浙江大学远程教育学院
《生物化学（药）》课程作业（必做）
姓名：学号：
年级：—————————————————————————————
第二章蛋白质化学
一、填空题
1. 增加溶液的离子强度能使某种蛋白质的溶解度增高的现象叫做盐溶，在高离子强度下使某种蛋白质沉淀的现象叫做盐析。
2. 蛋白质是由氨基酸聚合成的高分子化合物，在蛋白质分子中，氨基酸之间通过肽键相连，蛋白质分子中的该键是由一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基脱水形成的共价键。
3. 蛋白质分子中常含有色氨酸、酪氨酸残基等氨基酸，故在280nm波长处有特征性光吸收，该性质可用来测试蛋白质的含量。
4. 当蛋白质受到一些物理因素或化学试剂的作用发生变性作用时，它的生物学活性会丧失，同时还伴随着蛋白质溶解性的降低和一些理化常数的改变等。
5. 蛋白质平均含氮量为16% ，组成蛋白质分子的基本单位是氨基酸，但参与人体蛋白质合成的氨基酸共有20种,除甘氨酸和脯氨酸外，其它化学结构均属于L-a-氨基酸。
6. 蛋白质分子中的二级结构的结构单元有：α—螺旋、β—折叠、β—转角、无规卷曲。
7. 蛋白质分子构象改变而导致蛋白质分子功能发生改变的现象称为变构效应。引起变构效应的小分子称变构效应剂。
8. α螺旋肽段中所有的肽键中的α-氨基和α羧基均参与形成氢键，因此保持了α螺旋的最大稳定。氢键方向与螺旋轴平行。
9. 蛋白质在处于大于其等电的pH环境中，带负电荷，在电场中的向正极移动。反之，则向电场负极移动。
10. 稳定和维系蛋白质三级结构的重要因素是氢键，有离子键（盐键）、疏水作用及范德华力等非共价键。
11. 构成蛋白质四级结构的每一条肽链称为亚基。
12. 蛋白质溶液是亲水胶体溶液，维持其稳定性的主要因素是颗粒表面水化膜及表面带有同种电荷。
13.一级结构是蛋白质分子的基本结构，它是决定蛋白质空间构象的基础，而蛋白质的
空间构象则是实现其生物学功能的基础。
14. 根据理化性质天冬氨酸Asp和谷氨酸Glu属于酸性氨基酸；组氨酸His，赖氨酸Lys，精氨酸Arg；属于碱性氨基酸。
二、填空题
1.肽键：由蛋白质分子中氨基酸的?-羧基与另一个氨基酸的?-氨基脱水形成的共价键（-CO-NH-），又称酰胺键
2.蛋白质一级结构：指肽链中通过肽键连接起来的氨基酸排列顺序，这种顺序是由基因上遗传信息所决定的。维系蛋白质一级结构的主要化学键为肽键，一级结构是蛋白质分子的基本结构，它是决定蛋白质空间结构的基础
3.蛋白质的构象：各种天然蛋白质分子的多肽链并非以完全伸展的线状形式存在，而是通过分子中若干单键的旋转而盘曲、折叠，形成特定的空间三维结构，这种空间结构称为蛋白质的构象。蛋白质的构象通常由非共价键（次级键）来维系
4.蛋白质二级结构：是指蛋白质多肽链主链原子局部的空间结构，但不包括与其他肽段的相互关系及侧链构象的内容。维系蛋白质二级结构的主要化学键是氢键
5.肽键平面：肽键不能自由旋转而使涉及肽键的6个原子共处于同一平面，称为肽单元或肽键平面。但由于α-碳原子与其他原子之间均形成单键，因此两相邻的肽键平面可以作相对旋转
6.α-螺旋：是多肽链的主链原子沿一中心轴盘绕所形成的有规律的螺旋构象，其结构特征为：⑴ 为一右手螺旋；⑵ 螺旋每圈包含3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm；⑶ 螺旋以氢键维系
7.β-折迭：是由若干肽段或肽链排列起来所形成的扇面状片层构象，其结构特征为：
⑴ 由若干条肽段或肽链平行或反平行排列组成片状结构；⑵ 主链骨架伸展呈锯齿状；⑶ 借相邻主链之间的氢键维系
8.β-转角：是多肽链180°回折部分所形成的一种二级结构，其结构特征为：⑴ 主链骨架本身以大约180°回折；⑵ 回折部分通常由四个氨基酸残基构成；⑶构象依靠第一残基的-CO基与第四残基的-NH基之间形成氢键来维系
9.无规则卷曲：多肽链的主链除了?-螺旋、?结构和?转角外，还有一些无确定规律性的折叠方式，这种无确定规律的主链构象称为无规则卷曲
10.蛋白质的三级结构：是指蛋白质的一条多肽链的所有原子的整体排列。包括形成主链构象和侧链构象的所有原子在三维空间的相互关系。也就是一条多肽链的完整的三维结构。稳定三级结构的因素是侧链基团的次级键的相互作用，包括氢键、离子键(盐键)、疏水作用、范德华力
11.蛋白质的四级结构：就是指蛋白质分子中亚基的立体排布，亚基间的相互作用与接触部位的布局。维系蛋白质四级结构的是氢键、盐键、范氏引力、疏水键等非共价键。具有四级结构的蛋白质也称寡聚蛋白
12.亚基：某些蛋白质作为一个表达特定功能的单位时，由两条以上的肽链组成，这些多肽链各自有特定的构象，这种肽链就称为蛋白质的亚基
13.蛋白质的等电点：当蛋白质处于某一pH环境中，所带正、负电荷为零，呈兼性离子，此时溶液的pH值被称为蛋白质的等电点
14.蛋白质变性：蛋白质在外界的一些物理因素或化学试剂因素作用下，其次级键遭到破坏，引起空间结构的改变，从而引起了理化性质的改变，丧失生物活性，但蛋白质的一级结构并没有被破坏，这种现象称为蛋白质变性
15.蛋白质沉淀：蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀。变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质
16.盐析：在蛋白质溶液中加大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析
17.变构效应：蛋白质空间构象的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。具有变构效应的蛋白质称为变构蛋白，常有四级结构。以血红蛋白为例，一分子氧与一个血红素辅基结合，引起亚基构象变化，进而引进相邻亚基构象变化，更易与氧气结合
18.肽: 一个氨基酸分子的α-羧基与另一个氨基酸分子的α-氨基在适当的条件下经脱水缩合即生成肽键，多个氨基酸以肽键连接成的反应产物称为肽
三、问答题
1．什么是蛋白质的二级结构？它主要有哪几种？各有何特征？
答：蛋白质二级结构是指多肽链主链原子的局部空间排布，不包括侧链的构象。它主要有α－螺旋、β－折叠、β－转角和无规卷曲四种。在α－螺旋结构中，多肽链主链围绕中心轴以右手螺旋方式旋转上升，每隔3.6个氨基酸残基上升一圈。氨基酸残基的侧链伸向螺旋外侧。每个氨基酸残基的亚氨基上的氢与第四个氨基酸残基羰基上的氧形成氢键，以维持α－螺旋稳定。在β－折叠结构中，多肽链的肽键平面折叠成锯齿状结构，侧链交错位于锯齿状结构的上下方。两条以上肽链或一条肽链内的若干肽段平行排列，通过链间羰基氧和亚氨基氢形成氢键，维持β－折叠构象稳定。在球状蛋白质分子中，肽链主链常出现180°回折，回折部分称为β－转角。β－转角通常有4个氨基酸残基组成，第二个残基常为辅氨酸。无规卷曲是指肽链中没有确定规律的结构
2．什么是蛋白质变性？变性与沉淀的关系如何？
答：蛋白质在某些理化因素的作用下，其严格的空间构象受到破坏，从而改变其理化性质，并失去其生物活性，称为蛋白质的变性。变性的实质是蛋白质各种次级键破坏使得天然构象受到破坏，所以，功能发生改变，但一级结构不变，无肽键断裂。变性后由于肽链松散，面向内部的疏水基团暴露于分子表面，蛋白质分子溶解度降低并互相凝聚而易于沉淀，其活性随之丧失；而蛋白质沉淀特指蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象，有时发生沉淀的蛋白质并不一定发生蛋白质变性，如盐析法沉淀蛋白质，其实就是破坏了蛋白质胶体溶液稳定的因素：电荷性和水化膜，而并没有破坏蛋白质的空间构象，所以一般是不发生蛋白质变性
3. 简述蛋白质空间结构
答：蛋白质的空间结构包括：蛋白质的二级结构：蛋白质的二级结构是指蛋白质多肽链主链原子局部的空间结构，但不包括与其他肽段的相互关系及侧链构象的内容，蛋白质的二级结构主要包括：α-螺旋，β-折迭，β-转角及无规卷曲等几种类型。维系蛋白质二级结构的主要化学键是氢键。蛋白质的三级结构：蛋白质的三级结构是指蛋白质分子或亚基内所有原子的空间排布，也就是一条多肽链的完整的三维结构。维系三级结构的化学键主要是非共价键（次级键），如疏水键、氢键、盐键、范氏引力等，但也有共价键，如二硫键等。蛋白质的四级结构：就是指蛋白质分子中亚基的立体排布，亚基间的相互作用与接触部位的布局。维系蛋白质四级结构的是氢键、盐键、范氏引力、疏水键等非共价键
第三章核酸化学
一、填空题
1.组成RNA和DNA的碱基不同之处是 _ DNA中含有T,而 RNA 则含有U _，戊糖不同之处是 DNA中含有脱氧核糖，而RNA则含有核糖__。
2.构成核酸一级结构的基本化学键是磷酸二酯键，它是由前一核苷酸的戊糖的3′位羟基与后一核苷酸上的5′位磷酸基形成的磷酸酯键。
3．核酸分子游离磷酸基末端称5′端，另一端则呈现游离的__3′羟基端。
4．核酸的一级结构即指其结构中核苷酸的排列次序。
5．碱基配对规律是_A__和_T_之间因形成二个氢键而配对；
C和__G_之间因形成三个氢键而配对。
6.维持DNA双螺旋结构稳定的主要因素是__氢键和_ 碱基堆集力__。
7.DNA双螺旋结构中，其基本骨架是_核糖 _和__磷酸，而碱基朝向_ 内侧，碱基间以 __氢键 _ 相连。
8．tRNA的二级结构是三叶草形，其3′端为-CCA-OH结构，其作用是__结合和携带氨基酸_ ,又被称为__氨基酸臂或氨基酸柄__。
9. 组成DNA的基本核苷酸是dAMP、dGMP、dCMP、dTMP四种。组成RNA的基本核苷酸是AMP、GMP、CMP和UMP四种。
10. 稳定的B-型双螺旋结构的参数是：螺旋直径为2 nm，螺距为 3.4 nm。螺旋每一周包含了10个碱基（对），所以每个碱基平面之间的距离为0.34nm。
11. 在真核生物中，DNA主要存在于细胞核中，是遗传信息的贮存和携带者；RNA 则主要存在于细胞质中，参与遗传信息表达的各个过程
二、名词解释
1.核酸的一级结构
核酸的一级结构是指其结构中核苷酸的排列次序。在庞大的核酸分子中，各个核苷
酸的唯一不同之处仅在于碱基的不同，因此核苷酸的排列次序也称碱基排列次序
2.磷酸二酯键
核苷酸连接成为多核苷酸链时具有严格的方向性，前一核苷酸的3′-OH与下一位核苷酸的5′ -位磷酸间脱水形成3′、5′- 磷酸酯键，该键称为磷酸二酯键，它是形成核酸一级结构的主要化学键
3.DNA双螺旋结构
大多数生物的DNA分子都是双链的，而且在空间形成双螺旋结构。DNA分子是由两条长度相同、方向相反的多聚脱氧核糖核苷酸链平行围绕同一“想象中”的中心轴形成的双股螺旋结构。二链均为右手螺旋。两条多核苷酸链中，脱氧核糖和磷酸形成的骨架作为主链位于螺旋外侧，而碱基朝向内侧。两链朝内的碱基间以氢键相连，使两链不至松散
4.碱基互补规律
腺嘌呤与胸腺嘧啶以二个氢键配对相连；鸟嘌呤与胞嘧啶以三个氢键相连，使碱基形成了配对。这种严格的配对关系称为碱基互补规律
5.碱基平面
DNA双螺旋结构中配对的碱基一般处在同一个平面上，称碱基平面，它与双螺旋的长轴垂直
6.DNA变性
在理化因素作用下，破坏DNA双螺旋稳定因素，使得两条互补链松散而分开成为单链，DNA将失去原有的空间结构，从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变，这种现象称为DNA的变性
7.DNA复性
DNA的变性是可以可逆的。当去掉外界的变性因素，被解开的两条链又可重新互补结合，恢复成原来完整的DNA双螺旋结构分子，这一过程称为DNA复性
8.DNA变性温度（Tm值）
加热DNA溶液，使其对260nm紫外光的吸收度突然增加，达到其最大值一半时的温度，就是DNA的变性温度（融解温度，Tm）。
9.DNA增色效应
指DNA变性后对260nm紫外光的光吸收度增加的现象
10.核酸分子杂交
两条来源不同的单链核酸（DNA或RNA），只要它们有大致相同的互补碱基顺序，经退火处理即可复性，形成新的杂种双螺旋，这一现象称为核酸的分子杂交
11. 核酶
具有自身催化作用的RNA称为核酶，核酶通常具有特殊的分子结构，如锤头结构
三、问答题
1. 比较试简述DNA、RNA在分子组成上的特点
答：组成RNA的碱基是A、G、C、U，而组成DNA的碱基是A、G、C、T。戊糖不同之处是RNA含有核糖，而DNA含有脱氧核糖。组成RNA的基本核苷酸分别是AMP、GMP、CMP和UMP四种。组成DNA的基本核苷酸是dAMP、dGMP、dCMP、dTMP四种。DNA分子由两条反向平行并且彼此完全互补的脱氧核糖核苷酸链组成，RNA是单链核酸，会形成局部的链内配对
2. 试简述核苷酸的组成成分，以及各组成成分的连接方式
答：每分子核苷酸中都含有有机含氮碱、核糖和磷酸各一分子。核苷是由核糖（或脱氧核糖）与碱基缩合而成的糖苷。核糖的第一位碳原子（C1′）与嘌呤碱的第九位氮原子（N9）相连接，或与嘧啶碱的第一位氮原子（N1）相连，这种C-N连接键一般称为N-糖苷键。核苷与磷酸通过酯键缩合形成核苷酸。尽管核糖结构上游离的-OH（如C2′、C3′、C5′及脱氧核糖上的C3′、C5′）均能参与发生酯化反应,生成C3′- 或C5′-核苷酸,但生物体内的核苷酸组成中多数是5′-核苷酸，即磷酸基大多是与核糖的C5′- 连接的
3. 简述DNA双螺旋结构模型要点
答：双螺旋模型的要点如下：
（1）DNA分子是由两条长度相同、方向相反的多聚脱氧核糖核苷酸链平行围绕同一“想象中”的中心轴形成的双股螺旋结构。二链均为右手螺旋。
（2）两条多核苷酸链中，脱氧核糖和磷酸形成的骨架作为主链位于螺旋外侧，而碱基朝向内侧。两链朝内的碱基间以氢键相连，使两链不至松散。
（3）碱基间的氢键形成有一定的规律：即腺嘌呤与胸腺嘧啶以二个氢键配对相连；鸟嘌呤与胞嘧啶以三个氢键相连（即A=T，G≡C）。这种碱基配对规律造成了碱基互补。它们一般处在一个平面上，称碱基平面，它与纵轴垂直。正因为两链间的碱基是互补的，所以两链的核苷酸排列次序也是互补的，即两链互为互补链。当知道一条链的一级结构，另一条互补链也就被确定
第四章酶
一、填空题
1. 酶与非酶催化剂比较具有以下特点：①高度催化效率；②高度专一性；③对
反应条件高度敏感；④活性可被调节控制。
2. 反竞争性抑制作用，抑制剂只能和ES 结合，如以1/v 对1/[S]作图，呈现相
同斜率的直线，Km 减小，Vmax降低。
3. 变构酶的协同效应有正协同效应和负协同效应以及同促协同效应、异促协同效应
等类型。
4. 酶促反应受酶浓度、底物浓度、温度、pH、激活剂和抑制剂等影响。
5. 根据与酶蛋白结合的牢固程度不同，辅助因子可分为辅酶和辅基两
种。
6. 酶分子中的必需基团在某些化学物质的作用下发生改变，引起酶活性的降低或丧失
称为抑制作用。按照抑制剂的抑制作用，可将其分为不可逆抑制作用和可逆抑制作用两大类。
7. 非竞争性抑制的特点是非竞争性抑制剂的化学结构与底物的分子结构不一定相
似；底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合；当底物浓度的改变时抑制程度不变；动力学参数：Km值不变，Vm值降低。
二、名词解释
1.酶的辅助因子
答：指结合酶的非蛋白质部分，主要有小分子有机化合物及某些金属离子。小分子有机化合物根据它们与酶蛋白的亲和力大小，又分辅基和辅酶两种。前者与酶蛋白亲和力大，后者亲和力小。辅基和辅酶在酶促反应过程中起运载底物的电子、原子或某些化学基团的作用。常见的辅基和辅酶分子中多数含有B族维生素成分
2.活性中心
答：酶分子中与催化作用密切相关的结构区域称活性中心。活性中心的结构是酶分子中在空间结构上比较靠近的少数几个氨基酸残基或是这些残基上的某些基团，在一级结构上可能位于肽链的不同区段，甚至位于不同的肽键上，通过折叠、盘绕而在空间上相互靠近
3.酶原激活
答：指无活性的酶的前体转变成有活性酶的过程。酶原激活在分子结构上是蛋白质一级结构和空间构象改变的过程
4.酶的竞争性抑制
答：抑制剂I与底物S竞争和酶活性中心结合，从而排挤了酶对S的催化作用。I 常具有与S相似的分子结构，与酶结合是可逆的，提高底物浓度抑制作用可被减弱或解除。竞争性抑制剂使酶反应的Km值增大，而不改变Vmax值
5.酶的共价修饰
答：酶蛋白分子中的某些基团可以在其他酶的催化下发生共价的变化，从而导致酶活性的改变，称为共价修饰调节；酶的共价修饰包括磷酸化与脱磷酸化、乙酰化与脱乙酰化、甲基化与脱甲基化、腺苷化与脱腺苷化等等。其中以磷酸化修饰最为常见
6.酶的变构效应
答：效应物（配基）与变构酶的变构中心结合，改变酶分子的构象，进而影响酶与底物的亲和力，使酶促反应速率发生变化
7.同工酶
答：能催化相同的化学反应，但其分子组成及结构不同，理化性质和免疫学性质彼此存在差异的一类酶。它们可以存在于同一种属的不同个体，或同一个体的不同组织器官，甚至存在于同一细胞的不同亚细胞结构中
8.酶
答：酶是生物体活细胞产生的具有特殊催化活性和特定空间构象的生物大分子，包括蛋白质及核酸，又称为生物催化剂。绝大多数酶是蛋白质,少数是核酸RNA，后者称为核酶
9.辅酶
答：与酶蛋白疏松结合并与酶的催化活性有关的耐热低分子有机化合物称为辅酶
10.辅基
答：与酶蛋白牢固结合并与酶的催化活性有关的耐热低分子有机化合物称为辅基
11.酶的抑制剂
答：酶分子中的必需基团在某些化学物质的作用下发生改变，引起酶活性的降低或丧失称为抑制作用。能对酶起抑制作用的称为抑制剂
12.酶的可逆抑制作用
答：抑制剂以非共价键与酶分子可逆性结合造成酶活性的抑制，且可采用透析等简单方法去除抑制剂而使酶活性完全恢复的抑制作用就是可逆抑制作用
13.限速酶
答：可以通过改变其催化活性而使整个代谢反应的速度或方向发生改变的酶就称为限速酶或关键酶
14.酶的协同效应
答：当变构酶的一个亚基与其配体（底物或变构剂）结合后，能够通过改变相邻亚基的构象而使其对配体的亲和力发生改变，这种效应就称为变构酶的协同效应
三、问答题
1. 论述酶的作用的特点
答：酶作为催化剂，它具有一般催化剂的共同性质：（1）只能催化热力学上允许进行的反应，对于可逆反应，酶只能缩短反应达到平衡的时间，但不改变平衡常数；（2）酶也是通过降低化学反应的活化能来加快反应速度；（3）酶在反应中用量很少，反应前后数量、性质不变。酶的特殊催化性质：（1）高度的催化效率，酶通过其特有的作用机制，比一般催化剂更有效地降低反应的活化能，；（2）高度的作用专一性，酶对作用的反应物有严格要求，其中还包括催化底物发生反应的类型和方式。（3）酶活性对反应条件具有高度敏感性，酶的化学本质是蛋白质，所有能使蛋白质发生变性的理化因素，均能导致酶的失活；（4）催化活性可被调节控制，酶的作用无论是在体内或体外，都是可以调节控制的。酶的这一特性是保证生命有机体维持正常的代谢速率，以适应生理活动需要的根本前提。
2.酶的竞争抑制作用与非竞争性抑制作用有何区别？
答案：竞争抑制作用与非竞争性抑制作用比较表
竞争性抑制非竞争性抑制
①机理I与S竞争与酶活性中心结合，
排挤了E对S的催化作用I在E分子中结合的位置不是结合S的位置，E对S的结合不影响E和I的结合。
② I 结构I常具有与S相类似的结构I的分子结构与S分子无关
③抑制行为提高[S]，可减弱或解除抑制作
用
抑制作用不能因提高[S]而改变④动力学特征Km值增大，Vmax不变Km值不变，Vmax 降低
3.何谓变构酶？与非变构酶比较有什么特点？
答：某些代谢物能与变构酶分子上的变构部位特异性结合，使酶的分子构象发生改变，从而改变酶的催化活性以及代谢反应的速度，这种调节作用就称为变构调节。具有变构调节作用的酶就称为变构酶。变构酶多为寡聚酶，分子中有一个活性中心和另一个变构中心。与非变构酶的比较，其动力学特征主要表现为：v与[S]的关系为S型曲线，这种曲线关系再E 作用于S时，只要[S]发生微小的变化，即能引起v的极大改变。故变构酶能以极大程度调控反应速率
4.论述影响酶反应速度的因素。
答：（1）底物浓度对反应速度的影响：在一定[E]下，将[S]与v作图，呈现双曲线，当I的分子结构与S分子无关抑制作用不能因提高[S]而改变 Km值不变，Vmax 降低底物浓度较低的初始反应阶段底物浓度与反应速度成正比，然后处于混合级反应阶段，当底物浓度加大到可占据全部酶的活性中心时，反应速率达到最大值，即酶活性中心被底物所饱和。此时如继续增加底物浓度，不会使反应速率再增加。
（2）酶浓度对反应速度的影响：当反应系统中底物的浓度足够大时，酶促反应速度与酶浓度成正比，即ν=k[E]。
（3）温度对反应速度的影响：酶促反应速度随温度的增高而加快。但当温度增加达到某一点后，由于酶蛋白的热变性作用，反应速度迅速下降，直到完全失活。酶促反应速度随温度升高而达到一最大值时的温度就称为酶的最适温度。
（4）pH对反应速度的影响：pH对酶促反应速度的影响，通常为一“钟形”曲线，即pH过高或过低均可导致酶催化活性的下降。酶催化活性最高时溶液的pH值就称为酶的最适pH。
（5）抑制剂对反应速度的影响：凡是能降低酶促反应速度，但不引起酶分子变性失活的物质统称为酶的抑制剂。按照抑制剂的抑制作用，可将其分为不可逆抑制作用和可逆抑制作用两大类。
（6）激活剂对反应速度的影：能够促使酶促反应速度加快的物质称为酶的激活剂。酶的激活剂大多数是无机离子，如K+、Mg、Mn、Cl等。
第五章糖代谢
一、填空题
1．1个葡萄糖分子经糖酵解可净生成 2 个ATP；糖原中的1个葡萄糖残基经糖酵解可净生成 3 个ATP。
2．糖酵解在细胞的胞液中进行，该途径中三个限速酶分别是己糖激酶或葡萄糖激酶、6-磷酸果糖激酶-l 和丙酮酸激酶。
3．成熟的红细胞中无线粒体，所以只能从糖酵解中获得能量。
4．丙酮酸脱氢酶复合体包括丙酮酸脱氢酶、硫辛酸乙酰基转移酶和二氢硫辛酸脱氢酶三种酶和 5 种辅助因子。
5.三羧酸循环在细胞线粒体内进行，有4次脱氢和 2 次脱羧反应，每循环一次消耗掉1个乙酰基基，生成 12个分子ATP，最主要的限速酶是异柠檬酸脱氢酶。
6．糖原合成的限速酶是糖原合成酶，糖原分解的限速酶是磷酸化酶。
二、名词解释
1．糖酵解
答：葡萄糖或糖原在不消耗氧的条件下被分解成乳酸的过程，称为糖的无氧分解（或无氧氧化）。由于此反应过程与酵母菌使糖生醇发酵的过程基本相似，故又称为糖酵解（或无氧酵解）
2．糖的有氧氧化
答：葡萄糖在有氧条件下彻底氧化分解生成CO2和H2O的过程，称为糖的有氧氧化
3．巴斯德效应
答：有氧氧化抑制糖酵解的现象称为巴斯德效应
4．乳酸循环
答：在肌肉中葡萄糖经糖酵解生成乳酸，乳酸经血液运至肝脏，肝脏将乳酸异生成葡萄糖，葡萄糖释放至血液又被肌肉摄取，这种循环进行的代谢途径叫做乳酸循环
5. 糖异生
答：由非糖物质转变为葡萄糖或糖原的过程称为糖异生。非糖物质：乳酸、甘油、生糖氨基酸等。糖异生代谢途径主要存在于肝及肾中
6. 血糖
答：血糖指血液中的葡萄糖，其正常水平相对恒定，维持在3.89～6.11mmol/L之间
7. 糖原
答：糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的带有分支的高分子多糖类化合物
三、问答题
1．以葡萄糖为例，比较糖酵解和糖有氧氧化的异同。
答：具体见下表：
糖酵解和糖有氧氧化的异同分析表
比较项目糖酵解糖有氧氧化反应部位胞液胞液和线粒体
反应条件无氧有氧
受氢体NAD+ NAD、FAD +
限速酶己糖激酶或葡萄糖激酶
己糖激酶或葡萄糖激酶
6-磷酸果糖激酶-l
柠檬酸合成酶
异柠檬酸脱氢酶
α-酮戊二酸脱氢酶复合体
生成
ATP数
1分子G氧化分解净生成2分子A TP 净生成36或38分子A TP
产能方式底物水平磷酸化底物水平磷酸化和氧化磷酸
化，后者为主
终产物乳酸CO2和H2O
生理意义糖酵解是肌肉在有氧条件下进行收三羧酸循环
是体内糖、脂肪、蛋白质三大营养物质彻底氧化
分解共同的最终代谢通路；是成熟红细胞获得能
量的唯一方式；是神经、白细胞、骨髓等组织细
胞在有氧情况下获得部分能量的有效方式。
糖的有氧氧化是机体获得能
量的迅速获得能量的重要途
径主要途径；是机体缺氧时获
得能量的主要途径；是体内物
质代谢相互联系的枢纽。
2．何谓三羧酸循环？有何特点？
答：三羧酸循环是以乙酰辅酶A的乙酰基与草酰乙酸缩合为柠檬酸开始，经过两次脱羧和4次脱氢等反应步骤，最后又以草酰乙酸的再生为结束的连续酶促反应过程，此过程存在于线粒体内。因为这个反应过程的第一个产物是含有三个羧基的柠檬酸，故称为三羧酸循环，也叫做柠檬酸循环。
三羧酸循环特点：①在有氧条件下进行；②在线粒体内进行；③有两次脱羧和4次脱氢；
④受氢体是NAD和FAD；⑤循环1次消耗1个乙酰基，产生12分子ATP；⑥产能方式是底物磷酸化和氧化磷酸化，以后者为主；⑦循环不可逆；⑧限速酶是柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶复合体；⑨关键物质草酰乙酸主要由丙酮酸羧化回补。
3．简述磷酸戊糖途径的生理意义。
答：磷酸戊糖途径的生理意义：①为核酸和核苷酸的生物合成提供5-磷酸核糖。②为+ 多种代谢反应提供NADPH：NADPH是体内重要的供氢体，参与脂酸、胆固醇及类固醇激素的生物合成反应；NADPH是谷胱甘肽还原酶的辅酶，使氧化型谷胱甘肽（G-S-S-G）还原为还原型谷胱甘肽（G-SH）；NADPH还参与肝内生物转化反应。
4．简述糖异生的概念、原料、器官、关键酶及其生理意义。
答：糖异生概念：由非糖化合物转变为葡萄糖或糖原的过程。
原料：甘油、有机酸和生糖氨基酸。部位：主要在肝脏，其次是肾脏。
关键酶：丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、果糖二磷酸酶-1、葡萄糖-6-磷酸酶。
生理意义：①维持空腹和饥饿时血糖浓度稳定。②防止酸中毒发生。③补充肝糖原。
5. 简述糖的无氧氧化和有氧氧化的生理意义
答：糖酵解的生理意义：
（1）迅速提供能量。当机体缺氧或剧烈运动肌肉局部血流相对不足时，能量主要通过糖酵解获得。
(2)在有氧条件下，作为某些组织细胞主要的供能途径：成熟的红细胞没有线粒体，完全依赖糖酵解供应能量。神经、白细胞、骨髓等代谢极为活跃，即使不缺氧也常由糖酵解提供部分能量。
有氧氧化的生理意义：
(1)三羧酸循环是三大营养物质的最终代谢通路。糖、脂肪、氨基酸在体内进行生物氧化都将产生乙酰CoA，然后进入三羧酸循环进入三羧酸循环被降解成为CO2和H2O，并释放能量满足机体需要。
(2)三羧酸循环也是糖、脂肪、氨基酸代谢联系的枢纽由葡萄糖分解产生的乙酰CoA可以用来合成脂酸和胆固醇；许多生糖氨基酸都必须先转变为三羧酸循环的中间物质后，再经苹果酸或草酰乙酸异生为糖。三羧酸循环的中间产物还可转变为多种重要物质，如琥珀酰辅酶A可用于合成血红素；α-酮戊二酸、草酰乙酸可用于合成谷氨酸、天冬氨酸，这些非必需氨基酸参与蛋白质的生物合成。
第六章脂代谢
一、填空题
1.脂肪动员是将脂肪细胞的脂肪水解成游离脂肪酸和甘油释放入血，运输到其他
组织器官氧化利用。
2.长链脂酰辅酶A进入线粒体由肉碱携带，限速酶是肉碱脂酰转移酶Ⅰ。
3.脂肪酸生物合成在细胞的胞液中进行，关键酶是乙酰CoA羧化酶。
4.脂肪生物合成的供氢体是NADPH + H，它来源于磷酸戊糖途径。
5.血脂的运输形式是脂蛋白，电泳法可将其分为CM、前β-脂蛋白、β-脂蛋白、
α-脂蛋白四种。
6.合成胆固醇的原料是乙酰CoA ，递氢体是NADPH ，限速酶是HMG-CoA还原酶，胆
固醇在体内可转化为胆汁酸、类固醇激素1 、25-（OH）2-D3。
7.乙酰CoA的去路有经三羧酸循环氧化供能、合成脂肪酸、合成胆固醇、合成酮体
等
8.酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸、丙酮。酮体主要在肝细胞以乙酰CoA为原
料合成，并在肝外组织被氧化利用。
9.脂蛋白的主要功能是CM转运外源性脂肪、VLDL转运内源性脂肪、LDL 转运胆固醇和HDL逆转胆固醇。
二、名词解释
1．必需脂肪酸
答：机体必需但自身又不能合成或合成量不足、必须靠食物提供的脂肪酸称必需脂肪酸，人体必需脂肪酸是一些不饱和脂肪酸，包括亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸。
2．激素敏感性脂肪酶
答：是指脂肪细胞中的三脂酰甘油脂肪酶。它对多种激素敏感，其活性受多种激素的调节，胰岛素能抑制其活性；胰高血糖素、肾上腺素等能增强其活性。是脂肪动员的
限速酶。
3．血浆脂蛋白
答：血浆中脂蛋白与载脂蛋白结合形成的球形复合体，表面为载脂蛋白、磷脂、胆固醇的亲水基团，这些化合物的疏水基团朝向球内，内核为甘油三酯、胆固醇酯等疏水
脂质，血浆脂蛋白是血脂在血浆中的存在和运输形式。
4．脂肪动员
答：贮存于脂肪细胞中的甘油三酯在激素敏感脂肪酶的催化下水解并释放出脂肪酸，供给全身各组织细胞摄取利用的过程称为脂肪动员。
5．脂酸的β-氧化
答：脂酰CoA在线粒体基质中，被疏松结合在一起的脂酸β-氧化多酶复合体催化，脂酰基的β碳原子发生氧化，经脱氢、水化、再脱氢、硫解4步连续反应，生成1分
子乙酰CoA和1分子比原来少2个碳原子的脂酰CoA。
6．酮体
答：酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮，是脂肪酸在肝脏氧化分解的特有产物。
7．血脂
答：血浆中的脂类化合物统称为血脂包括甘油三酯、胆固醇及其酯、磷脂及自由脂
肪酸。
三、问答题
1．1分子12C饱和脂肪酸在体内如何氧化成水和CO2？计算ATP的生成。
答：12C脂肪酸氧化分解包括以下几个阶段：（1）脂肪酸活化生成脂酰CoA 消耗2个高能键（2）脂酰基由肉碱携带进入线粒体（3）通过5次-氧化，生成6分子乙酰CoA 生成5×5=25ATP（4）经三羧酸循环，乙酰CoA氧化成水和CO2 生成12×6=72ATP ATP生成数合计：25 + 72－2 = 95
另外，在肝脏乙酰CoA缩合成酮体，然后运至肝外组织，酮体重新转变为乙酰CoA，经三羧酸循环生成水和CO2。
2．何谓酮体？酮体是如何生成及氧化利用的？
答：酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮。
脂肪酸在肝外组织生成的乙酰CoA能彻底氧化成水和CO2，而肝细胞因具有活性较强的合成酮体（ketone body）的酶系，β-氧化生成的乙酰CoA大都转变为乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮等中间产物，这三种物质统称为酮体。
酮体是在肝细胞内由乙酰CoA经HMG-CoA转化而来，但肝脏不利用酮体。在肝外组织酮体经乙酰乙酸硫激酶或琥珀酰CoA转硫酶催化后转变成乙酰CoA并进入三羧酸循环而被氧化利用。
3. 为什么吃糖多了人体会发胖（写出主要反应过程）？脂肪酸能转变成葡萄糖吗？为
什么？
答：人吃过多的糖造成体内能量物质过剩，进而合成脂肪储存故可以发胖，基本过程如下：
葡萄糖丙酮酸合成脂肪酸脂酰CoA
葡萄糖磷酸二羟丙酮磷酸甘油
脂酰CoA + 3-磷酸甘油脂肪（储存）
脂肪分解产生脂肪酸和甘油，脂肪酸不能转变成葡萄糖，因为脂肪酸氧化产生的乙酰CoA不能逆转为丙酮酸，但脂肪分解产生的甘油少量可以通过糖异生而生成葡萄糖。
第七章生物氧化
一、填空题
1. 体内ATP生成的方式主要有氧化磷酸化和底物水平磷酸化两种。
2. 呼吸链上流动的电子载体有CoQ和Cyt c。
3. P/O值是指每消耗1mol氧原子所消耗无机磷酸的摩尔数，NADH的P/O值是3，琥珀酸的P/O值是2 。
4. 体内呼吸链有两种，它们是NADH呼吸链和琥珀酸呼吸链。
5. 生物体内的高能磷酸键主要有以下几种类型磷酸酐键、混合酐键、
烯醇磷酸键、和磷酸胍键等。
二、名词解释
1. 高能磷酸化合物
答：生物化学中一般将水解能释放出20.92kJ/mol以上自由能的磷酸化合物称为高能磷酸化合物
2. 生物氧化
答：有机分子如糖、脂肪、蛋白质等在机体细胞内氧化分解，生成二氧化碳和水并释放出能量的过程
3. 呼吸链
答：在线粒体中，由若干递氢体或递电子体按一定顺序排列组成的，与细胞呼吸过程有关的链式反应体系称为呼吸链
4. 电子传递体
答：在线粒体中传递代谢物脱下的氢与电子的酶与辅酶
5. 氧化磷酸化
答：代谢物脱下的2H经呼吸链传递，最后与氧结合生成水，此过程中释放的自由能驱使ADP与Pi发生磷酸化反应，生成A TP
6.ATP循环
答：ATP水解生成ADP和磷酸并释放大量自由能。它可以支持机体各种生命活动。机体生命活动所需要能量都和A TP分解供能有关。当营养物质氧化分解时产生能量可用于ADP磷酸化生成A TP。这样构成A TP－ADP循环。机体ATP不断形成又不断消耗。
7. P/O比值
答：每消耗一摩尔氧原子所消耗的无机磷的摩尔数称为P/O比值。
三、问答题
1. 呼吸链中各电子传递体的排列顺序是如何确定的?
答：呼吸链中各电子传递体的排列顺序主要是根据它们的氧化还原电势的测定来确定的，各电子传递体的氧化还原电势由低到高顺序排列。另外还可以利用电子传递抑制剂来确定它们的顺序。当在体系中加入某种电子传递抑制剂时，以还原态形式存在的传递体则位于该抑制剂作用位点的上游。如果以氧化态形式存在，则该传递体位于抑制剂作用位点的下游。这样结合应用几种电子传递抑制剂，便可为确定各电子传递体的顺序。此外还可通过测定细胞色素的氧化还原光谱来确定其排列顺序。
第八章氨基酸代谢
一、填空题
1、人体氨基酸脱氨基作用的最重要方式是联合脱氨基作用。该方式包括转氨基作用及氧化脱氨基作用两种作用，分别由转氨酶及谷氨酸脱氢酶催化。
2、体内重要转氨酶有ALT（丙氨酸氨基转移酶）和AST（天冬氨酸转移酶），它们的辅酶是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺。
3、氨的来源有氨基酸脱氨生成、由肠管吸收的氨、肾产生的氨。
4、不同α-酮酸的共同代谢去路有：再合成氨基酸、转变为糖、脂肪、氧化产生能量。
5、一碳单位的运载体是FH4。一碳单位的主要生理功能是作为合成嘌呤及嘧啶核苷酸的原料。
6、一碳单位包括甲基（-CH3）、亚甲基（=CH2）、次甲基（-CH=）、甲酰基（-CH0）、亚氨甲基（-CH=NH）等。
7、各种氨基酸主要通过需钠耗能的主动转运方式而吸收，也可经γ-谷氨酰基循环进行吸收。
8、氨基酸脱氨基作用的产物有氨、α-酮酸。
二、名词解释
1．转氨基作用
在转氨酶的催化下，α-酮酸与α-氨基酸进行氨基的转移，生成相应的α-酮酸与α-氨基酸的过程。体内的转氨酶有ALT和AST，其辅酶是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺，内含维生素B6 2. 联合脱氨基作用
转氨基作用加上氧化脱氨基作用，从而使氨基酸脱去氨基并氧化为α-酮酸的过程，是氨基酸脱氨基作用的一种重要方式，其逆过程也是体内生成非必需氨基酸的主要途径
3. 鸟氨酸循环
即尿素合成过程，体内氨的主要代谢去路是用于合成无毒的尿素。合成尿素的主要器官是肝脏，但在肾及脑中也可少量合成。过程是氨基甲酰磷酸的合成、瓜氨酸的合成、精氨酸的合成、尿素和鸟氨酸的生成。在胞液和线粒体中进行
4. 一碳单位
一些氨基酸在代谢过程中，可分解生成含有一个碳原子的有机基团，称为一碳基团，或一碳单位。包括甲基、亚甲基、次甲基、甲酰基、亚氨甲基等。其载体主要有四氢叶酸（FH4）和S-腺苷同型半胱氨酸
5. 氧化脱氨基作用
肝、肾、脑等组织的线粒体中广泛存在着L-谷氨酸脱氢酶，此酶分布广，活性强，但在心肌和骨骼肌中的活性较弱，是一种不需氧脱氢酶，此酶仅能催化L-谷氨酸氧化脱氨生成α-酮戊二酸，辅酶是NAD。是一个脱氢、加水、放出氨的过程
6. 氮平衡
体内蛋白质的合成与分解处于动态平衡中，故每日氮的摄入量与排出量也维持着动态平衡，这种动态平衡就称为氮平衡
7. 必需氨基酸
是指体内不能合成、必需由食物蛋白提供的氨基酸。主要有8种，它们是：异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸。体内不能合成，必须由食物蛋白质供给的氨基酸称为必需氨基酸
8. 氨基酸代谢库
在血液和组织中分布的氨基酸称为氨基酸代谢库
三、问答题
1、氨基酸脱氨基的方式有哪几种？
答：脱氨基作用主要有氧化脱氨基、转氨基、联合脱氨基、嘌呤核苷酸循环和非氧化脱氨基作用。转氨基作用中，在转氨酶的催化下，α-酮酸与α-氨基酸进行氨基的转移，生+ 成相应的α-酮酸与α-氨基酸的过程。体内的转氨酶有ALT和AST，其辅酶是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺，内含维生素B6。
氧化脱氨基作用经脱氢、加水、放出氨。酶是谷氨酸脱氢酶，分布广，活性强，两种组织活性低（心肌和骨骼肌）。
联合脱氨基作用是转氨基作用加上氧化脱氨基作用，是氨基酸脱氨基作用的一种重要方式，也是体内生成非必需氨基酸的主要途径。在心肌和骨骼肌则通过嘌呤核苷酸循环。
2、体内氨的来源和去路各有哪些？
答：体内氨有三个来源，即各组织器官中氨基酸及胺分解产生的氨、肠道吸收的氨、以及肾小管上皮细胞分泌的氨。
正常情况下体内的氨主要在肝中合成尿素而解毒，是氨的主要去路；只有少部分氨在肾以铵盐形式由尿排出。谷氨酰胺在肾小管上皮细胞中通过谷氨酰胺酶的作用水解成氨和谷氨酸，前者由尿排出，后者被肾小管上皮细胞重吸收而进一步被利用。
氨可通过联合脱氨基的逆过程，再生成非必需氨基酸。氨还可以通过还原性加氨的方式固定在α-酮戊二酸上而生成谷氨酸；谷氨酸的氨基又可以通过转氨基作用，转移给其他α-酮酸，生成相应的氨基酸，从而合成某些非必需氨基酸。也可以合成嘌呤和嘧啶
3、尿素生成的基本过程和生理意义各如何？
答：尿素在肝中生成，由肾排出。第一，鸟氨酸与氨及二氧化碳结合生成瓜氨酸；第二，瓜氨酸再接受1分子氨而生成精氨酸；第三，精氨酸水解生成尿素，并重新生成鸟氨酸。然后，鸟氨酸参与第二轮循环。由此可见，在这个循环过程中，鸟氨酸所起的作用与三羧酸循环中的草酰乙酸所起的作用类似。总的看来，通过鸟氨酸循环，2分子氨与1分子二氧化碳结合生成1分子尿素及1分子水。尿素是中性、无毒、水溶性很强的物质，由血液运输至肾，从尿中排出。鸟氨酸通过线粒体内膜上载体的转运再进入线粒体，并参与瓜氨酸的合成，如此反复，完成鸟氨酸循环。主要的生理意义是把有毒的氨变成无毒的尿素。
4．简述生物体内两种重要转氨酶及其临床测定意义
答：转氨酶是催化某一氨基酸的?-氨基转移到另一种?-酮酸的酮基上，生成相应的氨基酸；原来的氨基酸则转变成?-酮酸。转氨酶的辅酶均为含维生素B6的磷酸吡哆醛或磷酸吡哆胺。测定转氨酶的意义：转氨酶为细胞内酶，血清中转氨酶活性极低，当病理改变引起细胞膜通透性增高、组织坏死或细胞破裂时，转氨酶大量释放，血清转氨酶活性明显增高。体内重要的转氨酶：①谷丙转氨酶(GPT，又称ALT)：肝中含量最丰富，急性肝炎病人血清GPT活性明显升高。②谷草转氨酶(GOT，又称AST)：心肌含量最丰富，心肌梗死病人血清GOT活性明显升高
第九章核苷酸代谢
一、填空题
1. 脱氧核苷酸合成时，其脱氧核糖是在NDP（二磷酸核苷）水平生成的。
2. 嘌呤核苷酸分解代谢的特征性终产物是尿酸，嘧啶核苷酸分解的终产物
为β-丙氨酸，β-氨基异丁酸及氨和二氧化碳。
3. 嘌呤核苷酸分解主要在肝脏、小肠及肾脏进行
二、名词解释
1.嘌呤核苷酸的从头合成
嘌呤核苷酸的从头合成：用简单小分子磷酸核糖、氨基酸、一碳单位及CO2等为原料，经过多步酶促反应，进行嘌呤核苷酸的合成。
2.核苷酸的补救合成
解代谢产生的嘧啶/嘧啶核苷转变为嘧啶核苷酸的过程称为补救合成途径
第十章 DNA生物合成
一、填空题
1.DNA复制的保真性有赖于以下因素：①严格的碱基选择；②DNA聚合酶的校正功能；
③RNA引物的作用。
2.端粒酶是一种由NA 和蛋白质组成的逆转录酶，其功能是催化端粒DNA的合成。该酶以自身的RNA为模板，通过逆转录酶作用，延伸端粒内3＇-末端寡聚脱氧核苷酸的片段。
3.DNA损伤的修复方式主要有修复、切除修复、重组修复和SOS修复四种。
4. DNA生物合成有三种方式DNA复制、DNA的修复合成、逆转录合成。
5．原核生物每个DNA分子有一个复制起始点，真核生物DNA分子有多个复制起始点。
6．拓扑异构酶Ⅰ可使DNA一条链切断，松开双螺旋后再将DNA链连接起来，从而避免出现链的缠绕，不需消耗ATP。
二、名词解释
1.DNA半保留复制
DNA复制时亲代双链DNA解开，各以每股单链为模板，利用4dNTP，经碱基互补配对，合成新的互补链。生成的两个DNA分子中各有一股链来自亲代分子，另一股为合成新链。
2.连续复制
DNA复制时，新链延伸的方向为5＇→3＇，前导链的合成与复制叉行进方向一致，是连续合成；随从链合成与复制叉行进方向相反，先合成DNA单链片段，然后彼此连接成长链，此链为不连续合成
3.引发体
引物酶合成RNA引物的过程中，首先在复制起始点由许多蛋白质因子如PriA、B、C、DnaB、C、T等与引物酶结合装配成复合物，即引发体，进而催化RNA引物的合成
4.冈崎片段
随从链不连续合成的结果，生成许多带有RNA引物的DNA片段，此种合成方式由日本学者冈崎首先发现，故将该种片段称为冈崎片段
5.复制的保真性
也称复制忠实性，是指DNA复制过程中合成新链的碱基序列与模板链具有高度互补性，使子代DNA分子结构与亲代完全相同，从而使亲代DNA的遗传信息真实无误地传递到子代DNA分子中。
6.端粒酶
由RNA和蛋白质组成的逆转录酶，能在没有DNA模板情况下，以自身RNA为模板，通过逆转录作用，延伸线性DNA的3＇-末端的寡聚脱氧核苷酸片段，催化端粒DNA的合成，保证染色体复制的完整性
7.重组修复
当DNA损伤较严重时，来不及修复完善就进行复制，损伤部位无模板指导，复制的子链会有缺口。此时重组蛋白质RecA的核酸酶活性将另一股正常母链与缺口部交换，填补缺口；被交换移去的母链相应片段则可以互补链为模板指导合成，填补缺口
8.前导链
DNA复制时，双链解开，其中一股新链的合成依5＇→3＇方向延伸，与复制叉行进方向一致，是连续合成的，此链称为前导链
9. DNA的损伤
由自发的或环境的因素引起DNA一级结构的任何异常的改变称为DNA的损伤，也称为
实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶的提取 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法； 2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 1、实验内容： 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理： ①酵母细胞破碎 细胞破碎的常用方法 液体剪切法固体剪切法压力和研磨 物理法、化学渗透法、酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。 ②蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 三、实验材料与试剂
1、实验材料 市售干酵母粉10g/组(3～4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇(-20℃），20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）；研砵（每组一套）；50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）；高速冷冻离心机；恒温水浴箱（50℃）；量筒（50ml）、微量移液枪（1000ul)及枪头或移液管（1ml)、玻棒、滴管等;1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架；制冰机；－20℃冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10g+约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨(干磨)：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：量取总体积40 ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加研磨10min， 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后(托盘天平上)，离心10min （条件：4℃、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上清液并量出体积V1（样品I），另留1ml上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴，保温30min， 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min。 （条件：4℃，12000r/min） ④收集+测量：收集上清液并量出体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上清液加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，
,. 实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法 ①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； ②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。 2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。 二、实验内容和原理 1、Folin-酚测定法 Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。 优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。 缺点： 该反应受多种因素的干扰。 2、蔗糖酶活力测定 蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。 专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡 学号： 3130100246 日期： 2015.5. 26 地点： 生物实验中心310 装 订 线
一、恒温槽的性能测试 1.影响恒温槽灵敏度的主要因素有哪些？如和提高恒温槽的灵敏度？ 答：影响灵敏度的主要因素包括：1)继电器的灵敏度；2)加热套功率；3)使用介质的比热；4)控制温度与室温温差；5)搅拌是否均匀等。 要提高灵敏度：1)继电器动作灵敏；2)加热套功率在保证足够提供因温差导致的热损失的前提下，功率适当较小；3)使用比热较大的介质，如水；4)控制温度与室温要有一定温差；5)搅拌均匀等。 2.从能量守恒的角度讨论，应该如何选择加热器的功率大小？ 答：从能量守恒角度考虑，控制加热器功率使得加热器提供的能量恰好和恒温槽因为与室温之间的温差导致的热损失相当时，恒温槽的温度即恒定不变。但因偶然因素，如室内风速、风向变动等，导致恒温槽热损失并不能恒定。因此应该控制加热器功率接近并略大于恒温槽热损失速率。 3.你认为可以用那些测温元件测量恒温槽温度波动？ 答：1)通过读取温度值，确定温度波动，如采用高精度水银温度计、铂电阻温度计等；2)采用温差测量仪表测量温度波动值，如贝克曼温度计等；3)热敏元件，如铂、半导体等，配以适当的电子仪表，将温度波动转变为电信号测量温度波动，如精密电子温差测量仪等。 4.如果所需恒定的温度低于室温，如何装备恒温槽？ 答：恒温槽中加装制冷装置，即可控制恒温槽的温度低于室温。 5.恒温槽能够控制的温度范围？ 答：普通恒温槽(只有加热功能)的控制温度应高于室温、低于介质的沸点，并留有一定的差值；具有制冷功能的恒温槽控制温度可以低于室温，但不能低于使用介质的凝固点。 其它相关问题： 1.在恒温槽中使用过大的加热电压会使得波动曲线：( B ) A.波动周期短，温度波动大； B.波动周期长，温度波动大； C.波动周期短，温度波动小； D.波动周期长，温度波动小。 2.恒温槽中的水银接点温度计(导电表)的作用是：( B )
您的本次作业分数为：100分单选题2.生成酮体和胆固醇都需要的酶是（）。 A HMG-CoA 合成酶 B HMG-CoA还原酶 C HMG-CoA裂解酶 D 乙酰乙酰硫激酶 E 转硫酶正确答案:A 单选题 3.乳糖操纵子的调节水平在（）。 A 复制 B 转录 C 转录后 D 翻译 E 翻译后正确答案:B 单选题 4.变构效应物对酶结合的部位是（）。 A 活性中心与底物结合的部位 B 活性中心的催化基团 C 酶的-SH基 D 活性中心以外的特殊部位 E 活性中心以外的任何部位正确答案:D 单选题 5.1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为（）。 A 1 B 2 C 3 D 4 E 5 正确答案:D 单选题 6.酶的辅基具有下述性质（）。 A 是一种结合蛋白 B 与酶蛋白结合比较疏松 C 由活性中心的若干氨基酸残基组成 D 决定酶的专一性 E 与酶蛋白亲和力较大，一般不能用透析等物理方法彼此分开正确答案:E 单选题 7.体内转运一碳单位的载体是（）。 A 生物素 B 磷酸吡哆醛
C 四氢叶酸 D 二氢叶酸 E CoA 正确答案:C 单选题 8.原核生物转录的终止因子是（）。 A α B ρ C β D σ E Γ 正确答案:B 单选题 10.下列哪一物质含有高能键？（） A 6-磷酸葡萄糖 B 1,6-二磷酸果糖 C 1,3-二磷酸甘油酸 D 烯醇式丙酮酸 E 乳酸正确答案:C 单选题 12.肝脏不能氧化利用酮体是由于缺乏（）。 A HMGCoA合成酶 B HMGCoA裂解酶 C HMGCoA还原酶 D 琥珀酰CoA转硫酶 E 乙酰乙酰CoA硫解酶正确答案:D 单选题 14.下列关于遗传密码的基本特点，哪一点是错误的？（） A 密码无标点 B 一种氨基酸只有一种遗传密码 C 有终止密码和起始密码 D 密码专一性主要由头两个碱基决定 E 病毒、原核细胞或真核细胞都利用同一套遗传密码正确答案:B 单选题 16.三羧酸循环的第一个产物是（）。 A 乙酰CoA B 草酰乙酸 C 柠檬酸 D 苹果酸
生物化学（丙）期中试卷 一．判断题 1.1分子的NADH+H+经呼吸链氧化可产生 2.5分子ATP。 2.蛋白质变性的本质是蛋白质分子的高级结构被破坏，一级结构则保持完整。 3.琥珀酸脱氢酶和NADH脱氢酶的辅助因子都是FAD。 4.磺胺药可使乙酰胆碱酯酶的Km上升，Vmax不变。 5.ATP的主要功能是为机体提供能量和提供活性磷酸基团。 6.糖异生是指由丙酮酸、琥珀酸CoA、6-磷酸果糖、苹果酸等物质转变为葡萄糖的过程。 7.蛋白质三级结构的稳定力包括氢键、盐键、疏水相互作用、范德华力、二硫键、配位键 等次级键。 8.同源蛋白质的种属差异性说明一级结构的局部改变并不会影响蛋白质的功能。 9.同工酶是指功能相同，但结构和性质不同的一类酶。 10.限制性内切酶是指在一特殊序列处将DNA的两条链同时切断的一类酶。 11.ATP是磷酸果糖激酶I的底物，因此对该酶的活性起别构激活作用。 12.反馈抑制作用是指反应的产物对催化反应的酶的抑制作用。 13.硫辛酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和辅酶A都可以作为酰基的载体起传递作用。 14.酶催化高效性的机理是通过酸碱催化、温度效应、共价催化等因素降低了反应的活化能。 15.蛋白质的基本化学键是肽键、核酸的基本化学键是3’,5’-磷酸二酯键。 二．单选题 1.根据酶催化反应的性质，延胡索酸酶属于： (1)水解酶类(2)合成酶类(3)裂合酶类(4)转移酶类 2.当[S]=2Km时，V的值是： (1)2Vmax(2)2/3Vmax(3)1/3Vmax(4)1/2Vmax 3.下列酶催化的反应无CO2参与的是： (1)6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 (2)苹果酸酶 (3)3-磷酸甘油醛脱氢酶 (4)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 4.1分子的F1，6-2P被彻底氧化分解为CO2和H2O可产生的高能化合物分子数为（通过 α-磷酸甘油穿梭）： (1)32(2)30(3)34(4)28 5.在2,4-二硝基苯存在下一分子FADH2通过呼吸链可产生的ATP分子数是： (1)1(2)0(3)1.5(4)2.5 6.DNA的双螺旋结构中，主要的稳定力是： (1)氢键 (2)疏水相互作用 (3)范德华力 (4)离子键 7.下列代谢途径既不发生在细胞液也不发生在线粒体中的是： (1)EMP途径(2)TCA途径(3)HMP途径(4)乙醛酸循环 8.蛋白质的特征吸收波长是：(1)260nm(2)280nm(3)340nm(4)500nm 9.下列代谢途径中能为机体提供NADPH+H+的代谢途径是： (1)糖酵解途径(2)乙醛酸循环途径(3)磷酸戊糖途径(4)呼吸链 10.在酶的活化和去活化中，磷酸化和去磷酸化常发生在那个氨基酸残基：
一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP+生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异同 3 请对中心法则加以阐述 4 凝胶过滤是分离蛋白质混合物最有效的方法之一,请说明其工作原理并简述用该法分离蛋白质的实验操作步骤
浙江大学2001年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学,编号555 注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效 一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP 生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异
本科实验报告 课程名称：姓名：系：专业：学号：指导教师： 物理光学实验郭天翱 光电信息工程学系信息工程（光电系） 3100101228 蒋凌颖 2012年1 月7日 实验报告 实验名称：夫琅和弗衍射光强分布记录实验类型：_________ 课程名称：__物理光学实验_指导老师：_蒋凌颖__成绩： 一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得 一、实验目的和要求 1．掌握单缝和多缝的夫琅和费衍射光路的布置和光强分布特点。 2．掌握一种测量单缝宽度的方法。 3．了解光强分布自动记录的方法。 二、实验内容 一束单色平面光波垂直入射到单狭缝平面上，在其后透镜焦平面上得到单狭缝的夫琅禾费衍射花样，其光强分布为： i?i0( 装 式中 sin? ? ) 2 （1） 订 ?? 线 ??sin?? （2） ?为单缝宽度，?为入射光波长，?为考察点相应的衍射角。i0为衍射场中心点（??0处）的光强。如图一所示。 由（1）式可见，随着?的增大，i有一系列极大值和极小值。极小值条件 asin??n?(n?1,n?2) （3） 是： 如果测得某一级极值的位置，即可求得单缝的宽度。 如果将上述单缝换成若干宽度相等，等距平行排列的单缝组合——多缝，则透镜焦面上得到的多缝夫琅禾费衍射花样，其光强分布： n? sin?2 )2 i?i0()( ?
2 （4） sin 式中 ?? sin??2???dsin? ? ?? （5） ?为单缝宽度，d为相邻单缝间的间距，n为被照明的单缝数，?为考察点相应的衍射角；i0为衍射中心点（??0处）的光强。 n? )2 (sin?2() 2称?为单缝衍射因子，为多缝干涉因子。前者决定了衍射花 sin （干涉）极大的条件是dsin??m?(m?0,?1,?2......)。 dsin??(m? m )?(m?0,?1,?2......;m?1,2,.......,n?1)n 样主极大的相对强度，后者决定了主极大的位置。 （干涉）极小的条件是 当某一考虑点的衍射角满足干涉主极大条件而同时又满足单缝衍射极小值条件，该点的光强度实际为0/，主极大并不出现，称该机主极大缺级。显然当d/??m/n为整数时，相应的m 级主极大为缺级。 不难理解，在每个相邻干涉主极大之间有n-1个干涉极小；两个相邻干涉极小之间有一个干涉次级大，而两个相邻干涉主级之间共有n-2个次级大。 三、主要仪器设备 激光器、扩束镜、准直镜、衍射屏、会聚镜、光电接收扫描器、自动平衡记录仪。 四、操作方法和实验步骤 1．调整实验系统 （1）按上图所示安排系统。 （2）开启激光器电源，调整光学元件等高同轴，光斑均匀，亮度合适。（3）选择衍射板中的任一图形，使产生衍射花样，在白屏上清晰显示。 （4）将ccd的输出视频电缆接入电脑主机视频输出端，将白屏更换为焦距为100mm的透镜。 （5）调整透镜位置，使衍射光强能完全进入ccd。 （6）开启电脑电源，点击“光强分布测定仪分析系统”便进入本软件的主界面，进入系统的主界面后，点击“视频卡”下的“连接视频卡”项，打开一个实时采集窗口，调整透镜与ccd的距离，使电脑显示屏能清晰显示衍射图样，并调整起偏/检偏器件组，使光强达到适当的强度，将采集的图像保存为bmp、jpg两种格式的图片。 2．测量单缝夫琅和费衍射的光强分布（1）选定一条单狭缝作为衍射元件（2）运用光强分布智能分析软件在屏幕上显示衍射图像，并绘制出光强分布曲线。 （3）对实验曲线进行测量，计算狭缝的宽度。 3．观察衍射图样 将衍射板上的图形一次移入光路，观察光强分布的水平、垂直坐标图或三维图形。
专业：农业资源与环境 姓名：李佳怡 ____________ 学号：_J6 _______________ 日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙） 实验名称：蔗糖酶的提取 一、实验目的和要求（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 七、实验结果与分析（必填） .指导老师：方祥年 成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛 二、实验内容和原理（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 六、实验数据记录和处理 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、 学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法; 2、 巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 订 1、实验内容: 线 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理: ① 酵母细胞破碎 液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法 固体剪切法一压力和研磨 非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀 来。 ② 蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集 样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 实验报告 细 胞 破碎 的 常 用 方 法
三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉10g/组（3?4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10計约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨（干磨）：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：呈:取总体积40 ml的20mmol几Tris-HCl缓冲液，分2次加研磨lOmin, 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后（托盘天平上），离心lOmin （条件:4°C、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上淸液并量出体积VI （样品I）,另留1ml上淸液（样品I ）放置一20°C冰箱保存 用于蔗糖酶蛋白含量测眾、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I）,迅速放入50°C恒温水浴，保温30min, 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min a （条件：4°C, 12000r/min） ④收集+测量：收集上淸液并量出体积V2 （样品II）,另留1ml上淸液（样品II ）放宜一20°C冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测左、测左蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上淸液加入相同体枳的一20°C的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，
2003年秋 一、名词 变性与复性构型和构象Km 氧化磷酸化脂肪酸ß-氧化核糖体中心法则辅酶与辅基人类基因组计划和后基因组计划分子伴侣 二、论述 1 生物大分子中结构与功能的关系（10） 2 糖酵解过程（10） 3 选择一种分离方法，叙述其原理和操作过程（15） 4 生物化学的最新前沿进展（15） 2004年春 一、名词 ATP 构型和构象Km 分解与合成代谢核糖体中心法则Sanger 反应变性与复性启动子基因表达 二、论述 1．生物中大分子物质构成的基本结构（10） 2葡萄糖转化二氧化碳和水过程中相应步骤和酶（10） 3凝胶电泳的原理及应用（15） 4．生物化学的最新前沿进展（15） 2004年秋 论述 1.蛋白质模体和结构域（15） 2.生物膜结构特征和生物学功能（15） 3.生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4. DNA复制和转录的原理（15） 5.真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6.比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20） 2005年春 论述 1蛋白质模体和结构域（15） 2生物膜结构特征和生物学功能（15） 3生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4 DNA复制和转录的原理（15） 5真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20） 2006年 论述 1．生物化学研究的内容与目标 2．生物膜及其功能 3．蛋白膜质体与结构域 4．水对生物体的重要作用 5．DNA复制和转录的原理
6．氨基酸以R基分几类，写出其三字母、单字母的缩写 7．比较亲和层析、离子交换、分子排阻的原理 8．举例说明四种非共价键在蛋白质、核酸分子中的作用 9．构型与构象10. 生物体能量转化及其关系 未知年份 论述题 1.双向电泳的原理及步骤 2.单克隆抗体与多克隆抗体的定义 3.生物化学的定义与研究内容 4.蛋白质中二、三结构域的定义 5. DNA 的复制过程 2007年 一、名词解释 氧化磷酸化、折叠、第二信使、沉默子、反义RNA、胴体、一碳单位、别构酶、冈崎片段、基因文库 二、论述题 1.乙酰COA在脂肪氧化中的作用 2. RNA的分离纯化与鉴定 3.乳糖操纵子 4.真核生物基因表达的调控因子及其作用 5.肝糖原的激素影响及分子原理 6.生物重大研究进展与动物科学对其的指导意义 2008 年 论述 1.生物膜的组成及其功能 2.脂类的功能 3.蛋白质合成过程中和DNA复制过程中的化学防错 4.血红蛋白和BPG的结构和功能 5. ATP和NAD+的结构和功能 6.名词解释：糖酵解、乙醛酸循环、卡尔文循环、TCA循环 7.设计动力学试验，验证反应实质 2010年生物化学真题回忆版： 20种氨基酸的分类，简写 实验题2个关于分子实验和蛋白质实验的 电泳的原理和分类层析 化学渗透学说 蛋白组学和研究进展 c3植物和c4植物的区别 G蛋白介导的信号转导机制 生化题都是大题，回忆出大概内容，题目记不住了。 祝大家考博成功！
实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称：蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析 3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法 二、实验内容和原理 （1）实验内容 1、SDS －PAGE 凝胶制作； 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 电泳分离； 3、洗脱测定并计算相对分子质量。 （2）实验原理 1、电泳 是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。 2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品 主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。 3、区带电泳 是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。 4、聚丙烯酰胺凝胶（PAG) 由丙烯酰胺和交联试剂N,N ’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有催化剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N ’,N ’-四甲基乙二胺，TEMED ）的情况下聚合而成的。
5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。 6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为 ⑴连续系统凝胶缓冲液的pH值及凝胶浓度不变。该电泳系统具有电荷效应、分子筛效应； ⑵不连续系统凝胶缓冲离子成分、pH值、凝胶浓度、电位梯度不连续，由浓缩胶和分离胶组成。由于浓缩胶的堆积（浓缩）作用，可使样品（即使是稀释样品）在浓缩胶和分离胶的界面上先浓缩成一窄带，然后在一定浓度（或一定浓度梯度）的凝胶上进行分离。该电泳系统具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。 7、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 以PAG为支持物的电泳，由于各种蛋白质所带静电荷、分子量大小和形状不同而有不同的迁移率。为消除静电荷对迁移率的影响，在整个电泳体系中加入一定量的阴离子去污剂“十二烷基硫酸钠（简称SDS）”和“强还原剂（巯基乙醇）”后，蛋白质样品就会与SDS结合形成带负电荷复合物，而SDS作为一种变性剂和助溶剂，它能破坏蛋白质分子内和分子间的非共价键，并结合到蛋白质分子上，使分子去折叠，破坏蛋白质分子内的二级和三级结构，使蛋白质变性而改变原有的空间构象。另外，SDS－蛋白质复合物在强还原剂（巯基乙醇）存在下，可打开蛋白质分子内或肽链间的二硫键，并能避免重新氧化，这样分离出的谱带即为蛋白质亚基。蛋白质亚基的电泳的迁移率主要取决于亚基的相对分子质量大小，而电荷的因素可以忽略。 8、蛋白质亚基相对分子质量的测方法 在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的SDS时，蛋白质－SDS复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为1.8nm，而长轴则随蛋白质的分子量成正比变化。这样的蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只主要取决于它的椭圆棒的长度即蛋白质的相对分子质量的大小，而其他因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。由于蛋白质的相对分子质量不同，所形成复合物的相对分子质量不同，在电泳中反映出不同的迁移率。当蛋白质或亚基的相对分子质量在15,000～200,000之间时，电泳迁移率与相对分子质量的
. 实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 质粒DNA 的微量制备及电泳检测 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习并掌握质粒DNA 的提取原理和方法； 2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作； 3、学习并掌握对电泳检测结果的初步分析。 二、实验内容和原理 1、实验内容 ①质粒DNA 的提取 ②DNA 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 2、实验原理 ①质粒： 质粒是一种染色体（核质体）外的寄生性的自主复制子，存在于细菌等细胞中，为双链闭环的DNA 分子，大小在1-200kb 之间，具有自主复制和转录功能, 能表达例如抗性、菌毒素等细胞非必需的遗传信息，但其复制和转录必须要利用依赖宿主细胞（细菌）基因组DNA 编码的一些酶和蛋白质。质粒能够自发的或人为的在细胞间转移，因此是基因工程技术中将外源基因导入受体细胞的重要载体。 ②从细菌细胞中抽提质粒DNA 的步骤： a 细菌培养使质粒大量扩增； b 收集和裂解细胞,并去掉细菌碎片和核质体DNA ； c 进一步除去蛋白、脂类、RNA 等杂质，分离和纯化质粒DNA 。 ③碱裂解法来分离纯化质粒DNA ： 在EDTA 存在下，经过SDS 处理使细胞膜裂解，从而使菌体充分裂解，利用在碱性条件下（NaOH ）， 使核质体DNA 与质粒DNA 的变性；加入乙酸钾，在中性条件下，核质体DNA 与质粒DNA 又存在复性的差异，质粒DNA 很快得以复性，而细菌核质体DNA 分子难以复性，核质体DNA 会缠绕附着在细胞膜碎片上专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡 学号： 3130100246 日期： 2015.6.9 地点： 生物实验中心310 装 订 线
实验报告 课程名称： 大学化学实验p 实验类型： 中级化学实验 实验项目名称： 饱和蒸汽压的测定 同组学生姓名： 无 指导老师 厉刚 一、 实验目的和要求 1. 加深理解饱和蒸汽压，活度和渗透系数等概念。 2. 学习测定液体的饱和蒸汽压的方法，了解蒸汽压数据的应用。 3. 理解蒸汽压降低，沸点升高等溶液性质及稀溶液的依数性。 4. 熟悉温度计的露茎校正方法。 5. 了解数字真空仪，熟悉福廷式测压仪的使用及校正方法，初步掌握真空试验技术。 二、 实验内容和原理 通常温度下(距离临界温度较远时)，纯液体与其蒸气达平衡时的蒸气压称为该温度下液体的饱和蒸气压，简称为蒸气压。蒸发1mol 液体所吸收的热量称为该温度下液体的摩尔气化热。液体的蒸气压随温度而变化，温度升高时，蒸气压增大；温度降低时，蒸气压降低，这主要与分子的动能有关。当蒸气压等于外界压力时，液体便沸腾，此时的温度称为沸点，外压不同时，液体沸点将相应改变，当外压为1atm （101.325kPa ）时，液体的沸点称为该液体的正常沸点。 液体的饱和蒸气压与温度的关系用克劳修斯-克拉贝龙方程式表示： 2 m vap d ln d RT H T p ?= (1) 式中，R 为摩尔气体常数；T 为热力学温度；Δvap H m 为在温度T 时纯液体的摩尔气化热。 假定Δvap H m 与温度无关，或因温度范围较小，Δvap H m 可以近似作为常数，积分上式，得： C T R H p +??- =1 ln m vap (2) 其中C 为积分常数。由此式可以看出，以ln p 对1/T 作图，应为一直线，直线的斜率为 R H m vap ?-，由斜 率可求算液体的Δvap H m 。 继而Δvap S m= （Δvap H m ）/T 测定通常有静态法和动态法，静态法：把待测物质放在一个封闭体系中，在不同的温度下，蒸气压与外压相等时直接测定外压；或在不同外压下测定液体的沸点。动态法：常用的有饱和气流法，即通过一定体积 专业： 理科1010 姓名： 陈世杰 学号： 3100102092 日期： 2012.03.19 地点：化学实验中心328
1. 下列哪一项不是影响酶活性的主要因素（）。 A. 温度 B. Ph C. 激活剂 D. 酶的用量 2. 变构效应物对酶结合的部位是： A. 活性中心与底物结合的部位 B. 活性中心的催化基团 C. 酶的-SH基 D. 活性中心以外的特殊部位 3. 下列各项不属于蛋白质功能的是（)。 A. 催化功能 B. 运输功能 C. 运动功能 D. 提供能量 4. 1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 5. 乳糜微粒中含量最多的组分是 A. 脂肪酸 B. 甘油三酯 C. 磷脂酰胆碱 D. 蛋白质 6. 下列何种作用不可能改变酶活性 A. 延长酶作用时间 B. 加入酶必需的激活剂 C. 变构酶分子发生变构效应 D. 某些酶蛋白发生化学修饰 7. 在什么情况下，一种蛋白质在电泳时既不向正级移动，也不向负极移动，而停留在原点？ A. 发生蛋白质变性 B. 与其它物质结合形成复合物 C. 电极缓冲液的pH正好与该蛋白质的pI相同 D. 电极缓冲液的pH大于该蛋白质的pI 8. 1分子葡萄糖酵解时净生成多少分子ATP A. 1
C. 3 D. 4 9. 乳糖操纵子的调节水平在（）。 A. 复制 B. 转录 C. 转录后 D. 翻译 E. 翻译后 10. 有关多肽链主链肽键形成的正确描述是（)。 A. 由一个氨基酸的α—氨基与另一个氨基酸的α—羧基形成 B. 由一个氨基酸的α—氨基与自身的α—羧基形成 C. 由一个氨基酸的侧链氨基与自身的α—羧基形成 D. 由一个氨基酸的侧链氨基与另一个氨基酸的α—羧基形成 11. 在糖原合成中每加上一个葡萄糖残基需消耗高能键的数目是 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 12. 嘧啶从头合成途径首先合成的核苷酸为（）。 A. UDP B. ADP C. TMP D. UMP 13. 糖酵解途径的关键酶之一是 A. 乳酸脱氢酶 B. 果糖二磷酸酶-1 C. 6-磷酸果糖激酶 D. 6-磷酸葡萄糖酶 14. 在蛋白质三级结构中可存在如下化学键，但不包括： A. 氢键 B. 二硫键 C. 离子键 D. 磷酸二酯键 15. 1分子丙酮酸彻底氧化净生ATP分子数 A. 2 B. 3
2019年浙江大学生物化学与分子生物学考研专业指 导 一、招生人数 070 生命科学学院 生命科学学院招生规模74(其中学术学位74人，拟接收推免生44名左右，以最终确认录取人数为准）。 0710 生物学学术型 071010 生物化学与分子生物学 二、研究方向： 01蛋白质与酶工程 02生物化学与生物制药 03微生物生化与代谢工程 04动物生化与转基因工程 05植物生化与分子生物学 06海洋生化与分子生物学 三、考试科目： 初试科目：
①101政治 ②201英语一 ③727 细胞生物学 ④830生物化学与分子生物学（各50%） 复试内容：外语听、说能力、专业基础综合知识 欢迎理学、工学、农学、医学、药学等学科考生报考。生命科学学院100%招收学术学位研究生。 四、参考书目： 《生物化学》(下册) 王镜岩、朱圣庚、许长法高等教育出版社； 《生物化学》(上册) 王镜岩高等教育出版社； 《现代分子生物学》第二版，朱玉贤等主编，高等教育出版社； 《现代遗传学》赵寿元等主编，高等教育出版社。 《细胞生物学》翟中和高等教育出版社。 五、浙江大学生物化学与分子生物学近三年复试分数线
六、浙江大学生物化学与分子生物学考研经验： 1、零基础复习阶段（6月前) 本阶段根据考研科目，选择适当的参考教材，有目的地把教材过一遍，全面熟悉教材，适当扩展知识面，熟悉专业课各科的经典教材。这个期间非常痛苦，要尽量避免钻牛角尖，遇到实在不容易理解的内容，先跳过去，要把握全局。系统掌握本专业理论知识。对各门课程有个系统性的了解，弄清每本书的章节分布情况，内在逻辑结构，重点章节所在等。 2、基础复习阶段（6－8月) 本阶段要求考生熟读教材，攻克重难点，全面掌握每本教材的知识点，结合真题找出重点内容进行总结，并有相配套的专业课知识点笔记,进行深入复习，加强知识点的前后联系，建立整体框架结构，分清重难点，对重难点基本掌握。同时多练习相关参考书目课后习题、习题册，提高自己快速解答能力，熟悉历年真题，弄清考试形式、题型设置和难易程度等内容。要求吃透参考书内容，做到准确定位，事无巨细地对涉及到的各类知识点进行地毯式的复习，夯实基础，训练思维，掌握一些基本概念和基本模型。
普通物理（A卷）1997年1月22日 一．一．填空题： 1．1．用劈尖干涉法可检测工件表 面缺陷，当波长为λ的单色平行光垂直 入射时，若观察到的干涉条纹如图所 示，每一条纹弯曲部分的顼点恰好与其 左边条纹的直线部分的连线相切，则工 件表面与条纹弯曲处对应的缺陷是____________形（指凸或凹）， 其相应的高度是________λ。 2．2．某元素的特征光谱中含有波长分别为λ1 =450nm和λ2 =750nm(1nm =10-9m)的光谱线。在光栅光谱中，这两种波长的谱线 有重叠现象，重叠处λ 2 的谱线的级数将是____________________。 3．3．一束光是自然光和线偏振光的混合光，让它垂直通过一偏振片。若以此入射光束为轴旋转偏振片，测得透射光强度最大值 是最小值的5倍，那么入射光束中自然光与线偏振光的光强比值为 __________________。 4．4．要使处于基态的氢原子受激后可辐射出可见光谱线，最少应供给氢原子的能量为__________________eV。 5．5．电子显微镜中的电子从静止开始通过电势差为U的静电场加速后，其德布罗意波长是0.4?，则U为约为_______________。 （不计相对论效应。电子静止质量m 0=9.1×10-31kg，普朗克常 空气
量h=6.63×10-34 J ·S ） 6． 6． 波长λ=5000?的光沿X 轴正向传播，若光的波长的不 确定量△λ=10-3 ?，则利用不确定关系式△x △p x ≧h 可得光子的x 坐标的不确定量至少为_______________。 7． 7． 一平行板电容器充电后，将其中一半空间充以各 向同性、均匀电介质，如图所示。则图中Ⅰ、Ⅱ两部份的电场强度_____________；两部份的电位移矢量_____________；两部份所对应的极板上的自由电荷面密度______________。（填相等、不相等） 8． 8． 一平面试验线圈的磁矩大小P m 为1×10-8A ·m 2，把它放 入待测磁场中的A 处，试验线圈如此之小，以致可以认为它所占据 的空间内场是均匀的。当此线圈的m P 与Z 轴平行时，所受磁力矩大小为M=5×10-9 N ·m ，方向沿X 轴方向；当此线圈的m P 与Y 轴平行 时，所受磁力矩为零。则空间A 点处的磁感应强度B 的大小为 _________，方向为_____________。 9． 9． 两根无限长直导线互相垂直地放着，相距 d=2.0×102 m ，其中一根导线与Z 轴重合，另一根导线与X 轴平行且在XOY 平面内。设两导线中皆通过I=10A 的电流，则在Y 轴上离两根导线等距的点P 处的磁感应强 度为B =___________________。（μ0 = 4π×10-7T ·m ·A -1） 10．10．如图所示，一半径为 r 的金属圆环，在初始时刻与一 半径为 a ( a>>r ) 的大金属圆环共面且同心。在大圆环中