江南大学1990-2009年生物化学历年真题部分问答题答案

第 1 页 共 17 页 1、五只试剂瓶中分别装的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液,试用最简便的化学方法鉴别。

答:依次使用下列化学试剂进行鉴定

2、某一已纯化的蛋白无SDS 的凝胶电泳图如下所示,两种情况下的电极槽缓冲液都为8.2 从下面两副图给出的信息,有关纯化蛋白的结构你能得出什么结论?该蛋白的PI 是大于还是小于8.2?

答:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质时主要是根据各组分的pI 的差别。 图(a )的结果只呈现单一的带,根据题中给出的条件,表明该蛋白质是纯净的。 由于SDS 是一种带负电荷的阴离子去垢剂,并且具有长长的疏水性碳氢链。它的这种性质不仅使寡聚蛋白质的亚基拆离,而且还能拆开肽链的折叠结构,并且沿伸展的肽链吸附在上面。这样,吸附在肽链上的带负电荷的SDS 分子使肽链带净负电荷,并且吸附的SDS 量与肽链的大小成正比。结果是,不同大小的肽链将含有相同或几乎相同的q/r 值。由于聚丙烯酰胺凝胶基质具有筛分效应,所以,分子较小的肽链将比较大的、但具有相同的q/r 值的肽链迁移得更快。若蛋白质是由单一肽链或共价交联的几条肽链构成(在不含β-巯基乙醇的情况下),那么在用SDS 处理后进行SDS-PAGE ,其结果仍是单一的一条带。若蛋白质是由几条肽链非共价结合在一起,在用SDS 处理后进行SDS-PAGE ,则可能出现两种情况:一种仍是一条带,但其位置发生了变化(迁移得更快),表明此蛋白质是由几条相同的肽链构成,另一种可能出现几条带,则可以认为该蛋白质是由大小不同的几条肽链构成。图(b )的结果表明该蛋白质是由两种大小不同的肽链借非共健结合在一起的寡聚体蛋白质。从图(b )的电泳结果我们可以断定该蛋白质的等电点低于8.2。

答:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质时主要是根据各组分的pI 的差别。 图(a )的结果只呈现单一的带,根据题中给出的条件,表明该蛋白质是纯净的。 由于SDS 是一种带负电荷的阴离子去垢剂,并且具有长长的疏水性碳氢链。它的这种性质不仅使寡聚蛋白质的亚基拆离,而且还能拆开肽链的折叠结构,并且沿伸展的肽链吸附在上面。这样,吸附在肽链上的带负电荷的SDS 分子使肽链带净负电荷,并且吸附的SDS 量与肽链的大小成正比。结果是,不同大小的肽链将含有相同或几乎相同的q/r 值。由于聚丙烯酰胺凝胶基质具有筛分效应,所以,分子较小的肽链将比较大的、但具有相同的q/r 值的肽链迁移得更快。若蛋白质是由单一肽链或共价交联的几条肽链构成(在不含β-巯基乙醇的情况下),那么在用SDS 处理后进行SDS-PAGE ,其结果仍是单一的一条带。若蛋白质是由几条肽链非共价结合在一起,在用SDS 处理后进行SDS-PAGE ,则可能出现两种情况:一种仍是一条带,但其位置发生了变化(迁移得更快),表明此蛋白质是由几条相同的肽链构成,另一种可能出现几条带,则可以认为该蛋白质是由大小不同的几条肽链构成。图(b )的结果表明该蛋白质是由两种大小不同的肽链借非共健结合在一起的寡聚体蛋白质。从图(b )的电泳结果我们可以断定该蛋白质的等电点低于8.2。

3、含有以下四种蛋白质混合物:A ,分子量12000,pI=10;B ,分子量62000 ,pI=3;C ,分子量28000,pI=7;D ,分子量9000,pI=5。若不考虑其他因素,当它们(1)流过DEAE-纤维素阴离子交换柱时,用线性盐洗脱时。(2)流经SephadexG-75凝胶过滤柱时,这些蛋白质的洗脱顺序如何?阴离子交换柱起始pH 可选择什么范围。