G 试验和 GM 试验检测原理和临床应用 首都医科大学附属北京安贞医院左大鹏 G 试验和 GM 试验的检测原理和临床应用。目前我们国际合国内都对侵袭性真菌病的诊断制订了标准，其中有权威的是欧洲癌症研究和治疗组织暨侵袭性真菌病感染协作组，我们简称叫欧洲标准所制订的一个标准。这个标准它对侵袭性真菌病它分了三个不同的诊断层次。一个叫确诊，一个叫临床诊断，一个叫疑诊。 我们国家的很多的专业委员会也都根据欧洲标准就结合我们国家和专业的特点制订了我们国家各个专业的诊断标准。比如说中国侵袭性真菌感染工作组在 2010 年第 3 次修订的血液病和恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断，诊断标准和治疗原则，这第 3 次修订，第一次是 2006 ，第二次 2008 ， 2010 年是第 3 次修订了。这应该是血液里的肿瘤病人所用的一个标准。中华医学会器官移植学分会制订的实体器官移植患者侵袭性真菌感染的诊断和治疗指南。这可能是实体器官移植的这个方面的诊断标准。中华医学会儿科学会，中华医学会呼吸病学会，中华医学会急诊协会，中华妇产科学会也都根据自己的专业制订了的相应的侵袭性真菌感染的诊断和治疗指南。这作为我们从事这些方面的医务工作者所遵循的一个标准。 那我们看不管是国内和国际现在都采用这样一种方式。首先要看这个病人有没有宿主因素，它是不是容易发生侵袭性真菌，真菌感染的高危人群，你要是这样的，你要一个健康人这就不具备了，起码有一些原因它容易得侵袭性真菌感染要具备这样一个高危因素。第二它有临床表现，当然包括临床症状和影像学，比如说胸片， CT ，颅片等等。还有有微声学的检查，还有一个病理学检查，如果你只有宿主因素有临床表现我们叫做拟诊，不叫疑诊，疑似诊断。如果说你在这两个基础上又多了一条有微生物学证据，或者是培养的，或者是非培养的技术凡是证明他有真菌性感染的这种可能性就要临床诊断，临床诊断。如果再加上从肺的组织，从脏器的组织取出病理来确定，那叫确诊。所以侵袭性真菌感染根据宿主因素临床表现微生物学真菌，组织病理的结果，可以把它分成为拟诊，临床诊断跟确诊三个层次。确诊了当然就已经是确定了，治疗起来更有针对性。临床诊断基本是确定了，大方向也没有问题。拟诊是不能，不叫，就是说我们只能是一种预防性的治疗，或者是一种抢先的有干预的治疗，还不能说它一定有真菌感染。比如说我们高度怀疑，高度怀疑。 不管我们前面讲了，就是你要做到临床诊断你就必须有微生物学的真菌。在欧洲标准和我们国家各个专业把脑脊液能够找到隐球菌抗原这个阳性结果作为真菌性脑膜炎或者叫播散性真菌隐球菌病的一个确诊的依据。这时候确诊就不需要组织学了，它只要脑脊液里面找到隐球菌的抗原就确诊。血清的 1 、 3 β D 葡聚糖的检测我们称为 G 试验和这个曲霉菌的半乳甘露聚糖的 GM 试验，那就这个 G 试验和 GM 试验作为临床诊断侵袭性真菌病的依据。当然它不是确诊，它是临床诊断。 我们来看这是中华内科杂志 2007 年中国，中华这个重症协会所制定的关于重症患者侵袭性真菌感染的诊断语言，它在这个微生物学检查里面它要求所有的标本应该是新鲜的，
四大谱图基本原理及图谱解析 一.质谱 1.基本原理： 用来测量质谱的仪器称为质谱仪，可以分成三个部分：离子化器、质量分析器与侦测器。其基本原理是使试样中的成分在离子化器中发生电离，生成不同荷质比的带正电荷离子，经加速电场的作用，形成离子束，进入质量分析器。在质量分析器中，再利用电场或磁场使不同质荷比的离子在空间上或时间上分离，或是透过过滤的方式，将它们分别聚焦到侦测器而得到质谱图，从而获得质量与浓度(或分压)相关的图谱。 在质谱计的离子源中有机化合物的分子被离子化。丢失一个电子形成带一个正电荷的奇电子离子(M+·)叫分子离子。它还会发生一些化学键的断裂生成各种 碎片离子。带正电荷离子的运动轨迹：经整理可写成： 式中：m／e为质荷比是离子质量与所带电荷数之比；近年来常用m／z表示质荷比；z表示带一个至多个电荷。由于大多数离子只带一个电荷，故m／z就可以看作离子的质量数。 质谱的基本公式表明： （1）当磁场强度(H)和加速电压(V)一定时，离子的质荷比与其在磁场中运动半径的平方成正比(m／z ∝r2m)，质荷比(m／z)越大的离子在磁场中运动的轨道半径(rm)也越大。这就是磁场的重要作用，即对不同质荷比离子的色散作用。 （2）当加速电压(V)一定以及离子运动的轨道半径(即收集器的位置)一定时，离子的质荷比(m／z)与磁场强度的平方成正比(m／z∝H2)改变H即所谓的磁场扫描，磁场由小到大改变，则由小质荷比到大质荷比的离子依次通过收集狭缝，分别被收集、检出和记录下来。 （3）若磁场强度(H)和离子的轨道半径(rm)一定时，离子的质荷比(m／z)与加速电压(V)成反比(m／z∝1／V)，表明加速电压越高，仪器所能测量的质量范
抗凝血酶Ⅲ测定试剂盒（发色底物法） 适用范围：本产品用于体外定量测定人血浆中抗凝血酶III的活性。 1.1产品型号：产品为冻干型和液体型，试剂规格如下： 2.性能指标 2.1外观 .产品外包装应完整，无破损，标识、标签清晰； .冻干型：凝血酶试剂、发色底物为白色冻干品，复溶后为清晰无色液体，缓冲液为无色透明液体。 .液体型：凝血酶试剂、发色底物为无色液体，缓冲液为无色透明液体。 2.2装量(液体) 液体试剂的装量应不低于产品标示量。 2.3残留水分（冻干型） 凝血酶试剂、发色底物的含水量应≤3％。 2.4准确性
用试剂盒测试定值血浆，测量结果与定值血浆标示值相对偏差应≤±10%。 2.5 重复性 用正常值血浆重复测定的结果变异系数（CV%）均应≤6%。 用异常值血浆重复测定的结果变异系数（CV%）均应≤8%。 2.6批间差 用3个不同批号的试剂测试正常值血浆，所得结果的批间差应≤10％。 2.7瓶间差（冻干型） 用正常值血浆测试的瓶间变异系数（CV）应≤8%。 2.8 线性 线性范围为30％～150％，相关系数r≥0.98 2.9稳定性 a）冻干型制剂复溶稳定性：复溶后样品在2-8℃条件下，保存24小时，取该样品检测外观、准确性、重复性应符合2.1、2.4、2.5的要求。 b）液体制剂效期稳定性：在2-8℃条件有效期为12个月。取到效期后的样品检测外观、准确性、重复性，线性应符合2.1、2.4、2.5、2.8的要求。 c）冻干型制剂效期稳定性：在2-8℃条件有效期为12个月。取到效期后的样品检测外观、残留水分、准确性、重复性，瓶间差、线性应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.7、2.8的要求。
2013/12/2四大图谱综合解析[解] 从分子式CHO，求得不饱和度为零，故未知物应为512饱和脂肪族化合物。 1 某未知物分子式为CHO，它的质谱、红外光谱以及核磁共振谱如图，512未知物的红外光谱是在CCl溶液中测定的，样品的CCl稀溶液它的紫外吸收光谱在200 nm以上没有吸收，试确定该化合物结构。44-1的红外光谱在3640cm处有1尖峰，这是游离O H基的特征吸收峰。样品的CCl4浓溶液在3360cm-1处有1宽峰，但当溶液稀释后复又消失，说明存在着分子间氢键。未知物核磁共振谱中δ4. 1处的宽峰，经重水交换后消失。上述事实确定，未知物分子中存在着羟基。未知物核磁共振谱中δ0.9处的单峰，积分值相当3个质子，可看成是连在同一碳原子上的3个甲基。δ3.2处的单峰，积分值相当2个质子，对应1个亚甲基，看来该次甲基在分子中位于特丁基和羟基之间。质谱中从分子离子峰失去质量31（－CHOH）部分而形成基2峰m/e57的事实为上述看法提供了证据，因此，未知物的结构CH是3CCl稀溶液的红外光谱, CCl浓溶液44 CHOH C HC在3360cm-1处有1宽峰23 CH3 2. 某未知物，它的质谱、红外光谱以及核磁共振谱如图，它的根据这一结构式，未知物质谱中的主要碎片离子得到了如下紫外吸收光谱在210nm以上没有吸收，确定此未知物。解释。CH CH3+3.+ +C CH HCOH CHOH C HC3223 m/e31CH CH33 m/e88m/e57-2H -CH-H-CH33m/e29 CH m/e73CHC23+ m/e41 [解] 在未知物的质谱图中最高质荷比131处有1个丰度很小的峰，应从分子量减去这一部分，剩下的质量数是44，仅足以组为分子离子峰，即未知物的分子量为131。由于分子量为奇数，所以未成1个最简单的叔胺基。知物分子含奇数个氮原子。根据未知物的光谱数据中无伯或仲胺、腈、CH3N酞胺、硝基化合物或杂芳环化合物的特征，可假定氮原子以叔胺形式存CH3在。红外光谱中在1748 cm-1处有一强羰基吸收带，在1235 cm-1附近有1典型正好核磁共振谱中δ2. 20处的单峰(6H )，相当于2个连到氮原子上的宽强C－O－C伸缩振动吸收带，可见未知物分子中含有酯基。1040 的甲基。因此，未知物的结构为:-1cm处的吸收带则进一步指出未知物可能是伯醇乙酸酯。O核磁共振谱中δ1.95处的单峰(3H），相当1个甲基。从它的化学位移来CH3N看，很可能与羰基相邻。对于这一点，质谱中，m/e43的碎片离子CHCHCHOC223CH(CHC=O)提供了有力的证据。在核磁共振谱中有2个等面积(2H)的三重33峰，并且它们的裂距相等，相当于AA’XX'系统。有理由认为它们是2个此外，质谱中的基峰m /e 58是胺的特征碎片离子峰，它是由氮原子相连的亚甲－CH－CH，其中去屏蔽较大的亚甲基与酯基上的氧原子22的β位上的碳碳键断裂而生成的。结合其它光谱信息，可定出这个相连。碎片为至此，可知未知物具有下述的部分结构：CHO3NCH2CHCHCHOCCH32231 2013/12/23.某未知物CH的UV、IR、1H NMR、MS谱图及13C NMR数据如下，推[解] 1. 从分子式CH，计算不饱和度Ω＝4；11161116导未知物结构。 2. 结构式推导未知物碳谱数据UV：240～275 nm 吸收带具有精细结构，表明化合物为芳烃；序号δc序号δc碳原子碳原子IR :：695、740 cm-1 表明分子中含有单取代苯环；（ppm）个数（ppm）个数MS ：m/z 148为分子离子峰，其合理丢失一个碎片，得到m/z 91的苄基离子；1143.01632.01 313C NMR：在（40～10）ppm 的高场区有5个sp杂化碳原子；2128.52731.51 1H NMR：积分高度比表明分子中有1个CH和4个－CH－，其中（1.4～1.2）3128.02822.5132 ppm为2个CH的重叠峰；4125.51910.012因此，此化合物应含有一个苯环和一个CH的烷基。511536.01 1H NMR 谱中各峰裂分情况分析，取代基为正戊基，即化合物的结构为：23
解析解与数值解精确解和近似解 默认分类2011-01-19 12:51:37 阅读93 评论0 字号：大中小 订阅 在解组件特性相关的方程式时，大多数的时候都要去解偏微分或积分式，才能求得其正确的解。依照求解方法的不同，可以分成以下两类：解析解和数值解。 解析解(analytical solution)就是一些严格的公式,给出任意的自变量就可以求出其因变量,也就是问题的解, 他人可以利用这些公式计算各自的问题. 所谓的解析解是一种包含分式、三角函数、指数、对数甚至无限级数等基本函数的解的形式。用来求得解析解的方法称为解析法〈analytic techniques、analytic methods〉，解析法即是常见的微积分技巧，例如分离变量法等。解析解为一封闭形式〈closed-form〉的函数，因此对任一独立变量，我们皆可将其带入解析函数求得正确的相依变量。因此，解析解也被称为闭式解（closed-form solution）数值解(numerical solution)是采用某种计算方法,如有限元的方法, 数值逼近,插值的方法, 得到的解.别人只能利用数值计算的结果, 而不能随意给出自变量并求出计算值. 当无法藉由微积分技巧求得解析解时，这时便只能利用数值分析的方式来求得其数值解了。数值方法变成了求解过程重要的媒介。在数值分析的过程中，首先会将原方程式加以简化，以利后来的数值分析。例如，会先将微分符号改为差分符号等。然后再用传统的代数方法将原方程式改写成另一方便求解的形式。这时的求解步骤就是将一独立变量带入，求得相依变量的近似解。因此利用此方法所求得的相依变量为一个个分离的数值〈discrete values〉，不似解析解为一连续的分布，而且因为经过上述简化的动作，所以可以想见正确性将不如解析法来的好。 解析解一般可以理解为通过已经有的方法，是对应的问题在这个解决域上，进行变换演绎得到解的一种结果，变换过程也会有增根或漏根。数值解是将问题化解为比较多的子域，然后用比较简单的已知函数来逼近需求函数的相关问题。解析法要求基本功比较强，对概念理解非常有利，仅适合简单形式问题；数值解比较简单，要求运算量大，适合工程实际中的复杂问题。 解析解是解的形式可以表达为一个显式函数的表达式的解；而数值解其解的形式不能表达为显式函数，只能通过数值计算的方式求解，得到的是一系列离散的数值，不能表达为一个明确的函数的形式。对于大多数问题是得不到解析解的，只能得到数值解。能得到解析解的只是一小部分问题，而且通常有比较严格的限制条件。解析解能够很直观的体现各参数之间的关系，对于定性分析是很重要的。对于得不到解析解的问题，进行数值计算得到数值解，对于工程应用很重要。 精确解和近似解 所谓精确解和近似解，是从算法上决定的。一般的力学模型都是有一定的使用和假设条件的，主要是看在求解有关的问题时，计算的结果与模型的真实值的误差是否为零，如果为零，则是精确解法，如算法本身不能保证得到真实值，则是近似解法，与其是否是解析解无关，与
一、血常规 1．网织红细胞仪器测定法原理：目前国内外使用仪器法测定网织红细胞，一般采用流式细胞术。流式细胞术法是将红细胞经特殊荧光染料染色后，使含RNA的网织红细胞被计数，进而得出网织红细胞的百分率和绝对值。 2．血细胞分析仪的原理 （—）细胞计数及体积测定原理 流式细胞术加光学测定原理：利用流式细胞术使单个细胞随着流体动力聚集的鞘流液在通过激光照射的检测区时，使光束发生折射、散射和衍射，散射光由光检测器接收后产生脉冲，脉冲大小与产生的细胞大小成正比，脉冲的数量代表了被照细胞的数量。 （二）白细胞分类的原理 光散射与细胞化学技术联合白细胞分类技术此类仪器联合利用激光散射和过氧化酶染色技术进行血细胞分类计数。嗜酸性粒细胞有很强的过氧化酶活性，依次为中性粒细胞、单核细胞，而淋巴细胞和嗜碱性粒细胞无此酶。如果待测物质中含有过氧化物酶，能催化一种供氢体，通常是苯胺或酚等脱氢，当其脱氢后，供氢体分子结构发生了变化，从而出现了色基显色，即可使4氯仿-苯酚显色并沉淀后定位于酶反应部位。利用酶反应强度不同（阴性、弱阳性、强阳性）和细胞体积不同，激光光束射到细胞上所产生的前向角和散射角不同，以X轴为吸光率（酶反应强度），Y轴为光散射（细胞大小），每个细胞产生两个信号并结合定位在细胞图上。仪器每分钟可测定上千个细胞，经计算机处理得出细胞分类结果。 （三）红细胞测试原理 红细胞（RBC）和血细胞比容(HCT)原理同（一） 血红蛋白测定（Hb）细胞悬液加入溶血剂后，红细胞溶解释放出Hb，并与溶血剂中的某些成分形成Hb衍生物，在540nm波长的下比色，吸光度与Hb含量成正比，可直接反应Hb的浓度。 各项红细胞指数检测原理红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白的浓度？（MCHC）及红细胞体积分布宽度（RDW）均根据仪器检测的RBC、HCT和Hb的实验数据，经仪器内存电脑换算出来。 （四）血小板分析原理 血小板随着红细胞一起在一个系统内进行检测，根据阈值不同，分别技术血小板与红细胞数。血小板储存于64个通道内，根据所测血小板体积大小自动计算出血小板的平均体积（MPV）。血小板直方图也是反应血小板体积的，横坐标表示体积，范围一般为2-30fl，纵坐标表示不同体积血小板出现的相对频数。但要注意不同的仪器血小板直方图范围存在差异，为了使血小板技术更准确，有些意气专门设置了增加血小板准确性的技术，如鞘流技术浮动界标复合曲线等。 3.全自动五分类连接网织红细胞仪 二、血凝仪原理：凝固法－－磁珠法+光学法 免疫法－－乳胶颗粒法，免疫浊度分析 发色底物法－－比色法 在血栓/止血检验中最常用的凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶时间（TT）、内源凝血因子、外源凝血因子、高分子量肝素、低分子量肝素、蛋白C、蛋白S等均可用凝固法测量。所以目前半自动血凝仪基本上都是以凝固法测量为主，而在全自动血凝仪中也一定有凝固法测量。
13C-NMR谱图解析 13C-NMR谱图解析流程 1.分于式的确定 2.由宽带去偶语的谱线数L与分子式中破原子数m比较，判断分子的对称性. 若L=m，每一个碳原子的化学位移都不相同，表示分子没有对称性;若L 基团类型Qc/ppm 烷0-60 炔60-90 烯，芳香环90-160 羰基160 4.组合可能的结构式 在谱线归属明确的基础上，列出所有的结构单元，并合理地组合成一个或几个可能的工作结构。 5.确定结构式 用全部光谱材料和化学位移经验计算公式验证并确定惟一的或 可能性最大的结构式，或与标准谱图和数据表进行核对。经常使用的标准谱图和数据表有: 经验计算参数 1.烷烃及其衍生物的化学位移 一般烷烃灸值可用Lindeman-Adams经验公式近似地计算： ∑ Qc5.2 =nA - + 式中:一2.5为甲烷碳的化学位移九值;A为附加位移参数，列于下表，为具有某同一附加参数的碳原子数。 表2 注:1(3).1(4)为分别与三级碳、四级碳相连的一级碳;2(3)为与三级碳相连的二级碳，依此类推。 取代烷烃的Qc为烷烃的取代基效应位移参数的加和。表4一6给出各种取代基的位移参数 2013/12/2 第五节纤溶活性检测纤维蛋白溶酶（纤溶酶）可将已形成的血凝块加以溶解，产生纤维蛋白（原）的降解产物，从而反映纤溶活性。纤溶活性增强可致出血，纤溶活性减低可致血栓。 一、筛检试验 （一）优球蛋白溶解时间 【原理】 血浆优球蛋白（euglobulin）组分中含有纤维蛋白原（Fg）、纤溶酶原（PLG）和组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）等，但不含纤溶酶抑制物（plasmin inhibitor）。受检血浆置于醋酸溶液中，使优球蛋白沉淀，经离心除去纤溶抑制物，将沉淀的优球蛋白溶于缓冲液中，再加入适量钙溶液（加钙法）或凝血酶（加酶法），使Fg转变为纤维蛋白凝块，观察凝块完全溶解所需时间。 【参考值】 加钙法：（129．8±41．1）min；加酶法：（157.0±59．1）min。一般认为<70rain为异常。 【临床意义】 本试验敏感性低，特异性高。 1．纤维蛋白凝块在70 min内完全溶解表明纤溶活性增强，见于原发性和继发性纤溶亢进，后者常见手术、应激状态、创伤、休克、变态反应、前置胎盘、胎盘早期剥离、羊 水栓塞、恶性肿瘤广泛转移、急性白血病、晚期肝硬化、DIC 和应用溶血栓药（rt-PA、UK）。 2．纤维蛋白凝块在超过120 min还不溶解表明纤溶活性减低，见于血栓前状态、栓性疾病和应用抗纤溶药等。 （二）D-二聚体定性试验 【原理】 D-二聚体（D-dirner，D-D）是交联纤维蛋白降解产物之一，为继发性纤溶特有的代谢物。抗D-D单克隆抗体包被于胶乳颗粒上，受体血浆中如果存在D-二聚体，将产生抗原-抗体反应，胶乳颗粒发生聚集现象。 【参考值】 胶乳颗粒比阴性对照明显粗大者为阳性，正常人为阴性。 【临床意义】 D-D阴性是排除深静脉血栓（DVT）和肺血栓栓塞（PE）的重要试验，阳性也是诊断DIC和观察溶血栓治疗的有用试验。凡有血块形成的出血，本试验均可阳性，故其特异性低，敏感度高；但在陈旧性血块时，本试验又呈阴性。 （三）血浆纤维蛋白（原）降解产物定性试验 【原理】 于受检血浆中加入血浆纤维蛋白（原）降解产物[fibrin （agen）degradationproduct，FDPs]抗体包被的胶乳颗粒悬液，若血液中FDPs浓度超过或等于5μg／ml，胶乳颗粒发生凝集。 3 待鉴定的化合物（I）和（II）它们的分子式均为C8H12O4。它们的质谱、红外光谱和核磁共振谱见图。也测定了它们的紫外吸收光谱数据：(I)λmax223nm，δ4100；（II）λmax219nm，δ2300，试确定这两个化合物。 未之物（I）的质谱 未之物（II）质谱 化合物（I）的红外光谱 化合物（II）的红外光谱 化合物（I）的核磁共振谱 化合物（II）的核磁共振谱 [解] 由于未知物（I）和（II）的分子式均为C8H12O4，所以它们的不饱和度也都是3，因此它们均不含有苯环。（I）和（II）的红外光谱呈现烯烃特征吸收，未知物（I）：3080cm-1，(υ=C-H)，1650cm-1(υ=C-C) 未知物（II）：:3060cm-1 (υ=C-H)，1645cm-1(υ=C-C) 与此同时两者的红外光谱在1730cm-1以及1150～1300 cm-1之间均具有很强的吸收带，说明（I)和(II)的分子中均具有酯基； (I)的核磁共振谱在δ6.8处有1单峰，（II）在δ6.2处也有1单峰，它们的积分值均相当2个质子。显然，它们都是受到去屏蔽作用影响的等同的烯烃质子。另外，(I)和(II )在δ4. 2处的四重峰以及在δ1.25处的三重峰，此两峰的总积分值均相当10个质子，可解释为是2个连到酯基上的乙基。因此(I)和(II)分子中均存在2个酯基。这一点，与它们分子式中都含有4个氧原子的事实一致。 几何异构体顺丁烯二酸二乙酯(马来酸二乙酯)和反丁烯二酸二乙酯（富马酸二乙酯)与上述分析结果一致。现在需要确定化合物([)和(II)分别相当于其中的哪一个。 COOEt COOEt COOEt EtOOC 顺丁烯二酸二乙酯反丁烯二酸二乙酯 利用紫外吸收光谱所提供的信息，上述问题可以得到完满解决。由于富马酸二乙酯分子的共平面性很好，在立体化学上它属于反式结构。而在顺丁烯二酸二乙酯中，由于2个乙酯基在空间的相互作用，因而降低了分子的共平面性，使共轭作用受到影响，从而使紫外吸收波长变短。 数值分析试题 一、 填空题（2 0×2′） 1. ??????-=? ?????-=32,1223X A 设x =0.231是精确值x *=0.229的近似值，则x 有 2 位有效数字。 2. 若f (x )=x 7－x 3＋1，则f [20,21,22,23,24,25,26,27]= 1 ， f [20,21,22,23,24,25,26,27,28]= 0 。 3. 设，‖A ‖∞＝___5 ____，‖X ‖∞＝__ 3_____， ‖AX ‖∞≤_15_ __。 4. 非线性方程f (x )=0的迭代函数x =?(x )在有解区间满足 |?’(x )| <1 ，则使用 该迭代函数的迭代解法一定是局部收敛的。 5. 区间[a ,b ]上的三次样条插值函数S (x )在[a ,b ]上具有直到 2 阶的连续导数。 6. 当插值节点为等距分布时，若所求节点靠近首节点，应该选用等距节点下牛顿差商 公式的 前插公式 ，若所求节点靠近尾节点，应该选用等距节点下牛顿差商公式的 后插公式 ；如果要估计结果的舍入误差，应该选用插值公式中的 拉格朗日插值公式 。 7. 拉格朗日插值公式中f (x i )的系数a i (x )的特点是：=∑=n i i x a 0)( 1 ；所 以当系数a i (x )满足 a i (x )>1 ，计算时不会放大f (x i )的误差。 8. 要使 20的近似值的相对误差小于0.1%，至少要取 4 位有效数字。 9. 对任意初始向量X (0)及任意向量g ，线性方程组的迭代公式x (k +1)=Bx (k )+g (k =0,1,…) 收敛于方程组的精确解x *的充分必要条件是 ρ(B)<1 。 10. 由下列数据所确定的插值多项式的次数最高是 5 。 临床医学硕士专业学位研究生 临床检验诊断学培养方案 、培养目标 要求培养德智体全面发展，在临床检验诊断学领域具有坚实的理论基础和系 统的专业知识，熟练的操作技能。具有较强的临床分析和思维能力， 熟练掌握临 床检验的常规检查项目、参考值和临床意义。熟悉各类自动化仪器的性能、使用、 维护、保养和有关的计算机知识。能够做好实习医师的带教工作，能对下级医师 进行业务指导，达到高年住院医师的临床工作水平。掌握一门外语，能熟练地阅 读本专业的外文资料。具备文献检索、资料收集、数据统计处理的能力，完成相 关专业综述一篇，通过学位论文答辩。 二、 学习年限 三年 三、 培养方式及要求 （一）课程学习 硕士学位研究生课程学习实行学分制，总学分要求不少于18学分。 专业课：以自学与专题讲座相结合的方式进行，参加研究生院组织的专业课 考试。 自学参考书及有关文献：《全国临床检验操作规程》（第二版）、《今日临床检验学》、 《当代血液分析技术与临床》、《临床化学诊断方法大全》、《临床微生物手册》（美 国、第六版）。 1、学位课程 政治理论课：自然辩证法 科学社会主义理论与实践 医学英语 医学统计学 临床流行病学 专业课 40学时 2学分 30学时 1.5学分 90学时 4学分 50学时 2学分 30学时 1.5学分 60学时 3学分 专题讲座：参加本学科专业的专题讲座，题目附后。 （6）专业基础课：至少两门，从免疫学、生物化学与分子生物学等专业开设的研究生课程中选修。 2、非学位课程（选修课，至少选2门） 医学信息检索与应用20学时1学分 计算机文化基础与应用30学时1学分 科研方法学20学时1学分除专业课外，均由学院在研究生入学后的第一学期，统一安排集中学习，第二学期进入临床后由各专业点组织专业课教学，以自学与专题讲座相结合的方式进行，在第二学年未结束。 （二）临床能力训练理论知识与技能要求：掌握临床检验诊断学基本理论知识，了解新进展、新知识和新技能。 （2）掌握本专业基本实验诊断、方法和技术，内科系统常见病、多发病的病因、发病机理、临床表现、实验诊断和鉴别诊断，临床教学等技能。 2、轮转安排：本阶段为二级学科基础训练，以二级学科的各专业轮转为主，兼顾相关科室。培训方法为在检验科范围内轮转，并参加相关科室的专业查房和科巡诊。 轮转专业：临床常规检查4个月（门诊2个月，病房2个月），临床化学检验5个月，临床免疫学检验5个月，临床血液学检验6个月（包括输血1个月），临床微生物学检验5个月，急诊检验3个月。选择参加专业查房和巡诊的科室为感染病房、消化病房、肾内病房各2个月。必要时可结合与检验项目有关的科室参加查房。三年共要求参加查房20次，参加科巡诊4次。论文答辩及考核2个月。 出凝血19.１蛋白C（PC）活性测定（发色底物法）（第四版） 出凝血19.2 原理： 标本中的PC在特异的激活剂作用下被激活，PCa作用于特异的发色底物释放出产色基团，在405nm波长下比色，其显色深浅与其活性呈线性关系。 出凝血19.3标本处理： 患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀，避免用力震荡。 全血要在1小时内分离血浆。分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。全部试验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在0.5～1.0ml的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。-20℃可保存30天。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。 出凝血19.4 试剂： 蛋白C试剂盒购于天津威士达公司，试剂盒代号OUVV 15。试剂包括3×10ml蛋白C激活剂；3×3ml底物试剂；1×30ml缓冲液。蛋白C激活剂每瓶用10ml缓冲液复溶，37℃平衡30分钟。底物试剂每瓶用3ml蒸馏水复溶，37℃平衡30分钟。 出凝血19.5仪器：使用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。出凝血19.6 操作：按仪器操作步骤执行标准操作。 出凝血19.６.1开机：按下机器侧面的POWER 按钮。开机后机器进行自检，当屏幕上边显示“Ready:”时可以进行试验。 出凝血19.６.2检查消耗品： 1、准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。（一次性最多可放1000 个杯子） 2、准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示放置试剂。 3、查看仪器的洗液瓶和废液瓶 出凝血19.６.3准备标本：将样本放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。 出凝血19.６.4输入检测项目：主菜单上按下Work List 键，进入工作菜单，输入PC项目。 出凝血19.６.5输入样本号：按屏幕下菜单的ID No.键，按顺序输入样本的序号。 出凝血19.６.6开始检测：录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START 键，开始检测。 出凝血19.7 计算：仪器自动计算出结果。 出凝血19.8 参考值：70～140%（0.7～1.4） 发色底物法检测原理 首先人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的化合物，且化合物连接上产色物质，在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血活酶的活性。产色物质一般选用连接对硝基苯胺（PNA）。游离的PNA呈黄色，其测定波长选用405nm。在这一波长下，其它物质对光的吸收小于PNA对光吸收的1％。具体检测方法即可采用动态法、也可采用终点法。动态法即是连续记录样品的吸光度变化，算出单位时间吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的变化来报告结果。终点法即是指在活性酶同产色物质作用一段时间后，加入乙酸终止反应，检测此段时间内吸光度的变化，进而推算出待检酶的活性。凝血仪上多数采用动态法，因为它比终点法简单、结果更为准确。其优点主要表现在： 用酶学方法直接定量、测定结果准确、重复性好、便于自动化和标准化、所需样品量小。凝血仪使用产色物质在检测血栓／止血指标时大致可分成三种模式。 ①对酶的检测： 即在含酶的样品中直接加入产色物质，因为酶可裂解产色物质释放PNA，监测由于PNA释放而导致被检样品在405nm处光吸收的变化，就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测。 ②对酶原的检测： 要对某种酶原进行测定，必须先用激活剂将其激活，使其活化位点暴露，才可将产色物质上的PNA裂解下来。加入的激活剂必须过量，因为只有这样才能使酶原被全部激活，酶原的量才会同样品中酶的活性成一定的数量关系。样品中酶的活性可通过PNA释放，即样品吸光度的变化反应出来，由此则可推算出样品中酶原的含量。 ③对酶抑制物的检测： 首先往待检样品中加入过量对应的酶中和该抑制物，剩余的酶可裂解产色物质释放PNA，监测由于PNA释放而导致光吸收的变化，就可测出酶的活性，进而可推算出样品中抑制物的含量。如对抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）等。 HemosIL? In-vitro Diagnostikum De uso diagnóstico in vitro Dispositif mèdical de diagnostic in vitro Per uso diagnostico in vitro Dispositivo médico para utiliza??o em diagnóstico in vitro Chargen-Bezeichnung Identificación número de lote Désignation du lot Numero del lotto Número de lote Verwendbar bis Caducidad Utilisable jusqu’à Da utilizzare prima del Data límite de utiliza??o Festgelegte T emperatur T emperatura de Almacenamiento T empératures limites de conservation Limiti di temperatura Límite de temperatura Beilage beachten Consultar la metódica Lire le mode d’emploi Vedere istruzioni per l’uso Consultar as instru??es de utiliza??o Kontrollen Control Contr?le Controllo Controlo Biologisches Risiko Riesgo biológico Risque biologique Rischio biologico Risco biológico Hergestellt von Fabricado por Fabricant Prodotto da Fabricado por Bevollm?chtigter Representante autorizado Mandataire Rappresentanza autorizzata Representante autorizado Aplicación T est Cromogénico automatizado para la determinación cuantitativa de la actividad de Heparina no Fraccionada (UFH) y de Heparina de Bajo Peso Molecular (LMWH) en plasma humano citratado para los Sistemas de Coagulación IL. Principio glicosaminoglicano reside en su habilidad para acelerar (hasta 2000 veces) el efecto inhibidor de la antitrombina sobre las proteasas de la coagulación. En los últimos a?os se ha demostrado que la LMWH, además de ser tan útil terapéuticamente como la UFH, tiene una vida media más larga. El kit Heparina es una técnica basada en un substrato cromogénico sintético y la inactivación del FXa. El nivel de la Heparina en el plasma de los pacientes es medido automáticamente en los sistemas de coagulación IL en dos etapas: 1. La Heparina es analizada como un complejo con la antitrombina presente en la muestra. La concentración de este complejo es dependiente de la disponibilidad de antitrombina. Para obtener una concentración más constante de antitrombina, se a?ade antitrombina humana purificada al plasma del test.1 El Factor Xa se a?ade en exceso y es neutralizado por el complejo antitrombina-heparina. 2. El Factor Xa residual es cuantificado con un sustrato cromogénico sintético. La Paranitroanilina liberada es medida cinéticamente a 405 nm siendo su nivel inversamente proporcional a la actividad de la Heparina de la muestra.2 Dado que las diferentes clases de Heparina (tanto UFH como LMWH) tienen su propia actividad específica anti-factor Xa, la misma clase de heparina usada en el tratamiento del paciente debe usarse en la calibración de la curva estándar.3,4 Composición El kit Heparin consta de: S Chromogenic substrate (N° Cat. 00020009410): 1 x 4 mL vial de substrato cromogénico liofilizado S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCL (3 mg/vial) y estabilizantes. E Factor Xa reagent (N° Cat. 00020009420): 1 x 5 mL vial de una preparación liofilizada que contiene Factor bovino Xa (68 nkat/vial), tampón T ris, EDT A, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino. A Antithrombin (N° Cat. 00020009430): 1 x 3 mL vial de una preparación liofilizada que contiene Antitrombina humana (3 IU/vial), tampón T ris, EDT A, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino. B Buffer (N° Cat. 00020009440): 1 x 8 mL vial de solución concentrada que contiene tampón T ris, pH 8,4, EDT A, cloruro sódico y detergente. PRECAUCIóN: El material usado en este producto ha sido verificado por los métodos aprobados por la FDA y encontrado no reactivo al Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg), Anti-HCV y anticuerpos HIV. Manejar con precaución como si fuese potencialmente infeccioso.5 Indicaciones de Peligro: Ninguna Frases de Riesgo: Ninguna Frases de Seguridad: Ninguna T odos los productos derivados de animales deberán manejarse como potencialmente infecciosos. Este reactivo es para diagnóstico in vitro. Preparación Chromogenic substrate: Disolver el contenido de cada vial con 4 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso. Factor Xa reagent: Disolver el contenido de cada vial con 5 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso. Antithrombin: Disolver el contenido de cada vial con 3 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso. Buffer: Diluir la cantidad necesaria de T ampón concentrado 1:10 (1+9) con agua tipo CLR de CLSI.6 Mezclar antes de su uso. Working buffer (Diluyente funcional): A 24 mL de T ampón diluido, a?adir 1 mL de reactivo reconstituido de Antitrombina. Nota: Una opalescencia instantánea ocurrirá temporalmente al reconstituir los reactivos liofilizado, pero desaparecerá en un par de minutos.Conservación y estabilidad de los reactivos Los reactivos que no hayan sido abiertos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el vial si se mantienen a 2-8°C. Chromogenic substrate - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vial original ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP?. Factor Xa reagent - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vial original ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP. Antithrombin - Estabilidad después de la reconstitución: 3 meses a 2-8°C en el vial original. Buffer - El reactivo abierto es estable 3 meses a 2-8°C. Working buffer (Diluyente funcional) - Estabilidad después de su preparación: 7 días a 15°C y 2-8°C en un vial cerrado ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP. Para obtener una estabilidad óptima del reactivo reconstituido, sugerimos que acabado el trabajo, conserve el reactivo en su vial original almacenado en nevera entre 2 y 8°C. Método de Ensayo Seguir las instrucciones de la técnica de acuerdo al Manual del Operador de los instrumentos IL o bien al Manual de Aplicaciones. Nota: Se recomienda un ciclo de lavado después de cada sesión de ensayos de Heparina en los modelos ACL Clásicos (100-7000). Recolección y Preparación de las muestras trisódico. Para la recolección, manejo y conservación del plasma seguir las recomendaciones del documento H21-A5 de la CLSI.7 Estandarización Para la preparación del estándar de 0.8 U/ml utilice la misma heparina que la empleada para la terapia del paciente. Atención: para preparar el estándar de 0.8 U/mL deberá utilizarse plasma calibrador o un Pool de Plasma Normal (NPP), dependiendo del analizador que se vaya a emplear. Familia ACL TOP: preparar el estándar de 0.8 U/ mL utilizando Pool de Plasma Normal (NPP). ACL Futura/ACL Advance: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mL deberá utilizarse plasma calibrador. ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mL debería utilizarse plasma calibrador. ACL Clásico (100-7000): tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mL debería utilizarse Pool de Plasma Normal (NPP). Reactivos adicionales y plasmas de control Los siguientes reactivos no se suministran con el kit y deberán pedirse por separado. Américas y Pacific Rim Europa N° Cat. N° Cat. Plasma de Calibración 0020003700 0020003700 Agente de Limpieza 0009831700 0009831700 Agente de Limpieza 0009832700 0009832700 Control de Calidad Para realizar un programa completo de control de calidad, se recomienda el uso de dos niveles de control.8 T anto el Control Heparina Bajo*, como el Control Heparina Alto* están dise?ados específicamente para este programa. Cada laboratorio debe establecer su propia media y desviación estándar, asimismo establecer un programa de Control de Calidad para monitorizar los resultados de su laboratorio. Los controles deben ser usados como mínimo una vez dentro del turno de 8 horas, de acuerdo a la normativa de Buenas Prácticas en el Laboratorio. Referirse al Manual del Operador para información adicional. Consultar la publicación de Westgard y col. para una identificación y resolución de situaciones anormales del Control de Calidad.9 Resultados Los resultados de la Heparina se informan en U/mL. Referirse al Manual del Operador para información adicional. Limitaciones/Interferencias Concentraciones de Hemoglobina hasta 200 mg/dL, Bilirrubina hasta 20 mg/dL y T riglicéridos hasta 700 mg/dL no alteran los resultados de la Heparina en los ACL Futura/ACL Advance. Concentraciones de Hemoglobina hasta 375 mg/dL, Bilirrubina hasta 25 mg/dL y T riglicéridos hasta 1630 mg/dL no alteran los resultados de la Heparina en la Familia ACL TOP. Valores esperados actividad de la heparina debe estar en el rango de actividad recomendado por el fabricante del fármaco.10 Características técnicas Precisión: Se evaluó la precisión intraserie y total (serie a serie y dia a dia) a partir de múltiples series utilizando dos niveles de muestras tanto para la Heparina UFH como para la Heparina LMWH. Familia ACL Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total) UFH 0,77 1,84 2,18 UFH 0,23 7,76 8,23 LMWH 0,79 2,68 3,09 LMWH 0,23 7,99 9,69 ACL Futura/ACL Advance Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total) UFH 0,79 3,0 6,6 UFH 0,52 5,7 7,3 UFH 0,26 9,1 10,0 LMWH 0,76 4,1 4,5 LMWH 0,42 6,2 7,9 LMWH 0,22 10,7 11,9 Familia ACL TOP Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total) UFH 0,82 1,8 6,4 UFH 0,53 3,4 4,3 UFH 0,25 4,6 8,5 LMWH 0,86 2,4 4,4 LMWH 0,49 6,1 8,2 LMWH 0,25 5,7 11,3 Correlación: Sistema Pendiente Intersección r Método de Comparación Familia ACL 0,968 0,014 0,988 IL Heparina (Xa) ACL Futura/ 0,944 0,035 0,989 IL Heparina (Xa) ACL Advance Familia ACL TOP 1,012 -0,005 0,992 HemosIL Heparina (Xa) en ACL Advance Estos resultados de precisión y correlación se obtuvieron utilizando lotes específicos de reactivos y controles. Linealidad: Sistema Familia ACL y ACL Futura/ACL Advance 0 - 1,0 U/mL Familia ACL TOP 0 - 1,1 U/mL Verwendung Automatisierter chromogener T est zur quantitativen Bestimmung der Aktivit?t von unfraktionierten oder niedermolekularen Heparinen in menschlichem Plasma auf IL-Analysensystemen. Testprinzip und Zusammenfassung Heparin ist der am h?ufigsten eingesetzte antithrombotische Wirkstoff. Die biologische Aktivit?t der sulfatierten Glykosaminoglykane beruht auf ihrer F?higkeit den inhibitorischen Effekt des Antithrombin auf die Gerinnungsproteasen um das bis zu 2000-fache zu beschleunigen. In den letzten Jahren wurde gezeigt, dass niedermolekulare Heparine ebenso wie unfraktionierte Heparine zur Therapie eingesetzt werden k?nnen und zudem eine l?ngere Halbwertszeit besitzen. Der Heparin T estkit basiert auf einem synthetischen chromogenen Substrat über die Inaktivierung von Faktor Xa. Der Heparin-Spiegel des Patientenplasmas wird mit IL Gerinnungssystemen automatisch gemessen: 1. Heparin bildet mit dem in der Probe vorhanden Antithrombin einen Komplex. Die Konzentration dieses Komplexes ist von der Verfügbarkeit des Antithrombin abh?ngig. Um eine m?glichst konstante Konzentration an Antithrombin zu erhalten, wird gereinigtes menschliches Antithrombin der Probe zugeführt.1 Faktor Xa wird im überschuss zugegeben und durch den Heparin-Antithrombin-Komplex neutralisiert. 2. Die Restaktivit?t von Faktor Xa wird mit einem synthetischen chromogenen Substrat gemessen. Das freigesetzte Paranitroanilin wird kinetisch bei einer Wellenl?nge von 405 nm erfasst und ist umgekehrt proportional zum Heparin Spiegel der Probe.2 Da verschiedene Arten von unfraktionierten und niedermolekularen Heparinen unterschiedliche spezifische Anti-Faktor Xa-Aktivit?ten aufweisen, sollte bei der Kalibration der Standardkurve immer dasselbe Heparin wie in der Patientenprobe eingesetzt werden.3,4 Inhalt Die Heparin Packung enth?lt: S Chromogenic substrate (Art. Nr. 00020009410): 1 Flasche x 4 mL lyophilisiertes chromogenes Substrat [S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/Flasche)]. E Factor Xa reagent (Art. Nr. 00020009420): 1 Flasche x 5 mL eines lyophilisierten Pr?parates, das Faktor Xa bovinen Ursprungs (68 nkat/Flasche), T ris-Puffer, EDT A, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin enth?lt. A Antithrombin (Art. Nr. 00020009430): 1 Flasche x 3 mL eines lyophilisierten Pr?parates, das Human- Antithrombin (3 IU/Flasche), T ris-Puffer, EDT A, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin enth?lt. B Buffer (Art. Nr. 00020009440): 1 Flasche x 8 mL einer konzentrierten L?sung, die T ris-Puffer, pH 8,4, EDT A, Natriumchlorid und Detergenz enth?lt. WARNUNG: Das verwendete Material wurde mit FDA anerkannten T estmethoden auf HIV 1/2-Antik?rper, Hepatitis-B-Antigen und HCV-Antigen geprüft. Bitte beachten Sie die Bestimmungen zum Umgang mit potentiell infekti?sen Materialien.5 Gefahrenklasse: keine Risikoeinstufung: keine Sicherheitseinstufung: keine Alle Tierprodukte sollten als potentiell infekti?s behandelt werden. Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet. Herstellung Chromogenic substrate: Zum Inhalt einer Flasche wird 4 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gel?st.6 Nach vollst?ndiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Factor Xa reagent: Zum Inhalt einer Flasche wird 5 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gel?st.6 Nach vollst?ndiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Antithrombin: Zum Inhalt einer Flasche wird 3 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gel?st.6 Nach vollst?ndiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Buffer: Die ben?tigte Menge des konzentrierten Diluents 1:10 (1+9) mit CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) verdünnen.6 Vor dem Gebrauch mischen. Working buffer (Arbeitsl?sung): Zu 24 mL verdünntem Puffer wird 1 mL des rekonstituierten Antithrombin Reagenzes zugegeben. Hinweis: Auftretende T rübungen verschwinden innerhalb kurzer https://www.doczj.com/doc/ac160644.html,gerung und Haltbarkeit Die unge?ffneten Reagenzien sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar. Chromogenic substrate - Haltbarkeit nach Rekonstitution: - bei 15°C in der Originalflasche: 7 T age - bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate - bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP? Familie: 48 Stunden Factor Xa reagent - Haltbarkeit nach Rekonstitution: - bei 15°C in der Originalflasche: 7 T age - bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate - bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP? Familie: 48 Stunden Antithrombin - Haltbarkeit nach Rekonstitution: - bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate Buffer - ge?ffnetes Reagenz: - bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate Working buffer (Arbeitsl?sung) - Haltbarkeit nach Herstellung: - bei 15°C im geschlossenen Beh?lter: 7 T age - bei 2-8°C im geschlossenen Beh?lter: 7 T age - bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP? Familie: 48 Stunden Für eine optimale Haltbarkeit sollten die Reagenzien nach dem Gebrauch aus dem Ger?t entnommen und im Kühlschrank bei 2-8°C in der Originalflasche aufbewahrt werden. Bestimmungsansatz Die ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem Ger?te-Bedienerhandbuch und/oder dem Applikationshandbuch zu entnehmen. Hinweis: Es wird empfohlen im Anschluss an den Heparin T est einen Reinigungszyklus am ACL Classic (ACL 100-7000) durchzuführen. Probenmaterial und -gewinnung 9 T eile frisches ven?ses Blut und 1 T eil T rinatriumcitratl?sung werden sorgf?ltig in einem silikonisierten Glasr?hrchen gemischt. Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des Deutschen Instituts für Normung - DIN 58 905 - oder dem CLSI Document H21-A5 zu entnehmen.7 Standardisierung Zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards sollte dasselbe Heparin wie in der Patientenprobe eingesetzt werden. Hinweis: Zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards wird in Abh?ngigkeit vom verwendeten Ger?t entweder Kalibrationsplasma oder Normalpoolplasma (NPP) eingesetzt. ACL TOP Familie: Normalpoolplasma (NPP) sollte zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden. ACL Futura/ACL Advance: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasma zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden. ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasma zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden. ACL Classic (ACL 100-7000): Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Normalpoolplasma (NPP) zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden. Zus?tzliche Reagenzien und Kontrollplasmen Die folgenden Reagenzien sind nicht in der Packung enthalten und müssen zus?tzlich bestellt werden: Amerikan. und Pazifischer Raum Europa Art. Nr. Art. Nr. Kalibrationsplasma 0020003700 0020003700 Reinigungsl?sung 0009831700 0009831700 Reinigungsl?sung 0009832700 0009832700 Qualit?tskontrolle pathologischen Bereich zu überprüfen.8 Es wird empfohlen, als Kontrollmaterial die oben angegebenen Kontrollen zu verwenden. Die Bereiche sind der jeweiligen Packungsbeilage zu entnehmen. Jedes Labor sollte seinen eigenen Kontrollbereich ermitteln. Sp?testens nach jeweils 8 Stunden sollte eine Qualit?tskontrolle durchgeführt werden. Algorithmen zur Beurteilung der Qualit?tskontrollergebnisse siehe z.B Westgard et al.9 Siehe auch “Richtlinien der Bundes?rztekammer zur Qualit?tssicherung quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen” in der jeweils gültigen Fassung. Ergebnisse Heparin Ergebnisse werden in U/mL dargestellt. Zus?tzliche Informationen sind dem Bedienerhandbuch zu entnehmen. Einschr?nkungen Heparin Ergebnisse auf ACL- und ACL Futura/ACL Advance-Analysensystemen werden durch Konzentrationen an H?moglobin bis zu 200 mg/dL, Bilirubin bis zu 20 mg/dL und T riglyceriden bis zu 700 mg/dL nicht beeinflusst. Heparin Ergebnisse auf Systemen der ACL TOP? Familie werden durch Konzentrationen an H?moglobin bis zu 375 mg/dL, Bilirubin bis zu 25 mg/dL und T riglyceriden bis zu 1630 mg/dL nicht beeinflusst. Referenzbereiche Um einen optimalen Effekt bei einem minimierten Risiko bezüglich Blutungen oder thrombotischen Komplikationen zu erzielen, sollte die Heparin-Aktivit?t in dem vom Heparin-Hersteller empfohlenen Bereich liegen.10 Testcharakteristik Pr?zision Die Pr?zision im Lauf und von T ag zu T ag wurde in mehreren L?ufen unter Verwendung von je zwei unterschiedlichen Konzentrationen mit unfraktioniertem (UFH) und niedermolekularem Heparin (LMWH) ermittelt. ACL Familie Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag) unfrakt. Heparin 0,77 1,84 2,18 unfrakt. Heparin 0,23 7,76 8,23 niedermolek. Heparin 0,79 2,68 3,09 niedermolek. Heparin 0,23 7,99 9,69 ACL Futura/ ACL Advance Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag) unfrakt. Heparin 0,79 3,0 6,6 unfrakt. Heparin 0,52 5,7 7,3 unfrakt. Heparin 0,26 9,1 10,0 niedermolek. Heparin 0,76 4,1 4,5 niedermolek. Heparin 0,42 6,2 7,9 niedermolek. Heparin 0,22 10,7 11,9 ACL TOP Familie Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag) unfrakt. Heparin 0,82 1,8 6,4 unfrakt. Heparin 0,53 3,4 4,3 unfrakt. Heparin 0,25 4,6 8,5 niedermolek. Heparin 0,86 2,4 4,4 niedermolek. Heparin 0,49 6,1 8,2 niedermolek. Heparin 0,25 5,7 11,3 Korrelation: System Steigung Ordinatenabschnitt r Referenzmethode ACL Familie 0,968 0,014 0,988 IL Heparin (Xa) ACL Futura/ 0,944 0,035 0,989 IL Heparin (Xa) ACL Advance ACL TOP Familie 1,012 -0,005 0,992 HemosIL Heparin (Xa) am ACL Advance D ie Pr?zisions- und Korrelationsergebnisse sind mit spezifischen Reagenzien- und Kontrollchargen ermittelt worden. Linearit?t: System ACL Familie und ACL Futura/ACL Advance 0 - 1,0 U/mL ACL TOP Familie 0 - 1,1 U/mL Intended use Automated chromogenic assay for the quantitative determination of unfractionated heparin (UFH) and low molecular weight heparin (LMWH) activity in human citrated plasma on the IL Coagulation Systems. Summary and principle Heparin is the most frequently used antithrombotic drug. The biological activity of this sulphated glycosaminoglycan resides in its ability to accelerate (up to 2000-fold) the inhibitory effect of antithrombin on coagulation proteases. In recent years, it has been shown that LMWH, besides being as useful therapeutically as UFH, also has a longer half-life. The Heparin kit is an assay based on a synthetic chromogenic substrate and on Factor Xa inactivation. Heparin levels in patient plasma are measured automatically on IL Coagulation Systems in two stages. 1. Heparin is analyzed as a complex with antithrombin present in the sample. The concentration of this complex is dependent on the availability of antithrombin. In order to obtain a more constant concentration of antithrombin, purified human antithrombin is added to the test plasma.1 Factor Xa is added in excess and is neutralized by heparin-antithrombin complex. 2. Residual Factor Xa is quantified with a synthetic chromogenic substrate. The paranitroaniline released is monitored kinetically at 405 nm and is inversely proportional to the heparin level in the sample.2 Since different kinds of UF- and LMW- Heparins have their own specific anti-Factor Xa activity, the same kind of heparin as is used in the patient sample should also be used for calibrating the standard curve.3,4 Composition The Heparin kit consists of: S Chromogenic substrate (Cat. No. 00020009410): 1 x 4 mL vial of the lyophilized chromogenic substrate S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/vial) and bulking agent. E Factor Xa reagent (Cat. No. 00020009420): 1 x 5 mL vial of a lyophilized preparation containing purified bovine Factor Xa (68 nkat/vial), T ris-buffer, EDT A, sodium chloride and bovine serum albumin. A Antithrombin (Cat. No. 00020009430): 1 x 3 mL vial of a lyophilized preparation containing human antithrombin (3 IU/vial), T ris-buffer, EDT A, sodium chloride and bovine serum albumin. B Buffer (Cat. No. 00020009440): 1 x 8 mL vial of a concentrated solution containing T ris-buffer, pH 8.4, EDT A, sodium chloride and detergent. PRECAUTIONS AND WARNINGS: The material in this product was tested with FDA cleared methods and found nonreactive for Hepatitis B surface Antigen (HBsAg), Anti-HCV and HIV antibodies. Handle as if potentially infectious.5 Hazard class: None Risk phrases: None Safety phrases: None All animal products should be treated as potentially infectious. This product is For in vitro Diagnostic Use. Preparation Chromogenic substrate: Dissolve the vial contents with 4 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of the product. Keep the substrate at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use. Factor Xa reagent: Dissolve the vial contents with 5 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use. Antithrombin: Dissolve the vial contents with 3 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use. Buffer: Dilute the necessary quantity of concentrated buffer 1:10 (1+9) with CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Mix before use. Working buffer: T o 24 mL of diluted buffer add 1 mL of reconstituted antithrombin reagent. Note: An instant opalescence will occur in the lyophilized reagents but it will fade away within 2 minutes.Reagent storage and stability Unopened reagents are stable until the expiration date shown on the vial when stored at 2-8°C. Chromogenic substrate - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or 48 hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP? Family. Factor Xa reagent - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or 48 hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family. Antithrombin - Stability after reconstitution: 3 months at 2-8°C in the original vial. Buffer - Opened reagent is stable 3 months at 2-8°C. Working buffer - Stability after preparation: 7 days at 15°C and 2-8°C in a closed container or 48 hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family. For optimal stability remove reagents from the system and store them at 2-8°C in the original vial. Instrument/test procedures procedure instructions. Note: A cleaning cycle is recommended after running the Heparin assay on the ACL Classic (100-7000) Systems. Specimen collection and preparation Nine parts of freshly drawn venous blood are collected into one part trisodium citrate. Refer to CLSI Document H21-A5 for further instructions on specimen collection, handling and storage.7 Standardization For preparation of the 0.8 U/mL standard use the same heparin as used for patient therapy. Please Note: When preparing the 0.8 U/mL standard depending on the instrument being used either calibration plasma or Normal Pooled Plasma (NPP) should be used. ACL TOP Family: Normal Pooled Plasma (NPP) should be used in preparation of the 0.8 U/mL standard. ACL Futura/ACL Advance: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used in preparation of the 0.8 U/mL standard. ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used in preparation of the 0.8 U/mL standard. ACL Classic (100-7000): As indicated in the Operator’s manual, Normal Pooled Plasma (NPP) should be used in preparation of the 0.8 U/mL standard. Additional reagent and control plasmas The following are not supplied with the kit and must be purchased separately. Americas and Pacific Rim Europe Cat. No. Cat No. Calibration plasma 0020003700 0020003700 Cleaning solution 0009831700 0009831700 Cleaning agent 0009832700 0009832700 Quality control 8 establish its own mean and standard deviation and should establish a quality control program to monitor laboratory testing. Controls should be analyzed at least once every 8 hour shift in accordance with good laboratory practice. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information. Refer to Westgard et al for identification and resolution for out-of-control situations.9 Results Heparin results are reported in U/mL. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information. Limitations/interfering substances Heparin results on the ACL and ACL Futura/ACL Advance Systems are not affected by hemoglobin up to 200 mg/dL, bilirubin up to 20 mg/dL and triglycerides up to 700 mg/dL. Heparin results on the ACL TOP Family are not affected by hemoglobin up to 375 mg/dL, bilirubin up to 25 mg/dL and triglycerides up to 1630 mg/dL. Expected values T o obtain an optimal effect with minimum risk of bleeding or thromboembolic complications the heparin activity should be in the range recommended by the heparin manufacturer.10 Performance characteristics Precision: Within run and total (run to run and day to day) precision was assessed over multiple runs using two levels of sample of both UFH Heparin and LMWH Heparin. ACL? Family Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total) UFH 0.77 1.84 2.18 UFH 0.23 7.76 8.23 LMWH 0.79 2.68 3.09 LMWH 0.23 7.99 9.69 ACL Futura/ACL Advance Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total) UFH 0.52 5.7 7.3 UFH 0.26 9.1 10.0 LMWH 0.76 4.1 4.5 LMWH 0.42 6.2 7.9 LMWH 0.22 10.7 11.9 ACL TOP Family Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total) UFH 0.82 1.8 6.4 UFH 0.53 3.4 4.3 UFH 0.25 4.6 8.5 LMWH 0.86 2.4 4.4 LMWH 0.49 6.1 8.2 LMWH 0.25 5.7 11.3 Correlation: System slope intercept r Reference method ACL Family 0.968 0.014 0.988 IL Heparin (Xa) ACL Futura/ACL Advance 0.944 0.035 0.989 IL Heparin (Xa) ACL TOP Family 1.012 -0.005 0.992 HemosIL Heparin (Xa) on ACL Advance The precision and correlation results were obtained using specific lots of reagent and controls. Linearity: System ACL Family and ACL Futura/ACL Advance 0 - 1.0 U/mL ACL TOP Family 0 - 1.1 U/mL四大图谱综合解析
四大图谱综合解析
1 某未知物分子式为C5 H12 O，它的质谱、红外光谱以及核磁共振谱如图，
它的紫外吸收光谱在200 nm以上没有吸收，试确定该化合物结构。
CCl4稀溶液的红外光谱, CCl4浓溶液 在3360cm-1处有1宽峰
[解] 从分子式C5H12O，求得不饱和度为零，故未知物应为 饱和脂肪族化合物。 未知物的红外光谱是在CCl4溶液中测定的，样品的CCl4稀溶液 的红外光谱在3640cm-1处有 1尖峰，这是游离 O H基的特征吸收 峰。样品的CCl4浓溶液在 3360cm-1处有 1宽峰，但当溶液稀释 后复又消失，说明存在着分子间氢键。未知物核磁共振谱中δ4. 1处的宽峰，经重水交换后消失。上述事实确定，未知物分子 中存在着羟基。 未知物核磁共振谱中δ0.9处的单峰，积分值相当3个质子，可 看成是连在同一碳原子上的3个甲基。δ3.2处的单峰，积分值 相当2个质子，对应1个亚甲基，看来该次甲基在分子中位于特 丁基和羟基之间。 质谱中从分子离子峰失去质量31（－ CH2 OH）部分而形成基 峰m/e57的事实为上述看法提供了证据，因此，未知物的结构 CH3 是
H3C
C
CH3
CH2OH
根据这一结构式，未知物质谱中的主要碎片离子得到了如下 解释。
CH 3
2. 某未知物，它的质谱、红外光谱以及核磁共振谱如图，它的 紫外吸收光谱在210nm以上没有吸收，确定此未知物。
CH2
+ OH m/e31 -2H
+ . CH2OH
H3C
CH3
H3C
C
CH 3
C+
CH3
m/e88 -CH3 m/e29 m/e73
m/e57 -CH3 -H CH 3 C + CH 2
m/e41
[解] 在未知物的质谱图中最高质荷比131处有1个丰度很小的峰，应 为分子离子峰，即未知物的分子量为131。由于分子量为奇数，所以未 知物分子含奇数个氮原子。根据未知物的光谱数据中无伯或仲胺、腈、 酞胺、硝基化合物或杂芳环化合物的特征，可假定氮原子以叔胺形式存 在。 红外光谱中在1748 cm-1处有一强羰基吸收带，在1235 cm-1附近有1典型 的宽强C－O－C伸缩振动吸收带，可见未知物分子中含有酯基。1040 cm-1处的吸收带则进一步指出未知物可能是伯醇乙酸酯。 核磁共振谱中δ1.95处的单峰(3H），相当1个甲基。从它的化学位移来 看，很可能与羰基相邻。对于这一点，质谱中，m/e43的碎片离子 (CH3C=O)提供了有力的证据。在核磁共振谱中有2个等面积(2H)的三重 峰，并且它们的裂距相等，相当于AA’XX'系统。有理由认为它们是2个 相连的亚甲－CH2－CH2，其中去屏蔽较大的亚甲基与酯基上的氧原子 相连。 至此，可知未知物具有下述的部分结构：
O CH 2 CH 2 O C CH 3
从分子量减去这一部分，剩下的质量数是 44，仅足以组 成1个最简单的叔胺基。
CH 3 CH3 N
正好核磁共振谱中δ2. 20处的单峰(6H )，相当于2个连到氮原子上 的甲基。因此，未知物的结构为:
CH3 CH3 O N CH2 CH2 O C CH3
此外，质谱中的基峰m /e 58是胺的特征碎片离子峰，它是由氮原子 的β位上的碳碳键断裂而生成的。结合其它光谱信息，可定出这个 碎片为
CH3 CH3 N CH 2
1《诊断学》 第五节 纤溶活性检测
四大谱图综合解析
数值分析试题及答案解析
临床检验诊断学专业学位
出凝血191蛋白C(PC)活性测定(发色底物法)(第四版)(精)
发色底物法
HemosIL Heparin(发色底物法测定肝素)
相关主题
文本预览