课题2多聚酶链式反应扩增DNA 片段
1．DNA 聚合酶不能从头开始合成DNA ，只能从
3′端延伸DNA 链，因 此，DNA 的合成方
向总是从子链的5′端向3′端延伸。
2．PCR 反应需要DNA 模板、两种引物、四种脱
氧核苷酸、耐热的DNA 聚合酶等条件。
3．PCR 利用了DNA 的热变性原理，通过控制温
度来控制双链的解聚与结合。
4．PCR 每次循环都包括变性、复性和延伸三步。
5．DNA 聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间
的DNA 序列，使这 段固定长度的序列呈指
数扩增。
一、PCR 技术的原理
1．细胞内DNA 复制的条件[填表] 原料
4种脱氧核苷酸 模板
2条DNA 的母链 酶
解旋酶和DNA 聚合酶 引物
使DNA 聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
2．PCR 扩增的原理及条件
(1)概念：PCR 即多聚酶链式反应，是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术。
(2)原理：
①子链的合成：DNA 聚合酶只能从3′端延伸DNA 链，因此，DNA 复制需要引物，DNA 合成的方向总是从子链的5′端向3′端延伸。
②双螺旋的打开：DNA 的热变性原理，即：
双链DNA 变性(加热至80～100 ℃)复性(缓慢冷却)
单链DNA 。 (3)条件：DNA 模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA 聚合酶、一定的缓冲溶液以及能自动调控温度的设备。
二、PCR的反应过程
三、PCR技术的实验操作
1.实验用具
(1)PCR仪：该仪器能自动调控温度，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个恒温水浴锅代替，操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。
(2)微量离心管：总容积为0.5 mL，实际上是进行PCR反应的场所。
(3)微量移液器：用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体。
2.注意事项
(1)为避免外源DNA等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行高压灭菌。
(2)所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存。
(3)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。
四、DNA含量的测定
1.原理：利用DNA在260_nm的紫外线波段的吸收峰曲线来测定相应含量。
2.计算公式
DNA含量(μg/mL)＝50×(260_nm的读数)×稀释倍数。
1．PCR技术控制DNA的解聚与结合是利用了DNA的()
A．特异性B．稳定性
C．热变性D．多样性
解析：选C DNA分子在80～100 ℃的温度范围内变性，双链解开成单链；当温度缓慢降低时，又能重新结合形成双链。
2．标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是()
A．92 ℃、55 ℃、72 ℃B．72 ℃、55 ℃、92 ℃
C．55 ℃、92 ℃、72 ℃D．80 ℃、55 ℃、72 ℃
解析：选A当温度上升到90 ℃以上(90～96 ℃)时，双链DNA解聚为单链，称之为变性；当温度下降到50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当
温度上升到72 ℃左右(70～75 ℃)时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A 、T 、C 、G)在Taq DNA 聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA 链，称为延伸。
3．PCR 实验中用到微量离心管、缓冲液和蒸馏水，使用前必须进行的关键步骤是( )
A ．反复洗涤
B ．用酒精擦洗
C ．高压灭菌
D ．在－20 ℃保存
解析：选C 在PCR 实验中，为了避免外源DNA 等因素的污染，微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。同时也不能忽视其他操作步骤，如 缓冲液和酶应该分装成小份，并且在－20 ℃保存。
核心要点(一)| PCR 扩增的原理和过程
1．生物体内的DNA 复制与PCR 反应的比较
体内DNA 复制 PCR
反应
不 同 点 解旋 在解旋酶的作用下，边解旋边复制 加热至90 ℃以上时，双链全
部解开
酶 解旋酶、DNA 聚合酶 耐高温的DNA 聚合酶(Taq
DNA 聚合酶)
引物 一小段RNA RNA 或单链DNA 分子片段
合成子链 一条子链连续合成，另一条子链不连续合成 两条子链都是连续合成
温度 体内温和条件
高温 相同
点
①都需提供DNA 复制的模板②都需要四种脱氧核苷酸原料③都需要分别与两条模板链相结合的两种引物④子链延伸的方向都是从5′端到3′端
2．PCR 的反应过程
(1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA 解聚为单链，如图。
(2)复性：当系统温度下降至50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA 结合，如图。
(3)延伸：当系统温度上升至72 ℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如图。
3．PCR反应的结果
从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数形式扩增。
[题组冲关]
1．PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是()
①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA
②PCR过程不需要DNA聚合酶
③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的
④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制
A．③④B．①②
C．①③D．②④
解析：选C PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比较，主要有两点不同：①PCR 过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA，长度通常为20～30个核苷酸；②PCR 过程中，DNA解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的。
2．在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如图，图中黑色长条是引物)。在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。
(1)PCR需要模板DNA、引物、______________________________________________和
____________________等条件，其中的引物实质上是一种_________________。
(2)图中的变性、延伸分别是指______________________________________________、
________________________。
(3)某样品DNA分子中共含3 000个碱基对，碱基数量满足：(A＋T)/(G＋C)＝1/2，若经5次循环，至少需要向试管中加入______个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)
(4)若下图为第一轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。
解析：(1)PCR技术中除需要模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸外，还需要耐热的DNA 聚合酶等条件，其中的引物是一种单链DNA分子或RNA分子。(2)变性的实质是DNA双链解旋；延伸是以DNA单链为模板，按碱基互补配对原则合成子链的过程。(3)由(A＋T)/(G ＋C)＝1/2可知A∶T∶G∶C＝1∶1∶2∶2，所以A的比例为1/6，在一个DNA分子中的数量为3 000×2×(1/6)＝1 000(个)，5次循环形成的DNA数为32个，所以需要利用原料合成的DNA数相当于32－1＝31(个)，至少需腺嘌呤脱氧核苷酸数为31×1 000＝31 000(个)。
(4)画图的关键是注意引物A、B的位臵和所对应的模板链。
答案：(1)四种脱氧核苷酸耐热的DNA聚合酶单链DNA分子或RNA分子(2)模板DNA双链解旋形成单链在DNA聚合酶的作用下，脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链(3)31 000(4)如图
核心要点(二)| PCR技术的实验操作
1．实验操作步骤
2．DNA含量的测定
DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA含量有关。可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定，具体方法如下：
注：计算公式中的50代表在波长为260 nm紫外波段照射下，吸收峰为1时，DNA含量为50 μg/mL。
[题组冲关]
3．使用PCR仪的具体实验操作顺序应为()
①设计好PCR循环程序②按配方准备好各组分
③用微量移液器向微量离心管中依次加入各组分④进行PCR反应⑤离心，使反应物集中在离心管底部
A．②③⑤④①B．①⑤③②④
C．②③⑤①④D．④②⑤③①
解析：选C PCR反应的操作步骤一般分为准备(包括将配方所需各组分放于实验台上)→移液→混合→离心→反应。因PCR仪是一种能自动控制温度的仪器，设计好循环程序就可以进行反应了。
4．下列有关PCR操作过程的叙述，错误的是()
A．PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌
B．PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存
C．PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅速融化
D．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换解析：选C为了防止外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌；所用的缓冲液及酶应分装成小份保存，并使用一次性枪头。在冰箱中放臵的缓冲液和酶从冰箱中取出后应放在冰块上缓慢融化，而不能迅速融化。
[随堂基础巩固]
1．PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，下列说法不．正确的是()
A．PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步
B．PCR所用的解旋酶和DNA聚合酶都具有耐高温的特性
C．延伸的温度大于复性的温度，而小于变性的温度
D．PCR技术可用于基因诊断、判断亲缘关系等
解析：选B PCR技术需要耐高温的DNA聚合酶，不需要解旋酶。
2．DNA的复制需要引物，其主要原因是()
A．可加快DNA的复制速度
B．引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合
C．引物的5′端有助于DNA聚合酶延伸DNA链
D．DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链
解析：选D DNA的两条链是反向平行的，为了明确表示DNA的方向，通常将DNA 的羟基(—OH)末端称为3′端，而磷酸基团的末端称为5′端。DNA聚合酶不能从5′端开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。因此DNA复制需要引物，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。
3．符合PCR反应条件的一项是()
①稳定的缓冲液环境②DNA模板③合成引物
④四种脱氧核苷酸⑤Taq DNA聚合酶⑥DNA解旋酶
⑦限制性核酸内切酶⑧温控设备
A．①②③④⑤⑥B．①②③④⑤⑥⑦⑧
C．③④⑤⑥⑦⑧D．①②③④⑤⑧
解析：选D PCR反应模拟生物细胞内DNA复制的条件，只是不需要解旋酶，也不需要基因工程的工具酶(限制性核酸内切酶)。
4．PCR仪实质上是一台自动调控温度的仪器，它调控不同温度的目的是()
①95 ℃使DNA分子变性，失去生物活性
②95 ℃使DNA分子变性，解开螺旋
③55 ℃使DNA分子开始复制、延伸
④55 ℃使DNA分子的两条单链分别与两种引物相结合
⑤72 ℃使DNA分子开始复制、延伸
⑥72 ℃使DNA分子恢复双螺旋结构，恢复活性
A．①③⑤B．②③⑤
C．②④⑤D．②④⑥
解析：选C PCR技术在温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解旋变为单链；当系统温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当系统温度上升到72℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、G、C、T)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
5．如图表示PCR扩增的产物，请分析它是哪次循环的产物()
A．第一次循环B．第二次循环
C．第三次循环D．第四次循环
解析：选A在PCR反应中以引物为标记，第一次循环时，以加入的DNA为模板，两条DNA链可分别由引物Ⅰ和引物Ⅱ与其结合，并在DNA聚合酶的作用下延伸，所以，形成的每个子代DNA中只有一种引物。从第二次循环开始，第一次产生的DNA分子又可作为模板参与反应，形成的DNA分子中，只有两个仅一端含有引物，其他DNA分子两端都含有引物。
6．如图所示为DNA变性和复性示意图，相关说法正确的是()
A．向左的过程为加热(80～100 ℃)变性的过程
B．向右的过程是DNA双链迅速制冷复性
C．变性与在生物体内解旋过程的实质相同
D．图中左侧DNA片段共有4个游离的磷酸基团、4个3′端
解析：选C DNA体外的变性和体内的解旋，其实质是相同的，都是使氢键断裂，DNA 双螺旋打开，只是体内解旋需要解旋酶，体外变性需高温条件。
7．PCR技术是把DNA片段在体外酶的作用下，合成许许多多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段，它的基本过程如下图所示：
注：图中短线表示每次扩增过程中需要的引物。每个引物约含20个脱氧核苷酸，并分别与两条单链DNA结合，其作用是引导合成DNA子链。
(1)PCR与体内DNA复制的不同之处主要表现在温度上，在PCR中先用95 ℃高温处理的目的是________________；而这一过程在细胞内是通过________实现的。
(2)DNA子链复制的方向是____________，这是由于____________________________
________________________________________________________________________。
(3)在PCR技术中所需要的引物实质上是一种________________。若将1个DNA分子拷贝10次，则需要在缓冲液中至少加入________个引物。
(4)假定DNA片段含200对脱氧核苷酸，经3次扩增，从理论上计算需要________个游
离脱氧核苷酸。
解析：在PCR中先用95 ℃高温处理的目的是使DNA分子中的氢键断裂，两条链解开，使DNA分子解旋，形成单链。引物是一种单链DNA或RNA分子，它能与解开的DNA母链的3′端结合，为DNA聚合酶提供结合位点，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸，从而决定了DNA子链复制的方向是从子链的5′端到3′端。在DNA分子扩增时，需要2种引物，由于新合成的子链都需要引物作为复制的起点，故所需的引物数目等于新合成的DNA子链数目，若将1个DNA分子复制10次，则需要的引物为2×210－2＝(211－2)个。扩增3次一共形成8个子代DNA片段，需游离的脱氧核苷酸数为(8－1)×400＝2 800个。
答案：(1)使DNA变性(或使DNA的两条链解开)解旋酶(2)从5′端到3′端DNA 聚合酶只能从引物的3′端连接单个脱氧核苷酸分子(3)单链DNA或RNA分子211－2 (4)2 800
[课时跟踪检测]
一、选择题
1．关于PCR的说法，不．正确的是()
A．PCR是体外复制DNA的技术
B．PCR过程中只需要一个模板DNA、两个引物分子、大量脱氧核苷酸原料
C．Taq DNA聚合酶是一种热稳定的DNA聚合酶
D．PCR利用的是DNA双链复制原理
解析：选B PCR技术是一种在体外迅速扩增DNA片段的技术；PCR过程除需要DNA 分子双链作为模板、两种引物分子、大量脱氧核苷酸原料外，还需要酶等条件；Taq DNA 聚合酶是一种耐热的DNA聚合酶；PCR技术的原理和DNA的复制原理是一样的，都是半保留复制。
2．关于DNA聚合酶催化合成DNA子链的说法，正确的是()
A．Taq DNA聚合酶是从深海生态系统中发现的
B．DNA聚合酶能特异性地复制整个DNA的全部序列
C．Taq DNA聚合酶必须在每次高温变性处理后再添加
D．DNA聚合酶是以DNA为模板，使DNA子链从5′端延伸到3′端的一种酶
解析：选D Taq DNA聚合酶是在热泉中发现的。PCR 扩增的是引物之间的固定长度的DNA序列。Taq DNA聚合酶能耐高温，所以在反应体系中可反复利用而不用另外再添加。DNA聚合酶不能从头开始催化合成DNA，而只能从DNA单链的3′端延伸子链。
3．多聚酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温复性及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如图所示。下列关于PCR技术的叙述不．正确的是()
A．PCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA 的技术
B．反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板
C．PCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增
D．应用PCR技术与DNA分子杂交技术可以检测基因突变
解析：选C PCR技术是体外大量扩增DNA的技术，即以少量DNA制备大量DNA 的技术；PCR技术的原理是DNA复制，反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，所需原料是脱氧核苷酸，以指数方式扩增；应用PCR技术与DNA分子杂交技术可以检测基因突变。
4．PCR一般要经过三十多次循环，从第二次循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时将()
A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸
B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸
C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸
D．无须与引物结合，在酶的作用下从头合成子链
解析：选B当由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时，此单链引物端为5′端，因此与它互补的子链应从另一端开始合成，即与引物Ⅱ结合延伸DNA的子链。
5．在PCR扩增DNA的实验中，根据设计，一分子DNA经30次循环后，应得到约230个DNA分子，但结果只有约210个DNA分子。出现该现象的原因可能是()
①循环次数不够②Taq DNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制③引物不能与亲链结合④系统设计欠妥
A．①②③B．①②④
C．①③④D．②③④
解析：选B①循环次数过少，产物的量比预期的少；②Taq DNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制会导致扩增效率低，得到的产物比预期的少；③如果引物设计不合理，则无法进行扩增；④PCR系统设臵不妥，将达不到预期的效果。
6．下列关于PCR技术的叙述，正确的是()
A．PCR技术建立在对扩增的目的基因序列完全已知的基础上
B．该技术需要解旋酶和热稳定的DNA聚合酶
C．该技术需要一对特异性的引物，要求一对引物的序列是互补的
D．该技术应用体内DNA双链复制原理，也需要模板、原料、酶等条件
解析：选D PCR技术不必知道目的基因的全部序列，只需知道部分序列，就可根据已知序列合成引物。PCR技术不需要解旋酶。PCR技术需要引物，但引物的序列不能是互补的，否则，在复性时，两种引物通过碱基互补配对结合而失去作用。
7．下列有关PCR的叙述，正确的是()
A．PCR所需要的引物只能是RNA
B．PCR所需要的原料是核糖核苷酸
C．PCR所需要的酶在60 ℃会变性
D．PCR需要在一定的缓冲液中进行
解析：选D PCR所需的引物是一小段DNA或RNA。PCR所需要的原料是脱氧核糖核苷酸。PCR所需要的酶是耐高温的Taq DNA聚合酶。
8．在PCR的实验操作中，下列说法正确的是()
①在微量离心管中添加各种试剂时，只需要一个枪头
②离心管的盖子一定要盖严
③用手指轻弹离心管壁
④离心的目的是使反应液集中在离心管的底部
A．①②③B．①②④
C．②③④D．①③④
解析：选C在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换，以确保实验的准确性；盖严离心管口的盖子，防止实验中外源DNA污染；用手指轻轻弹击离心管的侧壁，使反应液混合均匀；离心的目的是使反应液集中在离心管的底部，提高反应效果。
9．复性温度是影响PCR特异性的较重要的因素。变性后温度快速冷却至40～60 ℃，可使引物与模板发生结合。PCR的结果可不考虑原来解旋开的两个DNA模板链的重新结合，原因不包括()
A．由于模板DNA比引物复杂得多
B．引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞
C．加入引物的量足够多而模板链数量少
D．模板链加热解旋已经变性不可能再次结合
解析：选D DNA双链变性解旋后是可以再次结合的，只不过是在PCR中，引物量较多，与DNA模板链结合机会大，而原来两条母链再次结合的机会小。
10．如图中PCR第二轮产物a、b、c、d分别是以PCR第一轮产物的哪一条单链DNA 为模板复制产生的()
A．②①③④B．①③④②
C．①②④③D．①②③④
解析：选D因为PCR的反应过程需要引物，在第二轮循环的产物中，a、d的引物分别为Ⅰ、Ⅱ，无引物的为模板链(即①、④)，则b、c的模板链分别为②、③。
二、非选择题
11．PCR技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程，请据图分析回答：
(1)A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的叙述，正确的是()
A．该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键
B．该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键
C．该过程不需要解旋酶的作用
D．该过程与人体细胞的过程完全相同
(2)C过程要用到的酶是________________。这种酶在高温下仍保持活性，因此在PCR 扩增时可以______加入，________(填“需要”或“不需要”)再添加。PCR反应除提供酶外，还需要满足的基本条件有______________________________________________________ ______________________________________________________________________________。
(3)如果模板DNA分子共有a个碱基对，其中含有胞嘧啶m个，则该DNA复制10次，需要加入胸腺嘧啶脱氧核苷酸____________________个。
(4)PCR中由碱基错配引起的变异属于________________________________________。
假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时一条模板链上发生碱基错配，之后正常配对，则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占________________ ________________________________________________________。
解析：(1)高温所起的作用类似于解旋酶，使双链DNA变为单链。(2)C过程是PCR技术的延伸阶段，当系统温度上升至72 ℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。Taq DNA聚合酶具有耐高温的特性，所以一次性加入即可。(3)在一个双链DNA分子中，C＋T占碱基总数的一半，则T的数目为(a－m)个，复制10次，
新增加了(210－1)个DNA分子，故需补充胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数目为(210－1)(a－m)个。
(4)基因中碱基对的改变属于基因突变。以一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，以后按正常配对方式进行扩增，以错配链作为模板扩增的都是错误的DNA 分子，原正常链扩增得到的DNA分子都是正常的DNA分子，故若干次后检测所有DNA 的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占3/4。
答案：(1)C(2)Taq DNA聚合酶一次不需要DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行
(3)(210－1)(a－m)(4)基因突变75% (或3/4)
12．请回答基因工程方面的有关问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。
图中引物为单链DNA片段，它是子链合成、延伸的基础。①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为____________。
②在第________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。
①第1组：______________________________________________________________
________________________________________________________________________；
②第2组：_______________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为_____________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。
解析：(1)①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为15/16。②在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。(2)某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理，原因：①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效；②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。(3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。
答案：(1)①15/16②三
(2)①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效
②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效
(3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上
13．如图为细胞内DNA复制过程示意图，该过程在体外也可进行，以获得大量相同的DNA片段，该项技术被称为PCR技术，又称多聚酶链式反应，请分析回答：
(1)PCR过程与细胞内DNA复制相比，主要不同点______________。
(2)PCR技术过程的三个步骤是：________、________、________。
(3)假设PCR过程中，只用一个DNA片段作为模板，30次循环后，理论上反应物中有______个这样的DNA片段。
(4)PCR技术能在几小时内将微量的DNA片段特异性地扩增上百万倍，从而解决了样品中DNA含量低，难以分离的难题，试举两例，说明PCR技术的应用：_______________ ________________________________________________________________________。
解析：(1)PCR过程与细胞内DNA复制相比，主要不同点是：PCR过程是高温变性解旋，不需要解旋酶。(2)PCR的每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。(3)由于一个DNA 片段作为模板，一次循环能产生2个DNA片段，所以30次循环后，反应物中大约有230个这样的DNA片段。(4)PCR技术有广泛的应用，可以用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、亲子鉴定等方面。
答案：(1)PCR过程是高温变性解旋，不需要解旋酶
(2)变性复性延伸(3)230(4)刑侦破案、亲子鉴定、疑难疾病的诊断、基因序列分析等
课题1 植物芳香油的提取
1．知道植物芳香油的来源与提取方法。(重点) 2．了解提取玫瑰精油和橘皮精油的实验流程。(难点)
一、植物芳香油的来源及特点 1．来源 植物芳香油可以从植物中提取，如玫瑰花用于提取玫瑰油，樟树树干用于提取樟油。 2．特点 (1)具有很强的挥发性。 (2)成分比较复杂，主要包括萜类化合物及其衍生物。 二、植物芳香油的提取方法 1．不同方法的选用依据：植物原料的特点。 2．提取方法 (1)水蒸气 蒸馏法 ? ? ? ? ? ? ?原理：利用水蒸气将挥发性较强的植物芳 香油携带出来，形成油水混合物，冷 却后，混合物又会重新分出油层和水层 分类 ? ? ?依据：蒸馏过程中原料放置的位置 类型：水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏局限性：由于水中蒸馏会导致原料焦糊和 有效成分水解等问题，因此对有些原 料不适用 (2)压榨法：主要适用于柑橘、柠檬芳香油的制备。
(3)萃取法??????? 原理：植物芳香油不仅挥发性强，而且易溶于有机溶剂步骤：将粉碎、干燥的植物原料用有机溶剂浸泡 ↓ 芳香油溶解于有机溶剂 ↓ 蒸发出有机溶剂注意事项：有机溶剂必须事先精制，除去杂质 [合作探讨] 探讨1：水溶性的有机溶剂可以从水溶液中萃取某物质吗？ 提示：不能。萃取物能溶于有机溶剂，由于有机溶剂溶于水，导致水和有机溶剂不能分层，无法萃取，达不到分离的效果。 探讨2：植物芳香油的哪些特点有助于将其从大量植物组织中提取出来？ 提示：芳香油具有易于挥发，难溶于水，易溶于有机溶剂等特点。 探讨3：橘皮精油的提取能否选用水中蒸馏法？为什么？ 提示：不可以。因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题。 [思维升华] 1．植物芳香油各种提取方法的比较 方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 萃取法
高中生物选修一生物技术实践 知识点总结 专题一 传统发酵技术的应用 课题一 果酒和果醋的制作 1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。 2、有氧发酵：醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵 3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖 4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。 C 6H 12O 6＋6O 2→6CO 2＋6H 2O 5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 C 6H 12O 6→2C 2H 5OH ＋2CO 2 6、20℃左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃ 7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。在发酵过程中, 随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。 8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂 9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变 为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 2C 2H 5OH ＋4O 2→CH 3COOH ＋6H 2O 10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中 断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。 11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋） 12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与 酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液2ｍL ，再滴入物质的量浓度为3mol/L 的H 2SO 43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色 13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时 用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶 管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利 于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应该充气 口连接气泵，输入氧气。 疑难解答 （1）你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？ 应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。 （2）你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？ 如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。 （3）制葡萄酒时，为什么要将温度控制在18～25℃？制葡萄醋时，为什么要将温度控制酶 酶 酶
专题二微生物的培养与应用 课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
高中生物胰岛素知识考点解析 胰岛素是人和高等动物体内的一种重要激素，通过胰岛素可将高中生物必修课和选修课中很多考点串联起来，融为一体，形成一个完整的知识网络。 1、1965年，我国的科学工作者经过6年多坚持不懈的努力，获得了人工合成的牛胰岛素结晶，这是世界上第一个人工合成的＿＿。 答：蛋白质 2、结晶牛胰岛素是由两条链组成，其中A链有21个氨基酸，B链有30个氨基酸。从理论上讲，结晶牛胰岛素最多是由——种氨基酸组成，至少含有＿＿个游离的氨基和＿＿游离的羧基。 答；20种（因为构成蛋白质的氨基酸总共就20种）；2；2. 3、这51个氨基酸彼此之间是通过——过程结合成胰岛素的。这些氨基酸形成胰岛素时，共形成了____个肽键，失去了＿＿分子水，分子量比原来减少了＿＿。 答：脱水缩合；49；49；888.提示：－SH＋－SH→－S－S－过程中脱去2个氢原子，即形成1个二硫键分子量减少2，胰岛素分子共3个二硫键，所以分子量减少为：（51－2）×18＋6＝888 4、合成胰岛素的信使RNA至少含有＿＿个碱基；胰岛素的基因中至少含有＿＿个脱氧核苷酸。 答：153；306 5、胰岛素和血红蛋白都是蛋白质，但功能却不相同，原因是＿＿。 答：氨基酸种类不同，数目不同，排列顺序不同，空间结构也不一样，所以功能就不一样。 6、胰腺是＿＿分泌腺，分泌各种消化酶进入消化道；而胰岛是＿＿分泌腺，胰岛素是由胰＿＿细胞合成的，胰高血糖素是由胰岛＿＿细胞分泌的，它们是直接释放到——内，二者在调节血糖上的关系是＿＿作用。具体说，胰岛素分泌能＿＿胰高血糖素的分泌，而胰高血糖素分泌能＿＿胰岛素的分泌。 答：外；内；B；A；血液；拮抗；抑止；促进 7、和胰岛素的合成和分泌有关的四种细胞器是＿＿、＿＿、＿＿、＿＿；胰岛素是通过——方式分泌到细胞外的。 答：线粒体、核糖体、内质网、高尔基体；外排作用。 8、正常人在进食后血糖升高，会直接刺激胰岛B细胞分泌胰岛素增加，也可通过刺激＿＿的某些部位，而间接引起胰岛B细胞分泌胰岛素增加，胰岛素的作用是＿＿，主要是通过促进＿＿、＿＿、＿＿，抑制其他非糖物质转变成血糖-实现的。当血糖浓度降低时，会直接刺激胰岛A细胞，或通过刺激＿＿的另一些部位来间接刺激胰岛A细胞分泌胰高血糖素增加，从而通过促进＿＿、＿＿来提高血糖浓度。 答：下丘脑；血糖氧化分解、血糖转变成肝糖元和肌糖元、血糖转变成脂肪、氨基酸等非糖物质；下丘脑；肝糖元的分解；非糖物质转化乘血糖。 9、（2001广东高考）注射一种较大剂量激素后，小白鼠渐渐反应迟钝，活动减少，以至浑睡，该激素是（） A 甲状腺激素 B 雄性激素 C 雌性激素 D 胰岛素 答：D（大剂量注射胰岛素，会使小白鼠的血糖浓度过低，出现低血糖昏迷） 10、当人的血糖浓度为150 mg／dL时，机体会作何反应（） A 交感神经兴奋，促进胰岛素分泌 B 副交感神经兴奋，促进胰岛素分泌 C 交感神经兴奋，抑制胰岛素分泌D副交感神经兴奋，抑制胰岛素分泌 答：B . 人的血糖浓度正常值为80~120 mg／dL，当血糖浓度过高时，会引起副交感神经兴奋，促进胰岛素分泌，加速血糖的氧化分解，使血糖浓度恢复正常。 11、胰岛素的作用机理是只有胰岛素和组织细胞细胞膜上的受体结合后，组织细胞才能将葡萄糖搬运到细胞内利用，这种受体的化学本质是＿＿。 答：糖蛋白 12、糖尿病发病的主要原因是人体胰岛＿＿细胞受损，使血糖浓度超过＿＿即160~180mg／dL时，一部分葡萄糖随＿＿排出体外。糖尿病人的主要症状是三多一少，既＿＿、＿＿、＿＿、＿＿。 答：B；肾糖阈；尿液；多饮、多食、多尿、体重减少； 13、糖尿病的确定是检测病人的尿液，检测方法有＿＿、＿＿、＿＿。 答：用斐林试剂、班氏糖定性试剂、尿糖试纸检测。
生物选修一全国高考近六年试题汇总
选修一生物技术实践历年全国卷（2010-2016）考题汇总 （2011年）39．【生物——选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题： （1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。 （2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。 （3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解能力。 （4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 39.【答案】（1）原油选择（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）强（4）干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰 （2013年）39.[生物——选修1：生物技术实践] 临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： （1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 （2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。 （3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素 B_____；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。 （4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。 答案：（1）划线稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌（4）A （2012年）39．（15分）为了探究6-BA和IAA对 某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组 在ＭＳ培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基 （见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一 致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时
1专题一传统发酵技术的应用 课题1 果酒和果醋的制作 1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。 2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵· 无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵 3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌·酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖孢子生殖 4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。 C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O 5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 C6H12O6→2C2H5OH+2CO2 6、20℃左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃ 7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。 8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂 9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 1
2C2H5OH+4O2→CH3COOH+6H2O 10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。 11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒(→醋酸发酵→果醋) 12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液2mL，再滴入物质的量浓度为3mol/L的H2SO43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色. 13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的;排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的;出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应该关闭充气口;制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧气。 课题2 腐乳的制作 1、多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。营腐生生活。 2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。 3、实验流程：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制 4、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。 前期发酵的主要作用： （1）创造条件让毛霉生长。 2
专题二课题1 一、选择题 1．菌种鉴定的重要依据是(B) A．细菌的大小、形状和颜色B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛D．培养基的不同 [解析]不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定特征，所以，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。单个的细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征不能作菌种鉴定的依据。 2．下列生物与灭菌无关的是(C) A．接种前用火焰灼烧接种环B．接种前用酒精擦拭双手 C．将平板倒置，放入培养箱中培养D．接种在酒精灯的火焰旁完成 [解析]接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格地消毒灭菌。A、B、D都是实验操作过程中灭菌或防止杂菌污染的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。 3．下列关于平菇培养的操作程序，正确的是(D) A．配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 B．配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养 C．配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 D．配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养 [解析]平菇的代谢类型属于异养型，需要提供现成的有机物才能成长。在题目给出的选项中，B选项是实验中培养细菌等的方法，D选项则是人们常用的培养平菇的方法，为了避免杂菌污染，应在接种前先进行灭菌处理。 4．下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1,2,3,4,5。下列操作方法正确的是(D) A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B．划线操作必须在火焰上进行
C．最可能得到所需菌落的区域是1 D．在1,2,3,4,5区域中划线前后都要对接种环灭菌 [解析]操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌；划线操作必须在火焰旁进行，而不是火焰上；最可能得到所需菌落的区域是5。 5．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是(C) ①待培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 ③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 ④用左手的拇指和食指完全打开皿盖 ⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 ⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A．①③④⑤B．④⑤⑥ C．③⑤D．①②④⑥ [解析]琼脂是一种多糖，在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。 6．(2017·西宁四中高二月考)下列有关细菌培养的叙述，正确的是(D) A．在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌 B．在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长 C．向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长 D．在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动 [解析]菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌，A错误；青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，所以青霉素培养基抑制细菌生长而促进真菌生长，B错误；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动，D正确。 7．平板冷凝后要将平板倒置，其意义是(D) A．利于大肠杆菌的接种B．防止杂菌污染 C．利于培养基的冷却D．防止皿盖冷却水倒流入培养基 [解析]平板倒置可避免凝集在皿盖上的水流入培养基。
高中生物教学大纲 生物学是研究生命现象和生命活动规律的科学，它与人类的生存和发展，与社会生产和个人生活，与其他自然科学和社会科学的发展，都有密切的关系。生物学在我国社会主义现代化建设中起着重要的作用。生物学将是二十一世纪领先的科学之一。 一、课程目的 普通高中生物课程是一门学科类基础课程。学生通过高中生物课程的学习，将在以下几个方面得到发展。 1．获得关于生命活动基本规律的基础知识，了解并关注这些知识在生产、生活和社会发展方面的应用。 2．树立辩证唯物主义观点，养成科学态度，形成崇尚科学的精神，初步具备创新意识，逐步形成科学的世界观。增强爱国主义思想感情。 3．初步学会生物科学探究的一般方法，具有生物学实验的基本操作技能，发展收集和处理信息的能力、获取新知识的能力、分析和解决实际问题的能力以及交流与合作的能力。 二、课程目标 通过教学过程应当实现以下课程目标，以达到本课程的目的。 1．知识方面 （1）获得关于生物学基本事实、基本原理和规律等方面的基础知识，主要包括生命的物质基础和结构基础、生物的新陈代谢、生命活动的调节、生物的生殖和发育、遗传和变异、生物的进化、生物与环境等方面的内容。
（2）了解并关注生物学知识在生活、生产、科学技术发展和环境保护等方面的应用。 （3）获得适应现实生活所需要的人体生理知识，促进身心健康。 （4）了解现代生物科学技术的主要成就及其对社会发展的影响。 2．态度观念方面 （1）通过生物学知识的学习，初步形成生物体的结构和功能、局部与整体、多样性与共同性相统一的观点，生物进化观点和生态学观点，树立辩证唯物主义自然观，逐步建立科学的世界观。 （2）正确认识我国生物资源状况、生物科学技术的发展，增强中华民族自豪感和社会责任感。 （3）爱护自然界的生物，认识保护生物多样性的重要意义，提高环境保护意识，树立人与自然和谐统一和可持续发展的观念。 （4）养成实事求是的科学态度，养成勇于探索、不断创新的精神与合作精神。3．能力方面 （1）能够正确使用显微镜等常用工具和仪器，掌握进行生物学实验的基本操作技能。 （2）能够利用各种媒体收集和处理生物科学信息。 （3）学会科学观察和实验的方法，初步学会提出问题，做出假设，设计并进行实验，分析和处理实验数据，作出合理的结论。 （4）发展比较、判断、推理、分析、综合等思维能力，初步形成创造性思维品质，能够运用学到的生物学知识评价和解决某些实际问题。 三、课程安排
精心整理 专题二微生物的培养与应用 课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHC3O等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）
2019年－9 月
精心整理蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。 只有固氮微生物才能利用N2 。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术除 了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目 的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 ·消毒与灭菌的区别 消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。 灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。 灭菌方法： ①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法； ②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱； 2019 年－9月
生物选修1知识点总结 专题1传统发酵技术的应用 课题1果酒和果醋的制作 【补充知识】发酵 1.概念：利用微生物或其他生物的细胞在有氧或无氧条件下繁殖或积累其代谢产物的过程。 2.类型： (1)根据是否需要氧气分为：需氧发酵和厌氧发酵。 (2)根据产生的产物可分为：酒精发酵、乳酸发酵、醋酸发酵等。 一.基础知识 (一)果酒制作的原理 1.菌种是酵母菌，属于真核生物，新陈代谢类型异养兼性厌氧型，有氧时，进行有氧呼吸， 大量繁殖，反应式为：C 6H 12O 6+6H 2O+6O 2 →6CO 2+12H 2O+能量；无氧时， 能进行酒精发酵，反应式为：C 6H 12O 6→2C 2H 5OH+2CO 2+能量。 酶 酶
2.酵母菌繁殖的最适温度20℃左右，酒精发酵一般控制在18～25℃。 3.自然发酵过程中，起作用的主要是附着于葡萄皮上的野生型酵母菌。也可以在 果汁中加入人工培养的酵母菌。(二)果醋制作的原理 1.菌种是醋酸菌，属于原核生物，新陈代谢类型为异养需氧型。只有在氧气充足时，才能进行旺盛的生命活动。变酸的酒表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖形成的。 2.当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，当缺少糖源时， 醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，反应简式为C 2H 5OH+O 2→CH 3COOH+H 2O 。 3.醋酸菌的最适合生长温度为30～35℃。 4.菌种来源：到生产食醋的工厂或菌种保藏中心购买，或从食醋中分离醋酸菌。二.实验设计 1.流程图 挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵 ↓↓ 果酒 果醋 2.制作实例 (1)实验材料葡萄、榨汁机、纱布、醋酸菌(或醋曲)、发酵瓶(如右图)、气泵、体积分数为70%的酒精等。 (2)实验步骤 酶
专题二练习 一、选择题 1．微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（）A．细菌的大小、形状、颜色 B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛 D．培养基的不同 2．下列4种生物中，哪一种生物的细胞结构与其他3种生物的细胞有明显的区别（）A．酵母菌B．乳酸菌C．青霉菌D．蘑菇 3．下列有关平板划线接种法的操作错误的是（） A．将接种环放在火焰上灼烧 B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液 C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连 4．细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌。如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活（） A．大肠杆菌B．一种青霉菌 C．枯草芽孢杆菌D．鼠伤寒沙门氏菌 5．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（） A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针 C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、高压锅 6．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（） Ａ．操作顺序为计算、称量、熔化、倒平板、灭菌 Ｂ．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 Ｃ．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板 Ｄ．待平板冷却凝固约5~10min后将平板倒过来放置 7.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是（） A.培养基分装到培养皿后进行灭菌 B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D.培养过程中每隔一周观察一次 8．获得纯净培养物的关键是（） A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B.接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵
专题五蛋白质技术血红蛋白的提取和分离 【典例1】下列有关血红蛋白的提取的叙述，错误的是 ( ) A．凝胶色谱法是一种根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法 B．电泳只是利用待分离样品中各种分子带电性质不同，从而迁移速度不同来分离蛋白质的 C．血红蛋白的提取和分离一般按照样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定的顺序进行 D．装填色谱柱时要尽量紧密，减小颗粒间隙；避免出现气泡；洗脱液不能断流 【答案】B 【解析】电泳法依据的原理：①在一定pH下，蛋白质分子的某些基团解离后会带上正电或负电。在电场的作用下，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。②待分离样品中各种分子间存在带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，这使得带电分子在电场作用下会产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 【变式1】如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题： (1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，它在红细胞中的作用体现了蛋白质具有________功能。 (2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是________ ；乙装置中，C溶液的作用是________________。 (3)甲装置用于________，目的是___________________________________________。 用乙装置分离蛋白质的方法叫________，是根据________________分离蛋白质的有效方法。 (4)用乙装置分离血红蛋白时，待________________时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。 【答案】(1)运输 (2)磷酸缓冲液洗脱血红蛋白 (3)透析(粗分离) 去除样品中分子量较小的杂质 凝胶色谱法相对分子质量的大小 (4)红色的蛋白质接近色谱柱底端 【解析】(1)红细胞中含有血红蛋白，血红蛋白可以运输氧，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有运输功能。(2)由血红蛋白提取和分离的实验原理可知，甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是磷酸缓冲液，其可抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定；乙装置中，C溶液的作用是洗脱血红蛋白。(3)甲装置用于透析，目的是去除样品中分子量较小的杂质。用乙装置分离蛋白质的方法叫凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，分子量大的流动速度快。(4)用乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。 专题六植物芳香油的提取 【典例1】下列是与芳香油提取相关的问题，请回答： (1)用于提取玫瑰精油的玫瑰花要在花开的盛期采收，大约是每年的5月上、中旬，原因是在此阶段____________________。 (2)玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有___________的性质。蒸馏时收集的蒸馏液________(填“是”或“不是”)纯的玫瑰精油，原因是________________。
选修1知识点总结 1.1 果酒和果醋的制作 一、实验原理 1．酒精发酵的原理： ① 酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，表达式为：C 6H 12O 6+O 2→CO 2+H 2O+能量 ② 酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，表达式为：C 6H 12O 6→C 2H 5OH+CO 2+能量 ③ 酵母菌的营养代谢类型为异养兼性厌氧型。在有氧时，酵母菌大量繁殖，但是不起到发酵效果；在无氧时，繁殖速度减慢，但是此时可以进行发酵。在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵。20℃左右最适合酵母菌繁殖，酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH 最好是弱酸性。 2．醋酸发酵的原理： ① 醋酸菌是好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸。 表达式为：C 2H 5OH+O 2→CH 3COOH+H 2O ； 当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。 醋酸菌生长的最佳温度是在30℃～35℃ 二、实验步骤 1. 对发酵瓶、纱布、榨汁机、盛葡萄汁的器皿等实验用具进行清洗并消毒。先用温水反复冲洗几次,再用体积分数为75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。 2. 取葡萄500 g ，去除枝梗和腐烂的子粒。 3. 用清水冲洗葡萄1～2遍除去污物，注意不要反复多次冲洗。 4. 用榨汁机榨取葡萄汁后，将其装入发酵瓶中或将葡萄打成浆后，用洁净的纱布过滤至发酵瓶中，盖好瓶盖。如果没有合适的发酵装置，可以用500 mL 的塑料瓶替代，但注入的果汁量不要超过塑料瓶总体积的2/3。 酶 酶 酶
5. 将发酵瓶置于适宜的温度下发酵。 6. 由于发酵旺盛期CO2的产量非常大，因此需要及时排气，防止发酵瓶爆裂。如果使用简易的发酵装置，如瓶子（最好选用塑料瓶），每天要拧松瓶盖2～4次，进行排气。 7. 10 d以后，可以开始进行取样检验工作。例如，可以检验酒味、酒精的含量、进行酵母菌的镜检等工作。 8. 当果酒制成以后，可以在发酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后将装置转移至30～35 ℃的条件下发酵，适时向发酵液中充气。如果找不到醋酸菌菌种或醋曲，可尝试自然接种，但效果不是很好。如果没有充气装置，可以将瓶盖打开，在瓶口盖上纱布，以减少空气中尘土等的污染。 三、注意事项 请分析此装置中的充气口、排气口和出料口分别有哪些作用。为什么排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接？结合果酒、果醋的制作原理，你认为应该如何使用这个发酵装置？ 充气口 出料口 答：充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出CO2的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接，其目的是防止空气中微生物的污染。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口连接气泵，输入氧气。 1.2 腐乳的制作 一、实验原理 1．参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多种，其中起主要作用的是毛霉。 2．毛霉是一种丝状真菌，营养代谢类型为异养需氧型，最适生长温度为15-18℃，常见于土壤、水果、蔬菜、谷物上，具有发达的白色菌丝。 3.毛酶等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。 二、实验步骤 1.将豆腐切成3cm×3cm×1cm的若干块。所用豆腐的含水量为70％左右，水分过多则腐乳不易成形。 2.将豆腐块平放在铺有干粽叶的盘内，粽叶可以提供菌种，并能起到保温的作用。每块豆腐等距离排放，周围留有一定的空隙。豆腐上面再铺上干净的粽叶。气候干燥时，将平盘用保鲜膜包裹，但不要封严，以免湿度太高，不利于毛霉的生长。 3.将平盘放入温度保持在15～18 ℃的地方。毛霉逐渐生长，大约5 d后豆腐表面丛生着直立菌丝。 4.当毛霉生长旺盛，并呈淡黄色时，去除包裹平盘的保鲜膜以及铺在上面的粽叶，使豆腐块的热量和水分能够迅速散失，同时散去霉味。这一过程一般持续36 h以上。 5.当豆腐凉透后，将豆腐间连接在一起的菌丝拉断，并整齐排列在容器内，准备腌制。 6.长满毛霉的豆腐块（以下称毛坯）与盐的质量分数比为5∶1。将培养毛坯时靠近平盘没长直立菌丝的一面统一朝向玻璃瓶边，将毛坯分层盘立摆放在容器中。分层加盐，并随层加高而增加盐量，在瓶口表面铺盐厚些，以防止杂菌从瓶口进入。约腌制8 d。 〔注：加盐可以析出豆腐中的水分，有利于腐乳成型；盐能够抑制微生物的生长，并且可以调味。用盐腌制时，注意盐都用量。盐的浓度过低，不足以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高，会影响腐乳的口味。〕
专题一课题1果酒和果醋的制作 (二）果醋制作的原理 ⑴当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成。 ⑵当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为，再变为。 反应式为：。 （三）、果酒和果醋的制作过程 挑选葡萄冲洗 果酒果醋 （二）、果酒和果醋的发酵装置 1、装置中的充气口、排气口和出料口分别有哪些作用？ 2、为什么排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接？ 3、发酵瓶为什么要留有1/3的空间？ 4、装置的使用：在进行酒精发酵时应关闭口，在进行果醋发酵时，充气口应连续充气，输入 专题一课题 2 腐乳的制作 (一)制作腐乳的实验流程: (二)毛霉的生长: 1.腐乳制作时,温度应控制在 ,并保持一定的湿度。自然条件下毛霉的菌种来自 中的。
一、腐乳的制作过程 1、前期发酵——让豆腐上长出毛霉 （1）前期发酵的作用是什么？ （2）前期发酵的温度为什么为15～18 ℃？ 2、后期发酵——加盐腌制、加卤汤装瓶、密封腌制 专题一课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 （二）亚硝酸盐含量的测定 1.原理（1）在条件下，亚硝酸盐与 发生反应后，与结 合形成 色染料。 （2）将显色反应后的样品与已知浓度的进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝 酸盐的含量2.测定方法：比色法3.测定步骤配制溶液→ →制备样品处理液→ 3、制备样品处理液 称取泡菜榨汁 →加入蒸馏水、提取液、氢氧化钠过滤→加入氢氧化铝乳液 问题2：提取剂、氢氧化钠、氢氧化铝乳液的作用？ 5、测定结果：泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化 、 发酵时间 亚硝酸盐含量 10d
专题2课题1微生物的实验室培养 （2）消毒：是指使用的物理或化学方法杀死物体表面或内部的微生物，（不包括和）常用的方法有：、、 灭菌：是指使用的理化因素杀死物体内外的微生物。包括芽孢和孢子 常用的方法有、、， 此外，实验室里还用或进行消毒。 三、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤： →→→→倒平板 四、纯化大肠杆菌 （1）微生物接种的方法中最常用的是和。 五、菌种的保存 为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用法；对于需要长期保存的菌种，可以采用法。 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。土壤中的微生物之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成。 2．设置对照：主要目的是排除实验组中因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 如：空白对照组可用来观察是否有杂菌污染。设置完全培养基，用来观察选择 培养基是否具有作用。 1．常用来统计样品中活菌数目的方法是。 土壤中分解尿素的细菌合成的将尿素分解成，使培养基的增强，PH ,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂，培养细菌后，若PH升高，指示剂将，这样就可以初步鉴定该细菌能够分解尿素。
选修一生物技术实践历年全国卷（2010-2016）考题汇总 （2011年）39．【生物——选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题： （1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。 （2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。 （3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解能力。 （4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 39.【答案】（1）原油选择（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）强（4）干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰（2013年）39.[生物——选修1：生物技术实践] 临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： （1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 （2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。 （3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。 （4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。 答案：（1）划线稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌（4）A （2012年）39．（15分）为了探究6-BA和IAA对某菊花品 种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在ＭＳ培养基中加 入6-BA和IAA，配制成四种培养基（见下表），灭菌后分别接 种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条 件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率（m），以及 再生丛芽外植体上的丛芽平均数（n），结果如下表。 回答下列问题： （１）按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为和两类。上述培养基中，6-BA属于类生长调节剂。（２）在该实验中，自变量是，因变量是，自变量的取值范围是。 （３）从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是号培养基。 （４）为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入（填“6-BA”或“IAA”）。 【答案】（１）大量元素微量元素细胞分裂素（２）IAA浓度丛芽外植体的比率及丛芽平均数０～０.５mg/L （３）１（４）6-BA （2010年）37．【生物——选修模块1：生物技术实践】(15分)下列 是与芳香油提取相关的问题，请回答： （1）玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有的 性质。蒸馏时收集的蒸馏液(是、不是)纯的玫瑰精油，原因是。 （2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取