其他中枢神经系统疾病。有研究表明，氟西汀对海马的神经保护作用是其发挥抗抑郁效应的机制之一［1］。关于氟西汀对体外培养的海马神经元生长的影响未见报道，本研究初步探讨了氟西汀对原代培养的海马神经元生长的影响。 1材料与方法 新生大鼠海马神经元的分离和培养 技术方法在参考文献［2］基础上加以改进。取出生24h内的新生SD大鼠（东南大学医学院动物实验中心提供），无菌分离出双侧海马，用显微剪剪碎，
D-Hank#39;s液清洗2或3次，将剪碎的海马组织转移至离心管中，加入等量%的胰酶（美国Sigma公司），37℃消化30min，中间振摇1或2次，加入10%的DMEM/F12（美国Gibco公司）5ml，轻轻吹打15次，然后1000r·min-1离心5min，制成单细胞悬液，置于CO2培养箱（德国Heraeus公司产品）中，差速贴壁30min，去除成纤维细胞，吸取未贴壁的细胞，并用200目的不锈钢滤网过滤，收集过滤后的单细胞悬液于培养皿中，然后至离心管中，取一滴单细胞悬液进行计数，并用DMEM/F12将细胞密度调到1×106ml-1，然后接种于200μg·ml-1多聚赖氨酸（美国Sigma公司）包被的6孔培养板中，转移至培养箱内培养，4h后换为无血清培养基，即含2%B27的Neurobasl培养基（美国Gibco公司），以后每3天半量换液1次。使用培养6d的神经元进行染色鉴定。 大鼠海马神经元的鉴定 烯醇化酶（NSE）免疫细胞化学染
［作者简介］李玉（1965～），男，云南昆明市人，医学硕士，副教授，主要从事癫痫外科和功能神经外科临床研究 工作. 昆明医学院学报2011，（5）：17～19Journal of Kunming Medical University CN 53-1049/R 胎鼠海马神经元培养及其鉴定 李玉1），王波1），但齐琴2 ） （1）昆明医学院第一附属医院神经外科，云南昆明650031；2）昆明医学院神经科学研究所，云南昆 明650031 ）［摘要］目的建立胎鼠海马神经元体外培养方法，观察细胞生长情况，免疫组织化学染色鉴定神经元特 异性．方法取胎鼠海马，分裂获得细胞悬液，接种于24孔板，经2h 差速帖壁去除成纤维细胞，将细胞液转移并继续培养，以获娶纯度较高的海马神经元．培养第5、11、15天观察细胞和突起生长情况，用NeuN 抗体以免疫组化SP 二步法染色鉴立神经细胞．结果培养头3d ．细胞生长缓慢，5d 时细胞开始生长，可见突起， 11d 时突起连成网状．经Neun 染色培养细胞呈阳性反应，证明是神经元．结论 本方法获取生长良好，纯度 较高的海马神经元． ［关键词］胎鼠；海马神经元；Neun ；培养 ［中图分类号］Q831.1+1［文献标识码］A ［文章编号］1003－4706（2011）05－0017－03 I dent ificat ion and Cult ur e of Hippocampus Neur ons in Fet al Rat s LI Yu 1），WANG Bo 1），DAN Qi －qin 2 ） （1）Deat.of Neurosurgery ；2）Institute of Neuroscience ，Kunming Medical University ， Kunming Yunnan 650031，China ） ［Abstract ］Objective To establish the protocol for culturing hippocampus neurons in vitro and explore the neuronal growth character istics ．Methods Tissues from hippocampus of fatal rats were harvested ，then digested into cell suspension by using 0.125%trypsin ．After planted into wells for 2hours ，cell suspension was transferred into next well for continuing incubation ．The cell growth was observed at day 5，11and 15．Neurons specific Enolase （NSE ）antibody ，recognized specifically NSE antigen in cultured cells ，was used to identify neurons by SP-two-step staining method ．Results After incubated for 2hours ，transferred suspensions in wells showed some pure neurons ，which is identified by NSE staining ．However ，they grew slowly during 1～3days ，then grew well from 5th day ，with gradual increasing the neuritis outgrowth ．Conclusion Purified neurons with neurite outgrowth states can be acquired by this method. ［Key words ］Fetal rats ；Hippocampus neurons ；NSE staining ；Culture 海马神经元细胞培养是研究神经细胞生物学特性和外源干扰因素作用（细胞因子）的有效细胞模型，其在神经生物学，发育生物学体外实验研究中已被广泛应用[1-3]．然而，要获得纯度较高， 生长状态较好的海马神经元也不是一件易事．本实验长期从事海马神经细胞生物特性及其应用研究，故需建立该细胞模型．鉴于胚胎来源的细胞 生长状态较成年动物来源者好[4，5] ．本实验建立大
老年人失眠最好治疗方法 老年人失眠是生理现象，人老少睡眠，多是早睡早醒，容易中断。老年人深度睡眠减少，浅睡眠增多，睡眠中觉醒的次数增加，睡不踏实，入睡困难，一觉醒来，总感到“不解乏”。影响老年睡眠的因素还有前列腺肥大，有的人“肾虚肾寒”，也容易频频起夜，影响睡眠。心脑血管病、高血压、糖尿病等老年慢性病，也常引起失眠。我也曾经是严重失眠，曾经用过灵芝胶囊、百利眠、佑左匹克隆、舒乐安定还有氟哌噻吨美利曲辛片（黛力新），吃这些药晚上才能维持睡5个多小时，睡眠质量不好，有点动静就醒，醒后难以入睡，早上起来心慌、胸闷，头晕头痛，四肢乏力，健忘掉头发，肠胃不好，不愿意吃东西，而且体质差，瘦小易生病，听朋友介绍用百艺舒，一共用了近5个月，把佑左匹克隆、舒乐安定还有氟哌噻吨美利曲辛片（黛力新）三种西药都停了，睡眠时间一直能维持在六个半到七个小时，不仅这样，我还学会了自我调整，以前心情不好的时候一点不能睡，现在听听音乐，泡泡脚，不大一会就能睡着。 另外，我再给大家介绍一些失眠的食疗方法： 牛奶 牛奶中含有丰富的色氨酸，为人体8种必需氨基酸之一。它能使人脑分泌催眠血清素，一杯温牛奶中的色氨酸对人体的作用与一片2．5毫克的安定相同。鲜牛奶中还含有吗啡，镇静作用更好，神经衰弱和经常失眠的人，睡前饮一杯热牛奶，催眠作用尤为明显，半小时后即可入眠。试验还证明：一般安眠药物作用逐渐减弱，而牛奶的催眠作用则逐渐加强，特别是下半夜睡得更甜，这对半夜醒来后难以入睡者更为合适。 莲子 莲子味甘甜，性平和。能补益脾胃、养心安神，素有“脾果”之美称。莲子中心的青嫩胚芽部分叫莲子心，味微苦，性偏寒，主要含有莲心碱、荷叶碱、木樨甙等，具有清心除烦、强心安神、交通心肾的功能。取莲子心适量水煎，放盐
-94- Clinical Journal of Chinese Medicine 2011 V ol.(3) No.19 家尤昭玲[3]治疗先兆流产时亦主张补肾健脾宁心，宁心之品多选用苎麻根、莲子心。苎麻根甘咸入心，能布散其光明，而不为郁热，此安胎良药也。莲子心味甘涩，性平，入心、脾、肾经，具有补脾益肾、养心安神的功效，还能收敛浮躁的心火，让人宁静且容易入睡。正如《女科集略》云：“受妊之后，宜令镇静，则血气安和。”又如《竹林寺女科秘要》所云：“胎气宜清不宜热，宜静不宜动。” 先贤所论安胎诸法，悉从其亲身实践总结而来，然如景岳所说：“胎气不安，证本非一，治亦不同。……去其所病，便是安胎之法。”同时又指出：“安胎之方不可执，当随证、随经、因其病而药之，乃为至善。”参考文献： [1]盛爱华,黄爱武.健脾补肾法配合黄体酮治疗先兆流产80例[J].浙江中医杂志,2007,42( 11):644 [2]夏桂成.中医妇科理论与实践[M].北京:人民卫生出版社,2003:308-312 [3]付灵梅,尤昭玲,陈宗光.补肾健脾宁心方治疗脾肾亏虚型先兆流产30 例中国实验方剂学杂志[J].2011,17(2):232~234 作者简介： 冯光荣（1979-），女，河南郑州人，郑州市妇幼保健院副主任中医师，博士，主要研究方向不孕症的治疗。 编号：EA-11071239（修回：2011-10-11） 乳鼠海马神经元细胞元代培养及AD损伤模型制备 Hippocampus neurons primary cultured and the AD cell model established 姜海英杨进刘涛 （南京中医药大学基础医学院，江苏南京，210029） 中图分类号：R574.62文献标识码：A 文章编号：1674-7860（2011）19-0094-02 【摘要】采用乳鼠海马做神经元细胞的原代培养和鉴定，并利用Аβ25-3损伤处理细胞，制备ＡＤ损伤细胞模型，为后继研究中药脑脊液和血清对神经元保护试验的奠定前期基础。 【关键词】乳鼠海马；神经元细胞；AD损伤模型； 【Abstract】Using the hippocampus neurons of the new born mice within 2～3 days to do the primary cell culture and do the appraisal . Using Аβ25-35 (aging treateded , final concentration 5μmol/L) on primary cultured hippocampus neurons to establish the AD cell model in order to study the protection of chinese medicine。 【Keywords】Rat hippocampus; Neurons cell; The AD cell model 通常做海马神经元原带培养，采用胎鼠细胞是最佳来源，但代价比较昂贵，取材比较繁琐困难。大鼠繁殖周期比较短，实验中，我们采取1～2天的乳鼠来培养，这样既保存了母鼠，还可以扩大海马组织来源，同时较胎鼠而言，乳鼠体积较大，可采取断颈处死的方法，取海马、剥离筋膜组织容易操作。 1 实验材料和仪器 Aβ25-35，B27、neurons培养基、胰蛋白酶（Sigama），12%胎牛血清（杭州四季青生物制品有限公司），NSE试剂盒、SW-CJ-2FD型超净工作台、CO2细胞培养箱、倒置相差显微镜。 2 细胞培养和鉴定 2.1 细胞培养 收获乳鼠后，置于75%的酒精中清洗，去除身上的垫料杂质，注意避免乳鼠呛到酒精。用酒精棉球反复擦拭后，至于灭菌的脱脂棉中，于无菌操作台中备用。同时注意保温，避免乳鼠产生过多的应激反应。 酒精棉球反复擦洗，无菌操作台断颈处死乳鼠。揭开脑壳，剥离脑膜，露出完整的脑组织。这对于完整分离海马很关键，海马的形状很容易分辨，取出海马组织，至于冷生理盐水中。全部材料取出后，在生理盐水中，小心用灭菌的吸管和镊子分离海马无关组织。反复沉淀清洗，仔细去除血管、筋膜及非海马结构（取材干净非常关键）。多次沉淀清洗的过程中，可以将渗入的血细胞和其他杂质细胞去除掉。然后置于0.125%的胰酶中消化，用弯头吸管边消化边吹打，吹打动作要轻柔。夏天可以在室外操作，消化时间大约20～30min（冬季至于37℃培养箱内消化25min）。由于脑组织细胞结构疏松，很容易将组织细胞吹散。在此过程中，用吸管将悬浮的筋膜组织去除干净，加入含血清的全培养液终止消化。 200目的尼龙筛，剪成3～5m2见方的正方形，在高温灭菌前，折叠成漏斗状，置于5ml或10ml离心管中。每只试管中可以放置多个。尼龙膜在高温灭菌的过程中，形状被固定，在过滤的过程中，由于组织粘附滤膜，会堵塞网口，导致过滤失败。该方法操作简单，有粘附组织存在时，用单陪冲洗，关键可以随时更换，经济实用。用三层尼龙网过滤时，既可以有效去除细胞和组织团块，避免其对细胞贴壁的影响，同时可以有效地降低污染。 将细胞用尼龙网滤过之后，1000转/min离心10min，用含10%血清的高糖DMEM全陪吹散细胞。计数细胞密度，接种密度在2×106。经验值为5～6只乳鼠可以接种一块6孔板。在细胞接种前，6孔板中置放涂布10%无菌多氨酸的盖玻片，紫外照射。 因为不贴壁的细胞数量较多，因而细胞至于培养箱中后，
应激对成年海马神经发生的影响【关键词】神经 近年来越来越多的研究表明成年中枢神经系统（CNS）的神经干细胞能不断地增殖分裂产生新的神经元，即在成年CNS仍存在神经发生（neurogenesis）。侧脑室的室管膜下区和海马齿状回的颗粒细胞下层是脑中两个主要的神经发生的区域。海马齿状回部位终生保持了生成新神经元的能力，在正常成年动物，每天有数以千计的新神经元形成。神经发生受到包括应激在内的多种因素的影响，这些区域的新生神经元会迁移，侧脑室的室管膜下区，大概在28d后几乎都迁移到嗅球，而海马齿状回的颗粒细胞下层的新生细胞部分迁移到颗粒细胞层，分化为颗粒细胞，产生树突、轴突，形成突触联系，整合到海马功能的神经环路中，参与海马的学习记忆等功能活动。我们结合近年来研究进展就应激对成年海马神经发生的影响作一综述。 1 海马区的神经发生 从结构上讲, 海马可分为海马回和齿状回(dentategyrus, DG) 两个部分。前者包括CA1、CA2、CA3、CA4 四部分, 主要由一些锥体神经元组成；后者则基本由颗粒细胞构成。早在20世纪60年代，采用[3H]胸腺嘧啶核苷标记方法就发现在成年大鼠海马、大脑皮质以及嗅球存在着神经发生现象。但是由于没有有力的证据证明新产生的细胞是神经元而非胶质细胞，并且具有神经元的相关功能，神经发生这一说法备受争议，在随后的20年间神经发生这一现象似乎被遗忘了。直到90年代随着技术方法的改进，成年脑神经发生进一步得到证
实。大鼠、猴子以及人类的神经细胞均具有终身增殖的能力，其增殖主要位于两个重要的脑区：海马齿状回和室管膜下区。各种细胞类型的分子克隆和免疫识别的新进展也证明了在成年哺乳类脑内存在着神经发生。新神经元产生于哺乳类和人类脑的两个脑区，即室下区和齿状回的颗粒下区。齿状回内新产生的颗粒神经元对学习与记忆很重要。新神经元来源于前体细胞，在细胞培养和组织原位中也转化为星形胶质细胞和少突胶质细胞的前体细胞。 早期研究利用[3H]胸腺嘧啶核苷标记分化细胞，其在细胞周期的S期能掺入进复制的DNA中通过放射自显影检测出来。后来用人工合成的BrdU（5溴3脱氧尿嘧啶核苷）取代了[3H]胸腺嘧啶核苷，BrdU是胸腺嘧啶脱氧核苷的类似物，胸腺嘧啶的碱基嘧啶环与5位C原子连接的甲基被Br取代，当细胞处于DNA合成期而同时有BrdU 存在时，BrdU就掺入到新合成的DNA中，BrdU用免疫细胞化学方法就能检测。这种技术通过改变BrdU注射和动物处死之间的时间差可以对新生细胞的增殖、分化、存活进行定量分析。由于BrdU有潜在的毒性作用，后来人们又找到其它的标记物，如增殖细胞核抗原（PCNA，DNA 聚合酶的辅因子）和Ki67（反映肿瘤增殖的标记物）作为反映细胞增殖的良好指标[1]。 在海马的齿状回颗粒下区，神经前体细胞增殖分裂产生新的颗粒细胞，新产生的细胞在分化成熟期进入颗粒细胞层，其轴突越过海马裂与CA3区锥体神经元树突发生突触联系，整合到海马的基本突触回路中，参与海马的功能活动。有报道显示，在哺乳动物的其它脑区，
海马神经元细胞免疫荧光检验 神经元鉴定： 一、烯醇化酶鉴定： 培养细胞用100%乙醇固定---10min---PBS漂洗5min×3次---3%H2O2室温孵育30min，目的用于去除内源性过氧化物酶---PBS 漂洗5min×3次---5%羊血清（0.3%TritonPBS配制），室温封闭30min 以减少排特异背景颜色------加第一抗体特异烯醇化酶（chemicon，1:1000），4℃冰箱孵育18~24小时---PBS漂洗5min×3次---加入2步法：PV9000试剂Ⅰ,37℃，30min---PBS漂洗5min×3次---PV9000试剂Ⅱ,37℃，30min---PBS漂洗5min×3次---DAB显示红棕色；70%，80%，90%，100%I，100%II 梯度酒精透水；二甲苯Ⅰ，Ⅱ透明2次，每次30min---中性树胶灯片---镜下观察。 二、β-微管蛋白Ⅲ（β-tubulinⅢ）荧光显示： 培养细胞用预冷PBS液轻柔漂洗3次，4%多聚甲醛固定，1h，4℃---吸去多余甲醛---PBS漂洗5min×3次---0.25%triton，室温，15min---3%H2O2室温孵育30min，目的用于去除内源性过氧化物酶---PBS漂洗5min×3次---5%羊血清（0.3%TritonPBS配制），室温封闭30min以减少排特异背景颜色------弃血清，加入β-tubulinⅢ抗体（1:100稀释），4℃，过夜---PBS漂洗5min×3次---滴加FITC 标记的山羊抗小鼠lgG（体积比1:200稀释），37℃，1h---DAPI复染10min---抗荧光猝灭封片液封片---荧光显微镜观察---选择10个视野，统计学处理。
昆明医学院学报2011，（6）：29～32 CN53-1049/R Journal of Kunming Medical University 成年小鼠海马神经细胞培养及其鉴定 李玉1），但齐琴2），习杨彦彬2） （1）昆明医学院第一附属医院神经外科，云南昆明650031；2）昆明医学院神经科学研究所， 云南昆明650031） ［摘要］目的观察体外培养成年小鼠海马神经细胞生长情况及其形态学变化．方法获取成年海马组织，制成细胞悬液，接种于培养板，分别于1，3，7，10，13，15d观察细胞生长情况，用神经元特异烯醇化酶抗体经免疫组织化学染色技术鉴定神经元．结果成年海马神经元接种后1～3d，有较多的杂质和部分细胞漂浮，贴壁细胞较少量．每隔3d半量换液后，杂质不断减少，但第1周细胞生长缓慢，第7～10d才见细胞生长良好．培养15d后，大部分细胞出现有明显的颗粒等早期退化征象．免疫组化染色证实培养细胞呈现神经元特异烯醇化酶染色阳性染色，免疫阳性产物主要分布于细胞质；证明是神经元．结论体外培养成年海马神经元早期生长缓慢，7～10d才显示良好的生长状态，2周左右细胞则开始退变．提示10d以前的细胞是供体外研究用的理想细胞． ［关键词］大鼠；神经细胞；海马；细胞培养；免疫组化 ［中图分类号］Q813.1+1［文献标识码］A［文章编号］1003－4706（2011）06－0029－04 Cult ur e and Ident ificat ion of Hippocampus Neur ons in Adult Rat s LI Yu1），DAN Qi－qin1），XIYANG Yan－bin2） （1）Dept.of Neurosurgery，The1st Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650032；2）Institute of Neuroscience，Kunming Medical University，Kunming Yunnan650031，China） ［Abstract］Objective To observe the morphology and characteristics of hippocampus neurons in adult rats in vitro．Method The hippocampus tissues from adult rats were collected，then digested into cell suspension by using0.125%trypsin．Cell suspension was planted into wells and observed at day1，3，7，10，13，and15 after incubation．Neurons specific Enolase（NSE）antibody，recognized specifically NSE antigen in cultured cells，was used to identify neurons by SP-two-step staining method．Results During1-3days，the extensive bodies of floating cells and tissue blocks were seen，but a few cells attached to the bottom of well．The growth of attached cells was also extensively slow，specifically within1week，while it began to grow quickly after7days，and maintained till15days．Amazingly，cells exhibited aging character with more particles in cytoplasm after15 days．NSE staining showed that cultured cells were positive staining by neuronal specific enalose antibody．Conclusion Adult hippocampus neurons grow slowly during the first week，but they are better from7day to15，then begin to degenerate after15days in vitro．This suggests that neurons from hippocampus of adult rats cultured in10days could be better for related neurobiological studies. ［Key words］Adult rats；Hippocampus neurons；NSE staining；Culture ［作者简介］李玉（1965～），男，云南昆明市人，医学硕士，副教授，主要从事癫痫外科和功能神经外科临床研究工作.
失眠怎么办9个小妙招治疗失眠 目录1、什么是失眠2、9个小妙招治疗失眠3、中医治疗失眠的方法4、西医治疗失眠的方法5、失眠吃什么食物好6、孕妇失眠怎么办7、女性失眠要如何治疗8、预防失眠做好日常12个小细节9、可以让你轻松入眠的5个诀窍10、不同类型失眠症有不同的疗法节什么是失眠失眠(英文：SLEEpLESSNESS)即睡眠失常。表现为入睡困难，断断续续不连贯，而过早地醒来，醒后不能再继续睡，有睡眠不足，全身乏力，倦怠感觉，多因健康情况不佳，疼痛、感觉不适，生理节奏被打乱，睡眠环境影响等，也有怕睡眠而失眠的。可根据不同的原因采取相应的措施。失眠是由于情志、饮食内伤，或病后及年迈，禀赋不足，心虚胆怯等病因，引起心神失养或心神不安，从而导致经常不能获得正常睡眠为特征的一类病症。主要表现为睡眠时间深度的不足、以及不能消除疲劳、恢复体力与精力，轻者入睡困难，或寐而不酣，时寐时醒，或醒后不能再寐，重则彻夜不寐。失眠是临床常见病症之一，虽不属于危重疾病，但妨碍人们正常生活、工作、学习和健康，并能加重或诱发心悸、胸痹、眩晕、头痛、中风病等病症。顽固性的失眠，给病人带来长期的痛苦，甚至形成对安眠药物的依赖，而长期服用安眠药物又可引起医源性疾病。专家说失眠在《内经》中称为目不瞑、不得眠、不得卧，并认为失眠原因主要有两种：一是其他病症影响，如咳嗽、呕吐、腹满等，使人不得安卧;二是气血阴阳失和，使人不能入寐。睡眠不足，难以入睡。南朝宋刘义庆《世说新语赏誉》：王丞相招祖约夜语，至晓不眠。明旦有客，
公头鬓未理，亦小倦。客曰：公昨如是似失眠。《儿女英雄传》第二二回：这位姑娘从来也不知怎样叫作失眠，不想这日身在牀上，翻来覆去只睡不稳。姚雪垠《长夜》一：正因为他想得太多，晚上不是失眠便是被噩梦缠绕。注释：辗转不能入眠或半夜醒后无法再入睡！失眠：(英文：INSOMNIA)：通常指患者对睡眠时间或质量不满足，并影响白天社会功能的一种主观体验。日常生活中，思想的冲突、工作的紧张、学习的困难、希望的幻灭、亲人的离别等一些消极因素，或是成功的喜悦等积极因素，无一不能带来不眠之夜，像这种失眠就是心理性失眠。中医的认识中医关于失眠的辨证论治颇为丰富，不少医者从临床实际出发，探求其发生的机理，提出了些新的辨证思路。 1、从五脏论治，有学者认为失眠症其病因病机主要表现于肝，波及五脏，统顾五脏实体病证。提倡五脏皆有不寐的整体观，从肝论治、兼顾他脏、辨证加减的证治体系，并由此分脏制定了失眠症证治方案。中医认为是阴阳失衡，导致阴阳失调，使人机能处于亢奋状态，从而睡不着。 2、从精神情志论治，精神情志与不寐关系密切，由此将不寐分成烦恼型、多疑型、紧张型、抑郁型，分别选用清热泻火、疏肝降逆法，滋阴清热、理气解郁法、清心宁神、调和肝脾法等治之，取得良好效果。 3、从昼夜节律论治，人体的睡眠是一种具有昼夜节律性的生理活动，失眠则是这种正常睡眠觉醒节律紊乱的结果。遵循这一规律，提出因时制宜治疗失眠。 4、从心肾相交论治，所有的失眠都是火不归根引起的，所有的治疗方案，最终都需要回到引火归根、心肾相交的问题上来，并将失眠分为五型：肝气郁结型、肾精不足
治疗失眠的12种妙方 失眠，往往令人很头疼，导致人们白天工作效率降低，情绪暴躁，容颜憔悴。现在给出治疗失眠的12种妙方。 1.一杯酸奶，一个香蕉，每晚睡前食用。此方对半夜不能入睡的患者尤为有效，饮用后可使患者血糖升高，快速入睡。 2.啤酒半瓶，每晚睡前半小时饮，连饮数周，可着枕即睡，通宵熟睡。 3.牛奶煮蛋黄，可治“虚烦不眠”之症，效果良好。 4.小米100克，加水煮成粥，加白糖适量调服，睡前半小时进食1小碗，能使人迅速发困、安眠入睡。 5.大枣、大米两味同煮粥食用，每晚适量食用，催眠作用很好。 6.龙眼：龙眼(桂圆)是南方一种佳果。《日用本草》述其能“益智宁心”、《滇南本草》载其可“养血安神”。现代科学分析，龙眼含葡萄糖、蔗糖、蛋白质、维生素、矿物质、酒石酸等。果肉鲜吃、浸酒饮或干品煎服，能补血安神。著名的中成药“归脾丸”专治神经衰弱失眠病，就是以龙眼肉为主药的。 7.莲子：是莲花的果实。《神农本草》载它“主补中养神”，《中药大辞典》说它“治夜寐多梦”。据分析，莲子含淀粉、柿子糖、蛋白质、钙、磷等，晚餐吃莲子粥，或睡前食碗莲子汤，能使人安然入睡。 8.百合;百合鳞茎含蛋白质、脂肪、淀粉等，治夜寐不宁，可用百合一两煎水，调蜂蜜于睡前服用。《本草纲目》说它能“温肺止咳”。
9.荔枝：荔枝味甘甜微酸，性温和。《本草纲目》称它能“通神、益智”，可用来养血、生津液。荔枝中含丰富的葡萄糖、蔗糖、维生素C、B、A以及柠檬酸、叶酸、苹果酸和游离氨基酸，是思虑过度、健忘失眠者不可多得的“安神益寿”果品，以鲜食为佳。 10.核桃：又名胡桃。宋代《开宝本草》说“食之令人肥健，温脾润肠，治虚寒咳嗽，腰部肿痛”。核桃营养价值很高，500克核桃仁的营养可以和2500克鸡蛋或4500克牛奶相媲美。其中脂肪钙、磷含量在果品中均名列前茅。每晚睡前吃几粒核桃仁、能安神益智，纳气平喘。 11.莴笋：莴笋茎叶中含有一种乳白色浆液，这种浆液具有类似鸦片的镇静安神作用，但无毒性。当睡眠不佳时，喝上一些莴笋浆液汁，具有良好的催眠作用。可将一小匙浆液汁溶于一小杯水中稀释后再服。 12.桑椹：桑椹一身皆是药，《本草纲目》载：桑椹能“补五脏，通气血，久服不饥，安魂镇神，令人聪明”。所以，桑椹可用来治疗由肝肾亏虚引起的头晕眼花，耳鸣目涩，神经衰弱，平时失眠的人多吃些桑椹，可起到安神益智的作用。
失眠症及其治疗方法 失眠症及其治疗方法 失眠症在中医里叫不寐。亦称不得眠、不得卧、目不瞑。是指经常不能获得正常睡眠为特征的一种病证。失眠症的症状轻重不一，轻者有入睡困难，有眠而易醒，有醒后不能再睡，亦有时睡时醒，还有虽睡却多梦等，严重者则整夜不能入睡。失眠症亦可单独出现，也可与头痛、眩晕、心悸、健忘等同时出现。 早在《素问·逆调论篇》中，就有黄帝问歧伯为什么有人不得卧，歧伯解释说：“胃不和则卧不安”。《黄帝内经·灵枢》中黄帝又就不得卧先后请教伯高和歧伯。伯高认为，阴虚者不得卧，治宜补其不足，泻其有余调和虚实，勾通阴阳，再服半夏汤一剂，便能安然入睡了。歧伯则认为不得卧是由于阳气盛，阴气虚，见地与伯高相近。由此可见早在两千多年以前，古人对失眠症的研究已达到相当高的水平。 今人与古人相比，受失眠症伤害的更普遍，更广泛，也更严重。 按说，“三十年前睡不醒”。在传统的农业社会里，生活的节奏是如此缓慢，当人们把爷辈的成功经验一成不变地传给孙辈的时候，如若孙辈效而行之，成功率仍然是很高的。与之相反，人们可以在现实生活中找到许许多多严酷而惨痛的事
实，告诫自己的孩子：“不听老人言，吃苦在眼前。”更何况孔夫子也说“三十而立”既然孔圣人到了三十岁才走向自立，那么三十岁以前依赖父母，听从父母就行了，自己无须操心，自然也就睡不醒了。 而今的青年人就不行了。因为从他能看能说开始，至少有百分之九十的信息不是来自他的父母，他自小就必须自立去判断选择。现实的生活是，那些自小依赖性很强的孩子最容易受到生活的伤害。据我临床发现，也是众所周知的事实，在大中学生中受失眠症伤害也是非常普通，非常广泛，非常严重的。 导致失眠症的原因很多。但主要包括两个方面的原因：一是心理方面的原因，二是生理方面的原因。失眠症多为情绪所困，具体说，入睡困难是由于焦虑所致，醒后不能再眠是因抑郁所伤。至于生理方面的原因，一般情况下，你很难用现代医学检测的方法及设备把它查出来，也很难用现代医学的语言把它描述清楚。这里，只能用中医的诊断方法及语言把它描述出来：即思虑劳倦，内伤心脾，阳不交阴，心肾不交，阴虚火旺，肝阳扰动，心胆气虚以及胃中不和等因素，均可影响心神而导致失眠症。中医辨证论治，又有虚证、实证之分。而青年人的失眠症大多属于虚证。 失眠症治疗的方法不少。这里，我向你介绍几种简便易行而又经临床反复验证是卓有成效的方法。
文章编号:1000-5404(2004)22-2061-03论著人不同胎龄胎脑海马神经干细胞发育规律初探 尹晓娟,杜 江,封志纯 (第一军医大学附属珠江医院儿科,广州510282) 提 要:目的 探讨人不同胎龄胎脑海马部位神经干细胞的发育规律。方法 收集胎龄16～32周的水囊引产胎儿100例,采用免疫组织化学和光镜技术对人胎脑海马部位神经干细胞的分布、形态、存在方式以及数量进行检测。结果 不同胎龄胎脑海马均存在神经干细胞,神经干细胞位于海马多形细胞层、锥体细胞层、颗粒细胞层及分子层,以多形细胞层、锥体细胞层及颗粒细胞层多见。细胞呈圆形、椭圆形、三角形及星形,以圆形和椭圆形多见,未见明显突起。细胞胞浆丰富,核呈圆形及椭圆形,染色质疏松,2～6个核仁不等。多数单个散在分布于其它神经元间,可见对称分裂现象,但有的神经干细胞呈簇状及群状分布,各组神经干细胞随着胎龄的增加呈减少趋势。结论 人不同胎龄胎脑海马广泛存在神经干细胞,各胎龄神经干细胞在分布部位、形态、存在方式及数量上存在一定的差异,海马可能是神经干细胞新的生发区。 关键词:神经干细胞;神经巢蛋白;人脑;海马 中图法分类号:R321;R322.81;R329.2文献标识码:A Development of neural stem cells in human hippocampus in the fetal brain at different developmental stages YIN Xiao-juan,DU Jiang,FE NG Zhi-chun(Department of Pediatrics,Zhujiang Hospital,First Military Medical University,Guangzhou 510282,Guan gdong Province,China) Abstract:Objective To study the development of neural stem cells fr om human fetal brains at different devel-opmental stages.Methods A total of100cases of embr yos at16-32gestational weeks by induction of labor with water ba g were collected for the determination of the distribution,forms,existing modes,and the number of neural stem cells in the hippocampus by SABC immunohistochemical method and light microscopy.R esults Neural stem cells wer e found in the hippoca mpus at different fetal ages and located in the polymorphic layer,pyramidal,granular and molecular la yers of hippocampus,mainly in polymorphic layer,pyramidal layer,and granular layer.Neural stem cells in hippocampus were round,ellipse,triangle,and stellate,particularly round and ellipse.No obvious enation was found.Neural stem cells had plenty of cytoplasm.The nuclei were round and ellipse with rare chromatin and nu-cleoli from2to6.Most of neural stem cells were distributed among other neurons,and symmetric cleavage was found in some of them,but some neural stem cells were distributed in cluster and nest.The number of neural stem cells in hippocampus were different between gr oups and gradually decreased with the increasing gestational age.Conclusion Neural stem cells exist widely in the hippocampus at different gestational ages.Ther e are differences in distribu-tion,for ms,existing modes,and number of neural stem cells in hippocampus at different gestational ages.Hipp-ocampus may be the ne w originating region of neural stem cells. Key words:neural stem cell;nestin;human brain;hippocampus 神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的发现彻底打破了神经不能再生的传统观念,不仅将神经科学研 基金项目:广东省科技联合攻关项目(B30502) Supported by t he Key Sc i&T ech Research Proj ect of Scie nt ific Co mm ittee of Guangdong Pro vince(B30502) 作者简介:尹晓娟(1966-),女,湖南省邵阳市人,博士研究生,主治医师,主要从事新生儿疾病、遗传性疾病及胚胎神经发育方面的研究,现在 在第三军医大学西南医院儿科,重庆400038。电话:(023)66359952 通信作者:封志纯,电话:(020)61643369,E-mail:zhjfe ngzc@sohu.co m 收稿日期:2004-03-04;修回日期:2004-07-03究推向了前沿,为神经发育和神经组织移植等领域开辟了广阔前景,同时给临床颅脑损伤或其它神经系统退行性疾病等治疗带来新的希望。国外研究表明,哺乳动物成年脑在未受损部位出现了间断性神经生发,诱导因素能使在体的脑组织发生内源性神经再生[1]。目前采用神经干细胞植入脑组织已经在临床取得了肯定的疗效,但激活脑内源性的神经干细胞实现自我修复仍然处在实验研究的初期[1,2]。迄今对于神经干细胞的原位调节仍然是一无所知,这负面影响了细胞移 2061 第26卷第22期2004年11月 第 三 军 医 大 学 学 报 ACTA ACADE MIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE Vol.26,No.22 Nov.2004 DOI:10.16016/j.1000-5404.2004.22.032