Champy固定液
Champy’s Fluid
编码名称规格
北京华越洋GT21201Champy固定液100ml，500ml
【Champy固定液简介】
Champy固定液主要用于固定线粒体和高尔基复合体。该固定液穿透能力差，组织块应小。固定时间6-24h，固定后流水冲洗过液。
【Champy固定液的运输及保存】
常温运输，室温保存，有效期一年。
【Champy固定液相关产品推荐】
Bouin固定液,Bouin氏固定液：特别适用于睾丸活检组织的固
定。
戊二醛固定液
Zetterqvist固定液
组织细胞固定液
AAF固定液：广泛用于动植物组织的固定和各种实验检测,植物固定则是首选.固定液渗透均一,速度很快.固定时间一般为4~24h.
此液处理后,染色结果细腻,但酸性染料着色力下降.本液配制后可以短时间放置.
卡诺氏固定液，Carnoy Fluid：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
B5固定液：多用于固定淋巴组织。
乙醇-甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
Schaffer氏甲醛—酒精固定液：此液对固定肥大细胞颗粒及粘液效果良好。
Zamboni固定液：用于免疫组化和免疫电镜的首选固定液，保存细微结构和抗原特性最好的固定液之一。
常用固定液及其配制 固定液分单纯固定液和混合固定液。 1甲醛（formaldehyde） 是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。 10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。 经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。 2 乙醇 无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。 3 中性甲醛液（混合固定液） 甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。 4 AF液（混合固定液） 95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。 此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。 以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。 yzbai wrote: （1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。 （2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。
常用溶液及其配制 1.非电解质溶液 常用5%～10%葡萄糖液，前者为等渗液，后者为高渗液。但由于葡萄糖输入体内后被迅速代谢成二氧化碳和水同时释放能量，或转化糖原储存，不能维持有效渗透压，故输液时不计算其张力，只用于供给水分及能量。 2.电解质溶液 （1）0.9%氯化钠（生理盐水）：每升含Na+和Cl-各为154mmol，与血浆离子渗透压相似为等渗液，但钠、氯之比为1：1，与人体血浆钠（142mmol）、氯（103mmol）的比例不同（血浆钠、氯比例约3：2），若大量或长期单独补给可使血氯增高，造成高氯性酸中毒。若用2份生理盐水和1份1.4%碳酸氢钠，配成2：1溶液，则钠氯之比为3：2较符合血浆。 （2）碱性液体：常用于纠正酸中毒也可配置其他溶液。①1.4%（1/6M）碳酸氢钠是等渗液，成品为5%，用5%～10%葡萄糖稀释3.5倍后，即为等渗液。1.4%碳酸氢钠4ml/kg或5%碳酸氢钠1ml/kg，可提高二氧化碳结合力1mmol/L，此为小儿纠酸的首选。②11.2%乳酸钠，稀释6倍，浓度1.87%（1/6M）时为等渗液。乳酸钠需在有氧情况下，经肝脏分解产生HCO3-而发挥作用，故小儿期纠酸不宜作为首选。 （3）10%氯化钾：纠正低血钾用。 3.混合溶液 将几种液体按不同比例配制成各种混合溶液，使之更适合于不同性质脱水补液的要求。 （1）2：1等渗液：为2份生理盐水与1份1.4%碳酸氢钠或1.87%乳酸钠。该液体有利于补充血容量，常用于低渗性脱水或重度脱水的扩容。 （2）4：3：2液：为4份生理盐水、3份5%～10%葡萄糖液、2份1.4%碳酸氢钠或1.87%乳酸钠。2/3张液。常用于中度以上或低渗性脱水。 （3）2：3：1液：为2份生理盐水、3份5%～10%葡萄糖液、1份1.4%碳酸氢钠或1.87%乳酸钠。1/2张液。常用于轻、中度等渗性脱水。 （4）维持液：为4份5%～10%葡萄糖液、1份生理盐水，并含0.15%氯化钾的混合液。常用于高热、肺炎等的维持输液。 （5）口服补液盐其成分为氯化钠0.35g、碳酸氢钠0.25g、氯化钾0.15g、葡萄糖2g、水100ml.2/3张液。用于口服补液。
常用标准溶液配制方法
1
2一般规定 本标准中所用的水，在没有注明其他要求时，应符合GB6682中三级水的标准。 本标准中所用试剂的纯度应在分析纯以上。 工作中所用的分析天平的砝码、滴定管、容量瓶及移液管均需定期校正。 本标准中标定时所用的基准试剂为容量分析工作基准试剂；制备标准溶液是所用的试剂为分析纯以上试剂。 本标准中所制备的标准溶液的浓度均指20c 时的浓度。在标定和使用时，如温度有差异，应只能附录A（补充件）补正。 “标定”或“比较”标准溶液浓度时，平行试验不得少于8次，两人各作4平行，每人4平行测定结果的极差与平均值之比不得大于0.1%。两人测定结果的差值与平均值之比不得大于0.1%，最终取两人测定结果的平均值。浓度值取四位有效数字。 本标准中凡规定用“标定”和“比较”两种方法测定浓度时，不得略去其中的任何一种，且两种方法测得的浓度值之差值与平均值之比不得大于0.2%，最终以标定结果为准。
制备的标准溶液与规定浓度之差不得超出规定浓度的+—5%。。 配制浓度等于或低于0.02mol/L 标准溶液时乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液除外，应于临用前将浓度高的标准溶液用煮沸并冷却的水稀释，必要时重新标定。 碘量法反应时，溶液的温度不能过高，一般在15~20c之间进行滴定。 滴定分析（容量分析）用标准溶液在常温（15~25）下，保存时间一般不得超过两个月。 3标准溶液的制备和标定 4.1 氢氧化钠标准溶液（使用期：2个月） c(NaOH) = 1 mol/L c(NaOH) =0.5 mol/L c(NaOH) =0.1 mol/L 4.1.1 配制 称取110g氢氧化钠，溶于100ml无二氧化碳的水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管吸下述规定体积的上层清夜，用无二氧化碳的水稀释至1000ml，摇匀。 c(NaOH) ，mol/L 氢氧化钠饱和溶
7、常用固定剂的种类和配方是什么？ （1）4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4（多聚甲醛40g，0.1mol/LPBS液pH7.4500ml，两者混 合加热至60℃，搅拌并滴加1NNaOH至清晰为止，冷却后加PBS液至总量1000ml）。 （2）10%中性缓冲福尔马林液（浓甲甲醛10ml，0.01mol/lpH7.4PBS90ml）。 （3）100%冰丙酮。 （4）戊二醛-甲醛液（戊二醛1ml，浓甲醛10ml，蒸馏水加至100ml）。 （5）甲醛升汞固定液（即B5固定液。浓甲醛10ml，氯化汞6g，醋酸钠1.25g，蒸馏水90 ml）。 （6）醋酸-甲醛液（浓甲醛10ml，冰醋酸3ml，生理盐水加至100ml）。 （7）Bouin’s液。 （8）Zamboni’s液。采用2.5%多聚甲醛和30%饱和苦味酸，更可增加对组织穿透力和固定效果，以保存更多的组织抗原。 （9）PLP液（过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液）。 （10）碳化二亚胺（1-ethyl-3（3-dimethyl-aminopropyl）cardodiimi-HCI）液：2g溶于100 ml0.01mol/L，pH7.4PBS中。此液宜用于标记多肽类激素的组织，对标记IgA、IgG效果不佳。 （11）碳二亚胺-戊二醛液（ECD-G液）。 （12）Zenker’s液（重铬酸钾2.5g，氯化汞5g，硫酸钠1g，蒸馏水100ml，混合溶解后，临用时加水醋酸5ml）。 （13）Clarke氏改良剂（100%酒精95ml，冰醋酸5ml），用于冰冻切片的后固定。 （14）乙醚（或氯仿）与乙醇等量混合液。 （15）AAF液：95%-100%酒精85ml，冰醋酸5ml，浓甲醛10ml。 （16）Carnoy氏液：100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合后4℃保存备用。
气相色谱柱常用的固定液 气相色谱柱常用的固定液 一、非极性 1、100%Dimethyl polysiloxane，100%聚二甲基硅氧烷，商品名：AC1，OV-101，OV-1，DB-1，SE-30，HP-1，RTX-1，BP-1 二、弱极性 2、5%Phenyl dimethyl polysiloxane, 5%二苯基(95%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC5，SE-52， 3、5% Phenyl 1%vinyl dimethyl polysiloxane，5%二苯基1%乙烯基(94%)二甲基聚硅氧烷，商品名：OV-5，DB-5，SE-54，HP-5，RTX-5，BP-5 注：2、3常无严格区分，通常混称。 三、中等极性 4、50%Phenyl dimethyl polysiloxane, 50%二苯基(50%)二甲基聚硅氧烷，商品名：OV-17，HP-50，RTX-50 5、14%Cyanopropyl phenyl polysiloxane, 14%氰丙基苯基(其中7%氰丙基7%苯基)(86%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC10，OV-1701，DB-1701，RTX-1701 6、50% Cyanopropyl phenyl polysiloxane，50%氰丙基苯基(其中25%氰丙基25%苯基)(50%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC225，OV-225，BP-225，DB-225，HP-225，RTX-225 四、强极性 7、polyethylene glycol,聚乙二醇，商品名：AC20，PEG20M，HP-INNOWAX(FFAP 是其与2-硝基对苯二甲酸的反应产物) 常用毛细管色谱柱对应表 SE-30、OV-1，化学组成：100%甲基聚硅氧烷（胶体），所属极性：非极性，适用范围：碳氢化合物、农药、酚、胺，对照牌号：DB-1、BP-1、007-1、SPB-1 、RSL-150、CPSRL-5 、HP-1. OV-101,化学组成：100%甲基聚硅氧烷（流体）,所属极性：非极性 ,适用范围：氨基酸、碳氢化合物、药物胺 ,对照牌号：HP-100、SP-2100 SE-52、SE-54,化学组成：5%苯基聚硅氧烷、1%乙烯基 5%苯基甲基聚硅氧烷 ,所属极性：弱极性 ,适用范围：多核芳烃、酚、酯、碳氢化合物、药物胺,对照牌号：DB-5 、BP-5、SPB-5、007-2 、OV-73、CPSIL-8、RSL-120 、HP-5. OV-1701,化学组成：7%氰丙基、7%苯基甲基聚硅氧烷,所属极性：中极性,适用范
常用固定液的配制 1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA) 50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml 可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。此液又可作保存液。固定时间最多10h。如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml 2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA） 福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml 固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。 3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative） 配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份 配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份 配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份 适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。固定时间不宜过久。 4. 酒精-福尔马林固定液 福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml 固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。通常固定24h，亦可长久保存。 5. 酒精-福尔马林-甘油固定液 95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml 此液也可长期储存材料。 6. 铬酸-醋酸固定液 根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方： （1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml （2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml （3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml 弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。固定时间较短，一般为。1h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至12~24h数小时，最长可固定 中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。为了易于渗透，可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。固定时间12~24h。 强液配方用于固定木质根、茎、成熟子房等。为了易于渗透，可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。固定时间12~24h或更长。 7. 铬酸-醋酸-福尔马林混合液 这3种药品混合在一起所配成的各种固定液，通常称纳瓦申固定液（Nawashin fixative），简称Craf。配方见下表： 纳瓦申固定(ml) 桑弗利斯纳瓦 常备(ml)原(ml) Ⅰ40 40
6 种固定液短时间固定对冰冻切片制片效 果影响 冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。由于其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。但在冰冻切片制过程中影响制片的质量因素较多，从而影响手术中的快速病理诊断。因此，快速制作一张高质量的冰冻切片对于确保病理诊断极其重要。 其中固定是冰冻切片制作中关键步骤之一，对切片的制片质量有着重要的影响。本文通过6种不同固定液短时固定对冰冻切片制片染色的比较，探讨不同固定液对冰冻切片制片效果的影响。 1资料与方法 1.1材料 选自病理科手术切除的新鲜组织标本40例，包括有乳腺、甲状腺、胃、子宫、卵巢等组织。 1.2固定液 6种固定液分别为：10%福尔马林；95%酒精；AF固定液；丙酮∶甲醇∶乙醚酒精（乙醚∶酒精1∶1）。 1.3方法 1.3.1 取材及切片取材大小为1.5cm×1.5cm，厚2～3mm的新鲜组织，用OCT包埋剂包埋后，放进徕卡冰冻切片机（温度-18℃～20℃），1～2min后，每例标本连续切片各6张，厚度4～5μm。 1.3.2 固定及染色切片后立即放进上述6种不同的固定液（室温20～25℃）固定6s。将固定过的切片用蒸馏水洗30s，放进改良的GILL苏木素液（预先放在65°恒温水域箱加热）2min，自来水洗，1%盐酸酒精分化液分化10s，温水（50℃）蓝化30s，伊红染色30s，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。2结果切片制作好后，通过对6种不同固定液的对比，在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表1。
表16种不同固定液的对比 1. 3. 1 取材及切片取材大小为1. 5 cm × 1. 5 cm，厚2 ~ 3 mm 的新鲜组织，用 OCT包埋剂包埋后，放进徕卡恒温冷冻切片机（温度-18°C ~ 20°C ），1 ~ 2 min 后，每例标本连续切片各6 张 ,厚度4 ~ 5 μ m 。 1. 3. 2 固定及染色切片后立即放进上述 6种不同的固定液（室温20 ~ 25°C ）固定 6s。将固定过的切片用蒸馏水洗 30 s，放进改良的GILL 苏木素液（预先放在65° 恒温水域箱加热）2 min，自来水洗,1%盐酸酒精分化液分化 10 s，温水（50°C ） 蓝化30 s，伊红染色30 s，梯度酒精脱水，二甲苯透明, 中性树胶封片。 2结果 切片制作好后，通过对6种不同固定液的对比,在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表 1 。 从观察结果显示，在 6 种固定液固定的冰冻切片中，经乙醚酒精固定后的冰冻切片，镜下组织细胞形态清晰，细胞无收缩，细胞核、细胞浆染色鲜艳，核浆对比良好。甲醇固定的冰冻切片质量次之。95%酒精固定的切片，除细胞明显收缩外，组织结构较清晰,细胞染色尚可。丙酮和AF液固定的冰冻切片，组织结构较清晰度稍差，细胞浆染色及核浆对比均差, 而且丙酮固定的细胞收缩较为严重。10%福尔马林固定的冰冻切片组织清晰度、细胞核染色、细胞浆染色及核浆比均差，同时细胞肿胀，尤其是细胞核明显肿胀、模糊。 3 讨论 冰冻切片的目的是在短时间内作出准确的病理诊断，协助临床医生确定病变的范围，决定手术的范围，因此，必须尽一切可能争取时间，争取尽快早出切片，并保证质量，所以快速制作一张高质量的冰冻切片非常重要。中华医学会规定完成冰冻HE 染色切片制备时间通常为20~25min，在冰冻切片制片中，固定液的选择及固定的
几种细胞固定方法 选择最佳固定液标准是： （1）最好地保持细胞和组织的形态结构； （2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的； （3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会使上皮细胞产生非特异性荧光； （4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。 单纯固定液 （1）4%中性甲醛固定液： 最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。 （2）乙醇固定液： 使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。 （3）4%多聚甲醛固定液： 主要用于培养细胞的固定。 混合固定液 （1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液： 适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。 （2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液： 多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。 （3）Bouin固定液： 非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。 （4）Carnoy固定液： 穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。 （5） Zenker固定液： 经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
Bouin固定液 Bouin氏液是组织化学中最常用的混合型固定液之一，由苦味酸饱和液（1.22%）、甲醛和冰醋酸按15:5:1的比例混合而成。此固定液对大多数组织固定效果良好。 它具有下列特点： 1.其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，染色效果好。 2.适用范围广，特别适合于富含结缔组织的标本和胚胎标本。能够软化皮肤角质，并可以用于植物组织的固定。 3.因为本产品含有苦味酸，会溶解火棉胶，所以如果用于火棉胶包埋，必须进行洗脱苦味酸处理。标本尺寸不可太大，一般窄边不大于5 mm。 使用方法：1.标本修块，厚度一般不超过5 mm，置入本产品内固定8 ~ 24 h（根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异）。 2固定后用70%-80%乙醇洗涤。 Bouin氏液是常用的混合固定液配方： 苦味酸饱和液（1.22%）75ml 福尔马林25ml 冰醋酸5ml Bouin固定液使用方法 1.标本修块，厚度一般不超过5 mm，置入本产品内固定8 ~ 24 h（根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异）。 2.固定后用70%-80%乙醇洗涤。 Bouin固定液关联产品 Zenker固定液；Helly固定液； Carnoy固定液；Karnovsky固定液 此液一般在临床用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。没有很好的固定就无法染色，所以，一种好的固定液是细胞观察的重点。 当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对lgA ，lgM，J链，K链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交
实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl , , 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。 2)10×TE Buffer , , 组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法： 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 3)1.5 M Tris-HCl 组份浓度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。 4)3 M 醋酸钠 组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml 配制方法： 1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至 3.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保存。 5)PBS Buffer 组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6)10 M 醋酸铵 组份浓度：10 M 醋酸铵 配制量：100 ml 配制方法：
附录一免疫细胞化学常用试剂介绍 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m 配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液
不同类型载冷剂之间的对比 1盐水：即氯化钙或氯化钠的水溶液,可用于盐水制冰机和间接冷却的冷藏装置，或冷却袋装食品。盐水的凝固温度随浓度而变，当溶液浓度为29.9%时,氯化钙盐水的最低凝固温度为-55℃;当溶液浓度为22.4%时,氯化钠盐水的最低凝固温度为-21.2℃。使用时按溶液的凝固温度比制冷机的蒸发温度低5℃左右为准来选定盐水的浓度。氯化钙和氯化钠价格较低，对设备腐蚀性很大。 2丙二醇和乙二醇：性质稳定，与水混溶，其溶液的凝固温度随浓度而变，通常用它们的水溶液作为载冷剂，适用的温度范围为0-20。虽然乙二醇或丙二醇溶液的凝固点低，可达-50℃，但是低温下溶液的粘度上升非常迅速，因此，一般具有工业应用价值的温度为-20℃以上。其水溶液也有腐蚀性。 3水：它性质稳定、安全可靠，无毒害和腐蚀作用，流动传热性较好，还是廉价易得物质。不足之处在于凝固点为0°C，相对而言比较高。由于较高凝固点的限制使之只适用于工作温度在0℃以上的高温载冷场合。即在0°C以上的人工冷却过程和空调装置中，水是最适宜的载冷剂。如空气调节设备等。工业用的循环冷却水，温度一般在10-30℃。 4二氯甲烷和三氯乙烯：通常用它们的液体作为载冷剂。二氯甲烷的凝固温度为-97℃,适用温度范围为-50到-90℃。但是无论是二氯甲烷，还是三氯乙烯都具有以下明显的缺点:液体挥发性高，沸点低，因此损失很重，需要补充的量非常多;含氯元素，而氯元素非常活泼，容易脱落形成盐酸及盐酸盐，造成设备腐蚀;溶水性低，因此低温下容易造成管道及设备的冰堵、爆管等损害;传热系数低，有机物的传热系数均较低。目前针对此类有机物载冷剂，市场上通常选择替代品。 上述介绍的载冷剂存在很多缺点，冰河冷媒是非常专业的载冷剂，有效解决了长期以来盐水、乙二醇、酒精等载冷剂代用品所产生的三大难题：设备腐蚀生锈、载冷效能低下、使
生化实验常用溶液的配制 一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
谈谈固定液的使用 作者: liza3 (站内联系TA) 发布: 2013-01-11 当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型： Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。 Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。 Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。 Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。 上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。 （1）甲醛 甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.12。它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。 甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。 甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。 甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要. 从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点: 1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好. 2. 固定均匀,穿透力强. 3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片. 4. 能保存脂肪及脂类物质. 5. 成本较低. 虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不可能十全十美的,它也有许多缺点: 1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应. 2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色. 3. 可产生福尔马林色素,影响观察. 4. 不能固定尿酸和糖类物质. 5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸. 6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组
北京吉美生物技术有限公司 Carnoy固定液 产品简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 Jimei Carnoy固定液(Carnoy，s Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。适用于一般动物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h。其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。推荐用于RNA和DNA染色的组织固定，亦用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。由于该液穿透力强，亦可固定外膜致密不宜渗透的组织。组织固定后暂时不用，可置于70%乙醇中保存。 操作步骤（仅供参考） 1、一般小块组织固定30~40min。稍大块组织2~4h。如果组织块大，可适当延长固 定时间，但不宜超过24h。 注意事项： 1、Carnoy固定液对人体有一定的损害，请小心操作，不宜用于固定脂类染色的组织。 2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。
分子生物学常用溶液的配制（1）在配制溶液前，请先计算所配试剂中各成分的用量。
注意：①LB液体培养基常用于大肠杆菌增殖培养；②在LB培养基中，酵母提取物提供维生素和矿物质，蛋白胨提供碳源、氮源及能量，NaCl提供适当的渗透压；③不必定容，可直接加入200mL蒸馏水；④氨苄青霉素等抗生素受热易分解，必须在培养基经高压蒸汽灭菌、且温度降至50℃以下时加入。 （3）LB固体培养基的配制：清洗250mL三角瓶，称取适量的酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl，并称取3g琼脂粉，加入200mL蒸馏水，铝箔纸包扎封口后，待高压蒸汽灭菌。 注意：①LB固体培养基常用于大肠杆菌的纯化培养；②琼脂粉起固化的作用；不必定容，可直接加入200mL蒸馏水；③氨苄青霉素等抗生素受热易分解，必须在培养基经高压蒸汽灭菌、且温度降至50℃以下时加入。 （3）溶液I、II、III的配制：清洗适当容积的试剂瓶，称取适量粉末状的葡萄糖，选择适当量程的微量移液器，移取所需体积的母液。溶液I、III需要在最后用100mL量筒定容，待高压蒸汽灭菌。溶液II现用现配，室温下放置。 注意：①溶液I、II、III用于质粒的制备；②正确使用微量移液器。 （4）配制TE（pH8.0）溶液，待高压蒸汽灭菌。 注意：①TE溶液用于溶解各类DNA；②由于Tris-HCl和EDTA溶液为常用试剂，故常常先配制高浓度的储存液，4℃冰箱中保存备用；③由于0.5M Tris-HCl（pH8.0）和0.5M EDTA（pH8.0）均已调好pH值，配制pH8.0的TE溶液时不必再调节pH值；④正确使用微量移液器。 （5）配制10×TAE电泳缓冲液，待高压蒸汽灭菌。 注意：10×TAE电泳缓冲液为高浓度的储存液，使用时稀释10倍作为1×TAE工作液，电泳槽中添加电泳缓冲液和配制琼脂糖凝胶所用的电泳缓冲液浓度应一致，都使用1×TAE 工作液。 （6）配制6×上样缓冲液，待高压蒸汽灭菌。 注意：电泳上样前，取适量6×上样缓冲液与DNA样品（如质粒溶液、PCR产物、酶切产物等）混合，使上样缓冲液在混合物中的终浓度约为1×。 （7）配制EB储存液（10mg/mL），室温下保存。
几种常用的固定剂 固定剂最先应用在光学显微技术中，但光学显微镜中使用的沉淀凝集蛋白性的固定剂对电镜并不特别适用。于是人们引入四氧化锇和中性甲醛进行固定。早期的电镜生物样品化学固定法都采用四氧化锇单一固定，但四氧化锇不能很好地保存糖原和其它碳水化合物，而且四氧化锇在组织中的渗透速度比较慢（约2mm/h）。而早期使用的中性甲醛也令人很不满意，因为早期使用的甲醛很不纯，含有甲酸和甲醇的残留（一般有10-15％），甲醇的存在对样品的保存很不利，于是后来人们改进了甲醛的制备方法，使用多聚甲醛新鲜配制甲醛，提高了它的纯度。1963年Sabatini、Bensch和Barrnett推荐使用醛类（特别是戊二醛）作为初级固定剂。使用戊二醛或戊二醛-多聚甲醛初步固定后再使用四氧化锇后固定的双重化学固定对大多数动物和植物组织都十分有效，因而成为目前大多数实验室常规的固定方法。 电镜中使用的固定剂都有毒性，操作时都要很小心，尽可能在通风橱中完成操作。如果实验室中发生固定剂泄漏，必须立即用大量奶粉覆盖泄漏出来的溶液，待反应充分后收集处理。 四氧化锇（Osmium tetroxide） 四氧化锇是一种很强的氧化剂，呈浅黄色结晶，分子量254，饱和水溶液的浓度为7.24％，它的水溶液为中性，有极大毒性。市售有密封的四氧化锇晶体和四氧化锇水溶液两种。四氧化锇晶体溶于水的速度很慢，必要时可以使用超声波设备来加速溶解。市面上也有已经配制好的2％四氧化锇水溶液出售，使用相当方便。但要特别注意的是无论是四氧化锇晶体还是水溶液都会挥发出四氧化锇气体，因此应将四氧化锇置于密闭容器（玻璃容器）中保存。四氧化锇气体对呼吸系统有刺激，对眼睛有严重的破坏作用，因此在使用时应特别小心，尽可能在通风橱中进行，并且严格控制用量。废弃的四氧化锇溶液应加入酒精水溶液或硫酸亚铁溶液，使四氧化锇转化为黑色沉淀，以降低毒性方便收集处理。 四氧化锇作为固定剂有如下优点： 1,四氧化锇可以与脂类、糖类和蛋白质反应。其对脂类的固定作用可以补充醛类固定剂对脂类固定不足的缺点。其反应方程式如下：
48 ZHONGGUO YIXUEZHUANGBEI 科学研究 孙海梅① 尚宏伟① 张立新① 季凤清① 周德山①* [文章编号] 1672-8270(2011)10-0048-03 [中图分类号] R 361.2 [文献标识码] A Effects of different fixative for HE staining on rat spleen paraffin sections/ SUN Hai-mei ,SHANG Hong-wei, ZHANG Li-xin,et al // China Medical Equipment,2011,8(10):48-50. [Abstract] Objective: T o determine optimal HE staining procedures on rat spleen paraffin sections. Methods: Rat spleens were immersed in three different fixatives. Tissues were dehydrated with ethanol (70%, 80%,90%,95% and then 100%) followed by xylene. Next, the tissues were embedded in paraffin and cut into sections. Then the sections were used for HE staining. The staining effect was observed under the light microscope. Results: Each fixative caused differential HE staining patterns, with Helly fixative resulting in the best results. Conclusion: Helly fixative is the most effective fixative for HE staining.[Key words] Fixative; Spleen; Paraffin section; HE Staining [First-author's address] Department of Histology and Embryology, Capital University of Medical Sciences, Beijing 100069, China. [摘要] 目的：比较经不同固定液处理的大鼠脾石蜡切片HE染色效果，优化制作大鼠脾石蜡切片HE染色标本的最佳方法。方法：用3种不同的固定液处理大鼠脾脏组织，经上行梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片、HE染色，显微镜下观察，比较其染色效果，选择最佳的大鼠脾石蜡切片标本的制作方法。结果：不同的固定液处理的大鼠脾石蜡切片HE染色效果各有不同，经Helly固定液处理后的标本的染色效果最佳。结论：Helly固定液是制作大鼠脾石蜡切片HE染色标本的理想固定液。[关键词] 固定液；脾；石蜡切片；HE染色 作者简介孙海梅,女，(1974- ),本科学历，实验师。 首都医科大学组胚教研室，组织学与胚胎学研究工作。①首都医科大学组胚教研室 北京 100069*通讯作者：zhouds08@https://www.doczj.com/doc/a96299188.html, 脾脏是哺乳动物体内最大的淋巴器官，富含血管和血窦等。虽为实质性器官，但制作脾石蜡切片难度较大，每一个操作步骤均可影响最终的标本质量。其中固定液的选择尤为重要，直接影响最终的标本染色效果[1-2]。1 材料与方法 1.1 仪器设备和主要试剂[3] LEICA ASP 300自动脱水机。LEICA EG 1160自动包埋。LEICA RM 2235轮转式石蜡切片机。 LEICA AUTO STAINER XL自动染色机。LEICA Q550IW图像分析系统。主要试剂有中性福尔马林固 定液；Bouin固定液；Helly固定液；Ehrlich苏木精；1%伊红水溶液。1.2 实验动物 选用健康成年SD大鼠1只，雌雄不拘。2 实验方法2.1 取材和固定 大鼠经乙醚麻醉，剪断颈总动脉放血处死，以减少脾内多余的血液成分。为保持脾结构的完整性，取材时应格外小心，尽量减少金属器械触碰脾实质， 用镊子夹持脾周围的结缔组织，小心剥离剔除脾周围多余组织，切取一块近似等边三角形组织块，厚度为 中国医学装备2011年10月第8卷第10期 China Medical Equipment 2011 October Vol.8 NO.10