几种煤矿井下除尘方法的比较
随着当今社会科技水平的进步，各行各业的机械化程度走在不断提高，在煤矿生产作业中也是如此，由于井下采煤的空间狭小，并且通风效果差，生产过程中不可避免的产生煤矿井下粉尘，严重污染井下环境，给作业环境带来一定程度的威胁。
从目标源上考虑，井下除尘主要可以分为“防”、“堵”、“消”三种类别。“防”就是从根源上防治，减少或阻止粉尘的生成，最常见的就是回采面的注水工艺；“堵”就是堵截粉尘的传播途径，阻止粉尘扩散，常见的有各类水喷雾除尘、泡沫除尘等；“消”就是消除工作面上已经生成的粉尘，降低粉尘的危害，常见的就是通风除尘、除尘器除尘等。
煤层注水除尘
井下回采工作面可以通过注入高压水的方式，预先对回采煤层进行浸润，以降低回采时浮游煤尘的产生率，并可以通过增加氯化钙等润滑剂来提高浸润程度，提升降尘效果，一般可降低粉尘浓度60%~90%。
水喷雾除尘
水喷雾除尘是最常见的除尘方式，通过水雾的附着、浸润增加粉尘的重量，以达到降尘的目的，具有低成本，效果明显等优点。。由于多数全岩巷道都是疏水性粉尘，水雾的附着性不强，加上井下的水质较差，喷嘴易堵塞、生锈，加大了维护的工作量，所以在岩石工况下使用效果并不理想。
通风除尘
通风除尘是国内煤矿生产中最早采用，技术最成熟，应用最广的除尘技术，通过“送风——循环——回风”的风流循环，将工作面中的大部分粉尘带走，起到降尘的目的。由于一些粉尘会在巷道内逐渐沉积，为尽量避免粉尘的二次飞扬，通风的速度不宜过高。
除尘器除尘
除尘器通过负压风筒将工作面的空气吸入，经洗涤或过滤装置将空气中的粉尘分离，达到净化空气的目的。除尘器从风机的角度可以分为旋流式和离心式，从有无水源上可以分为干式和湿式，从除尘原理上可以分为洗涤式和过滤式等。除尘器除尘最高可降尘约90%，具有除尘效率高、效果好等优点，但由于设备体积相对较大，较笨重，在工作面内不易调度。
泡沫除尘
泡沫除尘是以高压空气促使发泡剂产生无空隙湿润泡沫体覆盖尘源，使刚产生的粉尘得以浸润、附着、沉积，失去飞扬能力，整体除尘效果好，一般可达90%以上，尤其对5mm以下的呼吸性粉尘，除尘率可达80%以上。泡沫除尘能够无空隙地覆盖尘源，从根本上阻止粉尘向外扩散，液体形成泡沫后，总体积和表面积大幅度增大，增加了与粉尘的碰撞效率，泡沫的液膜中含有特制的发泡剂，能大幅度降低水的表面张力，迅速增加粉尘被湿润的速度。泡沫具有很好的粘性，粉尘和泡沫接触后会迅速被泡沫粘附，抑尘效果明显，比传统除尘方法有绝对优势。在现场利用原有的防尘系统和压风系统，安装工作量小，成本低，它将使煤矿现场环境质量得到根本性改变，在煤矿有良好的推广价值。
转染步骤及经验（精华） 一、基础理论 转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。 二、转染操作流程（以常用的6孔板为例） (1) 细胞培养： 取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备： 在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL， B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL； 轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 (3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。 (4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。 三、转染注意事项 1. 血清 A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。 B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 C. 对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一种营养丰富的无血清培养基OPTI-MEMⅠ培养基， 或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 2.抗生素（PS） 抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血
一、过滤材料与原理上的区别 1、滤筒或滤袋硬质滤料呈折叠布置形成圆筒，无骨架，简短，筒间间距大，清灰彻底，无二次污染。 2、布袋采用软质滤料缝成滤袋，套入钢筋焊成的骨架上（俗称龙骨架），滤袋坚向密布，滤料种类为长聚酯纤维及其后处理材质多为单层普通工业涤纶布。 3、过滤原理表面过滤原理：滤筒除尘器粉尘不深入滤料内深层过滤原理。袋式除尘器粉尘深入滤料内，靠滤料外表面建立粉尘层维护除尘效率。 二、主要性能比较 1、滤筒式除尘器：滤料特性
三、经济性的比较
四、各自优缺点 1、滤筒式除尘器的优点：
三新：新滤料（防水防潮防磨防腐）、新结构（硬质滤料折叠布置，无钢筋骨架，无滤料磨损现象）、新理论（表面过滤代替深层过滤粉尘，不再渗透与滤料内部）。使用了多年的反吹式、气箱脉吹式，机械振打机组等落后的除尘器，早已被美国、德国、澳大利亚等国家淘汰。滤筒式除尘器正是这些旧式除尘器的换代产品，其优势如下： 1）滤筒式除尘器表面过滤的除尘效率远远高于旧式除尘器，大大减少了有害物的排放量，空气净化指标达到了世界先进水平，彻底改变了旧式除尘器达不到要求的落后状态。 2）滤筒式除尘器无滤料磨损现象，其本体上无可动部件，可长期使用不须维修（即使拆换滤筒也极方便）避免了旧式除尘器不断换滤料的烦恼，省钱省时省力又无二次污染。 3）滤筒式除尘器其体积、重量远远小于同规格的旧式除尘器，节省土建空间及土建负荷，节省基建投资显著。 4）滤筒式除尘器阻力小，耗压缩空气量小，无维修工作量。比各类旧式除尘器节能，节资30%以上，任何企业都不可忽视这一节能效果给企业带来的显著经济效益。 2、袋式除尘器的优点： 1）它具有操作简单，清灰连续，阻力稳定，过滤速度高，内部无运动机件，设计简单等特点，是一种高效能的布袋除尘器。 2）除尘效率高，可捕集0.1UM以上的粉尘，使含尘气体净化到15mg/m3甚至以下。 3）附属设备少，投资省，技术要求没有电除尘器高。 4）能捕集电除尘难以回收的粉尘，并且在一定程度上能收集硝化物、硫化物等化合物。 5）对负荷变化适应性好，特别适应捕集细微而干燥的粉尘，所收的干尘便于处理和回收利用。 6）袋式除尘器收集含爆炸危险或带有火花含尘气体时安全性较高。 3、袋式除尘器的缺点： 1）对于不同类型的气体，应选用相应类型的布袋，且需要经常更换布袋，布袋消耗量较大。
布袋除尘器与电除尘器的比较 目前，全国燃煤锅炉在电力、供暖行业中占绝大多数。燃煤锅炉烟气除尘技术经历了水膜除尘、布袋除尘到电除尘的过程。随着国家环保要求的提高和布袋除尘器的运用实践，现在又出现了使用布袋除尘器的趋势。 在锅炉布袋除尘器的早期运用中，很多项目接受了失败的惨痛。其主要原因在于当时的配套件，特别是滤料这一除尘器关键配套件的质量不过关，国内外都缺少价格合理、耐高温、能适用于燃煤锅炉烟气除尘的材料。布袋除尘器失败后，燃煤锅炉烟气除尘基本应用电除尘器。但随着国家环保要求的日益提高、电除尘器的广泛运用，其弱点也逐渐暴露出来。 首先，电除尘器的除尘效率得不到保证。电除尘器运行初期，除尘效率基本能达到99%，但由于电厂燃煤品种的变化以及电除尘器结构及工作原理的局限，随着运行时间的延续，电除尘器内部组件变形、积灰引起电场变化，除尘效果一路下降，排放严重超标，成为电厂的一块心病。其次，电除尘器的运行综合费用高。电除尘器运行一个周期后，部结构变形、损坏严重，为保证正常运行，电厂不得不经常对电除尘器进行维修。维修投入的人力、物力及检修停产带来的损失对电厂来说不是一个小数。电除尘自身耗电更是被形象地比喻为电老虎。目前，随着布袋除尘器滤料等配套件生产技术的日益提高，原来布袋除尘器在燃煤锅炉烟气除尘运用中失败的因素，都得到了解决。特别是离线检修技术的成功运用，使得脉冲袋式除尘器在锅炉除尘技术中的运用得到有力的支持。国家环保政策对锅炉烟尘的排放要求有了极大的提高，新的《火电厂污染物排放标准》（GB13223-2003）已经发布，新标准中对燃煤电厂的烟尘排放浓度提高到了50mg/m 3。一部分地方环保部门提出了更严格的要求，北京市从2002 年3 月1 日起执行的《北京锅炉污染物综合排放标准》（DB11/119-2002），烟尘和二氧化硫的排放允许浓度严于很多先进国家标准，从2005 年1 1 月1 日起，已运行的火电厂锅炉到时烟尘排放浓度仅允许30mg/Nm3，目前四电场电除尘器改为五电 场、六电场也很难满足要求。2003 年7 月1 日实行的《排污费征收使用管理条例》，将对企业征收排污费，超标排放部分加倍收费，这样，对除尘器效率不高的企业，又增加了运行成本。根据当前形势，静电除尘器改造为布袋除尘器已经势在必行。由于除尘器是锅炉除尘系统中的关键设备，它的工况效果将直接影响到整个系统的成败，因此，对除尘器的设计、制造、安装、调试和运行等每一个环节都需要精心安排。我们综合考虑和比较了大气反吹布袋除尘器、回转脉冲袋式除尘器和管喷脉冲袋式除尘器的性能特点，为保证在各种环境条件下除尘器能长期、安全、稳 定的工作，体现除尘器的最佳价格性能比，决定采用包含了离线清灰、离线检修功能的RF-DML 型脉冲布袋除尘器。 该形式的除尘器已经在众多厂家的众多工程项目中得到运用。 RF-DML 型脉冲布袋除尘器具有下进风、离线清灰、离线检修、外滤式除尘、清灰效果好、过滤区全封闭、维护检修机外执行、操作方便、排放浓度低、运行费用省等特点。 内蒙古呼市电厂运用了水膜除尘、电除尘、布袋除尘三种技术，三种除尘技术的运用效果产生了鲜明的对比。 相对电除尘器而言，RF-DML 型脉冲布袋除尘器占地面积小、没有电除尘器必须的高压整流设备及控制楼、无须专设除尘器供电变压设备，并且长期运行费用较低。 从投资角度来说，现在的RF-DML 型脉冲布袋除尘器的造价与三电场电除尘器相比略高，接近或低于四电场电除尘器的造价。随着滤料等布袋除尘器的主要配件的逐步国产化，布袋除尘器的造价将进一步降低。随着国家环保法规的修订、提高以及人们环保意识的进一步增强，离线清灰低压脉冲布袋除尘器将成为锅炉烟气除尘的首选设备。 以下为我们对布袋除尘器和电除尘器的经济和技术状况的比较，供参考： 1 布袋除尘器和电除尘器性能对比 袋式除尘器优点： ＊除尘效率高，可以永久保证粉尘排放浓度在50mg/m3 以下。 ＊单元组合形式，内部结构简单、附属设备少，投资省，技术要求也没有电除尘器那样高，无须专设操作
电袋复合除尘器与布袋除尘器 技术方案对 目录 一、电袋复合高效除尘器技术特点 (2) 1、前言 (2) 2、电袋式除尘器的技术特点 (4) 3、技术保证措施 (6) 二、LCMD高效布袋除尘器技术特点 (10) 1、前言 (10) 2、LCMD电袋式除尘器的技术特点 (11) 3、技术保证措施 (13) 三、技术性能比较 (17) 四、一次性投资预算比较 (18) 五、综合比较结果及建议 (18)
电袋复合高效除尘器与LCMD布袋除尘器比较 一、电袋复合高效除尘器技术特点 1、前言 （1）电-袋复合式除尘器的主要用途 当前，我国经济社会发展与资源环境约束的矛盾日益突出，环境保护面临越来越严峻的挑战。在大气污染防治方面，国家出台了更为严格的排放标准，2国家颁布了《火电厂大气污染物排放标准》，水泥工业大气污染物排放标准》，目前国家正在修订《钢铁行业污染物排放系列国家标准》，这些新排放标准的出台对大气污染治理装备的性能和可靠性等方面提出更高的要求。 电除尘器和袋式除尘器是工业粉尘治理的两种主要传统设备。电除尘器具有处理烟气量大、运行阻力低等优点，但其除尘效率容易受到烟气粉尘特性的影响而发生波动；袋式除尘器排放浓度低，不受粉尘特性影响，但存在系统阻力大、能耗高、运行维护工作量大等缺点。为此，除尘设备要实现稳定低排放、节能低耗、长期可靠运行，在除尘技术方面需要有新的突破。 电袋复合除尘技术是除尘技术发展的重大突破。电袋复合除尘器有机结合了静电除尘和过滤除尘两种原理，充分应用两种除尘技术的各自优势，形成了电袋复合除尘一种独特的除尘机理。在这种新型除尘器中，首先应用静电除尘原理使粉尘预荷电并收集下大部分粉尘，荷电粉尘改变了粉尘的过滤特性；然后应用过滤除尘原理，实现稳定
各类除尘器优缺点
§1除尘器总论 1-1除尘器评定指标 评定除尘器工作性能的主要指标有: 除尘效率, 阻力, 经济性等. 1、除尘效率：系指除尘器捕集下来的粉尘量与进入除尘器的粉尘量之比. 根据总除尘效率, 除尘器可分为: 低效除尘器(50～80%), 中效除尘器(80～95%)和高效除尘器(95%以上)。 2、阻力：表示气流通过除尘器时的压力损失。据阻力大小除尘器可分为: 低阻除尘器(ΔP<500Pa), 中阻除尘器(ΔP=500～2000Pa)和高阻除尘器(ΔP=2000～20000Pa)。 3、经济性：是评定除尘器的重要指标之一, 它包括除尘器的设备费和运行维护费两部分. 在各种除尘器中, 以电除尘器的设备费最高, 袋式除尘器次之, 文氏管除尘器, 旋风除尘器最低。 1-2除尘机理 所谓除尘, 就是利用一定的外力作用使粉尘从空气中分离出来, 它是一个物理过程. 使粉尘从空气中分离的作用力主要有: 1、机械力: 包括重力, 离心力和惯性力; 2、阻留作用: 包括介质的筛滤作用, 尘气绕流的接触阻留作用和扩散接触阻留作用; 3、凝聚作用: 通过加湿, 蒸汽凝结, 超声波等作用, 使细尘粒凝聚而从空气中分离; 4、静电力:利用静电力使带电尘粒从空气中分离; 5、扩散：粒径小于0.3微米的粉尘。
1-3除尘器选用 机械式除尘器机械式除尘器造价比较低，维护管理方便，耐高温，耐腐蚀，适宜含湿量大的烟气，但对粒径在5μm以下的尘粒去除率较低。当气体含尘浓度高时，这类除尘器可作为初级除尘，以减轻二级除尘的负荷。 湿式除尘器湿式除尘器结构比较简单，投资少，除尘效率比较高，能除去小粒径粉尘，并且可以同时除去一部分有害气体，如火电厂烟气脱硫除尘一体化等。其缺点是用水量比较大，泥浆和废水需进行处理，设备及构筑物易腐蚀，寒冷地区要注意防冻。 过滤式除尘器过滤式除尘器以袋滤器为主，其除尘效率高，能除掉微细的尘粒，对处理气量变化的适应性强，最适宜处理有回收价值的细小颗粒物。但袋式除尘器的投资比较高，允许使用的温度低，操作时气体的温度需高于露点温度，否则不仅会增加除尘器的阻力，甚至由于湿尘黏附在滤袋表面而使除尘器不能正常工作：当尘粒浓度超过尘粒爆炸下限时，也不能使用袋式过滤器。 袋式过滤器广泛应用于各种工业生产的除尘过程。大型反吹风布袋除尘器，适用于冶炼厂、钢铁厂等的除尘；大型低压脉冲布袋除尘器，适用于冶金、建材、矿山等行业的大风量烟气净化；回转反吹风布袋除尘器，适用于建材、粮食、化工、机械等行业的粉尘净化；中小型脉冲布袋除尘器，适用于建材、粮食、制药、烟草、机械、化工等行业的粉尘净化；单机布袋除尘器，适用于各局部扬尘点如输送系统、库顶、库底等部位的粉尘净化。颗粒层除尘器适宜于处理高温含尘气体，也能处理比电阻较高的粉尘，气体温度和气量变化较大时也能适用。其缺点是体积较大，清灰装
miRNA及其inhibitor转染方法 1 对mimics、mimics control、inhibitor、inhibitor control进行稀释和分装（终浓度为100 nmol/μl）。 （1）Mimics加入250 μl DEPC处理的水； （2）Mimics control加入125 μl DEPC处理的水； （3）inhibitor加入250 μl DEPC处理的水； （4）inhibitor control加入125 μl DEPC处理的水； 对以上进行分装：mimics 20 μl每管，mimics control 10 μl每管，inhibitor 20 μl每管，inhibitor control 10 μl每管。 分装后于－80 ℃保存。 2经过调整，细胞状态较好。晚上铺细胞，4个60 mm培养皿，每皿×105细胞。做好标记，（1）为mimics（2）为mimics control（3）为inhibitor（4）为inhibitor control。 3 上午八点对昨天晚上的细胞进行转染。 （1）a 用500 μl opti-MEM稀释20 μl mimics，作用5 min b 用500 μl opti-MEM稀释20 μl mimics control，作用5 min c 用500 μl opti-MEM稀释20 μl inhibitor，作用5 min d 用500 μl opti-MEM稀释20 μl inhibitor control，作用5 min （2）a 用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min b用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min c 用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min d 用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min （3）分别将（1）、（2）对应的a、b、c、d混合，轻轻吹打均匀后室温作用20 min。（4）用无血清的DMEM将培养皿中的细胞清晰干净，至少2次 （5）向培养皿中加入3 ml无血清DMEM （6）向培养皿中加入a和b的混合液（成点状均匀加入） （7）放入细胞培养箱作用6 h。 4 下午三点对转染细胞进行换液：弃去无血清DMEM后每个60 mm培养皿加入4 ml 含10%血清的DMEM，18 h后接毒。
各种除尘器的优缺点及比较除尘器可分为两大类：①干式除尘器：包括重力沉降室、惯性除尘器、电除尘器、布袋除尘器、旋风除尘器。②湿式除尘器：包括喷淋塔、冲击式除尘器、文丘里洗涤剂、泡沫除尘器和水膜除尘器等。目前常见的运用最多的是旋风分离器、静电除尘器与布袋除尘器。 下面对各种除尘器做简要介绍： 一、干式除尘器 干式除尘器不需要用水作为除尘介质，占所有除尘系统的90%以上。干式除尘器特点：使用范围广，大多数除尘对象都可以使用干式除尘器，特别是对于大型集中除尘系统而言；粉尘排出的状态为干粉状，有利于集中处理和综合利用。其缺点是：不能去除气体中的有毒、有害成分；处理不当时容易造成二次扬尘。需要注意的是：处理相对湿度高的含尘气体或高温气体时，需采取防结露撒旦施，否则易产生粉尘黏结、堵塞管道的现象。湿式除尘器，用水作为净化介质。 1、重力除尘 原理：利用粉尘与气体的比重不同的原理，使扬尘靠本身的重力从气体中自然沉降下来的净化设备，通常称为沉降室。它是一种结构简单、体积大、阻力小、易维护、效率低的比较原始的净化设备，只能用于粗净化。重力降尘室的工作流程：含尘气体从一侧以水平方向的均匀速度V进入沉降室，尘粒以沉降速度V0独立沉降，运行t时间后，使尘粒沉降于室底。净化后的气体，从另一侧出口排出。 2、惯性除尘
惯性除尘器也叫惰性除尘器。它的原理是利用粉尘与气体在运动中惯性力的不同，将粉尘从气体中分离出来。一般都是在含尘气流的前方设置某种形式的障碍物，使气流的方向急剧改变。此时粉尘由于惯性力比气体大得多，尘粒便脱离气流而被分离出来，得到净化的气体在急剧改变方向后排出。这种除尘器结构简单，阻力较小，净化效率较低(40-80％)，多用于多段净化时的第一段，捕集10-20m 以上的粗尘粒。压力损失依类型而定，一般为100-1000Pa。 3、旋风分离器 工作原理：含尘气体从入口导入除尘器的外壳和排气管之间，形成旋转向下的外旋流。悬浮于外旋流的粉尘在离心力的作用下移向器壁，并随外旋流转到除尘器下部，由排尘孔排出。净化后的气体形成上升的内旋流并经过排气管排出。应用范围：旋风除尘器适用于净化大于5-10微米的非粘性、非纤维的干燥粉尘。它是一种结构简单、操作方便、耐高温、设备费用和阻力较低的净化设备，旋风除尘器在净化设备中应用得最为广泛。旋风除尘器它具有结构简单，体积较小，不需特殊的附属设备，造价较低．阻力中等，器内无运动部件，操作维修方便等优点。旋风除尘器一般用于捕集5-15微米以上的颗粒．除尘效率可达80％以上，近年来经改进后的特制旋风除尘器．其除尘效率可达85％以上。旋风除尘器的缺点是捕集微粒小于5微米的效率不高。 4、布袋除尘 工作原理：含尘气流从下部孔板进入圆筒形滤袋内，在通过滤料
各种转染试剂的中文转染方法 FuGENE6（Roche）转染步骤： 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。 2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。 3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。 4. 室温孵育20分钟。 5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。 6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。 7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。 Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）： 1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。 3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。 4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放置20分钟。 5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入2 ml无血清配养基。 6. 直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。 中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。 7. 在37℃，5％CO 2 或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。 8. 在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。 贴壁细胞的稳定转染： 转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。 Lipofectamine 2000转染试剂转染步骤（24孔板）：
两种转染试剂转染 C2C12 细胞效率比较分精品论文 两种转染试剂转染 C2C12 细胞效率比较分 析 韦伟，赵元元，张维娅，赵书红，李新云 5 ,农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室～华中农业大学～武汉 430070, 摘 要:C2C12 细胞是鼠的骨骼肌成肌细胞～常用于体外研究肌细胞成肌分化～研 究表明 C2C12 细 胞的转染效率较低～为了提高 C2C12 细胞的转染效率～建立理想的转染条件 ～本研究对 比分析了 FuGENE HD 和 Lipofectamine 2000 两种常用转染试剂的转染效 率。研究结果表明 10 FuGENE HD 转染寡核苷酸的效率比 Lipofectamine 2000 高～而转染 质粒的效率比 Lipofectamine 2000 低。另外我们还发现培养基中的血清会降低细胞的转染 效率。本研究结 果为提高 C2C12 细胞的转染效率提供了新的信息。 关键词:转染效率,寡核苷酸,质粒,C2C12 细胞 中图分类号:Q-33 15 Compare analysis of the transfection efficiency of two transfection regents in C2C12 Cells
Wei Wei, Zhao Yuanyuan, Zhang Weiya, Zhao Shuhong, Li Xinyun (Key Lab of Agricultural Animal Genetics, Breeding and Reproduction of Ministry of Education, 20 Huazhong Agricultural University, WuHan 430070) Abstract: C2C12 cells are the myoblast of mice, which are used as the model for investigating the differentiation of myoblast in vitro. The transfection efficiency of the C2C12 cells was not good in many studies. In order to improve the transfection efficiency of C2C12 cells and contribute an ideal condition of transfection. The transfection efficiency of two transfection reagents, FuGENE 25 HD and Lipofectamine 2000, was analyzed in this study. According the results, the transfection efficiency of FuGENE HD was higher than that of Lipofectamine 2000 when oligo nucleic acids was transfected, but it was lower than Lipofectamine 2000 when plasmid was transfected in the C2C12 cells. Also, we found that serum in cultured medium could inhibit the transfection efficiency. These results offered useful information for improving the transfection efficiency of 30 C2C12 cells. Key words: transfection efficiency; oligo nucleic acids; plasmid; C2C12 cells 0 引言 简转染是指将外源遗传物质转入到真核细胞内的过程。转染对现代分子生物学研究意义
RNAi or siRNA Transfection 以24孔板为例，其余规格的转染见表1 1 中板，细胞密度为30-50%适宜。 注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。 2 第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下： A 将20pmol siRNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。 B 将1ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C 将A B两管混合，放置20min。 3 转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。 Plasmid DNA Transfection DNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3 转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。 1 中板。 贴壁细胞：0.5-2X105 cells/well，第二天待细胞密度达到90%以上时转染 悬浮细胞：4-8X105 cells/well，中板后随即转染。 2 转染。 A 将0.8ug DNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。 B 将2ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C 将A B两管混合，放置20min。 转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix
加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。 Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection 中板密度*Culture vessel Surf. area per well Vol. of plating medium Vol. of dilution medium DNA Lipofectamine ?2000 cell/well 96-well0.3cm2100ul2X25ul0.2ug0.5ul 0.5-2X105 cell/well 24-well2cm2500ul2X50ul0.8ug 2.0ul 1-3X105 cell/well 12-well4cm21ml2X100ul 1.6ug 4.0ul 2-3X105 cell/well 6-well (35mm) 10cm22ml2X250ul 4.0ug**10ul 8-10X105 cell/dish 60mm20cm24ml2X0.5ml8.0ug***20ul 2-3X106 cell/dish 10cm60cm215ml2X1.5ml24ug60ul *：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参
各种转染方法比较 转染方法原理主要应 用 特点主要的厂家及产品 DEAE－葡聚糖法带正电的DEAE-葡聚糖与核酸 带负电的磷酸骨架相互作用形成 的复合物被细胞内吞 瞬时转 染 相对简便、重复比磷酸钙好,但对细 胞有一定的毒副作用,转染时需除血 清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS 细胞系 Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit) DNA复合物吸附细胞膜稳定转 染,染瞬 转染 不适用于原代细胞（所需的DNA浓 度较高）,操作简便但重复性差,有些 细胞不适用 细胞建议用CSCL梯度离心，转染 是拷贝数较多 GIBCO BRL，Promega 阳离子脂质体法带正电的脂质体与核酸带负电的 磷酸基团形成复合物，然后脂质 体上剩余的电核与细胞膜上的唾 液酸残基的负电核结合；另一种 解释是通过细胞是内吞作用而被 进入细胞。(若DNA浓度过高， 中和脂质体表面电核，而降低了 与细胞的结合能力) 稳定转 染,瞬时 转染,所 有细胞 使用方法简单，可携带大片段DNA， 通用于各种类型的裸露DNA或 RNA，能转染各种类型的细胞，没 有免疫原性。虽在体外基因转染中 有很高的效率，但在体内，能被血 清清除，并在肺组织内累积，诱发 强烈的抗炎反应，导致高水平的毒 性，这在很大程度上限制了其应用 Invitrogen（Lipofectamine 2000，Lipofectamine， Lipofectin，Lipofectamine Plus，Cellfectin） Roche（Dosper，DOTAP，FuGENE 6） CPG Biotech Co（GeneLimo Plus，GeneLimo Super） Promega（Transfast，Tfx， Transfectam）
布袋除尘器与静电除尘器基本性能比较
布袋除尘器与静电除尘器基本性能比较 烟尘是造成大气污染的主要原因之一，减少大气污染的根本措施就是减少有害物质向大气的排放。目前国家环保标准趋于严格，对污染物排放征收的费用和要求也越来越高。过去只要达标就可以免缴排污费，而且排放标准要求也比较低，电厂相对也比较容易实现达标排放。现在排放标准提高了，采用静电除尘器达标就相对比较困难，而且即使达标了，也会对污染物排放征收排放费。因此，燃煤电厂在选择锅炉烟气净化设备时必须考虑这些客观因素。 燃煤电厂在考虑选择除尘技术时，应充分考虑经济性、可靠性、适用性和社会性等方面的影响。除尘技术的确定受到当地条件、现场条件、燃烧煤种特性、排放标准和需要达到的除尘效率等多种因素的影响。 针对目前环保要求、污染物排放费用的征收情况以及静电除尘器和布袋除尘器在性能上的差异和在各行各业应用的实际情况，对两种除尘器在实际应用中的基本性能做一个简单客观的对比： 一、除尘效率 众所周知，布袋除尘器比静电除尘器有更高的收尘效率，尤其对人体有严重影响的重金属粒子及亚微米级尘粒的捕集更为有效。通常除尘效率可达99.99%以上，排放烟尘浓度能稳定低于50mg/Nm3，甚至可低于10 mg/Nm3，几乎实现零排放。 从目前电力行业燃煤锅炉应用的情况来看，布袋除尘器的排放能保证在30 mg/Nm3一下。××电厂两台300MW机组的锅炉烟气净化
采用了布袋除尘器，从CEMS系统长期自动监测的结果和权威检测单位的测试人员手工采样测试的结果来看，排放浓度均低于27 mg/Nm3。 随着国家环保标准的进一步提高和越来越多的电厂燃用低硫煤（或者经过了高效脱硫），对静电除尘器而言，即使达标也变得越来越困难。而布袋除尘器其高效的过滤机理决定了它不受燃烧煤种物化性能变化的影响，具有稳定的除尘效率。针对目前国家环保的排放标准和排放费用的征收办法，布袋除尘器所带来的经济效益是显而易见的。 二、燃煤及锅炉系统变化对除尘器的影响 燃煤电厂的煤种相对稳定，但也不能避免遇到煤种或煤质发生变化的时候：锅炉系统是一个时时变动和调节的系统，因此从锅炉出来的烟气物化性能、烟尘浓度、温度等参数也不能保证不发生变化、这一系列的变化，针对不同的除尘器会引起明显不同的变化。下面从主要的几个方面进行对比： 2.1 送引风机风量不变，锅炉出口烟尘浓度变化 ◎对布袋除尘器：烟尘浓度的变化只引起布袋除尘器滤袋负荷的变化，从而导致清灰频率改变（自动调节）。烟尘浓度高，滤袋的上灰速度快，相应的清灰频率高，反之清灰频率低，而排放浓度不会引起变化。 ◎对静电除尘器：烟尘浓度的变化直接影响粉尘的荷电量，因此也就直接影响了静电除尘器的除尘效率，最终反映在排放浓度的变
转染和转化的区别 转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。 基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。 转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。通过感染方式将外来DNA 引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。转染是转化的一种特殊形式。 基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。 载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。 转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。 感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。 转导:指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。 转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。 基因转染 基因转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。 基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，
精心整理 滤筒除尘器与布袋除尘器比较 滤筒除尘器布袋除尘器 净化原理采用过滤面积较大的滤筒进行过采用布袋进行过滤粉尘，将粉尘与 滤粉尘，将粉尘与洁净空气分开。洁净空气分开。 除尘器1、净化效率高，对亚微米级的粉尘有1、净化效率中等，对微米级的粉 特点99.9%的净化效率；尘有 99.5%的净化效率； 2、单个滤筒的过滤面积较大，使整个2、单个布袋的过滤面积较小，使 设备的体积较小，占地面积小，设整个设备的体积较大，占地面 备重量轻；积大，设备重量重； 3、滤筒结构紧凑，使用寿命长；3、布袋厚度薄，使用寿命短； 4、设备结构简单，滤筒数量少，使设4、设备结构复杂，布袋数量多， 备检修保养方便简单；使设备检修保养复杂困难； 5、设备能耗低，运行阻力低；5、设备能耗高，运行阻力高； 6、可根据安装实际面积组装成所需6、设备尺寸固定，安装位置由设 尺寸的设备；备尺寸确定； 7、设备价格中等；7、设备价格中低； 8、设备运行费用低，基本不需专人管8、设备运行费用高，需专人管理； 理。9、设备运行存在安全隐患。 9、设备运行稳定、安全、阻燃。 清灰方式灰桶收集、螺旋输送、出灰车等灰桶收集、螺旋输送、出灰车等 处理风量1、主风机功率： 7.5kw1、主风机功率： 11kw 为2、设备尺寸： 1000×3430×19002、设备尺寸： 2000×1100×8000 3 3、设备重量： 1000kg3、设备重量： 1350kg 10000m/h 的除尘器4、滤筒数量： 12 个4、布袋数量： 35 个 参数 22 5、过滤面积： 240m5、过滤面积： 66m 6、脉冲阀数量： 6 个6、脉冲阀数量： 10 个 7、滤筒规格：Ф350× L6607、布袋规格：Ф120× L5000
FuGENE6（Roche）转染步骤: 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总 体积到100ul。 2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。 3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。 4.室温孵育20分钟。 5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液 洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。 6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。 7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。 Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）： 1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。 细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释 4.0ugDNA，轻轻混匀。 3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如 OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。 Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。 NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。 4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放 置20分钟。 5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入 2ml无血清配养基。 6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
各种除尘器的优缺点及比较 除尘器可分为两大类：①干式除尘器：包括重力沉降室、惯性除尘器、电除尘器、布袋除尘器、旋风除尘器。②湿式除尘器：包括喷淋塔、冲击式除尘器、文丘里洗涤剂、泡沫除尘器和水膜除尘器等。目前常见的运用最多的是旋风分离器、静电除尘器与布袋除尘器。 下面对各种除尘器做简要介绍： 一、干式除尘器 干式除尘器不需要用水作为除尘介质，占所有除尘系统的90%以上。干式除尘器特点：使用范围广，大多数除尘对象都可以使用干式除尘器，特别是对于大型集中除尘系统而言；粉尘排出的状态为干粉状，有利于集中处理和综合利用。其缺点是：不能去除气体中的有毒、有害成分；处理不当时容易造成二次扬尘。需要注意的是：处理相对湿度高的含尘气体或高温气体时，需采取防结露撒旦施，否则易产生粉尘黏结、堵塞管道的现象。湿式除尘器，用水作为净化介质。 1、重力除尘 原理：利用粉尘与气体的比重不同的原理，使扬尘靠本身的重力从气体中自然沉降下来的净化设备，通常称为沉降室。它是一种结构简单、体积大、阻力小、易维护、效率低的比较原始的净化设备，只能用于粗净化。重力降尘室的工作流程：含尘气体从一侧以水平方向的均匀速度V进入沉降室，尘粒以沉降速度V0独立沉降，运行t时间后，使尘粒沉降于室底。净化后的气体，从另一侧出口排出。 2、惯性除尘
惯性除尘器也叫惰性除尘器。它的原理是利用粉尘与气体在运动中惯性力的不同，将粉尘从气体中分离出来。一般都是在含尘气流的前方设置某种形式的障碍物，使气流的方向急剧改变。此时粉尘由于惯性力比气体大得多，尘粒便脱离气流而被分离出来，得到净化的气体在急剧改变方向后排出。这种除尘器结构简单，阻力较小，净化效率较低(40-80％)，多用于多段净化时的第一段，捕集10-20m 以上的粗尘粒。压力损失依类型而定，一般为100-1000Pa。 3、旋风分离器 工作原理：含尘气体从入口导入除尘器的外壳和排气管之间，形成旋转向下的外旋流。悬浮于外旋流的粉尘在离心力的作用下移向器壁，并随外旋流转到除尘器下部，由排尘孔排出。净化后的气体形成上升的内旋流并经过排气管排出。应用范围：旋风除尘器适用于净化大于5-10微米的非粘性、非纤维的干燥粉尘。它是一种结构简单、操作方便、耐高温、设备费用和阻力较低的净化设备，旋风除尘器在净化设备中应用得最为广泛。旋风除尘器它具有结构简单，体积较小，不需特殊的附属设备，造价较低．阻力中等，器内无运动部件，操作维修方便等优点。旋风除尘器一般用于捕集5-15微米以上的颗粒．除尘效率可达80％以上，近年来经改进后的特制旋风除尘器．其除尘效率可达85％以上。旋风除尘器的缺点是捕集微粒小于5微米的效率不高。 4、布袋除尘 工作原理：含尘气流从下部孔板进入圆筒形滤袋内，在通过滤料的孔