第２６卷第３期２００５牟６月
河南工业大学学报（自然科学版）
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）
Ｖ０１．２６．Ｎｏ．３
Ｊｕｎ．２００５
文章编号：１６７３—２３８３（２００５）０３－００３０－０４
尿素在核黄素发酵中的增产作用
司马迎春，班睿，林涛，周士奇
（天津大学化工学院，天津３０００７２）
摘要：以２．５
ｇ／１００
ｍＬ的酵母粉作为Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ２４／ｐＭＸ４５核黄素发酵的氮源时，氮源的供给不足，在培养基中添加ＮＨ４ｃｌ、（ＮＨ４）２ｓ０４、尿素等氮源进行发酵，结果表明：在酵母粉作氮源的基础上添加尿素，可以提高核黄素的产量，添加０．２ｇ／１００ｍＬ的尿素可以提高核黄素产量２０％．关键词：核黄素；发酵；尿素
中图分类号：ＴＱ９２０．６文献标识码：Ｂ
０引言
核黄素（ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ），即维生素Ｂ’，为水溶性的Ｂ族维生素，主要是以黄素单核苷酸（ＦＡＤ）和黄素腺嘌呤二核苷酸（ＦＭＮ）的形式存在于ＮＳＬ类动物组织中．ＦＡＤ、ＦＭＮ作为黄素蛋白的辅酶参与传递氢的有关代谢，在呼吸和生物氧化中起着重要的作用．核黄素常用于医药、食品强化剂、动物饲料添加剂（２～８ｍｇ／ｋｇ），同时还有少量作为有效成分应用于营养性或治疗性的化妆品行业…１．目前核黄素的工业化生产方法有化学半合成法和微生物发酵法…．微生物发酵法生产核黄素至今已有约６０年的历史１２Ｊ，１９７４年以后，随着核黄素高产菌的选育成功和菌种生产性能的不断提高，尤其是Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ等产核黄素基因工程菌的相继构建成功及发酵工艺的改进，使微生物发酵法在与化学半合成法的竞争中愈加显示出其优越性，并被广泛地应用于核黄素工业化生产∞ｊ．基因工程菌由于经过多重诱变及目的产物的过量合成，对培养条件的变化非常敏感．采用单一用无机氮源时，菌体生长常常不足，进而导致目的产物的合成量较低，工业生产中常用复合氮源作为微生物发酵的氮源．笔者主要研究了基因工程菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ２４／ｐＭＸ４５发酵生产核黄素时，加入补充氮源对核黄素产量的影响．
收稿日期：２００５＿０３＿０３
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２００３６０ｌＯ）
作者简介：司马迎春（１９８２－），女，河南社旗人，硕士研究生，研究方向为基因工程菌的发酵．１材料与方法
１．１菌种
重组枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ２４／ｐＭＸ４５），本实验室保藏．
１．２培养基
菌种保藏和种子培养基均为ＬＢ固体培养基；发酵培养基组成为：１０％蔗糖，０．０５％硫酸镁，氮源视不同的实验而定，培养基初始ｐＨ值为７．４；酵母粉为广东遂溪制药厂药用级产品，其余为市购生化或分析纯试剂．
１．３发酵条件
保存在４℃冰箱中的菌种，接种到ＬＢ平板上，３７℃培养２４ｈ；以接种环（巾３ｍｍ）控制接种量，挑取一环菌苔，打散后接入１００ｍＬ／５００ｍＬ发酵摇瓶中．摇床转速２４０ｒ／ｍｉｎ，在４１℃下发酵６５ｈ．
１．４核黄素分析方法
发酵液中核黄素采用分光光度法进行定量分析［４Ｉ，发酵液样品用１ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ调ｐＨ值至１２，溶解核黄素结晶，１００００ｒ／ｍｉｎ离心４ｍｉｎ，取上清液用ｐＨ６．５乙酸／乙酸钠缓冲液适当稀释，在４４４ｎｍ下测定吸光度，根据标准曲线得出核黄素的含量．
１．５葡萄糖和乳酸的分析方法
采用ＳＢＡ－－４０Ｃ生物传感分析仪测定发酵液中葡萄糖和乳酸浓度．
１．６蔗糖分析方法
发酵液中蔗糖用ＨＰＬＣ法测定．惠普１１００系列（ＨＰｌｌ００系列二元泵，视差检测器，ＨＰ０４．０１化
万方数据