第五章种子生活力与活力测定
本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法
§2、种子活力测定原理及方法
第一节种子生活力测定的原理与方法
在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。
一、种子生活力概念：
种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的
生命力；
种子生活力和发芽具有不同的含义：
一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。
二、种子生活力测定的意义
1、测定休眠种子的生活力
新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。（怎样利用？）
播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。
种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。
2、快速预测种子的发芽力:
休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，
因为发芽试验所需的时间较长。如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。
而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d计算发芽率）。这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。
种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。
本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。
三、四唑测定法（GB）
(一)四唑测定法概述
1、发展简史
四唑测定法于1942年由德国https://www.doczj.com/doc/9a13969993.html,kon(莱康)教授发明，二战期间传人美国。ISTA于1950年成立四唑测定技术委员会，1953年首次将四唑测定列入国际种子检验规程，主持编写《四唑测定手册》，经过多次ISTA会议讨论修改，于1984年正式公布发行。该手册汇集了650多个种属的具体测定技术，是四唑测定的权威性参考书。目前国际和国家检验规程都将其列于正式检验项目，它是测定种子生活力公认的最有效的方法。
2、四唑测定方法的特点
四唑测定是一种世界公认、省时快速、结果可靠的种子生活力
测定方法。有以下几个特点：
1）原理可靠，结果准确：主要是按胚的染色图形来判断种子的死与活，该技术已发展成熟。如果能正确使用四唑测定方法，四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3～5％。
2）不受休眠限制：利用种子内部的还原反应显色来判断种子的死与活，不受休眠限制。
3）方法简便，省时快速：所需仪器设备和物品较少（恒温箱、培养皿、刀片、镊子、放大镜和四唑药品等）。测定方法也较为简便，
一般只需6～24h就能获得结果。特别是同发芽试验相比是很快的。
4）成本低廉：由于四唑测定所需仪器、物品少和方法简便，
所以每个样品测定所花成本很低。
四唑测定也有缺陷：对种子检验员经验和技能要求较高；
结果不能提供休眠的程度。
3、适用范围：
根据1996国际种子检验规程，四唑测定适用于下列范围：（p61）(1)测定深度休眠种子；收获后需马上播种的种子；发芽缓慢的种子；要求估测发芽潜力的种子。另外，也适用于：
(2)测定发芽末期未发芽种子的生活力，特别是怀疑有休眠时。
(3)测定种子收获或加工过程中的种子损伤的原因(如热害、机械损
伤、虫蛀等)。
(4)解决发芽试验中存在的问题，如查明不正常幼苗产生的原因；
怀疑杀菌剂、种子包衣的处理效果等。
(二)、四唑测定法的原理
有生活力的种子活细胞内有脱氢酶，可与氧化还原反应指示剂：四唑（无色）反应而显色，被还原成为红色、稳定的三苯基甲腊(triphenyl formazam)。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。
除了完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外，还可能出现一些部分染色的种子。说明在不同部位存在面积大小不同的坏死组织。
判断种子有无生活力，主要看胚和胚乳不染色坏死组织的部位及面积大小，而不完全取决于染色的深浅。染色的深浅可以区别健壮程度。即染色愈深，种子生活力愈旺盛。
四唑染色是一酶促反应，反应不仅受酶活性的影响，还受底物浓度、反应温度、pH等因素的影响。
(三)、四唑测定法应用的化学试剂
1、四唑
四唑盐类有多种，常用的是2，3，5—氯化三苯基四氮唑，
｛英文2，3，5—triphenyl tetrazo1ium chloride｝，缩写为TTC。（1）特性
①白色或淡黄色粉剂，易溶于水，有微毒，使用时不要接触（少接触）。
②见光易被还原成粉红色，需用棕色瓶包装，再裹一层黑纸。同样，配好的四唑溶液也应装入棕色瓶里，暗处保存，种子染色也需在暗处和弱光处进行。
（2）四唑液浓度
常用的四唑染色浓度为0.1％～1.0％(m/v)．一般来说:
切开种胚的种子可用0.1％～0.5％的四唑溶液；
整个胚、整粒种子需用1.0％的四唑溶液。
（3）pH:
四唑溶液的pH要求在6.5～7.5，若溶液的pH不在此范围，反应不能正常进行。因此，对于游离酸含量高的四唑应当用缓冲液配制。即一般国产的四唑游离酸含量高，要用缓冲液配制（进口的可直接用蒸馏水配制）。
配制方法：称取lg（或0.1g）四唑粉剂溶解于100mL磷酸缓冲液中，即配成1.0％（或0.1％）的四唑溶液；
当用酸度计测定时，若四唑液的pH值达不到要求，则可用稀NaOH 或NaHCO3溶液加以调节。
配好的四唑溶液应保存在棕色瓶里，一般有效期可保持数个月。若存放在冰箱里，有效期更长。
2、磷酸缓冲液：其配方如下：
(1)ISTA及GB规程法：首先配两种溶液，然后按比例混合即成。
溶液I：称取9.078g KH2PO4（磷酸二氢钾)溶解于l000ml蒸馏水中; 溶液Ⅱ：称取9.472g Na2HPO4（磷酸氢二钠)
或11.876g Na2HPO4.2H2O溶解于1000mL蒸馏水之中。然后取溶液I：2份和溶液Ⅱ：3份混合即成。
以上比较麻烦，也可用北美官方种子检验规程：
(2)AOSA规程法：在1000mL蒸馏水中加入5.450g NaH2PO4和3.790g Na2HPO4充分溶解即成。
3、乳酸苯酚透明液：
用于染色后的小粒豆类和牧草种子，经四唑染色后使种皮、稃壳或胚乳变得透明，以便透过这些部分清楚地观察其胚的染色情况。配法：20mL乳酸＋20mL苯酚(若苯酚是结晶形式，则需溶化为液体)＋40mL甘油＋20mL蒸馏水混合而成。
该药液有毒性，在使用时防止触及皮肤或衣服等。配制时最好戴塑胶薄膜手套，并在通风橱里操作。
（四）、四唑测定法的程序参照96版《国际种子检验规程》及95GB: 1、试验样品：
随机数取净种子100粒，2～4次重复（GB 2～4次重复，
ISTA 4次重复）
2、种子预处理（预措预湿）
(1)目的：大部分种子在测定前都需经过预处理。
目的：使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备，促进酶的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。
因为种子吸湿后，切开、针挑种皮或切开营养组织变得容易，而干种子则工作困难，并且活细胞内的酶尚未活化，染色效果不良。因此，预措预湿对正确测定是很重要的。
(2)预措：指在种子预湿前除去种子外部的附属物。包括剥去果壳和
在种子非要害部位弄破种皮。如水稻种子需脱去稃壳；
花生剥去果壳；豆科硬实种子需刺破种皮等。
注意：预措不能损伤种子内部胚的主要构造。而大多数种子则不需预措处理。
(3)预湿：是四唑染色测定的必要步骤。
因为吸账种子一般比干种子不易破碎，比较容易切开或刺破种皮。目前常用预湿方法有二种：
①缓慢吸湿：将种子放在纸上或纸间吸湿。
适用于：直接浸在水中容易破裂的种子；
已经劣变的种子（陈种子）；
过分干燥的种子。
缓慢吸湿，能较好地解决吸湿和供氧的矛盾。
GB规定：像大豆、菜豆、葱、花生等种子要求缓慢纸床预湿。
禾谷类种子既可水浸预湿，也可缓慢纸床预湿。
缓慢预湿可采用下面两种方法：
a 纸床上预湿：小粒豆类种子，如苜蓿、三叶草等种子。
b 纸卷或纸间预湿：像大豆、菜豆、豌豆等种子。
②快速水浸预湿：将种子完全浸入水中，充分吸胀。
因为种子直接浸入水中，吸水快、吸水均匀，可缩短预湿时间。适用于种子直接浸入水中，不会造成组织破裂的种子。包括水稻、
麦类、玉米等。浸种温度一般采用20℃～30℃水温。
具体种类和浸种时间见《农作物种子四唑染色技术规定》。
3、染色前的种子处理
种子在染色前需将胚的主要构造和活的营养组织暴露出来，
利于四唑溶液渗透，便于正确鉴定。
（p63 图5－1）表明种子不同切法的部位，常见的有以下几种：（1）不须样品准备：
a、种皮渗水性良好的小粒豆类种子（如紫花苜蓿和小扁豆等），染色时就能随着四唑溶液的渗入而吸胀，并在染色后剥去种皮就可正确鉴定。这类种子不须样品准备。
b、大粒豆类：可采用缓慢吸湿后不须样品准备。（如菜豆和大豆等）
但在染色后观察鉴定前也需剥去种皮，以便鉴定更为可靠。（2）沿胚纵切取半粒：适用于具有直立胚的大粒禾本科种子。
如玉米、麦类和水稻等种子。
方法：沿胚纵切，使胚的主要构造暴露出来，取其一半用于染色观察。（3）剥去种皮：棉花、十字花科种子需剥去种皮或内膜；
瓜类也剥去种皮。
方法是：将预湿后的整个种皮剥去。
4、四唑染色
将处理好的种子放在小烧杯内，然后加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移至一定温度的黑暗恒温箱内进行染色反应。
染色时间：因种子种类、样品准备方法、生活力的强弱、四唑溶液浓度、pH值和温度等因素的不同而有差异，其中温度影响最大。
在20～45℃范围内，温度每增加5℃，其染色时间可减少一半。
例如：30℃适宜染色时间为6h，
35℃则只需染色反应3h，
40℃下仅需1.5h。一般选择35℃
35℃染色：玉米、麦类等禾谷类种子0.5～1h
豆类种子3～4h
剥去种皮染色的种子2～3h
具体见《农作物种子四唑染色技术》。
达到规定时间或染色已很明显时，倒去四唑液，用水冲洗。如果到达规定时间种子染色仍不够完全，可适当延长染色时间。
5、鉴定前处理书上复杂
不进行处理的种子，观察前要适当处理使胚部暴露出来，具体处理方法规程中都有：（读本p201-204）
如一些小粒豆类、棉籽沿胚中轴纵切；
瓜类除去种皮和内膜；
大粒豆类（大豆、菜豆、花生）：除去种皮，掰开子叶，露出胚芽。
大粒种子可直接用肉眼或放大镜观察；
小粒种子最好用10～100倍体视镜观察。
6、观察鉴定
测定结果的可靠性取决于检验人员对染色组织和部位的正确识别、工作经验等综合运用能力。
观察鉴定的主要目的是区别有生活力和无生活力种子。
（1）一般鉴定原则：
a、凡是胚的主要构造染成鲜红色，为有生活力种子。
b、凡是胚的主要构造局部不染色，不染色部分超过允许范围，
为不正常种子。
c、凡是完全不染色的为死种子。
不正常种子和死种子均作为无生活力种子。
（2）观察的部位：
①禾谷类：主要观察胚芽、胚轴、胚根、盾片。鉴别标准：
除完全染色的为有生活力种子外，下列有残缺的种子也有生活力：
a、盾片上部或下部任一端不染色的部分＜1/3
b、胚根的顶端：玉米1/3不染色；水稻、高粱2/3不染色；
麦类大部分不染色，但不定根的原始体须染色。
理解：胚芽必须染色，胚根不染色可以长出次生根。
②豆类：有生活力的种子允许不染色的最大面积：
a、胚根顶端不染色：花生为1/3；蚕豆为2/3；其他为1/2.
b、子叶顶端不染色：花生为1/4；蚕豆为1/3；其他为1/2.
c、胚芽顶端不染色1/4，蚕豆除外。
③瓜类：胚根顶端不染色允许1/2；
子叶顶端不染色允许1/2。（胚芽必须染色）
④其他种属：（棉属、芸苔属等）
胚根顶端1/3不染色；
子叶顶端1/3不染色。（胚芽必须染色）
P70 图5－2 小麦种子四唑测定结果的鉴定标准（单子叶）：
图中黑色部分表示染成红色，有生活力组织，白色部分表示不染色的死组织。1－6有发芽力： 1．整个胚染成鲜红色；
2～5．盾片末端不染色；
6．胚根尖端不染色；
7－16无发芽力：
7．胚根3/4以上不染色 8．胚芽不染色；（一点也不行）9．盾片中部和盾片节不染色； 10．胚轴不染色；
11．盾片末端和胚芽尖端不染色; 12．胚的上半部不染色；
13．盾片不染色； 14．盾片、胚根和胚根鞘不染色；15．染成模糊的淡红色； 16．整个胚不染色。
图5-3 大豆种子四唑测定结果的鉴定结果标准
1－3有发芽力：1．胚染成鲜红色；
2．仅子叶远离胚芽部分少量未染色;
3．仅子叶下部和边缘少许不染色；
4－6无发芽力：
4．子叶上部重要部位未染色；（面积少也不行） 5．胚根主要部位不染色；
6．子叶一半以上未染色。
表1 农作物种子四唑染色技术规定
7、结果计算与处理
根据样品胚部的显色情况，分别计算各重复有生活力种子的百分率。GB/T3543.7-1995对试验样品的规定至少200粒：即2～4次重复。查重复间的最大允许差距: X1 X2 X3 X4→求平均数X
（GB：但生活力有二、三次重复值；而发芽试验无二、三次重复值）X最大－X最小与容许差距比较：＞容许差距重作；
≤容许差距结果正确用X表示。【例】测某种子生活力，三次重复95％、96％、98％。
X＝96.3％；98－95＝3＜容许差距7。
若测二次重复：95％、99％。X＝97％99－95＝4＜容许差距6。
（五）注意事项：
纵切禾谷类种胚时，一定要沿胚中部纵切，使切面显示胚的各部分构造，否则会出现鉴定误差。
1、若切面不正
若保留大的：胚芽是完整的，染色时间短，胚芽可能不染色。
其他地方染色均匀，也属正常有生活力的种子。
若保留小的：胚芽与盾片有缝，只要其他部分染色深、均匀，
也有生活力。
2、切面粗糙：
切时剥开，部分细胞被撕开，细胞被破坏，表层细胞不染色。所以切面要光滑。这时染成乳白色与不染色是有区别的。
（p71离体胚培养法:主要测定发芽缓慢或休眠期长的种子生活力，
主要用于林木种子，农作物种子用的少。）
四、染料染色法（GB中无，了解）同p73
(一)测定原理（TTC法：活细胞染成红色；本法相反：活细胞不染色）
有生活力的种子，其活细胞原生质膜具有选择透性，当种子浸入染料后，染料大分子不能进入活细胞内，其胚部活组织不能被染料染色；而死的种胚原生质膜丧失选择吸收能力，故可被染料染色。
(二)测定方法
1、靛蓝染色法
适用于豆类、谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种子的生活力测定。试剂为靛蓝：蓝色粉剂，能缓慢溶于水。测定方法如下：
(1)种子预处理：（100粒×2次）
先将种子去壳，浸入30℃水中，充分吸账。
浸种时间：小麦、大麦、大豆、豌豆和向日葵等为3h，
燕麦、芝麻等4h；油菜、花生、棉籽等6h，
蓖麻、红麻、大麻等7h；黍8h；水稻12h；玉米20 h。然后，禾谷类沿胚中线纵切；双子叶种子剥去种皮，以备染色用。
(2)靛蓝染色：
将处理好的种子置于小烧杯内，加入靛蓝溶液淹没种子。
浓度：纵切种子用0.1％溶液，剥去种皮种子用0.2％溶液。
染色时间:禾谷类为15min，
油菜、芝麻、红麻和大麻等30 min，
大豆、亚麻、向日葵、蓖麻、花生和棉籽等60 min，
豌豆3h。
(3)观察鉴定：取出种子，用清水冲洗后立即进行观察鉴定。
凡种胚不染色或染成浅蓝色的、胚根尖端或少部分子叶染色的，为有生活力种子；
凡种胚全部染成蓝色的，或胚根、胚轴、胚芽、子叶等大部分染成蓝色的，为无生活力种子。
2．红墨水染色法
测定原理、种子预处理、染色时间等与靛蓝染色法基本相同。不同点：染成的颜色不同，死胚染成红色，活种子胚不染色。
测定时用刚开瓶的红墨水，红墨水与水的比例：
小麦、玉米、大豆和棉花等为1：60；大麦以1：120为宜。
到达规定染色时间后取出种子，用清水冲洗，立即鉴定。
五、软X射线造影法（检验员读本无）
《1996国际种子检验规程》增加了X射线测定技术，国内没列入国标（国标为93规程）。
软X射线波长较长，为0.0l～0.05nm，穿透力弱。
（机械工业部）湘西探伤厂产的HY-35型农用X光机。
主要用于：作物种子成熟度的观察（水稻、花生）
种子隐蔽害虫的检验（进口林木种子隐蔽害虫）
农作物种子生活力测定（软X射线渗钡造影法）
(一)测定原理
活细胞的原生质膜具有选择透性，而死伤组织丧失选择透性。用氯化钡（BaCl2）溶液浸种渗透后：
凡有生活力的种子不吸收钡（Ba＋＋）离子；
无生活力的种子钡（Ba＋＋）就会渗入种子细胞内部。
软X射线造影时，由于重金属离子能强烈吸收x射线：
把这种渗钡状况不同的种子置于软X光机曝光造影：
在荧光屏上（印成相片后）：
死伤组织，渗入钡离子吸收了X射线，较为黑暗；
活种子较为明亮。
在底片上相反：死组织较透明；而活组织较为黑暗。
(二)测定方法
1．种子预湿
随机数取净种子200粒，每重复50粒。在室温下清水中浸泡2～16h充分吸账；对直接浸水容易破裂的种，可先进行缓慢预湿后再浸泡16h，然后取出种子用滤纸吸去种子表面的水分。
2．造影剂处理
凡不能透过活细胞的半透膜，而又能渗入死细胞内部的重金属盐类，均可作为造影剂。
常用的造影剂是BaCl2:造影效果好；价格便宜；使用方便。
将预湿好的种子放入20％的BaC12溶液中，处理时间一般为1～2h。（玉米粒大为 2.5h,小麦 1.5h，番茄、黄瓜、西瓜1h）。注意：应严格掌握BaC12浸种时间，过长、过短都会影响测定的正确性。将种子取出放入网兜，用自来水冲洗，再用吸水纸吸干种子表面的水分，或将种子于60～70℃下干燥1h。
3．软x射线摄影:可进行透视摄影；或荧光观察（仅限于大粒种子）。
我国主要应用Hy—35型农用x光机。
曝光条件：电压（kv）=30千伏，电流（mA）=3毫安。
曝光时间：小麦、水稻20秒；棉花40秒。
照射剂量和透过率太大，反差不明显，影像不清晰。
照射剂量太少，不同厚度的组织均不能通过，没有产生造影效果。
因此，必须在实际测定中确定最佳摄影条件。
常用胶片有：国产8DIN（定）黑白片，经济适用、可放大，可印相。
X光胶片最好，但太贵；
也可用4号相纸（GB21）直接印相，可供自己看。
摄影时，在暗室内剪取适当大小的胶片，装入黑纸袋内，置于摄影台上，将种子放在黑纸袋上排好摄影。
4．影像鉴定
在暗室用D-72显影液显影和酸性定影液定影。
鉴定原则：
在照片上（荧光屏上）：种胚黑色的，为无生活力种子；
种胚白色的，为有生活力种子。
在胶片上（底片上）：种胚透明的，为无生活力种子；
种胚黑色的，为有生活力种子。
总之，软x射线造影技术具有多方面的用途：
①既能测定种子生活力，不受种子休眠限制。与四唑相比，
具有不破坏性样品的优点。
②也能观察种子内部害虫和机械损伤，区分饱满与空瘪、虫蛀等。技术熟练时，诊断的有生活力种子与发芽率r=0.995.
特别适用于：番茄、西瓜和黄瓜等扁平种子生活力分析。
本节重点：种子生活力的概念；四唑染色技术的原理。
第二节种子活力测定原理及方法
种子活力（seed vigor）是种子质量的重要指标之一，与种子田间出苗质量密切相关。活力测定经过几十年的研究，已取得了重大进展。在美国和欧洲，许多种子公司把活力测定作为常规的检验项目，但国内没被列于国标。
一、种子活力的概念
种子活力的定义长期得不到统一，不同学者有不同的定义，经过27年的争论，直到1977年ISTA才确定了种子活力的定义：p75
1、种子活力是决定种子或种子批在发芽和出苗期间的活性水平和行为的那些种子特性的综合表现。表现好的为高活力种子，表现差的为低活力种子。
北美官方种子分析家协会(AOSA)于1980年采用了较为简单定义：2、种子活力是指在广泛的田间条件下，决定种子迅速整齐出苗和
长成正常幼苗潜在能力的总称。
以上两个定义的基本内容是十分相似的。因为种子活力不像种子发芽那样是一个单一的测定特性，而是描述种子出苗不同方面（包括田间和贮藏期间）的综合特性。
2004年出版的《国际种子检验规程》将种子定义为：
3、种子活力是指在广泛的环境条件下，决定可接受发芽率的种子批的活性和性能那些特性的综合表现。
种子活力不是一种简单一的测定概念，而是一种能表达有关种子批性能多种特性的综合概念：
（1）种子发芽、幼苗生长速率和整齐度；
（2）种子在不利环境条件下的出苗能力；
（3）贮藏后，特别是能保持发芽力的性能。
高活力种子批即使在不适宜的环境条件下，仍具有良好性能的潜力。
高活力种子发芽、出苗整齐、迅速，对不良环境抵抗力强。
低活力种子，在适宜条件下虽能发芽，但发芽缓慢，在不良环境条件下出苗不整齐，甚至不出苗（如陈种子发芽率虽正常，但早春播种出苗率低）。
二、种子活力测定的重要意义（同读本；颜启传）
1、高活力种子的生产优越性
高活力种子具有明显的生长优势和生产潜力。
(1)提高田间出苗率：高活力种子播到田间后出苗迅速，均匀一致，保证苗全苗壮和作物的田间密度，为增产打下良好的基础。
(2)抵御不良环境条件：
高活力种子由于生命力较强，对田间逆境具有较强的抵抗能力。如干旱地区，高活力种子可适当深播，并有足够能量顶出土面；
而低活力种子在深播情况下无力顶出土面。
(3)抗寒力强，适于早播：
春天种糯玉米，为了及早上市，一般提早播种（4/5～10覆膜），高活力种子对早春低温条件具有抵抗能力。蔬菜早种可早上市，提高经济效益。
(4)节省播种费用：
高活力种子可减小播种量，特别适于机械精量播种。（玉米可单粒播种：先玉335、4400粒/亩）
低活力种子往往缺苗断垄，必须重播，增加种子费用；
(5)增加作物产量：
据美国对大豆、玉米、麦类等14种作物的统计，高活力种子可以增产20～40％。对于叶菜类和根菜类蔬菜作物，高活力种子营养器官生长迅速，增产作用更加明显。
(6)提高种子耐藏性：
高活力种子可以抵抗高温、高湿等不良条件。长期贮藏的种子，最好选择高活力的种子
2、种子活力测定的必要性
(1)活力测定是保证田间出苗率和生产潜力的必要手段。
播种之前，进行活力测定，选用高活力种子，防止采用发芽率高而活力低的种子给生产带来损失，特别进行机播(穴播)时尤为重要。
(2)活力测定是种子产业中必不可少的环节。
种子收获后，要进行干燥、清选、加工、贮藏等过程。如某些条件不合适，可能使种子遭受机械损伤，使种子变质而降低种子活力。（烘干的安全温度：种温43℃；2％水分/h）。及时进行活力测定，可及时改善种子加工、处理条件，保持和提高种子活力。
(3)活力测定是育种工作者必须采用的方法。
活力测定有助于育种工作者在选择抗寒、抗病、抗逆、早熟、丰产的作物新品种。
三、活力、生活力和发芽力的区别与联系
衡量种子生理质量有发芽力、生活力和活力三个指标，三者有密切的关系，却有完全不同的含义：
1、种子生活力：是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。
通常用供检样品中活种子数占样品总数的百分率。
2、种子发芽力：是指种子在适宜条件下(实验室控制条件下)长成
正常植株的能力。通常用供检样品中长成正常幼苗数占样品总数的百分率，即发芽率表示。
在下列情况下，如果鉴定正确，生活力测定与发芽率测定结果基本是一致的：
四唑染色法测定种子生活力 福建农林大学20**级农学0******* ***** 一、目的 1、了解种子生活力测定方法 2、熟悉利用四唑染色法测定种子活力方法及操作方式 二、原理 有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都发生氧化还原反应，四唑溶液作为一种无色的指示剂，被种子吸收后参与活细胞的还原反应，从脱氢酶接受氢离子， 在活细胞里产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲。化学反应如下：DPNH2 + TTC DPN + TTCH + HCl （辅酶IH2）（四唑）（辅酶Ⅰ）（甲）（氯化氢） H N‐N‐C6H5N‐N‐C6H5 ∥2H ∥ C6H5‐C C6H5‐C +HCl \ \ N﹦N+‐C6H5 N＝N‐C6H5 无生活力的种子则无此反应。 根据种子的四唑显色的部位，即可区分有活力的部分和死亡部分。一般鉴定原则是，凡是胚的主要结构及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力的种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜色和光泽，并且活营养组织部染色成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。 三、试材与设备 1、材料大豆种子 2、设备烧杯、滤纸、刀片、镊子、恒温培养箱 3、试剂 1.0%的四唑溶液 四、实验步骤 从净度分析后并经过充分混合的大豆种子中，随机抽取30粒，3次重复。 1、种子预湿将选取的大豆种子水浸预湿，室温下浸泡8h，使其充分吸胀。 2、种子处理将吸胀的大豆种子的种皮去除，掰开子叶，露出子胚芽，保持湿润备用。 3、四唑染色将处理好的种子放入烧杯中，加入1.0%的四唑溶液，将种子淹没，然后置于35℃恒温培养箱中避光染色0.5~1 h。 4、观察鉴定将染色后的大豆种子经清水冲洗后进行染色情况的观察鉴定。胚部全部显成鲜红色、仅子叶远离胚芽部分少量未染色、仅子叶边缘少许未染色，为有生活力的种子。 5、结果计算及处理统计各个重复中有生活力的大豆种子数，并计算其平均值。
种子生活力快速测定 一、实验原理 通过本实验，掌握种子生活力快速测定的原理和方法。 二、实验原理 （1）活细胞染色：脱氢辅酶（NADH或NAFPH)存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。 （2）死细胞染色：有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗透的物质有选择性；而无生命力的细胞，其细胞膜已经消失，因此有的有色物质（如品红）不能进入活的细胞内，但可以进入已经死亡的细胞，从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色，故可以据此鉴别细胞是否死亡。 三、实验材料、药品和器具 1、实验材料：花生、黄豆 2、实验药品和器具：品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等 四、试验方法 1、分别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入TTC培养1h左右，观察胚染色的情况。胚被染色的为有活力种子，未被染色的为无活力的种子。 2、别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入品红培养10-20min，倒掉品红溶液，冲洗数次，观察胚染色的情况。胚被染色的为无活力种子，未被染色的为有活力的种子。 五、实验结果 品种测定方法测定种子总数有生活力种子粒数无生活力种子粒数种子生活率花生TTC 30 28 2 93% 品红30 28 2 93% 黄豆TTC 30 30 0 100% 品红30 29 1 97% 实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异，用TTC染色得出的结果高于品红染色法。 结果分析：可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净，品红粘在胚上，影响实验的观察，导致结果差异。 六、注意事项 1、选取种子的时候，要尽量选取未发芽的种子，避免影响测定。 2、添加染色液时，要是然也尽量没过种胚，使种胚和染液充分接触。 3、染色时间要尽量控制在规定时间内，染色过长过短都会影响结果测定。 4、清洗品红染液时，要冲洗干净，冲洗数次，直至冲洗液无色为止，冲洗不干净直接影响实验结果的测定。
《林果生产技术》实验实训2“种子质量的简易测定”之五：种子生活力的测定（红墨水法）教学设计 课题：种子生活力的测定（红墨水法）课型：专业技能实 训课 班级：2014级现代农艺班时间：2015年10月9日 教学目标： 1、应知：种子生活力的概念，红墨水法测定生活力的原理、意义、步骤。 2、应会：掌握用红墨水染色法测定种子生活力的操作技能，熟悉种子质量鉴定技术过程。 3、能力培养：学会自主学习、合作学习、探究学习，培养动手能力、观察能力、合作意识和专业情感。 教学重点： 小麦种子生活力红墨水染色法测定的方法步骤。 教学难点： 1、切分种子。 2、有无生活力的判断。 教学方法： 1、紧抓生本课堂的五大元素“前置学习、合作学习、展示分享、质疑问难、教师点拨”，让学生自主学习，先做后学，先学后教。 2、恰当运用信息化教学手段。
课前任务布置： 提前一天晚自习分发学案和适量材料样品（每小组分发经浸泡后充分吸胀了的小麦种子50粒左右，单面刀片2片，镊子2把，放大镜1个），自学时间2课时。学案附后。 材料器具准备： 经浸种吸胀后的小麦种子（每小组600粒左右）、直尺、烧杯、9cm培养皿（每小组4套）、镊子（每人1把）、单面刀片（每人1片）、瓷盘、洗瓶、滤纸、5%红墨水。 导入： 种子质量的好坏，直接关系到农业的丰歉。种子的纯度、净度、发芽率、生活力、含水量等是种子分级、是否合格的重要指标。今天我们以小麦种子为例，通过实训操作一起来学习种子生活力的测定方法。同学们课前已经做了预习，在操作之前我们先来弄清楚几个问题，分小组回答： 问题一：种子生活力指的是什么？（一组回答） 答案：种子生活力是指种子潜在的发芽能力。 问题二：既然种子生活力是指种子潜在的发芽能力，那么我们为什么不直接测定种子的发芽率，而测定种子生活力? （二组回答）答案：用标准发芽试验无法准确测出处于休眠状态的种子的发芽能力；发芽试验测定发芽率，所需时间较长，如小麦需要8天，水稻需要14天，多数林木种子则需要更长的时间，而生活力的测定可
种子生活力的测定红墨 水法教学设计 SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#
《林果生产技术》实验实训2“种子质量的简易测定”之五： 种子生活力的测定（红墨水法）教学设计 课题：种子生活力的测定（红墨水法）课型：专业技能实训课 班级：2014级现代农艺班时间：2015年10月9日 教学目标： 1、应知：种子生活力的概念，红墨水法测定生活力的原理、意义、步骤。 2、应会：掌握用红墨水染色法测定种子生活力的操作技能，熟悉种子质量鉴定技术过程。 3、能力培养：学会自主学习、合作学习、探究学习，培养动手能力、观察能力、合作意识和专业情感。 教学重点： 小麦种子生活力红墨水染色法测定的方法步骤。 教学难点： 1、切分种子。 2、有无生活力的判断。 教学方法：
1、紧抓生本课堂的五大元素“前置学习、合作学习、展示分享、质疑问难、教师点拨”，让学生自主学习，先做后学，先学后教。 2、恰当运用信息化教学手段。 课前任务布置： 提前一天晚自习分发学案和适量材料样品（每小组分发经浸泡后充分吸胀了的小麦种子50粒左右，单面刀片2片，镊子2把，放大镜1个），自学时间2课时。学案附后。 材料器具准备： 经浸种吸胀后的小麦种子（每小组600粒左右）、直尺、烧杯、9cm培养皿（每小组4套）、镊子（每人1把）、单面刀片（每人1片）、瓷盘、洗瓶、滤纸、5%红墨水。 导入： 种子质量的好坏，直接关系到农业的丰歉。种子的纯度、净度、发芽率、生活力、含水量等是种子分级、是否合格的重要指标。今天我们以小麦种子为例，通过实训操作一起来学习种子生活力的测定方法。同学们课前已经做了预习，在操作之前我们先来弄清楚几个问题，分小组回答： 问题一：种子生活力指的是什么（一组回答） 答案：种子生活力是指种子潜在的发芽能力。
实验六 种子生活力的快速测定 一、实验目的 1.加深对种子作用的理解； 2.掌握种子生活力的测定方法。 二、实验原理 在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。 有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H ） 种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深； 死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC 还原成红色； 种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色； 三、实验材料及用品 材料：绿豆种子 实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片 实验试剂：0.5%TTC 溶液（避光保存） 四、实验步骤 1. 浸种：将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色 ：a 、种子处理：随即选取吸胀的种子 40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。 b 、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC 溶液，以 刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h 。 c 、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min 后，加入0.5%TTC 溶液， 以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保温1h 。 有生活力的种子进行呼吸 作用，呼吸代谢途径催化产 生的氢（H ）
3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染 色情况。有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染 色。 生活力的种子数 计算种子生活力的比率= ————————X 100% 实验组测定种子数 五、实验现象与结果 表一种子染色情况记录表 图1 未煮沸的种子染色情况 图2 煮沸的种子染色情况 生活力的种子数 未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70% 实验组测定种子数
植物生理学小论文 三种常用检测种子生活力方法的比较 班级：09级生物技术2班 学号: 系别: 化学与生命科学系 : 雪婷 日期：2012年5月15日
浅谈三种常用检测种子生活力的方法 雪婷 （师学院化学与生命科学系675000） [摘要] 种子活力是种子最重要的生理及生产指标之一，近年来，无论在育种选种方面还是植物生理实验方面都得到广泛关注。本文基于对种子活力的概念、影响种子活力的因素和种子活力快速测定的最新研究进展为基准, 对TTC法、BTB法及红墨水染色法三种常见种子活力快速检测方法进行了简要综述。结论：四氮唑染色法是蔓荆子种子生活力测定的最佳方法，生活力与发芽率呈显著的正相关。 关键词：种子活力；TTC法；BTB法；红墨水染色法；研究进展 The discussion on three kinds of methods to detect seed vigor SUN-xueting （Chuxiong normal university，chuxiong，yunnan675000，China） Abstracts: The seed vigor is the most important physiological and seed production indexes. In recent years，No matter in selecting seeds breeding or in plant physiology experiments. The seed vigor is widely mentioned This paper based on the concept of the seed vigor influence factors of the seed vigor and the seed vigor rapid determination of the latest research progress Comparition of three kinds of methods to determine seed vigor. Keywords: seed vigor ；Triphenyl Tetrazolium Chloride method；Bromo—thymol blue method; red ink method;research progress 种子生活力是检测种子质量最重要的指标之一，它对于种子的发育，萌发，成熟以及成长为植株的潜在能力具有十分紧密的联系。对于科学选种，快速预测种子的利用价值也具有重要的意义。快速检测种子生活力的方法很多，但生产实验及植物生理实验中常用的主要有氯化三苯基四氮唑(TTC)法、溴麝香草酚蓝(BTB)法和红墨水染色法。这三种方法都能快速测定种子的正常生理代功能是否受到损害，胚是否存活,以了解种子是否还具有发芽的潜力。 种子生活力（seed viability)是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力，通常是指一批种子中具有生命力（即活的）种子数占种子总数的百分率。早在1876年种子学的创始人Nobbe（德国）[1]就指出在同一批种子存在个体间发芽和幼苗生长速度的差异，并且不
种子生活力的测定 一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法 【原理】 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下： TTC（无色） TTF（红色） 【仪器与用具】 培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。 【试剂】 TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。 【方法】 1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。 2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。 4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min. 5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。 表32-1 染色法测定种子生活力记载表 【注意事项】 1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 2.染色温度一般以25～35℃为宜。 3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。 4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；
种子生活力快速测定 实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业 试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。 本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。 实验仪器及材料： 1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀 2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5% 3、材料：玉米、小麦吸胀种子 方法一：红墨水染色法 实验原理： 红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质 的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。 操作步骤： 1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸 涨备用。 2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养 皿中，用5%红墨水染色。 3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着 色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。 结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100 方法二：BTB变色法 实验原理： 活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。色泽差异显著，易于观察。 操作步骤：
实验 17 种子生活力的快速测定 种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。 Ⅰ氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法） 一、原理 凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 玉米、小麦等种子。 （二）试剂 0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。溶液避光保存，若变红色，即不能再用。 （三）仪器设备 恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。 三、实验步骤 1. 浸种将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。 将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。 3. 计算活种子的百分率，如果可能的话与实际发芽率作一比较看是否相符？ Ⅱ溴麝香草酚蓝法（ BTB 法） 一、原理 凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的 O 2 放出 CO 2 。 CO 2 溶于水成为 H 2 CO 3 ， H 2 CO 3 解离成 H + 和 HCO 3 ˉ，使得种胚周围环境的酸度增加，可用溴麝香草酚蓝（ BTB ）来测定酸度的改变。 BTB 的变色范围为 pH6.0 ～ 7.6 ，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为 pH 7.1 ）。色泽差异显著，易于观察。 二、实验材料、试剂与仪器设备
实验六种子生活力的快速测定 一、实验目的 1.加深对种子作用的理解； 2.掌握种子生活力的测定方法。 二、实验原理 在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。 有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H） 有生活力的种子进行呼吸 作用，呼吸代谢途径催化产 种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深； 死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC还原成红色； 种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色； 三、实验材料及用品 材料：绿豆种子 实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片 实验试剂：0.5%TTC溶液（避光保存） 四、实验步骤 1. 浸种：将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色：a、种子处理：随即选取吸胀的种子 40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。 b、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC溶液，以刚 好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h。 c、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min后，加入0.5%TTC溶液， 以刚好浸没种子为宜，恒温（
32℃）中保温1h。 3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染 色情况。有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染 色。 生活力的种子数 计算种子生活力的比率= ————————X 100% 实验组测定种子数 五、实验现象与结果 保温1h后种子染色情况： 被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6 煮沸的种子 0 20 表一种子染色情况记录表 图1 未煮沸的种子染色情况 图2 煮沸的种子染色情况 生活力的种子数 未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%
实验四种子生活力测定 一、目的要求 应用化学药剂处理和生物化学法快速测定体眠种子生活力并比较不同方法的效果。 二、材料用具 （一）材料：水稻和玉米种子 （二）药品：2．3—5一氯化三苯基四氮唑和红墨水等。 三、方法步骤 （一）四唑盐类法： 1．在洁净的水稻种子中，随机数取试样2份，各100粒剥去谷壳，浸入30℃的水中6－8小时。 2．用2．3．5－氯化三苯基四氮唑配制成的溶液，装在棕色玻璃瓶里，保存在黑暗中。 3．将已剥去壳的软化的米粒沿种胚纵切，取其一半浸于已配好的药液中，放于暗处（最好用棕色发芽皿盛放），经24小时可观察结果，如果提高温度可以缩短处理时间（40℃1小时）。 4．观察结果：凡种胚的主要构造染成深红色者为有生活力的种子，凡种胚的主要构造染成浅红色或不染色者为无生活力的种子。 5．具体种子具体做法： 取水稻种子样品200粒，去壳，放纸间或水中30℃预湿12h，沿种子侧面胚纵切，放入0.1%四唑溶液35℃染色1-2h，凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。 （二）红墨水染色法： 1．从洁净玉米种子随机数取试样二，各100粒，于30℃温水中浸2-3小时。 2．配制红墨水溶液，用红墨水加水配成1：60的溶液。 3．取出软化过的种子，沿胚切成对半，取其半粒种子。 4．浸入红墨水溶液，15分钟后取出，用清水冲洗。 5．观察结果：凡种胚的主要构造不染色或染色浅者为有生活力的种子，凡种胚染色者为无生活力的种子。
四、结果表示与报告 计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过附表（生活力测定重复间的最大容许差距）的规定，平均百分率计算到最近似的整数。
种子生活力快速测定 ------红墨水染色法 一、教学目标： 知识与能力 熟悉红墨水染色法测定种子生活力的原理和方法及其计算 过程与方法 通过实验，培养学生动手操作的能力 情感态度与价值观 通过观察和实验等教学活动，培养学生科学的思维方法，实事求是的科学态度以及协作精神。 二、教学重点和难点 显色过程既是重点又是难点 三、教学准备 （一）教师准备 1.仪器设备、材料和试剂 （1）仪器： 培养皿2套；镊子1把；单面刀片1片；垫板(切种子用)1块；烧杯1个；搪瓷盘1个； （2）试剂： 取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）做为染色剂。 （3）材料： 玉米或小麦 2.实验操作准备 浸种 实验组将待测种子在30～35℃温水中浸泡(大麦、小麦、籼谷6～8h , 玉米5h左右,梗谷2h), 以增强种胚的呼吸强度,使显色迅速。 对照组取充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，
3．学生分好组 （二）、学生准备 学生课前认真的自学，自己查找相关资料，了解与弄清所需实验用具或用品的用途和用法，做好预习案及实验前的一切准备。 四、教学方法、教学手段： 1、教学方法：实验探究。 2、教学手段：本节课以学生亲自动手实践为主，教师演示与辅导为辅的教学手段。 五、教学设计： （一）创设情景，导入新课： 教师讲述：种子生活力就是种子发芽的潜在能力，通过对种子生活力的测定可以快速预测种子的发芽能力，为我们的播种选种提供理论依据，本节课我们就是学习怎样动手快速测定种子生活力。 （二）讲授新课 1.将在预习过程中遇到的疑惑，带到课堂师生共同解决，师生共同回顾种子生活力的相关知识。 2.红墨水染色法测种子生活力 （1）教师示范操作（同时讲解操作要点） 步骤： ①. 显色 取吸胀的种子和死种子各50粒,用刀片沿种胚中央纵切为两半, 其中一半放入培养皿中，加适量红墨水溶液（以浸没种子为度），染 色10-20min后倒去红墨水溶液,用水反复冲洗多次,至冲洗液无色为止。 ②.观察 对比观察冲洗后两组种子胚部着色情况。凡胚部不着色或略带浅 红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为 死种子，把测定结果记录在表格内。 （2）学生动手操作，教师巡回指导 （3）引导学生在观察的过程中讨论解决下列问题。 ①.种子生活力的测定方法还有哪些？
8种子生活力测定 Z—1概述 种子生活力（Seed viability）是指种子发芽的潜在能力。种子生活力测定在农业生产上具有重要的意义：①测定休眠种子的生活力。许多植物种子因存在休眠，暂时不能萌发，因此发芽率很低，尤其是新收获的和野生性较强的种子，必须进行生活力测定，才能了解种子的发芽潜力，以便合理利用种子。播种前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理。种子检验时，若发芽试验末期有新鲜不发芽种子或硬实种子，也应接着进行生活力测定，以正确评定种子品质。②快速预测种子的发芽力。休眠种子可借助于各种处理措施打破休眠，然后进行发芽试验，但所需时间较长。而种子贸易中，有时因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需时间更长，如小麦需8d，水稻需14d，某些蔬菜和牧草种子需2～3周，而多数林木种子则需要更长的时间。在这种情况下，可用生物化学速测法测定种子生活力作为参考。 种子生活力测定方法有10多种，根据其测定原理可大致分为4类：①生物化学法，如四唑测定法、溴麝香草酚蓝法、甲烯蓝法、中性红法和二硝基苯法等。②组织化学法，如靛蓝染色法、红墨水染色法和软x射线造影法等。③荧光分析法。④离体胚测定法。本节主要介绍四唑测定法、离体胚测定法、染料染色法和软x射线造影法。 Z—2生活力测定方法 一、测定原理 有生活力的种子，其活细胞原生质膜具有选择透性，当种子浸入染料后，染料大分子不能进入活细胞内，所以胚部等活组织不能被染料染色，而死的种胚细胞因原生质膜丧失选择吸收能力，故可被染料染色。 二、测定方法 （一）染色法 1．靛蓝染色法 此法适用于豆类、谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种子的生活力测定。所用试剂为靛蓝（或称靛蓝洋红），分子式为C18H8O2N2（SO5Na）2，系蓝色粉剂，能缓慢溶于水。测定方法如下： (l) 种子预处理：将种子浸人30℃水中，水稻、向日葵、蓖麻、花生和棉籽等种子须先去壳再浸种，浸种时间因种子不同而异，小麦、大麦、大豆、豌豆和向日葵等为3h，燕麦、芝麻等4h，油菜、花生、棉籽等6 h，蓖麻、红麻、大麻等7 h、黍8 h、水稻12 h、玉米20 h将充分吸胀的种子(100粒2次重复），沿胚中线纵切（如禾谷类）或剥去种皮（如双子叶种子），以备染色用。
实验十一植物种子生活力快速测定 一、实验目的 掌握植物种子生活力检测的基本原理及快速鉴定植物种子生活力的方法。 二、实验原理 种子活力是决定种子在发芽和出苗期间的活性强度和种子特性的综合表现（指田间条件下的出苗能力及与此有关的其他特征和指标），种子生活力是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力（通常指一批种子中具有生命力种子数占种子总数的百分率）。种子贮藏过程中必须维持种子是有活力的，因此定期进行生活力和活力的检测是非常重要的。测定种子生活力方法常用发芽率测定法，该法是指在最适宜的条件下，在规定天数内发芽的种子占供试种子的百分数。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。但是常规方法（直接发芽）测定种子发芽率所需的时间较长，对于处于深休眠状态的种子，几乎难于应用。特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定种子发芽率，所以有必要根据种子的生理特性建立起一套快速测定种子生活力的方法。 红墨水染色法 凡是生活的活细胞的原生质膜都具有选择吸收能力，它对某些染料不让透过，因此用这类染料(如红墨水、酸性靛蓝等)不能使种胚染色。而死种子的胚细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，于是染料进入死细胞，将胚完全染色。因此，可根据种胚或子叶对染料的着色情况判断种子的发芽率。 三、实验材料 小麦种子、大麦种子、籼稻种子、玉米种子、粳稻种子、蚕豆种子、大豆种子。 四、设备与试剂 恒温箱，培养皿，烧杯，镊子，刀片，紫外荧光灯，滤纸（无荧光），琼脂，沸水。 5％红墨水：市售红墨水5 mL加95 mL自来水。 五、实验步骤 1．红墨水染色法 将待测种子在30～35℃温水中浸种（小麦、大麦、籼稻种子6～8h；玉米种子5 h 左右；粳稻种子2 h），以增加种胚的呼吸速率，使显色迅速；取吸胀的种子200 粒，沿种子胚的中心线纵切为二半，将其中的一半置于红墨水培养皿中5～10 min；用红墨水染色后，倒去废液，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止，并检查种子死活。凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。也可用沸水杀死的种子作为对照观察。
第五章种子生活力与活力测定 本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法 §2、种子活力测定原理及方法 第一节种子生活力测定的原理与方法 在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。 一、种子生活力概念： 种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的 生命力； 种子生活力和发芽具有不同的含义： 一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。 二、种子生活力测定的意义 1、测定休眠种子的生活力 新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。（怎样利用？） 播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。 种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。 2、快速预测种子的发芽力: 休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，
因为发芽试验所需的时间较长。如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。 而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d计算发芽率）。这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。 种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。 本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。 三、四唑测定法（GB） (一)四唑测定法概述 1、发展简史 四唑测定法于1942年由德国https://www.doczj.com/doc/9a13969993.html,kon(莱康)教授发明，二战期间传人美国。ISTA于1950年成立四唑测定技术委员会，1953年首次将四唑测定列入国际种子检验规程，主持编写《四唑测定手册》，经过多次ISTA会议讨论修改，于1984年正式公布发行。该手册汇集了650多个种属的具体测定技术，是四唑测定的权威性参考书。目前国际和国家检验规程都将其列于正式检验项目，它是测定种子生活力公认的最有效的方法。 2、四唑测定方法的特点 四唑测定是一种世界公认、省时快速、结果可靠的种子生活力 测定方法。有以下几个特点： 1）原理可靠，结果准确：主要是按胚的染色图形来判断种子的死与活，该技术已发展成熟。如果能正确使用四唑测定方法，四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3～5％。 2）不受休眠限制：利用种子内部的还原反应显色来判断种子的死与活，不受休眠限制。 3）方法简便，省时快速：所需仪器设备和物品较少（恒温箱、培养皿、刀片、镊子、放大镜和四唑药品等）。测定方法也较为简便，
华南农业大学实验报告 专业班次11农学1班组别201130010110 题目种子生活力的快速测定（TTC法）姓名梁志雄日期2012-11-21 一、实验原理 有活力种胚中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色TTF，如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力 二、实验材料与实验器材 水稻种子、恒温箱、小白瓷碗、镊子、小烧杯 三、实验步骤 1、实验之前将种子放在微波炉里稍微加热，将水稻种子用温水（30~35℃）浸泡2~6h，使 种子充分吸涨 2、随机抽取30粒水稻种子，小心剥去种皮，千万不要伤害种胚，然后把处理好的种子置 于小白瓷碗中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为度，与恒温箱中（30~35℃）中保温0.5-1h。 3、染色结束后要立即进行鉴定，因放置太久会褪色。倒出TTC溶液，再用清水将种子清 洗1~2次，观察种胚染色的情况。凡种胚全部或大部分被染成红色即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。 四、数据记录记录 本实验测得染色种子25粒，无色种子5粒，其中染色的25粒种子中有19粒种子染色是比较深的，说明其生长活性物质多，生命力强。根据以下公式 种子活力（％）＝有活力的种子数/种子总数×100%
可以知道种子活力=25/30*100%=83.3% 六、实验总结 有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸过程中的代谢物质跟TTC反应生成红色TTF，且代谢物质越多，颜色越深，代谢强度越大。从本实验结果来看，种子生命力总体上时比较强的，且其中的19粒染色较深的那些则更高。另外TTC法还可以运用于花粉活力的测定。