汕头大学硕士学位论文
目录
中文摘要.......................................................................................................................................... I Abstract ......................................................................................................................................... I II 英文缩略词.................................................................................................................................... V 目录............................................................................................................................................. VII 第一章前言.. (1)
第二章材料与方法 (3)
2.1实验材料 (3)
2.2实验方法与步骤 (6)
第三章实验结果 (17)
3.1 UII基因的敲除位点的设计 (17)
3.2构建TALEN载体 (18)
3.3细胞层面验证TALEN质粒打靶活性 (21)
3.4 TALEN体外转录mRNA (23)
3.5 显微注射获得F0代小鼠 (24)
3.6挑选阳性突变体及分析基因型 (25)
3.7 纯合UII敲除小鼠 (27)
第四章讨论 (31)
参考文献 (36)
综述 (40)
参考文献 (47)
已发表及撰写的文章 (51)
致谢 (52)
个人简历 (53)
VII
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汕头大学硕士学位论文
第一章前言
在当今社会，心血管疾病正严重危害着人类的生命健康，越来越快的研究致力于心血管疾病的机制研究与治疗方案的新探索，然而仍有许多发病机理尚未完全阐明。
许多心血管疾病如心肌梗死、高血压、主动脉狭窄、心肌炎、特发性扩张性心肌病、心脏瓣膜反流病等各自具体的病因不尽相同，但在发病机制方面却有许多共同的分子、物理和生物特性，其中心肌重塑与心肌纤维化作为许多心脏疾病的共同病理生理反应过程，通过引起心室壁僵硬、舒张功能障碍、冠脉储备减少、心电功能传导障碍等促进各种心脏疾病的进展[1]。心肌重塑与心肌纤维化的过程由血流动力学负荷、神经体液因子、缺血及其它因素参与，可以导致氧化应激、炎症反应、胶原的合成和分泌、微血管系统重构等[2-5]，作为神经体液因素的重要组成部分，血管活性肽通过内分泌、旁分泌和自分泌作用在心血管生理调节和病理发展过程中发挥着十分重要的作用。
尾加压素II（UrotensinII，UII）作为继内皮素之后发现的强力缩血管活性肽，在心血管领域的研究也越来越深入。UII最先是从硬骨鱼的尾部神经内分泌器官尾垂体中分离出来的，现已证实普遍存在于从软体动物到哺乳动物的多种组织中，其中在人的中枢神经系统、内分泌系统、运动系统和心血管系统等都有表达[6]。虽然不同物种的UII结构不尽相同，但是其活性中心都是由[Cys-Phe-Trp-Lys-Tyr-Cys]六个氨基酸形成的环肽结构组成，该结构从鱼类到哺乳类中都高度保守，是UII发挥生物学效应重要的结构基础[7]。G蛋白偶联受体14（GPR14，G-protein-coupled receptor 14）是UII的特异性受体[8]，也称感觉上皮神经肽样受体，被国际基础与临床药理联盟命名为UT[9]。作为一种自分泌/旁分泌的活性因子[10]，UII可与UT结合形成UII/UT系统通过促进钙离子内流发挥多种生物学效应[11]，在许多疾病的发生发展过程中都有重要作用[12]。
UII作为目前哺乳动物体内发现的收缩活性最强的活性肽[13]，同其他血管活性肽一样，在心肌纤维化及心肌重塑过程中发挥重要作用。不仅可以直接促进心肌肥大[14]，还可以促进心肌成纤维细胞的增殖[15]和胶原合成来促进心脏纤维化[16.17]，这些在在体实验[18]和离体实验[19]中都得以证实。而体外阻断UT可抑制UII诱导的心肌细胞肥大[20.21.22]，可减少心衰的死亡率，改善心脏功能，抑制心肌重塑[13.23.]。由上可知，UII是作为新的促进纤维化发展的活性因子，并通过多种作用方式参与多种疾病引起的心血管重塑过程。
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