α-酮戊二酸受体1及Vimentin在糖尿病肾病大鼠肾脏的表达及意义
胡明1,2；张教斌1；韩春光1；虞积耀1,2；王恺1；邸婵娟1；刘永学1
(1. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所, 北京100850; 2. 海军总医院海战伤救治研究中心, 北京100048)
[摘要] 目的研究α-酮戊二酸受体1(oxoglutarate receptor 1, OXGR1)及Vimentin在糖尿病肾病大鼠肾脏的表达变化特点，并探讨其意义。方法选用Wistar大鼠，设置正常对照组和糖尿病模型组。通过注射链脲佐菌素，制作大鼠糖尿病模型；检测动物体重、血糖、24h尿蛋白及尿蛋白/尿肌酐比值的变化，并观察肾脏组织病理学的变化特点。应用免疫荧光检测OXGR1及Vimentin在肾脏的表达。结果正常对照组动物肾组织没有检测到OXGR1与Vimentin阳性重叠的区域。模型组动物随着病程的进展，体重减轻并出现血糖升高；24h尿蛋白及尿蛋白/尿肌酐比值升高，提示肾功能异常。免疫荧光发现模型组大鼠肾组织OXGR1或Vimentin阳性区域逐渐增强，同时两者阳性重叠区域逐渐增多。结论糖尿病模型动物随着病程的进展，一方面肾脏功能受损并出现组织学改变，另一方面OXGR1与Vimentin阳性重叠的区域增多，说明OXGR1可能与糖尿病肾脏上皮-间充质转化关系密切，前者在后者的诊断中具有潜在的意义。
[关键词]α-酮戊二酸受体1；Vimentin；糖尿病肾病；上皮-间充质转化；免疫荧光
Expression and significance of oxoglutarate receptor 1 and Vimentin in kidneys of rats with diabetic nephropathy
HU Ming 1,2; ZHANG Jiao-bin1; HAN Chun-guang 1; YU Ji-yao1,2; WANG Kai1; DI
基金项目：国家自然科学基金资助项目（No. 30973575）
作者简介：胡明，辽宁朝阳人，博士研究生，研究方向：病理学与病理生理学。
通讯作者：虞积耀，刘永学，liuyx@https://www.doczj.com/doc/b110214393.html,
Chan-juan1; LIU Yong-xue1
(1. Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850, China; 2. Naval Battle Wound Rescue and Treatment Research Center, Navy General Hospital, Beijing 100048, China; 3. Department of Pathology, Navy General Hospital, Beijing 100048, China)
Abstract: Objective To study the expression of oxoglutarate receptor 1 (OXGR1) and Vimentin in diabetic nephropathy, and its significance. Methods Wistar rats were randomly divided into normal control group and diabetes groups.Diabetes was induced in rats by using streptozotocin; body weight, blood sugar, urine protein in 24h and ratio of urine protein to creatinine in 24h were measured, and the pathological changes of kidneys were observed. Expression of OXGR1 and Vimentin in kidneys was detected by immunofluorescence(IF). Results In the normal control group, there was no OXGR1 and Vimentin overlapping region in the kidneys. In diabetes group, with the aggravation of diabetes, body weights of rats decreased, but blood sugar levels increased, and urine protein and ratio of urine protein to creatinine in 24h also increased, suggesting renal dysfunction; by IF, the OXGR1 or Vimentin positive regions gradually increased, and OXGR1 and Vimentin overlapping regions gradually increased, too. Conclusion With the progress of diabetes, the diabetic rats suffered from renal dysfunction, which was proved by pathological changes. Meanwhile, OXGR1 and Vimentin overlapping areas in the kidneys of diabetic rats increased, indicating OXGR1 may have a close relation with epithelial - mesenchymal transition in diabetic nephropathy, and the former might have potential significance in the diagnosis of the latter.
[Key words] diabetic nephropathy; epithelial-mesenchymal transition; oxoglutarate receptor 1; immunofluorescence
糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病（Diabetic Mellitus，DM）最严重的并发症之一，也是终末期肾病的主要原因[1]。肾小管上皮-间充质转化
(epithelial mesenchymal transition, EMT)是包括多种肾脏疾病进展到终末期肾功
能衰竭的共同通路[2]。EMT的程度与肾功能减退的程度具有一定的相关性，因此它可以作为评价慢性进展肾病的重要功能指标之一。
OXGR1（oxoglutarate receptor 1，α-酮戊二酸（盐）受体1），又称GPR80或GPR99，是一种G蛋白偶联受体。α-酮戊二酸或盐（α-Ketoglutarate，AKG）是其内源性配基[3]。肾脏是该受体表达最丰富的组织器官[4]，但当前有关OXGR1在肾脏中的研究非常有限，对其生理功能及病理意义甚少涉及。本研究旨在探讨OXGR1及Vimentin在糖尿病肾病大鼠肾脏的表达，并探索两者之间的内在联系。1．材料与方法
1.1实验动物
雄性Wistar大鼠18只，体重180±20克，由军事医学科学院实验动物中心提供并统一饲养，室内温度21-23度，相对湿度60%。
1.2.主要材料
链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)购自Sigma公司。尿肌酐及尿蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程有限公司。OXGR1兔抗人抗体购自Abnova公司，Vimentin小鼠抗人抗体购自中杉公司；山羊抗兔及山羊抗小鼠荧光二抗购自中杉公司。
1.3 动物分组及模型制备
将大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组，制备0.1M枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，溶解STZ。采用STZ诱导建立大鼠糖尿病模型，血糖>16.7mmol/L为糖尿病
模型标准。检测尿蛋白量>30mg/24h即为糖尿病肾病；并经病理学切片证实。1.4 大鼠血糖、体重、24h尿蛋白及尿肌酐的测定
大鼠STZ注射后不同时间点，称量并记录体重的变化；以血糖仪测定尾静脉的血糖。以代谢笼收集大鼠24h尿液，考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白排泄量，以试剂盒测定尿肌酐含量。
1.4 双重免疫荧光标记
将大鼠肾组织冰冻切片。-80℃冰箱内保存待用。使用前复温15分。冰冻丙酮固定15min。PBS洗3次，每次5min。加OXGR1的一抗，37°孵育1小时。PBS 洗3次，每次5min。加抗Vimentin一抗，放在湿盒里，4度过夜。PBS洗3次，每次5min。加相应二抗37°孵育30min。PBS洗3次，每次5min。水溶性封片剂封片。荧光显微镜观察。
1.5 结果判定
免疫荧光结果使用Image-pro Plus 6.0进行分析，每例切片选10个高倍视野，将平均积分光密度（IOD）进行对比。
1.6 统计学分析
使用SAS 9.2软件进行统计分析，采用方差分析进行比较，不同组间的两两比较采用SNK检验。
2 结果
2.1 动物体重变化
正常对照组大鼠生长状况良好，体重逐渐增加；模型组皮毛光泽差，大鼠懒
动，尿量显著增加，体重明显下降（P<0.01），而且随着病程的进展，状况日渐加重（表1）。
表1 大鼠体重（g）的动态变化(n=6)
0周16周32周
正常对照组192.3±21.5 491.1±47.2 511.5±56.2
模型组189.8±18.3 185.2±21.5**178.3±20.5**
**P <0.01，与正常对照组比较
2.2 动物血糖变化
正常对照组大鼠血糖平稳，波动在4.5~7.9mmol/L，模型组大鼠注射STZ后72h 血糖即开始明显升高，而且一直呈持续状态，平均值波动在22.2~28.4mmol/ L之间（表2）。
表2. 大鼠不同时期的血糖水平（mmol/L）(n=6)
组别0周16周32周
正常对照组 5.1±1.5 7.5±2.3 6.4±1.7
模型组 4.9±1.3 25.4±3.1**25.8±6.2**
**P <0.01，与空白对照组比较
2.3 动物24h尿蛋白和肌酐含量改变
表3、表4的结果表明，在各检测时间点，模型组大鼠24h尿蛋白含量较对照组明显增加（P<0.01），尿蛋白/尿肌酐比值亦较对照组显著升高（P<0.01），该变化有随病程发展而加剧的趋势。
表3. 大鼠24h尿蛋白含量（g）的动态变化(n=6)
组别16周32周
正常组 2.2±1.3 1.2±0.7
模型组40.4±15.8**61.5±29.3**
**P <0.01，与空白对照组比较
表4. 大鼠24h尿蛋白/尿肌酐比值（mg/mmol）动态变化(n=6)
组别16周32周
正常组 6.8±3.4 7.6±2.1
模型组100.4±28.7**160.4±38.2**
**P <0.01，与空白对照组比较
2.4 肾脏病理学改变
正常对照组大鼠肾脏大小形态正常，模型组大鼠肾脏肥大，但肾盂常常出现扩张。光镜下，正常对照组各期肾小球肾小囊与毛细血管袢间隙存在，毛细血管袢开放，无明显异常情况。肾小管上皮细胞排列整齐，细胞浆红染，无颗粒及空泡出现。间质淡染，均匀，无炎细胞浸润。糖尿病模型组随时间延长，系膜区增宽，系膜细胞增生，系膜基质红染，毛细血管腔受压变小。小动脉壁增厚，管腔狭窄。肾小球系膜膨胀，球囊粘连。肾间质炎细胞浸润，出现间质纤维化伴小管萎缩。实验结果与参考文献描述基本一致[5]。
在糖尿病发病早期，肾小管上皮细胞可能因糖原累积而出现空泡变性。但随着疾病的发展，特别是在疾病的中晚期，空泡变性常伴随着炎细胞浸润，间质纤维化，小管萎缩而同时存在。在糖尿病肾病中，炎细胞浸润、炎症反应、间质纤维化、以及肾小管萎缩等病变都是肾小管为中心。
免疫荧光标记图像显示，在肾小管密度基本相似的区域，随着糖尿病病程的
加重，OXGR1阳性区域逐渐增强，同时Vimentin 阳性区域逐渐增多，与正常对照组相比具有及显著差异（P<0.001）。在正常对照组中没有OXGR1与Vimentin 阳性重叠的区域。而随着糖尿病病程的进展，OXGR1与Vimentin 阳性重叠的区域增多，说明出现了EMT 。
OXGR1阳性（绿色荧光） Vimentin 阳性（红色荧光）
OXGR1阳性（绿色荧光）
+Vimentin 阳性（红色荧光）融合 OXGR1阳性（绿色荧光）+Vimentin 阳性（红色荧光）+明场图像融合
图1 OXGR1及Vimentin 在正常对照组大鼠肾组织的表达（100×）
OXGR1阳性（绿色荧光） Vimentin 阳性（红色荧光）
OXGR1阳性（绿色荧光）
+Vimentin 阳性（红色荧光）融合 OXGR1阳性（绿色荧光）+Vimentin 阳性（红色荧光）+明场图像融合
图3 DN 模型大鼠32W 肾组织OXGR1及Vimentin 表达（100×）
OXGR1阳性（绿色荧光） Vimentin 阳性（红色荧光）
OXGR1阳性（绿色荧光）
+Vimentin 阳性（红色荧光）融合 OXGR1阳性（绿色荧光）+Vimentin 阳性（红色荧光）+明场图像融合
图2 DM 模型大鼠16W 肾组织OXGR1及Vimentin 表达（100×）
表5 不同病变程度时的肾脏荧光强度(平均IOD)比较(n=6)
正常对照组模型16周组模型32周组OXGR1 156.50±6.43 325.89±8.08***359.90±5.60*** Vimentin 84.13±4.95 178.40±9.83***328.83±8.68***
***P <0.001，与空白对照组比较
3 讨论
STZ损毁胰岛是诱导DM的经典动物模型之一。该模型的动物生命体征保持相对平稳、动物存活率高。建立大鼠DM模型的关键在于大鼠出现持续性的高血糖，而这依赖于对胰岛β细胞的损毁。为此，除了注射STZ前应对大鼠禁食超过12h以外，STZ注射液的配制也很关键。应将STZ溶于枸橼酸钠缓冲液中，pH值4.2~4.5；鉴于STZ在水溶液中不稳定，应现配现用6，并在使用过程中低温保存。
本研究结果显示，STZ注射组大鼠的血糖始终维持在较高水平；与此相对应，大鼠的一般状况变差，体重减轻，尿量增多。随着高血糖的时间延长，通常会渐进性地引起肾脏损伤，出现尿蛋白及肌酐升高，而且病症随病程发展逐渐加剧，符合DN发生发展过程中肾功能损害的特点。常规病理也证实STZ组大鼠的肾脏初期出现了DM的典型病变。随着病程的进展，STZ组大鼠肾脏逐渐出现DN病变。尽管I型和II型糖尿病的病因有所区别，但两型糖尿病所导致的DN在病理学形态上具有相似性[7]，因而STZ诱发的DN模型可作为通用的DN疾病模型用于病理生理学研究。肾小球及血管的病变，在DN的病理生理学中起着重要的作用[8]。在本研究中，除了肾小球的病变以外，部分DN病变（如肾小管萎缩及间质纤维化等）呈现以肾小管为中心的特点，而非以肾小球为中心。高血糖可造成对肾小管
的损伤，这一点在过去的研究中往往重视程度不够。当前，肾小管病变在DN中的作用越来越受到重视，一般认为肾小管病变具有其独立性，而非过去所认为的继发性改变。随着对糖尿病认识的深入，糖尿病中肾小管损伤的意义逐步地得到揭示。在该过程中，肾小管的一些重要蛋白，包括近曲小管分泌的血管紧张素原、集合管分泌的肾素、以及肾小管中血管紧张素II的I型受体等都起了比较重要的作用[9]。
免疫荧光标记证实OXGR1阳性区域主要位于肾小管的外缘区域，并在肾小管细胞之间也可见到阳性区域，这说明OXGR1主要位于肾小管细胞膜表面表达。本实验通过建立大鼠DM模型，观察糖尿病大鼠肾脏蛋白水平的变化，结果表明随着DM的进展，OXGR1阳性区域逐渐增强。这可能源于在DM中出现肾小管增生。近年来的研究发现在DM的早期，胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor 1 ，IGF-1)，血小板来源生长因子(platelet-derived growth factor , PDGF)，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)，以及表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)等多种细胞因子参与了肾小管增生过程[10]。在DM 肾损伤的早期，JAK/STAT通路激活可介导超早期基因c-jun和c-fos，后两者可活化多胺合成的限速酶—鸟氨酸脱羧酶；鸟氨酸脱羧酶可导致肾小管上皮细胞数目增多以及肾小管增生[11]。肾小管的增生可引起重吸收的增加，这是肾小球高滤过的主要原因[12]。一般认为早期出现肾小球高滤过的病人[13]，在疾病晚期更易于出现糖尿病肾病[14]。
同时本研究中发现，随着DM病程的进展，Vimentin阳性区域逐渐增多。Vimentin作为标记分子，正常时在上皮细胞中并不表达，在DN中肾小管上皮细胞阳性表达提示出现了EMT；VEGF等细胞因子参与了EMT过程[15]。在正常对照
组中没有OXGR1与Vimentin阳性重叠的区域。而随着病程的进展，OXGR1与Vimentin阳性重叠的区域增多，这提示了EMT过程的加重。肌成纤维化细胞在肾小管－肾间质纤维化过程中起着关键作用，而EMT则可能是其它细胞转化为肌成纤维化细胞的重要途径之一[16]。DN肾脏病理改变中，除了肾小球受损外，肾小管－肾间质纤维化的严重程度与肾脏排泄功能减退的程度密切相关[17]。因此研究肾小管EMT的发生发展及其影响因素对改善包括DN在内的各种慢性肾脏疾病病变有着重要的意义。
本研究应用Vimentin作为标记分子，应用免疫荧光技术证实了在DN的肾小管上皮细胞中存在有EMT。而当EMT进展到一定程度时，导致肾小管上皮细胞的减少和肾间质成纤维细胞的积聚，同时紧密伴随着肾脏排泄功能的严重受损[18],[19]。我们推测，伴随着OXGR1的增多，肾小管对周围体液的离子浓度的波动变得敏感，提高了有机阴离子的转运速度。这样，机体内的有机阴离子的浓度波动加大，使得机体保持内环境的稳定变得更加困难，从而加重了糖尿病肾病的病情。因而，OXGR1表达的变化可在糖尿病的临床诊断中提示肾小管的功能转归，以及EMT的进展程度。
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大鼠肾纤维化模型 肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。 单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。 1.实验动物 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g 2.实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.实验周期 7d，14d，21d，28d 4.建模方法 1术前一晚禁食,自由饮水。 2称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手术区域。3在上腹中线偏左约3-4mm剪开腹壁，手术组分离出左肾输尿管。 4在靠近肾下极处结扎并分离输尿管，然后双结扎，在2个结扎中间剪断输尿管，逐层缝合肌层及腹壁，酒精清洁缝合处。待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 5置于加热垫至其苏醒。假手术组不结扎输尿管，其余步骤相同。 6术后三天连续注射青霉素20万单位/天防止感染。 5.模型的评价 5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。
2012年12月1日第12期No．12 1 Dec． 2012 中医学报 CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE 第27卷总第175期Vol．27 Serial No．175 *基金项目：北京中医药大学自主课题(编号:2011－JYBZZ － XS077) 通络救脑注射液对阿尔茨海默病模型大鼠学习 记忆及氧化应激反应的影响 * Effects of Tongluo Jiunao Injection on learning and memory and oxidative stress response for Alzheimer's Disease Rat Models 刘洋Liu Yang 1，李澎涛Li Pengtao 2，刘希伟Liu Xiwei 1，南一楠Nan Yinan 1，都文渊Du Wenyuan 1 1．北京中医药大学基础医学院中西医结合基础(病理)，北京110029 Integration of Traditional Chinese Medicine and Western Medicine Subject (Pathology )in Basic Medical College of Beijing University of Traditional Chinese Medicine ， Beijing ，China 1100292．北京中医药大学东直门医院，北京100700 Dongzhimen Hospital of Beijing University of Traditional Chinese Medicine ，Beijing ，China 100700 摘要：目的:探讨通络救脑注射液(Tong Luo Jiu Nao injection ， TLJN )对阿尔茨海默病(Alzheimer ’s Disease ，AD )模型大鼠的防治作用及其抗氧化机制。方法:采用脑内定位注射β淀粉样蛋白(βamyloid1-42)建立AD 大鼠模型，在模型建立成功的同时给予TLJN 治疗。采用Morris 水迷宫进行AD 大鼠的行为学检测，用化学比色法检测大脑皮质丙二醛(MDA )的含量。结果:与正常组比较，AD 模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P ＜0．01)，目标象限停留时间明显缩短(P ＜0．01);TLJN 治疗组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P ＜0．05)，目标象限停留时间明显增加(P ＜0．05)。AD 模型组大鼠脑皮质中MDA 含量增加(P ＜0.01);TLJN 治疗组，脑皮质MDA 含量显著减少(P ＜0．01)。结论:TLJN 具有改善学习记忆能力，对抗大鼠神经系统的退行性病变有一定的作用，可能通过抑制AD 模型大鼠脑皮质MDA 产生发挥其保护作用。 Abstract :Objective :To explore the preventive and therapeutic effect and anti-oxidation mechanism of Tong Luo Jiu Nao injection (TLJN )in Alzheimer's Disease (AD )rat models．Methods :The AD rat model was established by injecting β-amyloid1-42into the rat brain ，and successful model rats were given TLJN injection treatment at the same time．The behavioral changes of the AD rats were test-ed with Morris water maze．Chemical colorimetry was used to measure malondialdehyde (MDA )content in the cerebral cortex．Results :Compared with the control group ，the escape latent period of AD rats was significantly longer (P ＜0．01)，retention time of the target quadrant significantly obviously reduced (P ＜0．01);After TLJN treatment ，the escape latent period of AD rats was significantly shorter (P ＜0．05)，and retention time of the target quadrant was significantly increased (P ＜0．05)．In AD model group ，the MDA content in cerebral cortex was increased significantly (P ＜0．01);while after TLJN treatment ，the MDA content in cerebral cortex was decreased obviously (P ＜0．01)．Conclusions :TLJN treatment has certain effects on improving learning and memory ability of AD rats and resisting retrogression of rats nervous system ，and plays protective role in AD rats possibly via inhibiting the production of MDA．关键词：阿尔茨海默病;通络救脑注射液;Morris 水迷宫;学习记忆;氧化应激反应;大鼠 Key words :Alzheimer's Disease (AD );Tongluo Jiunao injection ;Morris water maze ;learning-memory ;oxidative stress response ;rat 中图分类号CLC number ：R285．5 文献标识码Document code ：A 文章编号Article ID ：1674－8999（2012）12－1614－03阿尔茨海默病（Alzheimer ’ s Disease ，AD ）是一种继心血管病、癌症、脑卒中后严重威胁人类健康的高发性神经退变性疾病。但目前临床上对于AD 的病因和发病机制尚不完全清楚， 对于其治疗仍旧是一个世界性的难题。近些年来，对于AD 的发病机制研究方面取得了很多进展，主要集中在遗传因素、环境因素、免疫-炎性机制、氧化应激和细胞凋亡等方面，而氧化应激在AD 中的作用越来越受到研究者的重视。结合本研究团队多年体内外实验研究， 发现AD 的中医病机关键为“毒损脑络”［1-2］ 。因此，本实验采用大鼠双侧海 马注射A β1-42这一致毒片段以模拟“毒损脑络”病证，观察“毒损脑络”病证下AD 大鼠学习记忆变化情况及氧化应激反应的改变，采用针对该中医病机关键具有解毒通络作用的中药复方通络救脑注射液进行干预， 通过Morris 水迷宫行为学检测方法观察药物干预后大鼠学习记忆的改善情况及通络救脑注射液的作用机制，为通络救脑注射液的临床应用提供体外实验依据。 1 材料与方法 1．1 动物分组 清洁级雄性SD 大鼠32只，体质量（250?20）g ，购自北 京维通利华实验动物中心。随机分成正常对照组（正常组）、 A β海马注射组（模型组）、A β海马注射+通络救脑注· 4161·
2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
生理学报 Acta Physiologica Sinica , December 25, 2007, 59 (6): 796-804 https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, 796 研究论文 Received 2007-05-16 Accepted 2007-06-08 This work was supported by the National Natural Science Fundation of China (No. 30470627). * Corresponding author. Tel: +86-21-54237716; Fax: +86-21-64171179; E-mail: lulimin@https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, 肾素(原)受体在大鼠肾小球系膜细胞和肾脏的表达 贺 明1，黄娅林2，张 琳3，姚 泰1，陆利民1,* 复旦大学上海医学院1生理学与病理生理学系；2医学神经生物学国家重点实验室，上海 200032; 3上海交通大学医学院生理学系，上海 200025 摘 要：近年发现的肾素(原)受体(renin/prorenin receptor, RnR)已被证明具有生物学功能，在心、肾及多种细胞表达。本文旨在观察RnR 在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MCs)和肾脏中是否表达，及其表达的细胞部位，并用RnR 的多肽阻断剂肾素原“柄区肽” (handle region peptide, HRP)与RnR 结合后观察受体复合物进入细胞的过程与定位。结果显示，RnR 主要存在于大鼠肾脏皮质肾小球系膜区和体外培养的MCs 的细胞核周围胞浆和细胞膜。将FITC 标记的HRP (FITC-HRP)加入细胞培养液后30 s 到30 min 期间，可观察到FITC-HRP 由培养液转移到胞浆内并进入细胞核。用免疫荧光和激光共聚焦技术观察到，HRP 与RnR 的共定位主要位于细胞膜和细胞核周围胞浆；在30 min 时，一部分HRP 已进入细胞核，而RnR 没有进入细胞核内，仍主要位于细胞核周围胞浆。上述结果提示，RnR 与其配基结合后进入细胞内并发挥生物学效应。 关键词：肾素(原)受体；肾素原“柄区肽”；系膜细胞；肾素-血管紧张素系统中图分类号：R 334+.1 Expression of renin/prorenin receptor in rat kidney and cultured mesangial cells HE Ming 1, HUANG Ya-Lin 2, ZHANG Lin 3, YAO Tai 1, LU Li-Min 1,* 1 Department of Physiology and Pathophysiology; 2 National Key Laboratory of Medical Neurobiology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China; 3 Department of Physiology, Medical College of Shanghai Jiaotong University, Shang-hai 200025, China Abstract: The renin/prorenin receptor (RnR) has recently been cloned and demonstrated to exist in different cells in the cardiovascular and renal systems, playing an important role in physiological and pathophysiological situations. In the present study, we used immunofluorescence method to identify whether and where the RnR expressed in cultured rat renal mesangial cells (MCs) and rat kidney.By using the prorenin handle region peptide (HRP) as a decoy peptide of the RnR, we observed the distribution of the HRP-RnR complex in the MCs. Our results showed that the RnR was localized in the perinuclear zone and plasma membrane of the MCs. At the organ level, the RnR was observed in the mesangium of cortical glomeruli in rat kidney. The FITC-labeled HRP (FITC-HRP) translocated from cell culture medium into the cytoplasm within 30 s. Colocalization of the HRP and RnR was observed mainly on the cell membrane and in the perinuclear zone of cytoplasm by using immunofluorescence and confocal microscopy. At 30 min the FITC-HRP was mainly observed in the nucleus while the RnR remained in the perinuclear zone of cytoplasm. Taken together, our results confirm the expression of RnR in the renal MCs. It is suggested that internalization of the RnR after binding with its ligand is at least one of the pathways through which the RnR exerts its biological actions. Key words: renin/prorenin receptor; handle region peptide of prorenin prosegment; mesangial cells; renin-angiotensin system
红景天对阿尔茨海默病大鼠行为学和脑组织 抗氧化能力的影响 作者：冀俊虎,董联玲,曹娟,杨发明,王健 【摘要】目的探讨红景天对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的干预效果和作用机理。方法采用腹腔注射D-半乳糖(用生理盐水配成浓度为10 mg/mL)和灌胃AlCl3(用蒸馏水配成浓度为20 mg/mL),并一次性注射东莨菪碱建立AD动物模型。通过Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆能力变化,抗超氧阴离子和总抗氧化能力测定检测各组大鼠脑组织抗氧化水平,常规HE染色和免疫组化测Aβ1-40的表达,观察大鼠海马及皮质的形态学改变。用红景天以灌胃方式对实验大鼠进行干预,并以喜得镇做对照观察其干预效果。结果模型组大鼠记忆功能明显减退,神经细胞破坏明显,海马和皮质出现β-淀粉样蛋白沉积及老年斑。中药组、西药组及空白组大鼠在水迷宫测试中,逃避潜伏期明显缩短,原平台象限比、跨平台次数明显增加,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；模型组抗超氧阴离子和总抗氧化能力活性较其他组明显降低(P＜0.05)。结论红景天可以有效改善AD大鼠空间学习记忆能力损害,同时在清除自由基和抗氧化损伤方面有显著功效,具有神经保护作用。 【关键词】红景天；阿尔茨海默病；行为学；抗氧化能力；大鼠
Abstract：Objective To study the intervention effect and mechanism of integripetal rhodiola herb (IRH) on Alzheimer’s disease model rats. Methods Alzheimer’s disease model was made by injecting D-galactose (10 mg/mL) in abdominal cavity and taking AlCl3 (20 mg/mL) by intragastric administration, and injecting scopolamine. Morris water maze testing system was undertaken to observe the change of learning and memory ability in rats, biochemical indicator tested was to contrast the state of oxidative stress, common HE staining and immunohistchemistry staining were to observe the morphology change of the hippcampus and cortex cell. The model rats were administrated IRH by means of intragastric administration contrasting with hydergine to compare the effect. Results The memory ability of model group was obviously decreased, cellula nervosa were damaged badly. A β and senile plaques appeared on hippcampus and cortex. All of the test indexes in Morris water maze showed that the abilities of space search, learning and memory in different groups remarkably improved compared with that of the model group (P ＜0.05). The anti-02·- and T-AC activity of the model group was lower than other groups obviously (P＜0.05). Conclusion IRH has significant relieving effect on the lesion of the abilities of
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
中国组织工程研究与临床康复第15卷第18期 2011–04–30出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 30, 2011 Vol.15, No.18 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 3347 Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China Mai Hai-xing★, Master, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China maimark24@ https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, Correspondence to: Chen Li-jun, Doctor, Professor, Master’s supervisor, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China chenlijun829@ https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, Received: 2010-10-26 Accepted: 2010-12-02 解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 麦海星★，男，1981年生，广东省阳江市人，汉族，2008年解放军第四军医大学毕业，硕士，主要从事肾脏移植的研究。 maimark24@ https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, 通讯作者：陈立军，博士，教授，硕士生导师，解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 chenlijun829@ https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, 中图分类号:R617 文献标识码:B 文章编号:1673-8225 (2011)18-03347-04 收稿日期：2010-10-26 修回日期：2010-12-02 (20101026009/W ? W) 大鼠原位肾脏移植模型的建立★ 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军 Rat models of orthotopic kidney transplantation Mai Hai-xing, Qu Nan, Zhao Li, Huan Chen, Wang Ya-lin, Li Xue-chao, Li Jian-tao, Chen Li-jun Abstract BACKGROUND:There are many ways to prepare kidney transplantation models in rats; however, there are still many problems about operation time, transplantation effect and so on. OBJECTIVE: To study the microsurgical technique of establishing a reliable rat model of orthotopic kidney transplantation. METHODS: Kidney transplantation was performed from SD to Wistar strain (allogeneic),the donor’s artery and renal vein were put on the self-make rubber septum and underwent the end to end anastomosis surgeon with the receptor’s arteriae renalis and renal vein. After that, the donor’s bladder valva was inosculated with the receptor’s bladder. All the rats were divided into two groups: control group and Cyclosporin A (CsA) group, each group included 30 rats. The control group received 1 mL D-hanks each day after transplantation; the CsA group received subcutaneous injection of CsA for 15 mg/kg. The serum creatinine levels were observed at days 3, 5 and 10 after transplantation, pathological changes were also observed at 10 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION: Rat orthotopic kidney transplantation was performed in 60 rats, and the successful rate was 85%. The serum creatinine level in the CsA group was lower than that in the control group (P < 0.05), but the survival time in the CsA group was longer than that in the control group (P < 0.05). Allografts of the control group exhibited typical severe acute rejection. It is indicated that this rat model of kidney transplantation is a reliable model with good reproducibility and high achievement ratio. Mai HX, Qu N, Zhao L, Huan C, Wang YL, Li XC, Li JT, Chen LJ.Rat models of orthotopic kidney transplantation. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(18): 3347-3350. [https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, https://www.doczj.com/doc/b110214393.html,] 摘要 背景：目前已有多种大鼠肾移植模型建模方式,但在移植时间、移植效果等方面都存在各种问题。 目的：探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的方法。 方法：以SD大鼠为供体Wistar大鼠为受体行原位肾移植术。供体肾动脉、肾静脉在自制橡胶垫片上分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合。将实验动物随机分为2组，对照组移植后每日腹腔内输注1 mL D-hanks 液；环孢素A组移植后每日皮下注射环孢素A 15 mg/kg。记录大鼠生存时间并于移植后第3，5，10天测定血肌酐值，移植后第10天，光镜下观察移植肾病理改变。 结果与结论：大鼠原位肾脏移植成功率为85%。移植后第5，10天环孢素A组血清肌酐值显著低于对照组(P < 0.05)。环孢素A组大鼠肾移植后存活天数明显长于对照组(P < 0.05)，移植肾病理可见排斥明显减轻。提示该模型稳定性强、重复性好，具有较高的成功率。 关键词：模型，动物；肾；移植；显微外科；大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.18.028 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军.大鼠原位肾脏移植模型的建立[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(18):3347-3350. [http://www.crte https://www.doczj.com/doc/b110214393.html, https://www.doczj.com/doc/b110214393.html,] 0 引言 大鼠是目前器官移植实验中最常用的实验动物[1-5]。由于大鼠的肾血管短，手术视野小，端端吻合难度较大，因而以往实验大多采用端侧吻合，但这须阻断大鼠体循环，导致其下半身在吻合期间处于缺血状态。当开放血管夹后，将发生严重的缺血-再灌注损伤[6-9]。有的方法采用带有与供肾动脉和肾静脉相连的主动脉和下腔静脉片，分别与受者肾动脉、肾静脉端端吻合，膀胱与膀胱吻合，但术中往往发现主动脉与肾动脉管径相差甚远，吻合后容易漏血。另一种方法利用供、受体动、静脉袖口式套叠，此方法提高了受体的存活率并缩短了手术时间，但因所用的套管管径有限，在翻转血管壁形成袖口时，使血管腔变狭小，影响移植肾脏血流的恢复，腹腔静脉与肾静脉作端端吻合时，因静脉壁薄弱常引起静脉壁撕裂而导致手术失败。 不阻断大鼠体循环的肾血管端端吻合原位肾移植技术的建立，避免了上述的缺点，采用端端吻合法减少了供肾的缺血-再灌注损伤，术后动物的存活率较采用端侧吻合者有明显提高[10-12]。 实验采用供体肾动脉、肾静脉分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合的方法。施行大鼠肾移植。
大鼠肾脏冰冻切片的体会 发表时间：2016-03-01T14:17:27.000Z 来源：《中国综合临床》2015年9月供稿作者：张丽娥[导读] 福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用. 张丽娥 福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００ 【中图分类号】R５８７．２【文献标识码】B 【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０８５７－０１ ０．引言由于肾脏组织质地柔软,含水量高,或在取材过程中肾组织与水分接触, 突遇低温,易形成冰晶,快速冷冻切片的制作难度大,我们通过对大鼠肾脏的冰冻制片,总结经验如下. １材料使用德国产Leica—CM１９５０型冰冻切片机,Leica一次性刀片,冷冻组织包埋剂(O．C．T．),AF固定液,改良Gill苏木素染色液,２％碳酸氢钠返蓝液,逐级梯度酒精,中性树胶. ２方法２．１取材及包埋２．１．１取新鲜大鼠肾脏标本常规取材,标本要新鲜,无需固定,严禁浸入甲醛, 酒精,生理盐水等液,尤其是不可以用酒精固定,酒精固定后组织将无法冷冻.２．１．２将样本托放入冰冻切片机的冻台上预冷,加少许O．C．T．,在OCT 未完全冻结前快速的将组织放于样本托上,在组织周围适量的补充O．C．T,待包埋剂约１/３未冻结时压上冷冻锤,打开加强冷冻,使组织快速冷冻.２．１． ３冰冻切片机温度设定在－１６oC—－１８oC为宜.冷冻时间一般为１min~２min.冷冻时间过长,组织易变硬变脆,细胞结构会发生改变,难于切片.２．１．４包埋组织时应将组织周边多留出O．C．T．用于牵引展开切片,O．C．T．中的小气泡应尽量去除,以免切片时挤压旁边组织产生皱褶,影响切片效果. ２．２切片组织切片厚度设定为５um－６um.刀具提前安放好,调整好刀具角度,切片时控制好操作窗,以利保温.肾脏组织细胞比较致密,若时间过长会变脆且易碎,在冰冻切片时可用手指轻压组织回温,再进行切片. ２．３固定切片后立即放入AF固定液固定３０s—１min,不可待切片干后再固定,这样会造成细胞核染色质不清晰,呈现毛玻璃样改变,细胞胞浆边界不清等组织细胞的退变现象. ２．４染色封片固定好的冰冻切片在苏木素染液中染色３０s—５０s,经１％盐酸分化,２％碳酸氢钠水溶液返蓝,伊红染色,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片. 制好的切片核浆对比分明,红蓝适度,颜色鲜艳,达到理想染色效果. ３讨论与分析:３．１冰晶是由于冷冻缓慢,冷冻时间过长,胞质内与组织间隙未结合的水分析出形成的.肾脏因其组织结构,在组织冷冻过程中,组织内易产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生,最佳的办法一是使用冻锤:新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织受挤压变形.应该待O．C．T．凝固６０％~７０％时,再将冻锤轻压在组织上, 这样既能防止冰晶的产生,又能得到较平整的切面;另一种方法为使用液氮冷冻,可将组织放入液氮中２s－３s,待组织冻至８０％时即可取出制片,否则过冻会引起组织发脆,冻头与组织分离[２]. ３．２将包埋剂放入－１０OC或－４OC冰箱内保存,包埋剂要使用OCT,而不能用胶水等替代,因OCT 的主要成分为PVP,其能通过渗透的作用将细胞内的水分移出,减少冰晶形成. ３．３冰冻的速度与样品的表面积和体积成正比,取材时组织块尽可能薄,０．２cm 为宜,扁平状冷冻速度快,切片的前几张冰晶少,越后冰晶越多,切片不能求快,而要确保切片质量,力争一次完成一张高质量的切片[１]. ３．４可预先做好OCT冻头,将冻头上的OCT 修平,有利于将组织放平,再在冰冻机内在肾组织上滴加OCT,有利于OCT迅速降温,避免组织复温,减少冰晶形成. ３．５肾脏冰冻制片时易产生不规则裂痕,与切片时温度和切片速度有关,操作时应注意操作窗不要开太大,免工作箱的温度升高;OCT的用量太少易产本皱褶,滴加OCT时要上下俩端多,俩侧少,同时要注意OCT不要有小气泡. ３．６冰冻切片机应安放在冷室内,避免压缩机反复工作,仪器要定期维护,除霜,清洁消毒. 总之,冰冻切片技术是病理科最重要的常规工作之一,也是较难掌握的病理实验技术.要做好一张冰冻切片需要病理技术人员具有严格的责任心、严谨的工作态度、丰富的工作实践经验[３]在日常的工作中还需不断摸索经验提高切片质量,冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用. 参考文献[１] 陈乐真,徐庆中,陈国璋手术中病理诊断图鉴１版北京:科学技术文献出版社,２００５:２(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[２] 范慧,陈立华,刘宇冷冻切片的制作体会及常见问题分析．诊断病理学杂志,２００８,１３８(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[３] 吴艳霞．冰冻切片的制作方法分析．吉林医学,２００９,３０(６):４９３．
阿尔茨海默病大鼠自噬相关蛋白Beclin—1和凋亡相关蛋白p53表达 变化及电针的调控作用 目的观察电针对大鼠海马自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达的影响，探讨电针治疗阿尔茨海默病（AD）的作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组。电针组取“百会”和“涌泉”进行电针治疗，每日1次，7 d为1个疗程，共治疗4个疗程。疗程结束后尼氏染色观察各组海马CA1区组织形态的变化并计数尼氏体阳性细胞，Western blot检测Beclin-1和p53蛋白的表达。结果模型组CA1区尼氏体阳性的细胞数目较正常组显著减少（P＜0.01），电针组锥体细胞和尼氏体表达较模型组明显增多（P＜0.05）。与正常组比较，模型组海马组织中Beclin-1蛋白表达降低、p53蛋白表达升高（P＜0.05）；与模型组比较，电针组Beclin-1蛋白表达明显升高（P＜0.01），p53蛋白表达降低（P＜0.05）。结论电针治疗可对抗β-淀粉样蛋白诱导的神经元凋亡，改善AD海马组织形态变化。 标签：电针；阿尔茨海默病；凋亡；自噬；Beclin-1蛋白；p53蛋白；大鼠 上海中医药大学名师传承研究工程项目（2009120） 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种慢性进行性的中枢神经系统退行性变性病，β-淀粉样蛋白（amyloid-β，Aβ）沉积形成的老年斑、神经原纤维缠结和神经元及其突触的缺失是其典型特征。目前AD的临床药物只能对症治疗，无法逆转其病理进程。自噬是细胞长寿命蛋白、变性或衰老细胞器的主要降解途径[1]。研究表明，自噬功能障碍与多种错折叠蛋白聚集体导致的神经变性疾病有关[2-3]。自噬障碍可能影响Aβ的清除和增加神经细胞死亡[4]，表明自噬可以保护神经元免受Aβ诱导的凋亡[5]，与AD的病理生理学密切相关。针灸治疗AD具有诸多的优势，且疗效明确[6-7]。本研究在构建AD大鼠模型的基础上，通过检测自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53的表达变化，探讨电针治疗AD的作用机制。 1 实验材料 1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠60只，体质量（200±50）g，上海中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（沪）2008-0016，实验室符合国家动物实验设施屏障系统标准。 1.2 主要试剂与仪器 Aβ1-40，美国Sigma公司；Beclin-1兔抗大鼠多克隆抗体和HRP标记山羊抗兔二抗，美国cell signaling technology公司；p53山羊抗大鼠多克隆抗体，美