蛋白质的等电点测定及性质实验
一、实验目的
初步学会测定蛋白质等电点的基本方法，并了解蛋白质的性质。
二、实验原理
蛋白质分子是两性电解质，当调节溶液的酸碱度，使蛋白质分子上所带的正负电荷相等时，在电场中，该蛋白质分子既不向正极移动，也不向负极移动，这时溶液的pH值，就是该蛋白质的等电点（pI）。不同蛋白质，等电点不同。在等电点时，蛋白质溶解度最小，容易沉淀析出。因此，可以借助在不同pH溶液中的某蛋白质的溶解度来测定该蛋白质的等电点。
在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。蛋白质的盐析作用是可逆过程。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解。而重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。
三、试剂和器材
⑴高筋面粉、低筋面粉。
⑵ 1mol/L醋酸。（每组自配0.1mol/L醋酸、0.01mol/L醋酸）
⑶ 0.5%酪蛋白溶液。
称取2.5克酪蛋白，放入烧杯中，加入40℃的蒸馏水，再加入50毫升1N 氢氧化钠溶液，微热搅拌直到蛋白质完全溶解为止。将溶解好的蛋白溶液转到500毫升容量瓶中，并用少量蒸馏水洗净烧杯，一并倒入容量瓶。在容量瓶中再加入1N醋酸溶液50毫升，摇匀，再加蒸馏水定容至500毫升，得到略显混浊的、在0.1N NaAc溶液中的酪蛋白溶液。
⑷鸡蛋白溶液。
将80mL鸡蛋清与800mL蒸馏水混合均匀后，用洁净的多层湿纱布垫在漏斗上过滤，滤液即为鸡蛋白溶液（不能有不溶性物悬浮）。要现配现用，最好使用经过煮沸并封在容器中隔绝空气冷却的蒸馏水。
⑸质量分数为5%的CuSO
4
溶液。（每排3组合配）
⑹ (NH
4)
2
SO
4
饱和溶液。（确保有固体析出）
⑺天平、水浴锅、移液管、试管等。
四、操作步骤
1、蛋白质的等电点测定
⑴取5支同种规格的试管，编号，按表1顺序精确加入各种试剂，特别注意0.5%酪蛋白溶液最后加入，然后逐一振荡试管，使试管混合均匀。此时1、2、
3、4、5管的pH值依次为5.9、5.3、4.7、4.1、3.5。
⑵将上述试管静置于试管架上15min后，仔细观察，比较各管的浑浊度，将观察的结果记录于表格内，并指出酪蛋白的等电点。
注意：本试验各种试剂的浓度及用量均要求很准确，确保缓冲液的pH值准确；浑浊度可用－、＋、＋＋、＋＋＋等符号表示，最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。
3、当实验结果与已知发生较大误差时，试着分析其原因。