目录
中文摘要 ............................................................... I ABSTRACT............................................ 错误！未定义书签。英文缩略词表 ........................................................... V 前言 .................................................................. VI 1 材料与方法 .. (1)
1.1 主要实验试剂 (1)
1.2 主要实验仪器 (1)
1.3主要试剂的配制 (2)
1.4实验方法 (3)
1.5统计学分析 (8)
2 结果 (9)
2.1 LDBM支架的大体及电镜观察 (9)
2.2体外软骨细胞与LDBM支架的3D培养 (10)
2.3支架的降解性能及力学性能 (10)
2.4 LDBM的细胞毒性及细胞相容性 (12)
2.5术后一般情况观察 (13)
2.6修复组织的大体观察 (13)
2.7修复组织组织学观察 (15)
2.8大体观察及组织学评分 (19)
3 讨论 (20)
4 结论 (23)
参考文献 (24)
骨软骨组织工程支架的研究进展 (28)
文献综述 (28)
参考文献 (33)
在学期间发表的学术论文与研究成果 (37)
致谢 (38)
个人简介 (39)
山西医科大学硕士学位论文
摘要
目的
模仿骨软骨解剖结构利用制备分层脱钙骨基质（LDBM）“双相”一体化支架；探讨藻酸凝胶作为细胞载体制备“软骨细胞-LDBM支架”复合体植入兔关节软骨缺损的修复效果。
方法
1.LDBM三维多孔支架的制备及特性研究
牛股骨干骺端松质骨柱(直径4mm，高度10mm)经脱脂、联合脱细胞化学处理后，将骨柱下半部分包埋于骨蜡中进行分层脱钙，脱蜡后制得松质骨LDBM一体化支架。体外对支架进行大体、扫描电镜观察和组织学染色，并检测支架细胞毒性、降解率及力学特性。体外分离培养的兔软骨细胞利用藻酸钙凝胶，与制备好的LDBM支架复合培养，利用扫描电镜观察细胞在支架上的黏附情况，CCK-8法测定支架对软骨细胞生长增殖的影响。
2.“软骨细胞-LDBM支架”复合体修复软骨缺损
将LDBM浸泡到藻酸纳与软骨细胞的混悬液，滴加氯化钙溶液构建“软骨细胞-LDBM支架”复合体。本实验中选用健康新西兰大白兔24只，制造双侧膝关节软骨缺损后随机分为三组:复合体组、单纯LDBM组及空白对照组。复合体组植入“软骨细胞-LDBM支架”复合体，单纯LDBM组植入LDBM支架，空白对照组旷置处理。术后分别3、6月取材行大体、组织学及免疫组化染色观察，并进行病理评分。
3．统计分析
数据采用SPSS17软件处理，实验数据均用平均值±标准差表示，采用单因素方差分析和LSD检验分析评分结果，观察复合体组与单纯LDBM组及空白对照组统计学是否有差异，P<0.05，有统计学意义。
结果
1、LDBM支架呈疏松多孔结构，脱钙部分与未脱钙部分过渡自然，界限明显。SEM观察LDBM支架保留原有的骨管腔系统，孔径分布均匀，材料内部空隙间交通状况良好，交界区连接完整，未见断裂现象。MTT实验结果是支架无细胞毒性，体外复合软骨细胞培养，SEM和CCK-8结果示细胞黏附增殖能力良好。