小鼠脂肪细胞取材流程：
Protocol:
i. Sacrifice each mouse (C57BL/6J, 8–10 weeks old) by carbon dioxide asphyxiation. Wipe with 70% ethanol and open abdominal area. Using sterilized forceps and scissors, dissect perigonadal (epididymal in male and parametrial in female) and/or subcutaneous inguinal fat pads and place into 6 cm petri dishes containing HBSS. We advise proceeding immediately to digestion of fat tissue on the day of harvest. Chilling or freezing the tissue for storage purposes makes subsequent collagenase digestion more difficult.
ii. Add an equal volume of collagenase solution (to weight of fat pads) into autoclaved scintillation vials and warm to 37°C.
iii. Rinse fat pads in HBSS, dry with Kimwipes and place into collagenase solution. iv. Finely mince the tissue with a sterilized scissor.
v. Shake vials (~100 rpm) in a 37°C water bath shaker for 30 to 60 min. Check digests every 10 min and stop reaction when complete. The digestion efficiency varies with speed and type of shakers and batch of collagenase used. You should see a white fat layer separated and, when the vials settle, it floats on top of the solution.
vi. Transfer and filter the digested solution through a 250 μm nylon filter. Then filter through a 100 μm cell strainer and transfer the filtrate into 15 ml or 50 ml ce ntrifuge tubes. Centrifuge at 400g for 5 min at room temperature.
vii. Carefully aspirate the floating layer containing mature adipocytes and aqueous supernatants, leaving the pellet. This pellet is the stromal vascular fraction (SVF). viii. Resuspend the pellet with 10 ml HBSS. Centrifuge again at 400g for 5 min.
ix. Repeat the washing step three times.
x. If the pellet appears red, rupture the red blood cells by adding 10 ml erythrocyte lysis buffer. Pipet up and down to resuspend the pellet. The solution should become
red. Leave for 5 min at room temperature and centrifuge for 5 min. Aspirate the supernatant. （Optional）
xi. Resuspend the pellet in 10 ml Expansion DMEM media and plate onto Petri dishes.
xii. Incubate at 37°C in a 5% CO2 incubator for 1 hour. The majority of hematopoietic lineage cells such as monocytes/macrophages will attach to the Petri dish at this stage.
xiii. Transfer non-adherent cells (containing ADS cell populations) to 10 cm regular culture dishes and incubate at 37°C in a 5% CO2 incubator. We typically culture cells isolated from 2 – 3 g fat in one 10 cm dish.
xiv. Change the media after 24 h. After that, feed cells every 3 d until cells reach around 80% confluency. mADS cells should exhibit a large and flat fibroblastic morphology.
Related reagents are being ordered:
1. Type I collagenase (Worthington Biochemical, cat. no. LS004196)
2. Falcon 100 μm cell strainers (BD, cat. no. 352360)
3. Adenosine (Sigma, cat. no. A9251)
小鼠皮下脂肪细胞 小鼠皮下脂肪细胞产品说明： 为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠皮下脂肪细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠皮下脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠皮下脂肪细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠皮下脂肪细胞产品简介： 1、产品名称：小鼠皮下脂肪细胞 2、组织来源：小鼠脂肪组织 3、产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶 小鼠皮下脂肪细胞简介： 小鼠皮下脂肪细胞来源于小鼠脂肪组织，皮下脂肪细胞主要功能： （1）脂肪细胞能储存能量并参与身体代谢。 （2）脂肪细胞分化是一个发展的过程，它对代谢稳态和营养信号很重要。（3）前脂肪细胞存在于小鼠脂肪组织中，能根据能量的平衡增殖和分化成熟的脂肪细胞。前体细胞的增殖和分化能够增加脂肪组织的体积。 （4）前脂肪细胞与脂肪分化以及许多生理病理过程密切相关，如脂肪代谢、能量平衡、肥胖、糖尿病、高血脂和乳癌，所以小鼠皮下脂肪细胞对这些疾病的研究提供素材。
脂肪酸检测--科标检测 通过实验结果，发现在大部分含油脂丰富的食物中，有一半左右的热量是由脂肪和油类提供的。天然的脂肪和油类通常是由一种以上的脂肪酸与甘油形成的各种酯的混合物。脂肪是人体的三大供能营养素之一，对人体有许多重要的生理作用。脂肪的成分中大于90%是脂肪酸，而脂肪酸可分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，其中多不饱和脂肪酸中n-6系和n-3系含有人体的必需脂肪酸，也就是人体无法合成而必须从食物中获取的脂肪酸。所以对食品中脂肪酸的检测十分必要。 在众多脂肪酸检测方法中，GC-MS联用技术发展较早，成熟度较高，其优势在于：微量或痕量分析，灵敏度高，检出限低，分离度好，分辨率高，重复性佳，保留时间稳定；且由于已有成熟的商品化标准谱图数据库，可对未知化合物进行快速检索和鉴定，是一种较为理想的脂肪酸分析技术。 科标化工分析检测中心可依照ISO、ASTM、DIN、GB、HB等标准完成食品、饲料、药品、纺织品、农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及其他产品理化性能、力学性能、电气性能等测试。中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会（CMA）实验室认证认可，能出具权威的第三方检测报告。此外，本中心分析能力较强，能对橡胶、塑料、油墨、涂料、各类助剂、胶黏剂、未知物等进行成分分析和鉴定，能对市场上新的产品进行配方分析，为顾客产品研发生产排忧解难。 脂肪酸检测(气相色谱质谱联用法) 一、实验原理 科标中心参照国标及各种文献将脂肪酸衍生化成脂肪酸甲酯，使用十九酸内标，用正己烷提取后稀释后用气相色谱质谱联用仪，外标法结合内标法定量分析。 二、仪器和试剂 Thermo Trace1310气相色谱质谱联用仪，HH-4数显恒温水浴锅；盐酸、甲醇、氯仿为分析纯试剂，正己烷为色谱纯试剂。 三、试验方法 1、样品提取 称取适量样品，加入4mL的甲醇/CH2Cl2（1:3）混合溶液，摇匀；恒温在30℃以下超声抽提10min。取出离心管，放于离心机中离心（1800rpm，10min），收集上清液，重复3次；将萃取液在柔和氮气流下吹干。
脂肪干细胞治疗E D Prepared on 22 November 2020
EBioMedicine 前列腺癌根治术后勃起功能障碍患者海绵体内注射自体脂肪干细胞的安全 性和潜在功能性研究：一个开放的I期临床试验 Martha Kirstine Haahr a,e,f,1, Charlotte Harken Jensen b,e,1, Navid Mohamadpour Toyserkani c,e,f, Ditte Caroline Andersen b,e,f, Per Damkier b,f, Jens Ahm Srensen c,e,f, Lars Lund a,e,f, Sren Paludan Sheikh b,d,e, 摘要 背景：前列腺癌是男性最常见的癌症，而前列腺癌根治术（RP）通常会导致勃起功能障碍 （ED），严重影响患者术后的生活质量。当前的干预，主要包括PDE-5抑制剂，但治疗效果 乏善可陈。有文献指出，利用脂肪干细胞来治疗ED得到了潜在的满意结果。本研究中我们 使用自体吸脂后新鲜分离的脂肪来源的再生细胞（ADRCs）进行了一个前瞻性的一期的单 臂临床试验。 方法：17名前列腺癌根治术后的ED患者，使用传统疗法，无法得到满意的效果。本研究为 前瞻性的一期的单臂临床试验。所有受试者在入组之前进行5-18个月都经历了前列腺癌根 治术，随访到海绵体内注射6个月后。ADRCs根据其干细胞表面标记物进行分选。主要终 点是细胞治疗的安全性和耐受性，而次要结果是勃起功能的改善。记录任何不良事件，而 勃起功能使用IIEF-5评分。本研究注册账号为：NCT02240823。 研究结果：在为期一个月的评估中，海绵体内注射ADRCs的耐受性良好，只有使用脂肪提 取液引起的不良反应，而在其后的研究随访中均未见效果报道。在研究期间，总体而言， 8人恢复了勃起功能并能完成性交。进行分层分析之后，非尿失禁患者（平均IIEF= 7 （95％ CI 5-12），11人中的8人恢复勃起功能（IIEF6个月= 17（6-23）），（P = ）。相 比之下，失禁患者没有恢复勃起功能（中位IIEF1/3/6 个月= 5（95％CI 5-6）; 平均差1 （95％CI ），P ＞）。 解释：新鲜分离的自体ADRCs海绵体内注射是一种安全的手术。并且具有改善IIEF评分 和勃起功能的作用。具有良好的应用前景 资金：丹麦医学研究理事会，欧登塞大学医院和丹麦癌症协会。 1.介绍 很多基础研究对于干细胞治疗效果的前景进行了报道，并已吸引了 非常广泛的研究瞩目。在临床实践中，然而，这类研究大部分仍停留在 实验室阶段，除了骨髓移植和化疗期间的干细胞治疗。而临床使用干细 胞治疗勃起功能障碍（ED）是一种可行的临床实践方案。
小鼠棕色脂肪和白色脂肪的识别 ——白色脂肪、棕色脂肪及脂肪肝含量的CT 测量研究 关键词：白色脂肪、棕色脂肪（BAT）、肝脏脂肪、定量核磁共振法quantitative magnetic resonance (QMR)、LaTheta LCT-200 (Hitachi-Aloka, Tokyo, Japan) 选自PLoS ONE, May 2012 研究背景：现代的生活方式导致了肥胖的高发。由能量摄取和消耗不平衡所导致的肥胖通常 会伴随高血压，血脂异常，冠心病等症状，最终导致新陈代谢异常。脂肪的分布而不是总脂 肪量决定了新陈代谢的状况。皮下脂肪对人体有益，而内脏脂肪的增加及肝脏、骨骼肌及胰 腺的异常脂肪量则会增加2 型糖尿病的风险。另一个与新陈代谢疾病密切相关的是广泛存 在的非酒精性脂肪肝疾病。最近，棕色脂肪（BAT）逐渐吸引了广泛的关注。棕色脂肪的研 究主要集中在小动物体内，然而新的数据表明BAT 同样在成人体内发挥作用，BAT 的量与 BMI 值呈现负相关性，表明棕色脂肪在人体内能量代谢的作用。 目前检测人体腹部脂肪和肝脏脂肪含量的金标准是MRI and CT。小鼠的身体脂肪通常由定 量核磁共振法quantitative magnetic resonance (QMR) 所测量，该技术测量精确，不需对 动物麻醉且测量速度快，但是无法区分皮下脂肪和内脏脂肪，因此在本次实验中，我们使用LaTheta LCT-200 (Hitachi-Aloka, Tokyo, Japan), 来区分腹部脂肪及皮下脂肪并对两部分 脂肪进行定量研究，同时我们也用该仪器测量了肝脏脂肪含量及棕色脂肪情况。 方法：我们使用不同的消瘦及肥胖小鼠模型(C57BL/6, B6.V-Lepob, NZO) 来确定扫描不同 部位脂肪的最佳的扫描参数。数据与扫描后的实际称重相比较。肝脏脂肪量由生化分析法测 定。 结果：脂肪组织经天平称重的值与经CT 测量值的相关性为：皮下脂肪(r2 = 0.995), 内脏 脂肪(r2 = 0.990)，总的白色脂肪(r2 = 0.992). 另外，利用腹部区域（腰椎L4 到L5 之间） 的扫描与身体脂肪的相关性可以减少扫描时间，并降低对实验动物的辐射及麻醉。 CT 扫描所得的肝脏脂肪量与生化分析的结果呈线性相关(r2 = 0.915)。另外，棕色脂肪的 CT 测量结果与天平测量的结果呈高度相关(r2 = 0.952)。短期冷冻(4℃, 4 hours) 导致棕 色脂肪含量变化，从而引起甘油三脂变少，这种变化可由CT 成像时CT 值的增加体现。 结论：LCT200 对小鼠总脂肪，皮下脂肪、内脏脂肪及棕色脂肪、肝脏脂肪的3D 成像及定 量分析可靠准确，这种非入侵的方式可以使我们对小鼠的肥胖情况进行长期的扫描研究。
脂肪酸与人体健康 脂肪酸是具有长碳氢链和一个羧基末端的有机化合物的总称。自然界约有40多种脂肪酸，但能被人体吸收利用的却只有偶数碳原子的脂肪酸，人体所含的脂肪酸一般为14-24个碳原子，只有视网膜例外，含有多达36个碳原子的脂肪酸。 对人体健康有重要影响的脂肪酸 1 单不饱和脂肪酸（MUFA） （MUFA）的碳链中只含有一个不饱和双键，MUFA 可降低血浆总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDL）的水平，但甘油三酯（TG）水平不升高，高密度脂蛋白（HDL）水平有所升高。MUFA 在降低冠心病的危险性方面具有十分重要的意义。它主要是对凝血功能，血压，血脂等方面进行调节从而影响着冠心病的发生。 MUFA 对凝血功能的影响 首先是对内皮细胞功能的影响，内皮细胞通过释放舒血管和缩血管物质来调节血管的紧张度，内皮细胞分泌的多种代谢产物与血液凝固、血纤蛋白溶解、黏附等有关。MUFA 可通过影响动脉壁中不同物质对动脉粥样硬化的过程发挥作用。 其次是对凝血功能的影响，血栓形成是冠心病的临床症状之一，而血小板聚集、血液凝固和血纤蛋白溶解共同影响着血栓的形成。MUFA 可减少胶原诱导的血小板聚集而影响凝血过程。 MUFA对血纤蛋白溶解也有影响。在血栓形成过程中，血纤蛋白溶解有重要作用，是通过组织型纤溶解酶原激活剂和抑制剂之间的平衡调节实现的。实验研究结果显示，摄入富含MUFA膳食导致抑制剂血浆浓度降低，提示血纤蛋白溶解活性升高。还有实验表明富含MUFA 的地中海膳食具有防止血栓形成的作用。 MUFA 对血压的影响 MUFA 具有降低血压的作用，收缩压和舒张压均可下降3%～9%。MUFA 能降低冠心病发病的危险性达27%，为高血压的预防提供了一条营养途径。 MUFA 对血脂的影响 LDL 的氧化修饰是动脉粥样硬化的初始原因，当LDL 颗粒中MUFA 含量较高时，其LDL 的氧化敏感性则降低。Baroni等对高胆固醇血症患者的研究中表明：MUFA 含量多的LDL 则不易被氧化修饰。有人认为橄榄油的抗LDL 氧化作用可能与其中含有多酚类化合物有关。有人对花生油的研究证实：富含
脂肪干细胞的提取及鉴定 一、脂肪干细胞(ASCs)的提取及鉴定 1、实验技术及原理: 运用细胞培养技术、流式细胞术(体外扩增后ACSs的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化)，差异离心术(可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除ASCs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态)。取C57BL,6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液，0.075%II型胶原酶消化(37?，30分钟)以去除外基质，生理盐水终止胶原酶的消化，离心(1200g,10分钟)，去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DMEM重悬细胞沉淀，0.16mol/L氯化氨溶解剩余红细胞，离心洗涤，过200目铜网，得到单个核细胞。?镜下计数，按10个细胞/ml种植在培养瓶中，37?5%CO2孵箱培养，24小时后第一次换液，以后3天换液一次，80%融合后0.25% Trypsin,0.02%EDTA消化传代。细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型(CD29/CD44)的鉴定。 2、实验用品: 2.1 材料:C57BL,6 WT小鼠 2.2 试剂:PBS液，0.075%II型胶原酶消化，10%FBS，低糖DME M 2.3 仪器设备:超净工作台、恒温培养箱、普通显微镜、倒置显微镜、离心机、离心管、解剖剪、眼科剪、镊子(尖头、平头和有沟镊)、小烧杯，200目铜网过滤器，低糖DMEM、血球计数板、橡皮瓶塞、酒精灯、换药碗 3、细胞培养的方法与步骤:
小鼠前脂肪细胞 小鼠前脂肪细胞产品说明： 为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠前脂肪细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠前脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠前脂肪细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠前脂肪细胞其他相关小鼠原代细胞： 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞
脂肪干细胞成脂诱导及鉴定程序 一、试剂准备 （一）成脂分化诱导液（Adipogenic Medium, AM）配方【1】： 试剂名称浓度商品信息 1.极限必须培养基 (Dulbecco’S Modified Eagle Medium ，DMEM) 1.0 L (SH30021.01B, Hyclone) 2.胎牛血清 （Fetal Bovine Serum，FBS）10% (ES-009-B, Millipore) 3.青霉素/链霉素 （Penicillin/Streptomycin）1% （TMS-AB2C, CHEMICON） 4.地塞米松 (Dexamethasone,DM) 1μmo／L 分子量：392.46 (D4902-25MG, Sigma) 5.胰岛素 (Insulin, IS) 10 μmol／L 分子量：5808 (91077C—1g, Sigma) 6.3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 (Isobutylmethylxanthine,IBMX) 0.5 mmol／L 分子量：222.24 ( I5879-100MG, Sigma) 7.吲哚美辛 (Indomethacin,ID) 200 μmol／L 分子量：357.79 (I7378—5G, Sigma) （二）成脂分化诱导液浓储液配制 试剂名称质量浓缩倍数配制方法 1.Stock A 胎牛血清1ml/管1X( liquid）分装1ml/管X100 保存：-20℃ 2.Stock B 青霉素/链霉素0.1ml/管100X( liquid）分装0.1ml/管X100 保存：-20℃ 3.Stock C 地塞米松0.0117738 g 1000X 溶于30ml 无水乙醇(0.1%) 分装0.1ml/管X300 保存：-20℃ 4.Stock D 胰岛素0.05808 g100X 溶于10ml Hcl(0.1 mol/L，PH2.0) 分装0.1ml/管X100 保存：4℃ 5.Stock E 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.05556 g 200X 溶于2.5ml DMSO(0. 5%) 分装0.05ml/EP管X50 保存：-20℃ 6.Stock F 吲哚美辛0.07155 g 500X 溶于2ml 无水乙醇(0.2%) 分装0.02ml/管X100 保存：-20℃ （三）成脂分化诱导液工作液配制（10ml） 1.取DMEM(L)8.72ml加入15ml离心管（BD）; 2.加1管Stock A（1ml）； 3.加1管Stock B（0.1ml）； 4.取1管Stock C（0.1ml）溶解，加入0.01ml； 5.加1管Stock E（0.05ml）；
?专科小词典? 脂肪干细胞 脂肪干细胞（ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＡＤＳＣｓ）是一种从脂肪组织中分离提取出的能够贴壁生长、具有可塑性、黏附性和多向分化潜能的中胚层来源的成体干细胞。 ２００１年，Ｚｕｋ等通过脂肪抽吸术，在吸出的人体脂肪悬液中第一次分离得到了多向分化的干细胞。传代后培养的ＡＤＳＣｓ，多角细胞逐渐减少，传代至第三代时基本消失，大多为梭形细胞，胞浆核仁十分丰富，与骨髓间充质细胞基本没有区别，多次传代后细胞生长速度也无减慢趋势，显示出ＡＤＳＣｓ具有易获得、易扩增、不易衰老的明显优势。ＡＤＳＣｓ表面的免疫标识会随传代的次数而发生改变，其中ＣＤ１６６、ＣＤ１０６、ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ６３、ＣＤ４４、Ｃ２９在最初表达量较低，随传代次数的增加而显著增加；与干细胞相关的表面标志ＣＤ３４一直持续较高的表达水平。ＡＤＳＣｓ一般不表达ＣＤ６２、ＣＤ５６等。ＡＤＳＣｓ可以分化为源于中胚层的多种细胞类型，包括骨骼肌、心肌、软骨、脂肪、成骨等，向心肌细胞分化能力是最低的。此外还可以分化为源于外胚层的神经细胞和源于内胚层的胰腺细胞。ＡＤＳＣｓ还可能有助于血管和造血细胞的生成。 由于脂肪组织在人体大量存在，取材容易，少量组织即可获取大量干细胞，能够在体外稳定增殖且衰亡率低，适宜大规模培养，对被采集者身体健康影响小，加上真空负压抽脂术已是成熟的整形技术。因此ＡＤＳＣｓ显示出了其他干细胞所不能及的应用前景。 （广州医科大学附属第一医院骨科严广斌整理）?８５３?中华关节外科杂志（电子版）２０１６年６月第１０卷第３期 ＣｈｉｎＪＪｏｉｎｔＳｕｒｇ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｊｕｎｅ２０１６，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．３
人脂肪间充质干细胞体外分离培养方法 间充质干细胞属于成体干细胞，广泛存在于骨髓、脂肪和脐带等组织，下面是小编搜集整理的一篇探究干细胞体外分离培养方法的，供大家阅读查看。 大面积皮肤缺损、重度烧伤的传统修复方法-自体或异体皮肤移植，因存在免疫排斥和供区不足等缺陷而限制了广泛临床应用。近年来，干细胞相关机制及应用的研究为皮肤创伤的治疗带来了新突破。研究显示，间充质干细胞能维持皮肤稳态和促进皮肤创面修复，其机制包括促进细胞分化、免疫调节和分泌生长因子来促进创面再上皮化和血管形成[1-2].人脂肪间充质干细胞(humanadipose-derivedmesenchymalstemcells,hAD-SCs)是由Zuk等[3]首次从抽脂术脂肪中分离出的一类具有多向分化能力的细胞群，因其具有来源丰富、容易获取和扩增快等优点，是组织工程的理想种子细胞。本实验旨在提供一种有效的hADSCs体外分离培养方法，为以后临床细胞移植提供实验基础。 1材料与方法 1.1材料成人腹部大网膜脂肪组织7例取自江苏大学附属医院产科剖宫产手术患者，年龄17~33岁，平均为26岁，健康状况良好，无系统性疾病。低/高糖DMEM、Ⅰ型胶原酶(Gibco公司),胎牛血清(Hyclone公司),鼠抗人单克隆抗体CD29-FITC、CD44-FITC、CD45-FITC、CD73-FITC、CD90-PE、CD105-PE、CD166-PE、HLA-DR-PE及其相应同型对照(eBio-sciences公司),地塞米松、抗坏血酸磷酸盐、β-甘油磷酸钠、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、胰岛素(Sigma公司). 1.2方法 1.2.1hADSCs细胞分离培养产科无菌条件下取出腹部大网膜脂肪组织约 10ml,PBS清洗，剪碎，0.1%Ⅰ型胶原酶37℃消化45min,10%胎牛血清终止消化，离心，沉淀重悬，200目细胞筛过滤，再离心。加入完全培养液(含10%胎牛血清、1×双抗的低糖DMEM)重悬，以5×104/ml接种于6孔板，置于37℃,5%CO2培养箱中培养，48h后首次换液，之后每周换液2次，待细胞生长至80%融合时，0.25%胰酶-0.02%EDTA消化传代。实验时用第3~9代细胞。 1.2.2细胞免疫表型检测取消化消化贴壁的第3代hADSCs,1000r/min离心5min,用PBS重悬分装于1.5ml的EP管中，每管100μl,细胞密度为105/ml,加入鼠抗人CD29、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、CD166E、HLA-DR等单克隆抗体及其同型对照。4℃避光孵育30min,PBS洗2次，加PBS300μl重悬后流式细胞仪检测细胞表面抗原。 1.2.3细胞生长曲线和倍增时间取处于对数生长期的第3、6和9代细胞，消化贴壁细胞，将细胞按5×103/孔接种于24孔板，分7组，每组3孔，置培养箱培养。每24h用台盼蓝计数一次，每次计3孔，取其平均数;连续计数7d,
A D S C s的分离与纯化关于ADSCs的获取方法很多，但不管哪种方法所得到的并非单一的脂肪干细胞，是一组具有干细胞特性的细胞群。目前应用最广泛的分离方法是酶胶原消化法。首先将无菌条件下切取的脂肪组织块剪成细小的颗粒，PBS液冲洗干净后，用0．1％的胶原酶在37℃下振荡消化4O～90min，再用含10％胎牛血清的等体积DMEM培养基终止。1200r ／min离心5～10min，弃上清液及悬浮的脂肪组织，重悬细胞后经过细胞筛过滤，所得细胞按2—4×105／cm接种于50ml培养瓶内。37℃条件5％的CO饱和湿度培养箱内培养，2d后首次换液，以后3d换液一次，至细胞达70％～8O％融合时用0．25％胰酶消化，并传代。经过提取获得的以脂肪干细胞为主的细胞群接种后数小时即开始贴壁生长，24h内完成贴壁。细胞的形状与成纤维细胞相似，体积较小，核浆比较大，随后细胞体积渐增大，克隆形成。经传代后，细胞的形态及排列才趋于一致。由于目前尚未发现脂肪干细胞表面存在特异性的分子标记物，因此无法利用分子表型来分离纯化。然而可通过纯化脂肪组织块来间接达到纯化脂肪干细胞的目的。流式细胞仪检测显示：传至第3代时，可达95％以上的细胞纯度。 ADSCs的生物学特性 1.ADSCs的鉴定
在ADSCs鉴定上，现阶段尚无特异性鉴定方法。用免疫荧光法和流式细胞术检测结果均显示ADSCs表达特异性分子CD44，OCT一4，E—eadherin，流式细胞术检测细胞周期显示绝大多数细胞是处于静止期的干细胞，传代后生长迅速，随机挑选来源标本，对细胞进行染色体核型分析显示ADSCs具有遗传稳定性。 ADSCs分泌多种生长因子 在生理功能方面，脂肪干细胞能分泌相当数量的细胞因子，包括肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PGF)、转化生长因子一B(TGF—B)、成纤维细胞生长因子(FGF一2)等，低表达的因子有Ang一2C。 2.ADSCs的多向分化能力 与骨髓间充质干细胞相比，脂肪干细胞具有储量丰富、取材容易、扩增迅速、不宜衰老、排斥反应低等优点。在特定培养基和特异的诱导剂作用下可分化为特定的体细胞，在组织修复、细胞移植、基因治疗等领域有着潜在价值。 向脂肪细胞分化：在特定培养基中加入一定浓度地塞米松、胰岛素、吲哚美辛及1一甲基一3～异丁基一黄嘌呤，3周后发现ADSCs向脂肪细胞分化，可检测出ADSCs表达许多脂肪细胞的特异性标记：脂蛋白脂肪酶、脂肪酸结合蛋白aP2、PPAR—r2、leptin(瘦素)、Glut4(葡
小鼠脂肪细胞取材流程： Protocol: i. Sacrifice each mouse (C57BL/6J, 8–10 weeks old) by carbon dioxide asphyxiation. Wipe with 70% ethanol and open abdominal area. Using sterilized forceps and scissors, dissect perigonadal (epididymal in male and parametrial in female) and/or subcutaneous inguinal fat pads and place into 6 cm petri dishes containing HBSS. We advise proceeding immediately to digestion of fat tissue on the day of harvest. Chilling or freezing the tissue for storage purposes makes subsequent collagenase digestion more difficult. ii. Add an equal volume of collagenase solution (to weight of fat pads) into autoclaved scintillation vials and warm to 37°C. iii. Rinse fat pads in HBSS, dry with Kimwipes and place into collagenase solution. iv. Finely mince the tissue with a sterilized scissor. v. Shake vials (~100 rpm) in a 37°C water bath shaker for 30 to 60 min. Check digests every 10 min and stop reaction when complete. The digestion efficiency varies with speed and type of shakers and batch of collagenase used. You should see a white fat layer separated and, when the vials settle, it floats on top of the solution. vi. Transfer and filter the digested solution through a 250 μm nylon filter. Then filter through a 100 μm cell strainer and transfer the filtrate into 15 ml or 50 ml ce ntrifuge tubes. Centrifuge at 400g for 5 min at room temperature. vii. Carefully aspirate the floating layer containing mature adipocytes and aqueous supernatants, leaving the pellet. This pellet is the stromal vascular fraction (SVF). viii. Resuspend the pellet with 10 ml HBSS. Centrifuge again at 400g for 5 min. ix. Repeat the washing step three times. x. If the pellet appears red, rupture the red blood cells by adding 10 ml erythrocyte lysis buffer. Pipet up and down to resuspend the pellet. The solution should become
Medivet In House Adipose Stem Cell Procedure Kit Procedure Manual 脂肪干细胞套组 操作步骤 美联申德美联申德（（南通南通））进出口有限公司 https://www.doczj.com/doc/a017576787.html,
操作要点 1. 所有操作步骤都要遵从无菌操作的原则，人员必须穿戴灭菌手套、口罩、头套 2. 开始进行操作之前，工作台必须先以70%酒精擦拭干净 3. 离心机的设定请遵守下列规范设定：Rotor →3, Acceleration →9和 Deceleration →1 4. 为避免离心机故障损坏，使用前请确保放置样本的离心管对侧，存有相同重量的离心管 5. 水浴槽请设定在37℃以及震荡设定钮设定到 3.5，而且使用前请提早预热20分钟 6. 使用前请确保药瓶与溶液混合均匀 注意事项 1. 脂肪干细胞增殖套组(ADIPOSE STEM CELL KIT)整盒需冷藏保存为宜 2. 其中药剂B液(vial B Medistem)特别需要冷冻保存
第一步骤‐ 准备富含血小板血浆(Platelet Rich Plasma, PRP) (Platelet Rich Plasma, PRP) 富含血小板血浆含有大量的生长因子，而且取自于病患自身的血液，这些生长因子可以活化干细胞并且促进干细胞增殖。操作如下： 1. 将三支ACD‐A试管装满5 ml血液，并且上下翻转混合8次。 2. 将试管以1000g (2500rpm)的条件离心4分钟。 3. 以微量滴管吸取三支试管的血浆层(上层)，置入15 ml试管中，吸取的过程中避免接近血 球层，每管可留下约5 mm高度的血浆，避免吸到血球。 4. 将装有血浆的15 ml试管放入离心机，以1000g (2500rpm)的条件离心8分钟，通常离心后 可见底部存有少量的血小板。 5. 以微量滴管将上层血浆抽出移除，留下约3 ml高度的血浆，接着将底层的血小板与剩下 的3 ml血浆混合均匀，这就是富含血小板血浆。 6. 以1 ml针筒抽取药剂G 0.5 ml，并加入富含血小板血浆之中，混合均匀。经过大约5 – 15分钟活化后可见富含血小板血浆呈现果冻状。当果冻状富含血小板血浆出现后，就可以暂时放置在室温中，若1 – 2小时后要使用富含血小板血浆时见到少量溶解，属于正常现象。或者可放置在Medivet水浴槽37℃可加快活化作用。
小鼠内脏脂肪细胞 小鼠内脏脂肪细胞产品说明： 为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠内脏脂肪细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠内脏脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠内脏脂肪细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠内脏脂肪细胞其他相关小鼠原代细胞： 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/a017576787.html, 人脂肪干细胞（ADSCs）体外培养的研究及应用进展 作者：徐巧瑜等 来源：《中国美容医学》2012年第13期 干细胞是一类具有自我更新与增殖能力的细胞，按其分化阶段不同分为胚胎干细胞与成体干细胞，目前对成体干细胞的研究较为广泛。人的脂肪干细胞（adipase derived stem cells，ADSCs）是来源于脂肪组织的干细胞，具有自我更新及多向分化的能力，在适宜诱导条件下可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。自从2001年ZUK[1]首次通过吸脂术抽取脂肪组织悬液培养出多能干细胞，ADSCs因其取材方便，一次取材获取的细胞数量大，对供体创伤 小等优点已成为近年来种子细胞的研究热点。 1 ADSCs的获取 脂肪组织是人体中含量最丰富的组织，占正常体重的10%～29%[2]。它的存在主要有两种形式：棕色脂肪组织及白色脂肪组织。其中棕色脂肪组织仅在婴儿期发挥作用，而白色脂肪组织在人体起到储存及释放能量的调节器作用，主要分布在腹腔内的网膜、肠、肾周及臀部、大腿、腹部的皮下区域[3]。因此研究重点集中在白色脂肪组织。目前，ADSCs主要通过局部脂肪切除术及抽脂术后的脂肪组织中获取，但Vallee等[4]发现由抽脂术获得的脂肪有更好的成 脂潜力、重建三维脂肪替代物能力。供者的年龄也是影响ADSCs的因素。一般来说供者的年龄越小，细胞增生能力越好，反之亦然。然而，AustL等[5]却认为ADSCs的衰老与供体的体质指数呈负相关，而与年龄无关。取材部位不同，ADSCs数量凋亡倾向也不同。Schipper等[6]发现人前臂脂肪组织中含有更多的脂肪干细胞，而腹部的ADSCs不容易凋亡；腹部似乎比臀部或大腿更有利于获取ADSCs[7]。 2 ADSCs分离培养 2.1分离：目前常用的是酶消化法，将脂肪组织剪碎后采用胶原酶或胰酶消化、过滤离心后，使用含血清的培养基将沉淀重悬后接种于培养瓶中。沉淀物是多种细胞的混合物，又称为血管基质成分（Stromal vascular fraction，SVF），其中含有内皮细胞、周细胞、平滑肌细胞、前脂肪细胞、间充质干细胞及血液来源的细胞，常需传代来纯化。 2.2 培养：体外培养需要合适的生长条件，培养基的选择很重要。常用的培养基有DMEM、a-MEM、RPMI1640。Lee等[8]报道L-DMEM比a-MEM更适合培养ADSCs。Mischen等[9]研究表明低糖更有利于维持ADSC的多分化潜能，而培养液中的抗生素对ADSC 的细胞表型和分化能力无影响。Bunnell等[10]认为25%血清浓度可能使ADSC向脂肪细胞分化，而低氧低血清可增加ADSC凋亡。对于最优的糖浓度及血清浓度尚不明确。为了消除动物血清的使用带来的不良影响，部分文献开始介绍低人血清培养基或无血清培养基的使用。
第一章 现代文明病与脂肪酸 1、现代文明病 随着科技发展与社会进步，一些长期危害人类健康的疾病，如营养不良、恶性传染病已被逐步根除或得到有效控制，人类的寿命明显延长。然而，另一类危害人类健康的疾病，包括肥胖、高血压、高血脂、心脑血管疾病、糖尿病和癌症等现代文明病已成为致命的主要原因。 粗看起来，这些病各有成因，实际上却彼此联系，互为因果。摄入过量脂肪而消耗不足，人就会发胖。肥胖多伴有高血脂。血脂沉积在血管内膜下就是动脉粥样硬化，沉积在肝脏就引起脂肪肝。动脉硬化发生在心脏会引起心绞痛、心肌更塞；发生在脑血管就容易形成脑血栓、引起脑中风。而多发性脑血栓又是早老性痴呆的主要原因。 人类90%的糖尿病属于Ⅱ型，多见于肥胖型中老年人。糖尿病使全身代谢紊乱，以血管受损最重；血管狭窄加上肾缺血必然会引发高血压。脂肪肝极易硬化和癌变，所以肥胖者易患多种癌症。 这就是现代文明病的简单因果关系。 2、“好脂肪”和“坏脂肪” 导致现代文明病的主要原因是营养过剩、脂肪作祟。那么，什么营养过剩？脂肪如何作祟？ 人是由亿万个细胞组成的有机整体。在人体需要的各种营养物质中，蛋白质不容易缺乏，几乎任何肉食都可以满足8种必需氨基酸，而且应当限制。正常的饮食维生素、微量元素一般都不缺乏，唯有脂肪易过量，而且是“好脂肪”少“坏脂肪”多。 人类可食用的脂肪是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成。其中： 1)、饱和脂肪酸：主要存在于动物油和肉类、蛋类、奶制品中。这类脂肪酸过量，能引起人体血脂增高，引发动脉硬化等心脑血管病变。 2）、单不饱和脂肪酸（油酸、芥酸）：在橄榄油、菜籽油、花生油中含量较高，对人体不产生动脉病变，即不明显升高血脂，也不明显降低血脂。 3）、多不饱和脂肪酸：可分为： ω-6系列脂肪酸：以亚油酸为主，可在 人体内转化为花生四烯酸，含量较多的食用油有花生油、玉米油、葵花油、豆油、棉籽油等。 ω-3系列脂肪酸：包括α-亚麻酸、EPA、DHA（深海鱼油的主要成分），其中，α-亚麻酸是ω-3系列脂肪酸的母体，被称为生命核心物质，主要含于亚麻油、紫苏油中。 这两种脂肪酸都是人体必需脂肪酸。 3、认识人体必需脂肪酸
红色的是参考同类实验所用的方法，比例，不知道在我们实验室可行不，黄色是疑问的地方，希望老师解答下谢谢 一、脂肪干细胞（ASCs）的提取及鉴定 1、实验技术及原理：运用细胞培养技术、流式细胞术（体外扩增后ACSs的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化），差异离心术（可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除ASCs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态）。取C57BL／6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液， 0.075%II型胶原酶消化（37℃，30分钟）以去除外基质，生理盐水终止胶原酶的消化，离心（1200g,10分钟），去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DMEM 重悬细胞沉淀，0.16mol/L氯化氨溶解剩余红细胞，离心洗涤，过200目铜网，得到单个核细胞。镜下计数，按10⒋个细胞/ml种植在培养瓶中，37℃5%CO2孵箱培养，24小时后第一次换液，以后3天换液一次，80%融合后0.25% Trypsin,0.02%EDTA消化传代。细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型（CD29/CD44）的鉴定。 2、实验用品： 2.1 材料：C57BL／6 WT小鼠 2.2 试剂：PBS液，0.075%II型胶原酶消化，10%FBS，低糖DMEM 2.3 仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、普通显微镜、倒臵显微镜、离心机、离心管、解剖剪、眼科剪、镊子（尖头、平头和有沟镊）、小烧杯，200目铜网过滤器，低糖DMEM、血球计数板、橡皮瓶塞、酒精灯、换药碗 3、细胞培养的方法与步骤： 3.1无菌操作的要领和要求。（前两周重点学习） 3.2细胞原代培养： 3.2.1操作步骤 a．培养用品消毒后，安防在超净工作台内，紫外线消毒，做好洗手等准备工作。 b. 取材：取C57BL／6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液。 c. 消化：将漂洗后的组织至于平皿中,加入胶原酶（0.075%II型胶原酶, PH），用量（0.1-0.3ug/ml或200U/ml），再用移液管移至烧瓶中，臵于37℃水浴或恒温箱中30分钟），每隔5-10min振荡一次。30min后，生理盐水终止胶原酶的消化。 d. 离心和计数：将离心管做好标记，平衡后以（1200g,1200r/min？10分钟），去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DMEM重悬细胞沉淀，0.16mol/L氯化氨溶解剩余红细胞，将收集的细胞悬液经200目铜网过滤，1200r/min？离心10分钟（先后顺序），得到单个核细胞。加入培养液吹打混匀后取样计数。根据计数结果调整细胞浓度为10⒋个细胞/ml。
ADSC s 的分离与纯化关于ADSCS勺获取方法很多，但不管哪种方法所得到的并非单一的脂肪干细胞，是一组具有干细胞特性的细胞群。目前应用最广泛的分离方法是酶胶原消化法。首先将无菌条件下切取的脂肪组织块剪成细小的颗粒，PBS夜冲洗干净后，用0. 1%的胶原酶在37C下振荡消化48 90mi n,再用含10%胎牛血清的等体积DME培养基终止。1200r /min离心5~10min,弃上清液及悬浮的脂肪组织，重悬细胞后经过细胞筛过滤，所得细胞按2—4X 105/cm接种于50ml培养瓶内。37C 条件5%的CO饱和湿度培养箱内培养，2d后首次换液，以后3d换液一次，至细胞达70%?8O%融合时用0. 25%胰酶消化，并传代。经过提取获得的以脂肪干细胞为主的细胞群接种后数小时即开始贴壁生长，24h内完成贴壁。细胞的形状与成纤维细胞相似，体积较小，核浆比较大,随后细胞体积渐增大,克隆形成。经传代后,细胞的形态及排列才趋于一致。由于目前尚未发现脂肪干细胞表面存在特异性的分子标记物, 因此无法利用分子表型来分离纯化。然而可通过纯化脂肪组织块来间接达到纯化脂肪干细胞的目的。流式细胞仪检测显示：传至第 3 代时,可达95%以上的细胞纯度。 ADSCS勺生物学特性
ADSC s 的分离与纯化1. ADSCS的鉴定
在ADSCS鉴定上，现阶段尚无特异性鉴定方法。用免疫荧光法和流式细胞术检测结果均显示ADSCs表达特异性分子CD44 OCT一4，E—eadherin ，流式细胞术检测细胞周期显示绝大多数细胞是处于静止期的干细胞，传代后生长迅速，随机挑选来源标本，对细胞进行染色体核型分析显示ADSC具有遗传稳定性。 ADSC分泌多种生长因子 在生理功能方面，脂肪干细胞能分泌相当数量的细胞因子，包括肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）胎盘生长因子（PGF）、转化生长因子一B（TGF- B）、成纤维细胞生长因子（FGF 一2）等，低表达的因子有Ang 一2C。 2. ADSCS的多向分化能力 与骨髓间充质干细胞相比，脂肪干细胞具有储量丰富、取材容易、扩增迅速、不宜衰老、排斥反应低等优点。在特定培养基和特异的诱导剂作用下可分化为特定的体细胞，在组织修复、细胞移植、基因治疗等领域有着潜在价值。 向脂肪细胞分化：在特定培养基中加入一定浓度地塞米松、胰岛素、 吲哚美辛及1 一甲基一3?异丁基一黄嘌呤，3周后发现ADSCS向脂肪细胞分化，可检测出ADSCs表达许多脂肪细胞的特异性标记：脂蛋白脂肪酶、脂肪酸结合蛋白aP2、PPAR—r2、leptin（瘦素）、Glut4（葡萄糖转运蛋白等。镜下观察可见胞内有空泡形成。这些特点是脂