血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
一.血型鉴定
1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆,取一滴压积红细胞,三次洗涤,制备患者2%-5%红细胞悬液。
3.加样
ABO正定型:1滴(50ul)抗A、抗B试剂加1滴(50ul)患者红细胞悬液。
ABO反定型:1滴(50ul)患者血清加1滴(50ul)反定型试剂红细胞。
RhD定型:1滴(50ul)抗D血清加1滴(50ul)患者红细胞悬液。
4.结果判断
离心(2档):轻摇试管,肉眼观察有无凝集,记录ABO、RhD血型结果。
二.不规则抗体筛查(生理盐水法+凝聚胺法)
1.排管标记01、02、03及自身对照管
2.加样各试管分别加入相应的患者血清2滴(100ul)及筛选细胞1滴
(50ul)。
3.结果观察
离心(2档),观察结果
先看上清液有无溶血,轻轻混匀,肉眼观察有无凝集,结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质0.65ml,轻轻混匀(参照试剂说明书)
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴(100ul)混匀,离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液,留约0.1ml,轻轻混匀
肉眼观察有无凝集(凝者继续试验,否则查找原因并重复试验)
各试管分别加入重悬液2滴(100ul),轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min内消失
显微镜检查
三.交叉配血试验(生理盐水法+凝聚胺法)
1.标本准备
分离供血者血浆与红细胞
三次洗涤,制备供血者2%-5%红细胞悬液
2.排管标记
排管,主侧、次侧及自身对照管
3.加样
各试管分别加入相应的备检血清2滴(100ul)及2%-5%备检红细胞悬液1滴(50ul)
4.结果观察
离心(2档),观察结果
先看上清液有无溶血
轻轻混匀,肉眼观察有无凝集
结果判断并记录
各试管分别加入低离子介质0.65ml,轻轻混匀(参照试剂说明书)
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴(100ul)混匀,离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液,留0.1ml,轻轻混匀
肉眼观察有无凝集(凝者继续试验,否则查找原因并重复试验)
各试管分别加入重悬液2滴(100ul),轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min内消失
肉眼观察阴性者,显微镜检查
记录交叉配血结果
A、B、O试验红细胞悬液的制备
1.分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞,经盐水洗涤3次,以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液(见表格)
红细胞悬液的配置
悬液浓度(%)压实红细胞(滴)盐水(滴)212.0ml(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)
2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致,可随机采取3个以上健康成人血液,按A、B、O型分别混合后,按上法制备。