酶免疫分析系统项目可行性研究报告
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酶免疫分析系统项目建议书
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酶免疫分析系统项目可行性研究报告
【主要用途】发改委立项，政府批地，融资，贷款，申请国家补助资金等【关键词】酶免疫分析系统项目可行性研究报告、申请报告
【交付方式】特快专递、E-mail
【交付时间】2-3个工作日
【报告格式】Word格式；PDF格式
【报告价格】此报告为委托项目报告，具体价格根据具体的要求协商，欢迎进入公司网站，了解详情，工程师（高建先生）会给您满意的答复。
【报告说明】
本报告是针对行业投资可行性研究咨询服务的专项研究报告，此报告为个性化定制服务报告，我们将根据不同类型及不同行业的项目提出的具体要求，修订报告目录，并在此目录的基础上重新完善行业数据及分析内容，为企业项目立项、上马、融资提供全程指引服务。
可行性研究报告是在制定某一建设或科研项目之前，对该项目实施的可能性、有效性、技术方案及技术政策进行具体、深入、细致的技术论证和经济评价，以求确定一个在技术上合理、经济上合算的最优方案和最佳时机而写的书面报告。可行性研究报告主要内容是要求以全面、系统的分析为主要方法，经济效益为核心，围绕影响项目的各种因素，运用大量的数据资料论证拟建项目是否可行。对整个可行性研究提出综合分析评价，指出优缺点和建议。为了结论的需要，往往还需要加上一些附件，如试验数据、论证材料、计算图表、附图等，以增强可行性报告的说服力。
可行性研究是确定建设项目前具有决定性意义的工作，是在投资决策之前，对拟建项目进行全面技术经济分析论证的科学方法，在投资管理中，可行性研究是指对拟建项目有关的自然、社会、经济、技术等进行调研、分析比较以及预测建成后的社会经济效益。在此基础上，综合论证项目建设的必要性，财务的盈利性，经济上的合理性，技术上的先进性和适应性以及建设条件的可能性和可行性，从而为投资决策提供科学依据。
投资可行性报告咨询服务分为政府审批核准用可行性研究报告和融资用可
行性研究报告。审批核准用的可行性研究报告侧重关注项目的社会经济效益和影响；融资用报告侧重关注项目在经济上是否可行。具体概括为：政府立项审批，产业扶持，银行贷款，融资投资、投资建设、境外投资、上市融资、中外合作，股份合作、组建公司、征用土地、申请高新技术企业等各类可行性报告。
报告通过对项目的市场需求、资源供应、建设规模、工艺路线、设备选型、环境影响、资金筹措、盈利能力等方面的研究调查，在行业专家研究经验的基础上对项目经济效益及社会效益进行科学预测，从而为客户提供全面的、客观的、可靠的项目投资价值评估及项目建设进程等咨询意见。
可行性研究报告大纲（具体可根据客户要求进行调整）
为客户提供国家发委甲级资质
第一章酶免疫分析系统项目总论
第一节酶免疫分析系统项目背景
一、酶免疫分析系统项目名称
二、酶免疫分析系统项目承办单位
三、酶免疫分析系统项目主管部门
四、酶免疫分析系统项目拟建地区、地点
五、承担可行性研究工作的单位和法人代表
六、酶免疫分析系统项目可行性研究报告编制依据
七、酶免疫分析系统项目提出的理由与过程
第二节可行性研究结论
一、市场预测和项目规模
二、原材料、燃料和动力供应
三、选址
四、酶免疫分析系统项目工程技术方案
五、环境保护
六、工厂组织及劳动定员
七、酶免疫分析系统项目建设进度
八、投资估算和资金筹措
九、酶免疫分析系统项目财务和经济评论
十、酶免疫分析系统项目综合评价结论
第三节主要技术经济指标表
第四节存在问题及建议
第二章酶免疫分析系统项目投资环境分析
第一节社会宏观环境分析
第二节酶免疫分析系统项目相关政策分析
一、国家政策
二、酶免疫分析系统行业准入政策
三、酶免疫分析系统行业技术政策
第三节地方政策
第三章酶免疫分析系统项目背景和发展概况
第一节酶免疫分析系统项目提出的背景
一、国家及酶免疫分析系统行业发展规划
二、酶免疫分析系统项目发起人和发起缘由
第二节酶免疫分析系统项目发展概况
一、已进行的调查研究酶免疫分析系统项目及其成果
二、试验试制工作情况
三、厂址初勘和初步测量工作情况
四、酶免疫分析系统项目建议书的编制、提出及审批过程
第三节酶免疫分析系统项目建设的必要性
一、现状与差距
二、发展趋势
三、酶免疫分析系统项目建设的必要性
四、酶免疫分析系统项目建设的可行性
第四节投资的必要性
第四章市场预测
第一节酶免疫分析系统产品市场供应预测
一、国内外酶免疫分析系统市场供应现状
二、国内外酶免疫分析系统市场供应预测
第二节产品市场需求预测
一、国内外酶免疫分析系统市场需求现状
二、国内外酶免疫分析系统市场需求预测
第三节产品目标市场分析
一、酶免疫分析系统产品目标市场界定
二、市场占有份额分析
第四节价格现状与预测
一、酶免疫分析系统产品国内市场销售价格
二、酶免疫分析系统产品国际市场销售价格
第五节市场竞争力分析
一、主要竞争对手情况
二、产品市场竞争力优势、劣势
三、营销策略
第六节市场风险
第五章酶免疫分析系统行业竞争格局分析第一节国内生产企业现状
一、重点企业信息
二、企业地理分布
三、企业规模经济效应
四、企业从业人数
第二节重点区域企业特点分析
一、华北区域
二、东北区域
三、西北区域
四、华东区域
五、华南区域
六、西南区域
七、华中区域
第三节企业竞争策略分析
一、产品竞争策略
二、价格竞争策略
三、渠道竞争策略
四、销售竞争策略
五、服务竞争策略
六、品牌竞争策略
第六章酶免疫分析系统行业财务指标分析参考第一节酶免疫分析系统行业产销状况分析
第二节酶免疫分析系统行业资产负债状况分析
第三节酶免疫分析系统行业资产运营状况分析
第四节酶免疫分析系统行业获利能力分析
第五节酶免疫分析系统行业成本费用分析
第七章酶免疫分析系统行业市场分析与建设规模第一节市场调查
一、拟建酶免疫分析系统项目产出物用途调查
二、产品现有生产能力调查
三、产品产量及销售量调查
四、替代产品调查
五、产品价格调查
六、国外市场调查
第二节酶免疫分析系统行业市场预测
一、国内市场需求预测
二、产品出口或进口替代分析
三、价格预测
第三节酶免疫分析系统行业市场推销战略
一、推销方式
二、推销措施
三、促销价格制度
四、产品销售费用预测
第四节酶免疫分析系统项目产品方案和建设规模
一、产品方案
二、建设规模
第五节酶免疫分析系统项目产品销售收入预测第八章酶免疫分析系统项目建设条件与选址方案
第一节资源和原材料
一、资源评述
二、原材料及主要辅助材料供应
三、需要作生产试验的原料
第二节建设地区的选择
一、自然条件
二、基础设施
三、社会经济条件
四、其它应考虑的因素
第三节厂址选择
一、厂址多方案比较
二、厂址推荐方案
第九章酶免疫分析系统项目应用技术方案第一节酶免疫分析系统项目组成
第二节生产技术方案
一、产品标准
二、生产方法
三、技术参数和工艺流程
四、主要工艺设备选择
五、主要原材料、燃料、动力消耗指标
六、主要生产车间布置方案
第三节总平面布置和运输
一、总平面布置原则
二、厂内外运输方案
三、仓储方案
四、占地面积及分析
第四节土建工程
一、主要建、构筑物的建筑特征与结构设计
二、特殊基础工程的设计
三、建筑材料
四、土建工程造价估算
第五节其他工程
一、给排水工程
二、动力及公用工程
三、地震设防
四、生活福利设施
第十章酶免疫分析系统项目环境保护与劳动安全
第一节建设地区的环境现状
一、酶免疫分析系统项目的地理位置
二、地形、地貌、土壤、地质、水文、气象
三、矿藏、森林、草原、水产和野生动物、植物、农作物
四、自然保护区、风景游览区、名胜古迹、以及重要政治文化设施
五、现有工矿企业分布情况
六、生活居住区分布情况和人口密度、健康状况、地方病等情况
七、大气、地下水、地面水的环境质量状况
八、交通运输情况
九、其他社会经济活动污染、破坏现状资料
十、环保、消防、职业安全卫生和节能
第二节酶免疫分析系统项目主要污染源和污染物
一、主要污染源
二、主要污染物
第三节酶免疫分析系统项目拟采用的环境保护标准
第四节治理环境的方案
一、酶免疫分析系统项目对周围地区的地质、水文、气象可能产生的影
响
二、酶免疫分析系统项目对周围地区自然资源可能产生的影响
三、酶免疫分析系统项目对周围自然保护区、风景游览区等可能产生的
影响
四、各种污染物最终排放的治理措施和综合利用方案
五、绿化措施，包括防护地带的防护林和建设区域的绿化
第五节环境监测制度的建议
第六节环境保护投资估算
第七节环境影响评论结论
第八节劳动保护与安全卫生
一、生产过程中职业危害因素的分析
二、职业安全卫生主要设施
三、劳动安全与职业卫生机构
四、消防措施和设施方案建议
第十一章企业组织和劳动定员
第一节企业组织
一、企业组织形式
二、企业工作制度
第二节劳动定员和人员培训
一、劳动定员
二、年总工资和职工年平均工资估算
三、人员培训及费用估算
第十二章酶免疫分析系统项目实施进度安排第一节酶免疫分析系统项目实施的各阶段
一、建立酶免疫分析系统项目实施管理机构
二、资金筹集安排
三、技术获得与转让
四、勘察设计和设备订货
五、施工准备
六、施工和生产准备
七、竣工验收
第二节酶免疫分析系统项目实施进度表
一、横道图
二、网络图
第三节酶免疫分析系统项目实施费用
一、建设单位管理费
二、生产筹备费
三、生产职工培训费
四、办公和生活家具购置费
五、勘察设计费
六、其它应支付的费用
第十三章投资估算与资金筹措
第一节酶免疫分析系统项目总投资估算
一、固定资产投资总额
二、流动资金估算
第二节资金筹措
一、资金来源
二、酶免疫分析系统项目筹资方案
第三节投资使用计划
一、投资使用计划
二、借款偿还计划
第十四章财务与敏感性分析
第一节生产成本和销售收入估算
一、生产总成本估算
二、单位成本
三、销售收入估算
第二节财务评价
第三节国民经济评价
第四节不确定性分析
第五节社会效益和社会影响分析
一、酶免疫分析系统项目对国家政治和社会稳定的影响
二、酶免疫分析系统项目与当地科技、文化发展水平的相互适应性
三、酶免疫分析系统项目与当地基础设施发展水平的相互适应性
四、酶免疫分析系统项目与当地居民的宗教、民族习惯的相互适应性
五、酶免疫分析系统项目对合理利用自然资源的影响
六、酶免疫分析系统项目的国防效益或影响
七、对保护环境和生态平衡的影响
第十五章酶免疫分析系统项目不确定性及风险分析
第一节建设和开发风险
第二节市场和运营风险
第三节金融风险
第四节政治风险
第五节法律风险
第六节环境风险
第七节技术风险
第十六章酶免疫分析系统行业发展趋势分析
第一节我国酶免疫分析系统行业发展的主要问题及对策研究
一、我国酶免疫分析系统行业发展的主要问题
二、促进酶免疫分析系统行业发展的对策
第二节我国酶免疫分析系统行业发展趋势分析
第三节酶免疫分析系统行业投资机会及发展战略分析
一、酶免疫分析系统行业投资机会分析
二、酶免疫分析系统行业总体发展战略分析
第四节我国酶免疫分析系统行业投资风险
一、政策风险
二、环境因素
三、市场风险
四、酶免疫分析系统行业投资风险的规避及对策
第十七章酶免疫分析系统项目可行性研究结论与建议
第一节结论与建议
一、对推荐的拟建方案的结论性意见
二、对主要的对比方案进行说明
三、对可行性研究中尚未解决的主要问题提出解决办法和建议
四、对应修改的主要问题进行说明，提出修改意见
五、对不可行的项目，提出不可行的主要问题及处理意见
六、可行性研究中主要争议问题的结论
第二节我国酶免疫分析系统行业未来发展及投资可行性结论及建议
第十八章财务报表
第一节资产负债表
第二节投资受益分析表
第三节损益表
第十九章酶免疫分析系统项目投资可行性报告附件
1、酶免疫分析系统项目位置图
2、主要工艺技术流程图
3、主办单位近5年的财务报表
4、酶免疫分析系统项目所需成果转让协议及成果鉴定
5、酶免疫分析系统项目总平面布置图
6、主要土建工程的平面图
7、主要技术经济指标摘要表
8、酶免疫分析系统项目投资概算表
9、经济评价类基本报表与辅助报表
10、现金流量表
11、现金流量表
12、损益表
13、资金来源与运用表
14、资产负债表
15、财务外汇平衡表
16、固定资产投资估算表
17、流动资金估算表
18、投资计划与资金筹措表
19、单位产品生产成本估算表
20、固定资产折旧费估算表
21、总成本费用估算表
22、产品销售（营业）收入和销售税金及附加估算表
服务流程：
1.客户问询，双方初步沟通；
2.双方协商报告编制费、并签署商务合同；
3.我方保密承诺（或签保密协议），对方提交资料。
专家答疑：
一、可研报告定义：
可行性研究报告，简称可研报告，是在制订生产、基建、科研计划的前期，通过全面的调查研究，分析论证某个建设或改造工程、某种科学研究、某项商务活动切实可行而提出的一种书面材料。
可行性研究报告主要是通过对项目的主要内容和配套条件，如市场需求、资源供应、建设规模、工艺路线、设备选型、环境影响、资金筹措、盈利能力等，从技术、经济、工程等方面进行调查研究和分析比较，并对项目建成以后可能取得的财务、经济效益及社会影响进行预测，从而提出该项目是否值得投资和如何进行建设的咨询意见，为项目决策提供依据的一种综合性分析方法。可行性研究具有预见性、公正性、可靠性、科学性的特点。
一般来说，可行性研究是以市场供需为立足点，以资源投入为限度，以科学方法为手段，以一系列评价指标为结果，它通常处理两方面的问题：一是确定项目在技术上能否实施，二是如何才能取得最佳效益。
二、可行性研究报告的用途
项目可行性研究报告是项目实施主体为了实施某项经济活动需要委托专业
研究机构编撰的重要文件，其主要体现在如下几个方面作用：
1. 用于向投资主管部门备案、行政审批的可行性研究报告
根据《国务院关于投资体制改革的决定》国发（2004）20号的规定，我国对不使用政府投资的项目实行核准和备案两种批复方式，其中核准项目向政府部门提交项目申请报告，备案项目一般提交项目可行性研究报告。
同时，根据《国务院对确需保留的行政审批项目设定行政许可的决定》，对某些项目仍旧保留行政审批权，投资主体仍需向审批部门提交项目可行性研究报告。
2. 用于向金融机构贷款的可行性研究报告
我国的商业银行、国家开发银行和进出口银行等以及其他境内外的各类金融机构在接受项目建设贷款时，会对贷款项目进行全面、细致的分析平谷，银行等金融机构只有在确认项目具有偿还贷款能力、不承担过大的风险情况下，才会同意贷款。项目投资方需要出具详细的可行性研究报告，银行等金融机构只有在确认项目具有偿还贷款能力、不承担过大的风险情况下，才会同意贷款。
3. 用于企业融资、对外招商合作的可行性研究报告
此类研究报告通常要求市场分析准确、投资方案合理、并提供竞争分析、营销计划、管理方案、技术研发等实际运作方案。
4. 用于申请进口设备免税的可行性研究报告
主要用于进口设备免税用的可行性研究报告，申请办理中外合资企业、内资企业项目确认书的项目需要提供项目可行性研究报告。
5. 用于境外投资项目核准的可行性研究报告
企业在实施走出去战略，对国外矿产资源和其他产业投资时，需要编写可行性研究报告报给国家发展和改革委或省发改委，需要申请中国进出口银行境外投资重点项目信贷支持时，也需要可行性研究报告。
6. 用于环境评价、审批工业用地的可行性研究报告
我国当前对项目的节能和环保要求逐渐提高，项目实施需要进行环境评价，项目可行性研究报告可以作为环保部门审查项目对环境影响的依据，同时项目可行性研究报告也作为向项目建设所在地政府和规划部门申请工业用地、施工许可证的依据。
三、可行性研究报告的编制依据
——国家有关的发展规划、计划文件。包括对该行业的鼓励、特许、限制、禁止等有关规定；
——项目主管部门对项目建设要请示的批复；
——项目审批文件；
——项目承办单位委托进行详细可行性分析的合同或协议；
——企业的初步选择报告；
——主要工艺和装置的技术资料；
——拟建地区的环境现状资料；
——项目承办单位与有关方面签订的协议，如投资、原料供应、建设用地、运输等方面的初步协议；
——国家和地区关于工业建设的法令、法规。如“三废”排放标准、土地法规、劳动保护条例等；
——国家有关经济法规、规定。如中外合资企业法、税收、外资、贷款等规定；国家关于建设方面的标准、规范、定额资料等。
在项目可行性研究报告编制过程中，尤其是对项目做财务、经济评价时，还需要参考如下相关文件：
1、《中华人民共和国会计法》，[主席令第24号]，2000年1月1日起实施；
2、《企业会计准则》，[财政部令第5号]，2007年1月1日起实施；
3、《中华人民共和国企业所得税法实施条例》，[国务院令第512号]，2008年1月1日起实施；
4、《中华人民共和国增值税暂行条例实施细则》，[财政部、国家税务总局令第50号]2009年1月1日起实施；
5、《建设项目经济评价方法与参数（第三版）》，国家发展与改革委员会2006年审核批准施行；
6、项目必须遵守的国内外其他工商税务法律文件等。
可研报告客户提供材料清单
以下资料，能提供的尽量提供，提供不了的，空着即可。
1、项目简介
2、项目规模投资额
3、项目场址：地理位置、当地优惠政策、占地面积、土地使用情况
4、工程建设：建设面积、主要建筑物、规划结构
5、项目主要设施：设施名称、规格、来源、数量
6、能源（水、电等）使用量、价格
7、工作人员：人员组织机构、人员配置
8、项目建设工期
9、项目建筑工程费用、设备清单、设施费用
10、项目营销方案
11、资金筹措措施
12、公司近3-5年的财务状况
13、规划部门、土地管理部门对本项目的审批意见
注：
1、关于以上部分内容可参照下面表格填写。
2、对于新建项目或对相关信息不能做出正确答复的，请咨询我公司进行解决。
一、项目的基本信息
项目名称
项目承办单位
项目
承办单位概况
法人代表介绍
主要股东
持股情况
主营业务介绍
近几年财务状况（企业资产、营业收入、
利润等）
3-5年发展规划
项目拟建设地点
项目占地面积
项目性质（新建/扩建/技改等）
项目实施时间安排
（是否分期实施/项目实施起止时间）
项目总投资
项目资金来源
（是否有银行贷款，
如有，贷款金额或者比例）
项目年产量、年销售收入
项目目前的进展情况
项目发起的缘由
二、项目的主要产品
产品名称及规格
（多种产品时应逐一列出）
产品生产采用标准
产品价格的制定
产品优势概括
三、项目的生产资源
原辅料
项目所需原、辅料名称
（应逐一列出）
项目每年所需原、辅料数量
项目所需原辅料来源
能耗
项目所用燃料品种
项目每年所用燃料品用量
项目总装机功率或年用电量
项目供电来源
项目需用的电力设施
项目年用水量
项目水源及供应情况
项目其他能源需求情况
项目其他能源来源
工艺及设备
项目生产工艺简述
项目单位技术优势
项目使用的设备名称及数量（包括生产设备、
检测设备等）
四、项目（现有设施）的土建工程
项目主要建设方案
生产车间建筑面积（已有/新建？）
配套工程
（已有/新建？）（包括办公楼、职工食堂
宿舍等）
道路、绿化等（已有/新建？）
土建工程的造价估算
五、项目的环境与劳动保护
项目主要污染物
（废水/废气/废固/噪声等）
项目的主要污染物处理方案
劳动安全、卫生设施
消防设施
六、项目的工作人员
企业组织机构（图）
企业工作制度（工作时间安排）
项目所需人员总数
其中所需工人数量
其中工程技术人员数量
其中管理人员数量
其中后勤、服务人员数量
职工年平均工资估算
职工的培训计划
职工的培训费用估算
七、对项目的补充说明或编写要求
一、
二、
三、
……
仅供科研使用，不得用于临床检验。 小鼠髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书 黄石市艾恩斯生物科技有限公司 【产品名称】 通用名称：小鼠髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒） 英文名称：Mouse Myeloperoxidase（MPO）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度。【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗小鼠髓过氧化物酶（MPO）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入小鼠髓过氧化物酶（MPO）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗小鼠髓过氧化物酶（MPO）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品检测范围：0.156-10ng/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。 【适用仪器】 半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。 【样本要求】 样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
人C-反应蛋白(CRP)酶联免疫分析试剂盒使用方法 检测范围：96T 30μg/L -800μg/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中C-反应蛋白(CRP)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人C-反应蛋白(CRP)水平。用纯化的人C-反应蛋白(CRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入C-反应蛋白(CRP)，再与HRP标记的C-反应蛋白(CRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的C-反应蛋白(CRP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中C-反应蛋白(CRP)浓度。 试剂盒组成 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
全自动化学发光免疫分析仪 技术审查指导原则 （第一次征求意见稿） 一、前言 本指导原则旨在指导注册申请人对全自动化学发光免疫分析仪注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对全自动化学发光免疫分析仪的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
二、适用范围 化学发光免疫分析根据化学发光物质的类型和发光特点，可分为电化学发光免疫分析和化学发光免疫分析，其中化学发光免疫分析根据发光剂的不同，可分为直接化学发光免疫分析、酶促化学发光免疫分析和鲁米诺氧途径免疫分析。目前，各类型化学发光免疫分析的常见发光剂包括：电化学发光剂为三联吡啶钌[RU（bpy）3]2+，直接化学发光剂为吖啶酯（AE），酶促化学发光剂为辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺（3-氨基苯二甲酰肼，luminol）及其衍生物或者碱性磷酸酶催化3-（2′-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3″-磷酰氧基）苯-1,2-二氧杂环丁烷（AMPPD），鲁米诺氧途径发光剂为酞箐、二甲基噻吩衍生物及Eu螯合物。 化学发光免疫技术根据反应过程中标记物是否需要分离可分为均相反应和非均相反应。均相反应主要应用于鲁米诺氧途径免疫分析中，而非均相反应则应用于其他类型化学发光免疫分析中，通过采用固相分离、过滤分离、珠式分离、顺磁性颗粒分离等方式实现游离标记物和免疫复合物标记物的分离，其中顺磁性颗粒分离较其他分离方式更为常用。目前，基于鲁米诺氧途径免疫分析原理的产品还比较少，临床常用的全自动化学发光免疫分析仪更多地采用非均相反应模式。
关于购置全自动酶免分析系统 项目的可行性建议书 一、引进全自动酶免分析系统的必要性、紧迫性和工作量预测 近年来，伴随着我院的跨越式发展，检验科体检量逐年快速递增，2009年体检人次，较2008年、2007年分别同比增长 %、 %。血液疾病酶联免疫检测是患者体检工作的重点之一，目前所用的酶免分析系统检测速度较慢，检测项目较少，无法应对目前大批量的酶免项目检测，占用很大的人力和时间。最新型全自动酶免分析系统（酶免之星）具备强大而灵活的软件设置操作程序，可以实现动态连续进样,乙肝五项各96个标本的发报告时间仅需3小时39分，大大提高了检测速度和工作效率。同时，ELISA试验受诸多因素影响。其中试剂盒的质量以及操作者的水平将直接影响到这一过程的成功与否。因此在完全按照试剂盒要求的前提下，均一，稳定的操作过程和试验条件是获得最佳试验结果的必要条件。购置全自动酶免分析仪避免了常规程序的局限性，集加样,孵育，洗板，比色于一体。极大的消除了人为因素带来的误差，使试验的灵敏性，重复性以及特异性同时大大提高。所以，全自动酶免分析仪符合现代化实验室的要求，也是现代化医院实验室的发展趋势。 因此，需要配备先进的、自动化、数据化、标准化的安全检测自动化设备——全自动酶免分析系统，可以解放劳动力，满足目前大体检量的血液酶免检测的需求，同时也有利于腾出人员开展其它体检项目，增加经济效益。
预计2010年酶免检测和其他的相关检测项目，总量将达到人次左右，再创我愿患者体检量的历史高峰。 二、全自动酶免分析系统的先进性和实用性： 全自动酶免分析系统采用先进的多任务、多通道、完全实现平行过程处理，硬件上采用综合模块化设计，广泛采用液体水平监测技术，体积和重量传感、光学位置传感等，实现真正的全过程控制。它完善、全面、全自动化的酶免处理管理流程，在使实验室工作人员的日常繁杂工作变得简单自如的同时，减少了错误的发生，主要特点体现在以下几点： 1、提高检测准确性：影响ELISA免疫诊断试剂测试结果的因素有很多，其中加样的精确度对结果的保证有重要作用。酶免之星系统具备完善的液体处理全过程监控系统，压力传感器精确监控每个通道吸液分液全过程,因此能避免漏加,堵尖错误的产生,确保加样的精确性及溯源性，从而提高酶免检测的准确性。 2、提高了检测特异性：基于空气置换的加样原理,采用一次性加样尖,避免了检测过程中因交叉污染导致的结果假阳性，提高检测特异性,减少确认重复实验次数,直接提高了检验科的工作效率及经济效益。 3、缩短发报告时间：该系统大大减少了发报告的时间。完全可以做到上午收到样本，下午发出报告，节省了医院和患者两方面的时间。 4、减少了分析仪器数量，提高了分析仪器的质量：酶免之星系统的所有部件，模块均置于传感系统的监测之下，并由跟踪系统(TRACE)全自动追踪记载诊断，实现cGMP对设备运行实时监控与记载要求，有利于检验科的质量控
高灵敏小鼠白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 金益柏试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆样本中白细胞介素-6（IL-6）含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素6（IL-6）水平。用纯化的小鼠白细胞介素6（IL-6）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素6（IL-6），再与HRP标记的白细胞介素6（IL-6）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素6（IL-6）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素6（IL-6）浓度。 试剂盒组成： 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS （PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。 仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速 冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS （PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。 若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、 第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第 四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中， 再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加 标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90 pg/mL，60 pg/mL ，30 pg/mL，15 pg/mL，7.5 pg/mL）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各 步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释 液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
全自动酶免分析系统的技术发展与现状 王兆强（澳斯邦生物工程有限公司） 酶联免疫吸附试验(ELＩSＡ/EIA,简称“酶免试验”)是一项现代医学临床检验基本的、常规的检测技术。尽管在9０年代初期，由于以聚合酶链反应（ＰCR)技术为代表分子生物学水平技术的发明，人们纷纷预测，酶免试验将被更高灵敏度、数百万级信号放大的、病原体水平检测的核酸放大试验(ＮＡＴ)所取代。但由于免疫临床标志物（抗原/抗体）具有无法替代的临床意义、以及酶免试验具有操作简便、技术可靠,特别是,9０年代末期ＥＬＩSＡ检测系统的灵敏度和特异性以及检测过程的自动化得到了显著提高与完善，因此，酶免试验再也没人怀疑将被淘汰，而成为传染病血清学标志物（如肝炎、艾滋、致畸病原Torch)、肿瘤标志物及内分泌等各种临床免疫指标检测的主导技术。 支持酶免试验技术的进步,酶标板检测仪器朝着二个方向快速发展。一方面,侧重酶免试验的光学检测系统——酶标仪,到９0年代末已达到至臻完美状态;随着纳米技术微量 加样的发展,酶标仪将很容易由检测传统的96微孔板,转化为检测３84微孔板，甚至1536微孔板，达到更高的检测效率。另一方面，侧重酶免试验处理过程技术——酶标分析系统,到9０年代末已充分发展；随着多任务软件,如O/S2,Unix及Wｉnｄowｓ NＴ等操作平台的完善，满足现代实验室GMP/GＬＰ要求的全自动酶标分析系统，正在世界各种实验室普及。应当指出，在发达国家全自动酶标分析系统的进步,是由法规要求严格、酶免试验结果至关重要的血站实验室需求推动的。这是因为,不同于临床病人检测结果,仅是医生诊断的参考数据,血站血液筛查实验室的检验结果判定，将直接决定血液的安全性。? 以日本为代表的“全面实验室自动化”（TLＡ)运动,对于全自动酶免分析系统产生了巨大的需求。在90年代初期，手工酶免试验操作曾经成为TLA的主要障碍。目前，由于全面实验室自动化具有标准化、高效率、高质量的自动化与网络化特征,正成为临床实验室发展的新趋势。??酶免试验自动化与网络化的时代已经到来,全面实验室自动化不再是一种模型。了解这些技术进步将有助于高效临床实验室的建设与发展。 一样本处理自动化 根据美国临床病理学院(CＡP）的调查报告，实验室误差（ERＲＯR)产生原因的79%
附件1 酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则 一、前言 本指导原则主要针对酶联免疫类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。 本指导原则系对酶联免疫法检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适时的调整。 二、适用范围 本指导原则适用于有关病原微生物检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查。其他酶联免疫法检测试剂（如作为二类管理的体外诊断试剂）可参考本指导原则执行。 三、基本要求 （一）基本原则 1.研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。 2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，应按照《体外诊断试剂
生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药品监督管理部门批准。 3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。 4.试剂在研制、生产过程中所用的各种材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。 5.生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。 （二）原材料质量控制 1.主要生物原料 与产品质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反应用抗原或抗体、制备校准品（标准品）等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料（包括工艺）或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。 主要生物原料的常规检验项目一般包括： （1）外观 肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒；或者为白色粉末，不含其他颜色的杂质；特殊生物原料应具备相应外观标准。 （2）纯度和分子量
鸡马立克氏病病毒（MDV）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒 使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于检测鸡血清，血浆及相关液体样本中马立克氏病病毒（MDV）水平。 实验原理： 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸡马立克氏病病毒（MDV）。用纯化的鸡马立克氏病病毒（MDV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中马立克氏病病毒（MDV）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的马立克氏病病毒（MDV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中鸡马立克氏病病毒（MDV）的存在与否。 试剂盒组成：
样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
克伦特罗酶联免疫定量检测试剂盒（I） 使用说明书 概述： 克伦特罗(Clenbuterol)属于一类β-兴奋剂，具有改进脂肪型动物体内肉与脂肪的比例的作用，亦可促进动物生长。但同时，此药物还会使非横纹肌松弛，人体摄入后可引起心跳、心率不正常等副反应，甚至可导致心脏病。因此在我国，克伦特罗在畜牧业上的使用是被严格禁止的。 本试剂盒利用竞争酶联免疫法对生物样品中的克伦特罗进行定量分析。适用于动物尿液、血清、内脏等物质中克伦特罗的快速检测。由于ELISA法的高通量与简便快速，适合大量样本的定量筛查，自样本加入至结果读出，不超过60分钟，检测灵敏度为0.1ppb。 一、简要原理 试剂盒所提供的微孔板上包被有抗体，然后将校准品或样本中的克伦特罗与酶标记的克伦特罗加入微孔中后，两者可竞争结合克伦特罗抗体，洗去未结合的酶标记克伦特罗。加入底物后，在酶作用下，底物溶液会显蓝色，加入终止剂后，溶液由蓝转为金黄色。在450nm波长光下测吸光度，吸光度高低与校准品或样品中克伦特罗的含量呈反比，根据校准品的读数作出校准曲线，并利用校准曲线计算出样品中克伦特罗的含量。 二、试剂盒组成 1.酶标反应板： 96孔易折板，抗体已包被 2.克伦特罗校准品： 1ml/瓶×6瓶浓度：0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3.11×酶标记克伦特罗浓缩液： 1.2ml/瓶×1瓶(稀释11倍使用) 4.底物液： 11ml/瓶×1瓶 5.酶标稀释液： 20ml/瓶×1瓶 6.50×浓缩洗涤液： 20ml/瓶×1瓶(稀释50倍使用) 7.终止剂： 11ml/瓶×1瓶 8.其他：说明书×1份自封袋×1个 2-8℃贮存，有效期一年 三、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器 1.试剂 ――――――10mM盐酸溶液 ――――――氯化钠 ――――――50mM PH7.0 PBS (配制:9g NaCl；4.65g Na2HPO4·12H2O；0.56g NaH2PO4·2H2O 溶解于1000ml蒸馏水中) ――――――异丙醇 ――――――乙酸乙酯 2 .仪器 ――――――微孔板酶标仪 ――――――涡旋振荡器或超声波粉碎仪 ――――――离心机
人封闭抗体（BA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 特异性：本试剂盒可检测人封闭抗体（BA），且与其他相关抗体无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中封闭抗体（BA）含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。 2.酶结合物（Conjugate）：2×6ml/瓶。 3.样品稀释液（Sample Diluent）：2×6ml/瓶。 4.阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。 5.阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。 6.底物溶液A（Substrate A）：1×7ml/瓶。 7.底物溶液B（Substrate B）：1×7ml/瓶。 8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 9.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6.蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 1.加样：分别设空白孔，不加任何溶液；设阴性对照孔2孔，加阴性对照100μl；设阳性对照孔2孔，加阳性对照100μl；余孔加100μl样本稀释液，然后直接加待测样本5μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置30分钟。 2.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 3.每孔加酶结合物100μl（空白孔除外），充分混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置20分钟。 4.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 5.依序每孔加底物溶液A和B各50μl，37℃避光显色10分钟。 6.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加
全自动酶免分析系统的技术发展与现状 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
全自动酶免分析系统的技术发展与现状 王兆强（澳斯邦生物工程有限公司） 酶联免疫吸附试验（ELISA/EIA，简称“酶免试验”）是一项现代医学临床检验基本的、常规的检测技术。尽管在90年代初期，由于以聚合酶链反应（PCR）技术为代表分子生物学水平技术的发明，人们纷纷预测，酶免试验将被更高灵敏度、数百万级信号放大的、病原体水平检测的核酸放大试验（NAT）所取代。但由于免疫临床标志物（抗原/抗体）具有无法替代的临床意义、以及酶免试验具有操作简便、技术可靠，特别是，90年代末期ELISA检测系统的灵敏度和特异性以及检测过程的自动化得到了显着提高与完善，因此，酶免试验再也没人怀疑将被淘汰，而成为传染病血清学标志物（如肝炎、艾滋、致畸病原Torch）、肿瘤标志物及内分泌等各种临床免疫指标检测的主导技术。 支持酶免试验技术的进步，酶标板检测仪器朝着二个方向快速发展。一方面，侧重酶免试验的光学检测系统——酶标仪，到90年代末已达到至臻完美状态；随着纳米技术微量加样的发展，酶标仪将很容易由检测传统的96微孔板，转化为检测384微孔板，甚至1536微孔板，达到更高的检测效率。另一方面，侧重酶免试验处理过程技术——酶标分析系统，到90年代末已充分发展；随着多任务软件，如O/S2，Unix及Windows NT等操作平台的完善，满足现代实验室GMP/GLP要求的全自动酶标分析系统，正在世界各种实验室普及。应当指出，在发达国家全自动酶标分析系统的进步，是由法规要求严格、酶免试验结果至关重要的血站实验室需求推动的。这是因为，不同于临床病人检测结果，仅是医生诊断的参考数据，血站血液筛查实验室的检验结果判定，将直接决定血液的安全性。
免疫分析技术研究进展 摘要：目的：综述免疫分析技术的最新研究进展。方法：通过查阅国内外有关免疫分析技术的研究论文，对放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CLIA)等免疫分析技术进行了综述，同时指出了发展前景和尚待解决的问题。结果：多种免疫分析方法相互结合，可大大提高分析方法的灵敏度，增大检测范围；CLIA和TRFIA是非放射免疫分析的两大主流，其中，CLIA更具有竞争力。结论：目前还没有一种免疫分析技术是完美无缺的，各种技术还需要不断发展和完善，以开发出更新、更理想的免疫分析技术。 关键词：药物分析学；免疫分析；放射免疫分析；酶免疫分析；荧光免疫分析；化学发光免疫分析 免疫分析法(immunoassay ，IA)是基于抗原和抗体特征性反应的一种技术。由于免疫分析试剂在免疫反应中所体现出的独特的选择性和极低的检测限，使这种分析手段在临床、生物制药和环境化学等领域得到广泛应用。各种标记技术(放射性标记、荧光标记、化学发光、酶标记等)的发展，使免疫分析的选择性更加突出。免疫分析法起始于本世纪50年代，首先应用于体液大分子物质的分析，1960年，美国学者Yalow和Berson等将放射性同位素示踪技术和免疫反应结合起来测定糖尿病人血浆中的胰岛素浓度，开创了放射免疫分析方法的先河。1968年，Oliver将地高辛同牛血清白蛋白结合，使之成为人工抗原，免疫动物后成功获得了抗地高辛抗体，从而开辟了用免疫分析法测定小分子药物的新领域。在RIA的基础上，随着新的标记物质的发现及新的标记方法的使用，以及电子计算机、自动控制技术的广泛应用，派生出许多新的检测技术[1]，使免疫分析法逐渐发展成为一门新型的独立学科。 1 免疫分析方法分类 (1)根据标记物的不同，可以免疫分析主要分为放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)、酶免疫分析(enzyme immuoassay，EIA)、化学发光免疫分析(chemiluminescent immunoassay，CLIA)、荧光免疫分析法(fluorescence immunoassay，FIA)等。 (2)按反应机制的不同，可以分为竞争法和非竞争法。非竞争法是将待测抗原与足够的标记抗体充分反应形成抗原-标记抗体复合物，产生的信号强度与抗原的量成正比。竞争法是将过量的待测抗原与定量标记抗原竞争结合形成定量的特异性抗体，待测抗原的量越大，与抗体结合的标记抗原量越少，产生的信号强度越小，由此定量待测抗原的量。 (3)还可以按测定过程中的某些步骤的差异分为均相免疫分析和非均相免疫分析两大类。均相酶免疫测定法的特点是抗原-抗体反应达到平衡，对结合与游
TECAN Freedom Evolyzer全自动酶免疫分析一体机的应用体会 Freedom EVOlyzer（全自动酶免工作站）是TECAN公司推出的新一代全自动酶免疫分析工作站。它具备专业的酶免分析平台，可满足不同批处理量的试验要求，实现微孔板ELISA 试验的自动化，并且依靠其高品质的组件来确保酶免疫试验高效、快速、安全地完成。 1、功能呢特点Freedom EVOlyzer带有8根液体加样针和独立的全自动机械臂，提供12 个加热孵育器和32个微孔板存储位置，并通过新型Columbus Pro洗板机和Sunrise酶标仪来完成操作。它提供可视化用户向导界面，其开放的平台使ELISA试验自动化，包括样本分配、预稀释、移液、孵育、洗涤、判读及试验结果的生成。其优点是：操作性更强，更加智能、简便、快捷；缺点是：一旦出现致命错误，机器随即“死机”，所有程序即刻终止，不给用户干预的机会。 1.1操作简单从最初的样本识别，到传输试验结果，再到实验室信息的处理，一键式操作。 1.2软件易用仪器的Run Control 软件操作简单易用 1.3进样灵活仪器的连续进样模式可以根据实验室的样品量自动调整。 1.4更改轻松当实验标本被仪器扫描或工作表被载入后，在试验开始前仍然有机会通过点 击“处理架子并解决问题”来对实验项目进行最后的更改。 1.5提示智能仪器台面上的LED状态灯会通过持续或闪烁的红色和绿色指示灯来显示设备 的运转状态。当操作系统需要人工干预时，仪器会以声光报警提示。 2、使用维护仪器管理是科室的一项重要任务，掌握Freedom EVOlyzer的主要保养方法， 定期做好管道的清洁、加样针的清洗、去蛋白处理等至关重要。按照操作规程做好仪器的保养工作，可降低仪器故障的发生率和延长设备的使用寿命。 2．1即时维护即时维护是指仪器在运行过程中发生不可预知的状况时，须立即进行的维护。出现以下几种情况需要即时维护：（1）若设备发生漏液，须立即关闭仪器，阻断泄露源；（2）若发生液体处理机械臂撞击，应检查加样针的准直性，确定固定式加样针排列准直且均能达到要求以及工作台上的物件位置正确无误；（3）若发生机械臂撞击，则应检查机械抓手两侧的正确定位，即其应与工作台表面保持水平，确定工作台上的物件为证正确无误。如果撞击严重或在检查时发现异常则应联系工程师维修。 2.2日维护日维护分为仪器运行开始时，运行时以及运行结束时的维护工作，现分别介绍如下：（1）仪器运行开始时：检查液体系统是否发生泄漏，将微量注射器和活塞螺钉拧紧；检查加样针是否完好，并清洗其外壳锁紧螺帽座；灌注系统液容器，清空废液桶，灌注液体系统并进行紧密性检查看有无直接流出物和气泡，再用蒸馏水启动（液体流经管道）清洗Columbus Pro洗板机。（2）仪器运行进行时：及时清空废液桶，检查系统液容器的注水高度并及时补充。（3）仪器运行结束时：清空洗液桶并用水漂洗或收起，用蒸馏水启动（液体流经管道）清洗Columbus Pro洗板机。（2）仪器运行进行时：及时清空废液桶，检查系统液容器的注水高度并及时补充。（3）仪器运行结束时：清空洗液桶并用水漂洗或收起，用蒸馏水启动（液体流经管道）清洗Columbus Pro洗板机，灌注加样针的内外部，用水漂洗系统液容器并灌注，清洁载架、支架、机械手、洗针站、工作台面、前安全挡板以及低位一次性加样针卸载选件的摇杆，清空废液桶并用水漂洗，再次检查液体系统是否有漏液并处理。另外，勿用次氯酸钠溶液来清洗加样针和洗板机，以防其与底物液产生非特异性反应而造成“花板”。 2.3周维护需在每周的最后一个工作日和很长时间闲置不用后进行。包括清洁并灌注系统液容器，清空并清洁废液桶，清洁液体系统、前机械臂导轨、液体处理机械臂和机械手臂以及激光束射出窗口，用蒸馏水启动（分别灌注每一管道）清洁Columbus Pro洗板机。 2.4 半年维护为了保证设备的良好工作状态，半年维护由一位得到Tecan授权的现场服务工程师完成。
Ap22 Speedy 全自动酶免分析系统技术参数 性能技术指标： 原装进口 一、样本架： 1号：可容纳40个直径16mm的试管； 2号：可容纳60个直径12mm的试管； 3号：可容纳80个直径12mm的试管 二、稀释架： 可容纳92个直径12mm的试管 三、通用试剂架： 1个组合模块，用于放置稀释液、终止液等通用试剂，可使用原试剂盒中的试剂瓶，避免浪费和污染试剂 四、专用试剂架： 8个组合模块，用于放置标准品、质控品、酶联物和底物，可同时运行8个实验项目，使用原试剂盒中的试剂瓶，避免浪费和污染试剂。 五、储液瓶：外置的2个洗涤缓冲冲洗液、1个废液瓶和1个清洗液瓶。储液瓶均有液面感应装置，防止液体不足或溢出 六、微孔板：可放置两块96孔板，多达8种不同项目的板条可任意组合在同一板框中同时测试 七、温育温度：从室温到45摄氏度可调，温控精度为±0.2摄氏度 八、加样系统：加样针1根 采用陶瓷玻璃表面处理的不锈钢吸液--加液针，具有X-Y-Z三维运动模式，连接一个1000μL的注射器，可进行单次或连续分液 九、加样量：从8μL到1000μL连续可调，加样量100μL时误差小于1% 十、管路清洗：具有多种清洗模式，清洗管路和钢针的速度和次数可调，自动吸入气泡加强冲洗效果，有清洗槽及清洗通道，确保对各种样本和试剂的清洗效果 十一、携带污染：选择合适的清洗模式可便携带污染率低于10-6以下十二、稀释模式：多种稀释模式，可选择直接加原血清或稀释的血清至微孔板中 十三、加样本速度：加完96孔板少于12分钟（依工作模式而定）十四、加试剂速度：加完96孔板少于3分钟（依工作模式而定） 十五、洗涤系统：双排8针的洗板机，可根据孔板底部深度自动调整
人C-jun酶联免疫分析试剂盒使用方法 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 3U/L – 80U/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中C-jun含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人C-jun水平。用纯化的人C-jun抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入C-jun，再与HRP标记的C-jun抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的C-jun呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人C-jun浓度。 试剂盒组成 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
酶免疫技术的特点方法原理 免疫酶技术是指在一定的生物反应器内,利用酶的催化作用,进行物质转化的技术.其应用范围已遍及工业、医药、农业、化学分析、环境保护、能源开发和生命科学理论研究等各个方面。下面是给大家的酶免疫技术的特点，希望能帮到大家! (1)酶和酶作用的底物： ①辣根过氧化酶(HRP)：是一种糖蛋白，含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶，由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。在反应中H2O2是受氢体底物，DH2无色的供氢体底物，在HRP的催化下脱氢而显色，此即HRP作为示踪物的原理。 ②碱性磷酸酶(AP)：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的最适pH为8.0;用小牛肠粘膜提取的AP最适pH为9.6。 ③其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。 (2)酶标记的抗体或抗原： 称为结合物。制备方法通常有戊二醛交联法(包括有一步法和二步法)和过碘酸盐氧化法。标记抗体的最佳用量：通常采用棋盘滴定法进行滴定。 (3)固相载体： 主要试剂：固相的抗原或抗体、医学`教育网搜集酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可作固相载体物质最常用
的是聚苯乙烯。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。聚苯乙烯作为ELISA固相载体，载体还包括微孔滤膜和含铁磁性微粒。聚氯乙烯板的特点为质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。 (4)免疫吸附剂： 固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过 程称为包被。如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以 消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。 ACA(抗心磷脂抗体)主要通过抑制血管内皮细胞合成PGI2，干 扰血栓调节素、纤溶酶原激活剂和蛋白质C系统的活性，抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝状态，与复发性动静脉血栓形成、反复自然流产及血小板减少症关系密切。 其主要程序为用纯心磷脂的无水乙醇溶液包被聚苯乙烯板，封 闭后分别于标本孔和对照孔中加入一定稀释度的被检血清及阳性与 阴性对照血清，之后加入酶标二抗和酶底物，终止反应后肉眼观察结果或测吸光度(A)值。 具体步骤如下： 预步骤：先用一定浓度的心磷脂溶液包被聚苯乙烯板的小孔，4℃冰箱过夜，次日取出甩尽液体备用。 (1)用微量移液器分别加待检血清、阳性对照、阴性对照各100μl于1、2、3孔中，370C水浴箱温育30min。
酶联免疫（）使用试剂盒检测过程中值得关注的问题 1、仪器质控 为使仪器保持最佳工作状态，应建立维护和校正仪器的标准操作程序（），所要控制的仪器包括移液器（加样枪）、温箱、洗板机和酶标仪。 ◎移液器：加样量小（20-200卩l ），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：低、中、高三个刻度分别吸取指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在土5淋内；◎恒温箱：经常检查恒温箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有土1C的误差； ◎洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定，一般不超过2卩I ;人工扣板时，垫纸不湿；定期检查管孔是否堵塞；◎酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。 2、试剂盒选择 ◎应尽量选择正规厂家，产品经相应政府部门审核认可，试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。 ◎灵敏度：有二层含义，1）为试剂检出被检物质的最低量的能
力；2）为试剂对大量样品中阳性检出的能力。 ◎特异性：常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应，使测定结果升高，可能导致假阳性，所以交叉反应是评价其质量的关键指标。 ◎精密度：试剂一般指其批内，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围。 ◎准确度：通过添加回收实验进行评价。 ◎简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性实验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单。 ◎安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。◎经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本，而市场价格比较合理。 ◎试剂评价：需要有权威的确证方法和确证的样品进行检测。 3、样本前处理注意事项 3.1 均质 组织样本: 肉、肝食品类切细，用绞肉机反复绞碎，混合均匀。水产样本：去除样品的非食用部分，食用部分切细，用均质器均浆；原料表面较脏时, 需适当用蒸馏水清洗。 蛋类：鲜蛋去壳，蛋黄和蛋白充分混匀。水果、蔬菜类：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。 3.2 振荡提取将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中，振荡， 使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部，提取待测组分。 3.2.1 振荡方式：振荡器上进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。 3.2.2 在组织样本中加入有机溶剂之间提取时，应边加边振荡，防止组织凝结成团，不利于提取。 3.3. 在用有机溶剂提取过程中，如果出现乳化现象，解决的方法有： ①用细头轻轻的搅拌，破坏乳化后，再重复离心。②再加入适量的提取剂，重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。 3.4 浓缩 由于净化过程中引入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析，需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60C氮气下吹干，再用复溶液溶解干燥残留物。浓缩方式：