血细胞分析仪的工作原理及其近期发展
姜穗
(温州医学院附属第二医院临床工程科浙江省温州市325027)
[摘要]本文简要介绍了血细胞分析仪的主要工作原理,各主要厂家在血细胞分析仪上采用的白细胞分类技术及业界的技术进展.
[关键词]血细胞分析仪,红细胞,血小板,白细胞,计数
The Work Principle Of Hematology Analyzer
And Its Near Period The Development
Jiang Sui
(Clinical Engineering Department of The Second Hospital of Wenzhou Medical College, Wenzhou Zhejiang 325027,China)
Abstract:Tise paper introduces the major principle of hematology analyzer,the categorized technology of white blood cell mainly used by manufacturer and the development of analyzing technology.
Keyword: hematology analyzer,red blood cell,platelet,white blood cell,counter 自50年代初库尔特先生发明了粒子计数技术的专利,制造了第一台血细胞分析仪并应用于临床以来,血细胞分析仪的发展已有50年的历史.血细胞分析仪实质上是指对一定体积内血细胞数量及异质性进行分析的仪器.最初的血细胞计数仪(Cell Counter)仅能计数红细胞(RED)和白细胞(WBC),后来又有了血红蛋白(HBG),血小板(PLT),红细胞压积(HCT),平均红细胞体积(MCV)等几个参数.而发展成为血细胞分析仪(Hematology Analyzer)后,又增加了许多分析和计算参数,
如红细胞体积分布宽度(RDW),平均血小板体积(MPV),血小板体积分布宽度(PDW),血小板压积(PCT),大血小板比率,白细胞三分群,白细胞五分类,血红蛋白浓度分布宽度,异常淋巴细胞提示,幼稚细胞提示等各种参数和功能也不断地添加到一些品牌的仪器上.
电阻检测法的基本原理是:在待测液体中置一微孔,在微孔的两端各加一定电压的电极,当液体中的颗粒巾进经过微孔时,电极间的电阻就会产生训瞬间的变化,以因而产生电脉冲,对这种电脉冲进行计数就可得到颗粒的数量,脉冲幅度的大小表示颗粒的体积的大小,经过对各种细胞所产生脉冲的大小的电子的选者择,可以区分出不同种类的细胞;在液体中加上一定的负压就能使经过微孔的液体流动.
随着电子技术,流式细胞技术,激光技术,电子计算机技术和新荧光化学物质等多种高科技技术在临床检验工作的应用,使血细胞分析仪在自动化程度,先进功能和完美设计方面提高到了一个崭新的阶段,血细胞分析仪已经不仅仅局限在进行常规的血细胞分析,还增加了许多扩展功能,例如将网织红细胞(RET)的计数和分析功能加入其中,一些仪器还另外增加了幼稚细胞分析和有核红细胞分析功能,甚至对血液细胞中某些寄生虫进行提示,更有一些仪器把流式细胞分析仪的某些功能和并到血细胞分析仪上,在进行常规血细胞分析时可得到某些淋巴细胞亚群的分析结果.
在常规血细胞计数仪上,红细胞(RBC),血小板(PLT)共用一个测量通道,血红蛋白含量(HGB)的测定在任何类型,档次的仪器中其测试原理都是相同的.白细胞的计数和分类有其专用的通道,现我们就对分析仪上各测试项目所使用的技术方法和原理作些简要介绍.
血红蛋白含量测定
血红蛋白含量的测定是在被稀释的血液中加入溶血剂后,使红细胞释放出血红蛋白,后者与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物,进入血红蛋白测试系统,在特定波长(一般在530-550nm)下比色,吸光度的变化与液体中Hb含量成比例,仪器便可显示Hb浓度.不同系列的血液分析仪配套溶血剂配方不同,形成的血红蛋白衍生物也不同,但大多数的最大吸收光谱接近540nm.近年来许多高档的分析仪上采用了激光散射法进行单个血红细胞血红蛋白的分析,以尽量减少高WBC,乳糜血,高胆红素等对HBG比色的影响.
血红细胞及血小板的检测
血红细胞的检测是血液分析仪的重要组成部分,红细胞的检测以往主要还是使用阻抗法对红细胞的数目和体积计数,以此分选出不同大小的信号并打印出红细胞体积分布直方图.但现在也采用光学和电阻抗法结合的处理方法对红细胞体积进行三维空间分析(3D)以期得到更正确的结果.如拜尔的ADVIA 120以光散射法检测红细胞,以低角度前向光散射和高角度散射两个测量系统同时测量1个红细胞,根据低角度光转换能量的大小测量单个红细胞体积与总数;根据高角度的光散射得出单个血红蛋白浓度,可准确得出MCV(平均红细胞体积),MCH(平均血红蛋白含量),MCHC(平均血红蛋白浓度)测定值,并绘出红细胞散射图,单个红细胞体积及红细胞内Hb含量的直方图及求出RWD(红细胞体积分布宽度),HDW(红细胞血红蛋白分布宽度)等参数.
由于血小板和红细胞体积的明显差异,很容易用一个限定阈值将两者同时测得的光电信号区分.因此,迄今为止全血分析中血小板,红细胞检查均采用一个共用的分析系统.但由于血小板和红细胞测量信号常有交叉,如大血小板的脉冲信号可能被误认为红细胞而计数,小红细胞的脉冲信号可能进入血小板通道,造成实验误差.各血细胞分析仪生产厂家采用多种先进技术以减少血小板计数的干扰,以下我们就分别给予介绍:
扫流技术(sweep flow):由于血小板和红细胞在同一个计数池中计数,红细胞体积较大,在通过正中计数感应区时会形成一个大脉冲,若有回流会同时又产生一个因涡流再度进入感应区边缘而形成的小脉冲使电极可能感应到相当于血小板大小的小脉冲,使血小板计数假性增多.扫流技术是在进行红细胞和血小板计数的同时,在红细胞计数小孔的后面有一个稳定的液流通过,这样可以使后的红细胞被立即冲走,以防止回到感应区被计数为血小板.
防反流装置:为防止以被计数的红细胞又回到感应区,在红细胞计数池小孔的内侧按装一块带孔的小板,板上小孔的直径比红细胞计数孔略大,正好位于计数孔的后方,感应区以外.当进行细胞计数时,由于负压的作用细胞快速通过小孔感应区并穿过挡板小孔,即使挡板外侧产生涡流,红细胞也会被阻挡在感应区之外,不影响血小板计数.
鞘流技术(sheath flow):为了避免计数中血细胞从小孔边缘处流过及湍流,涡流的影响,发明了鞘流技术.具体做法是用一毛细管对准小孔管,细胞混悬液从毛细管喷出,同时与四周流出的鞘液一起流过敏感区,保证细胞混悬液在中间形成单个排列的细胞流,四周被鞘液围绕.鞘流技术可应用于两种细胞计数原理:一为电阻抗原理,鞘流通过小孔的敏感区进行细胞计数;另一种为激光计数原理,细胞液流室
较长,与激光垂直相交,激光光束对流经的每一个细胞照射后产生光散射,利用此原理进行细胞计数.
浮动界标:正常标本中红细胞与血小板体积相差较大,一般将红细胞与血小板的界限定于35fl,大的为红细胞,小的为血小板,也有以30fl或20fl为界限的.但在某些病理情况下可能有大血小板超过35fl界限,造成血小板漏计使结果偏低;反之,如果红细胞体积偏小(如缺铁性贫血,地中海性贫血),则可能将部分小红细胞误计为血小板,使血小板计数偏高.为了结果准确一些,计数仪利用计算机在5-35fl间寻找直方图最低点,以此定为红细胞和血小板的界限.由此可使所计数的数值符合实际情况.因为各种细胞间的界限可以随细胞实际大小而向左或右移动,故称为浮动界标技术(floating threshold).
此外,还有延时计数(extended count),拟合曲线(fitting curve)等技术以确保计数结果和体积分布图的准确性.
三,白细胞计数及分类
在早期的单分类仪器中,WBC的计数是将病人的血样经抗凝后按一定比例稀释,再加入溶血剂(作用是使细胞膜皱缩,周围的胞浆慢慢从细胞内扩散,但细胞颗粒仍在),使经过这样预处理的病人血样成为有悬浮颗粒的液体,并使其在一定时间内流过一个用红宝石做成的微孔.不同的颗粒可用不同大小的微孔来测试,一般情况下测量白细胞的微孔尺寸长*直径为100*70微米左右.后来,许多公司在单分类仪器的基础上利用经过溶血处理后的白细胞体积大小不同,将产生大小不同的电脉冲,通过仪器内电脑的各个通道运算可初步确认相应的细胞参数,将细胞分成淋巴细胞(小细胞亚群),中性细胞(单核细胞亚群)和粒细胞群(大细胞亚群)三个分类计数.由于采用液流聚焦电阻法克服了微孔易堵,液体返流等问题,采用了定容积方法来克服由于负压不稳引起的误差,并将样本稀释,添加溶血剂等多道手续在机内一次完成,提高了自动化程度.在电路上,还在通道中对多个颗粒同时进入微孔敏感带而造成的误差进行自动校正,数据经CPU处理后在显示器,打印机上用数据图表,直方图等形式读出,仪器软件提供人机对话界面,能方便地完成定标,质控,测量,冲洗等日常操作,报告参数有近20项.此类仪器由于结构和电路上都较单分类仪器作了较大改进,性能稳定,在中小医院得到了广泛使用.
近期血细胞分析仪测试原理的改进,主要体现在白细胞分类方面的改进.对WBC 来说,从单分类到三分类,五分类甚至九分类,血细胞的测定和分析方法已经不仅仅局限于某一单一的方法,已发展到利用多种物理化学方法处理白细胞,用先进的电脑技术区分,辨别经上术方法处理后的各细胞间的细胞差别,综和分析实验数据,得出较为准确的白细胞分群结果.联合检测法代表了血细胞分析仪的最新发展趋势.如库尔特公司的STKS和GEN.S采用电阻抗,激光及电磁波技术,拜尔公司的ADVIA系列采用化学反应与激光技术结合原理进行白细胞五分类测定,雅培公司的CD-3500采用电阻抗与光散射结合技术,希森美康公司的XE-2100/SE-9500用硫化氨基酸和特殊溶血剂及电阻抗与射频技术检测幼稚细胞等,这些仪器的问世大大提供了自动化仪器进行白细胞分类的准确性,使仪器的发展进入了新阶段. 下面就各大厂家对白细胞的分类采用的各种不同方法做些介绍.
Coulter公司的VCS联合检测技术
VCS技术即体积测量,高能电磁波传导性和激光散射技术(见原理图1).
V代表体积.Coulter公司仍采用电阻抗法进行血细胞计数和体积测量.C代表一束电磁波穿透细胞的传导性,它取决于细胞的大小及内部结构.通常我们用较正后的传导性来反映细胞的内部结构,如核的大小,核浆比例及细胞内质粒的大小和密度,所以传导性可辨别体积完全相同的两组细胞群.例如直径均在9-12um的小淋巴细胞和嗜碱性粒细胞.S代表光散射,可以依据细胞表明光散射的特点对细胞进行分类.用激光光源产生的单色光束直接进入计数池的敏感区,在不同角度(10°～70°)对每个细胞进行扫描分析,测定其散射光强度,从而提供细胞结构,形态的光
散射信息.由于粗颗粒细胞的散射强度比细颗粒细胞更强,故光散射对细胞颗粒的构型和颗粒质量具有很好的区别能力.
图1,VCS法白细胞分类原理
VCS技术可使白细胞处于与机体完全相同的自然条件下得出检验结果.首先在样本内加入只作用于红细胞的溶血剂(erythrolya)使红细胞溶解,然后加入抗溶血剂(stabilyse)起中和溶血剂的作用,使白细胞表面,胞质及细胞大小等特点仍保持与体内相同的状态,由于不同的细胞在细胞体积,表面特征,内部结构如核浆比例和颗粒构型及质量等方面完全一致的几率很小,加上仪器配备了先进软件,可与流式细胞仪一样调较,设置门限,可在三维图像上将各细胞较好的分开,达到较准确的分类,同时可提示幼稚白细胞,异型淋巴细胞等.此外,还可将包被了抗CD4和CD8单克隆抗体的聚苯乙烯微球加到血液中,使含有相应表面(抗原)标志的淋巴细胞结合相应的微球而改变该细胞的VCS性质,在分析仪上直接计数CD4和CD8淋巴细胞,并计算比率.以此原理生产的仪器以GEN·S细胞分析仪为代表.
Bayer公司的光散射与细胞化学联合技术
以ADVIA120为代表的此类仪器联合应用激光散射与过氧化物酶染色技术进行白细胞分类计数.用激光散射技术计数血细胞,因细胞表面结构不同,在不同角度上所测散射光会有所差别.此仪器有四个测量通道:血红蛋白测量通道,红细胞/血小板测量通道,嗜碱性粒细胞测量通道,过氧化物酶测量(白细胞分类)通道.其利用五种白细胞过氧化物酶活性的差异对白细胞进行染色,测定其酶反应强度,对白细胞进行分析.在测试过程中,每个细胞产生两个信号:组化染色结果与光散射结果.它以X轴代表吸光率(组化染色酶反应强度),Y轴代表光散射(细胞大小),一起定位于细胞图上(cytogram)见图二.计算机系统对存储资料进行分析处理,并结合嗜碱性或分叶细胞通道结果计算出白细胞总数及分类.
血液中五种白细胞的过氧化物酶活性排列顺序为:嗜酸性粒细胞>中性粒细胞>单核细胞.淋巴细胞和嗜碱性粒细胞均无过氧化物酶.将待测血液加入清洗剂和甲醛的等渗液体内经孵育,再加入过氧化氢(H2O2)和四氯-萘酚,细胞内过氧化酶分解产生〔O〕-,使四氯-萘酚显色并沉淀,并定位于酶反应部位.由于酶反应强度不同,激光束照射细胞在低角度(0°-5°)和高角度(5°-14°)测定散射强度也不同.低角度
反映细胞大小:由于嗜碱性粒细胞在此溶血剂中保持不溶(细胞大),故散射强;高角度反映核叶数目及大小,核叶多,核
图2,过氧化物酶通道白细胞分类原理图
大则散射强.最后由计算机综合处理分析,给出较准确的白细胞总数及分类计数,其中还包括了大型不染色细胞群,即非典型淋巴细胞或过氧化物酶阴性的幼稚细胞,故称六分类.该仪器采用激光散射法检测红细胞和血小板,均需加入试剂;同时
还可在红细胞稀释液中加入可染RNA的荧光染料,经激光照射激发后,对其中的网织红细胞进行计数,分类,得到八个网织红细胞参数.
由于其采用化学染色方法来分析细胞类别,故其共使用了11种试剂来进行测试,运行成本较高.
雅培(Abbott)公司采用的多角度偏振光散射(MAPSS)技术
以CD-3500和CD-3000型血细胞分析仪为代表的此类仪器采用了多角度偏振光散射技术进行白细胞分类计数.其原理是利用鞘流液与血标本按适当的比例混合后,使其白细胞内部结构基本保持不变(只有碱性粒细胞颗粒因有吸湿特性而其
结构有较微改变),红细胞在该鞘流液中细胞膜完整且和鞘流液的吸光指数相等,故不会干扰白细胞的检测.用偏振激光束射照单个排列细胞(集中于一直径30um 的小股液流中),并进一步分辨细胞.该技术采用了其他仪器很少用的10°窄角和偏振加消偏振检测法,分辨能力有所提高.它第一步先测试中性/单核细胞,用0°-90°的散射数据,再测90°D的衍射差,将嗜酸性和中性细胞分开,而嗜碱性粒细胞,淋巴细胞及单核细胞,则按其大小和内部结构的复杂性不同,所产生的散射光也各异,用可调较的门限加以区分.其采用特定程序自动储存分析数据,并经电脑软件处理,在屏幕上显示6个散点图和两个直方图.
4,Sysmex公司的射频(RF)加直流阻抗式(DC)的白细胞分类技术
典型机型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等.这类仪器共有四个不同的检测系统,将标本用特殊细胞染色技术处理后再应用RF和DC技术对白细胞进行分类和计数.其共采用如下四个检测系统:
淋巴,单核,粒细胞(中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞)检测系统:该系统采用电阻抗与射频联合检测方式,使用作用较温和的溶血剂,对核及细胞型态影响不大.在内外电极上存在直流和高频两个发射器.由于直流电不能达到细胞质及核质,而射频电能透入胞内测量核大小和颗粒多少,因此这两种不同的脉冲信号的个数及高低综合反映了细胞数量,大小(DC)和核及颗粒密度(RF).由于淋巴细胞,单核细胞及粒细胞的大小,细胞质含量,核形态与密度均有较大差异,故可通过扫描得出其比例.
嗜酸性粒细胞检测系统:该系统是利用电阻抗方式计数.血液经分血器分血后部分与嗜酸性粒细胞计数溶血剂混合,特异的溶血剂使嗜酸性粒细胞以外的所有细胞均溶解或萎缩,这种含完整嗜酸性粒细胞的液体经阻抗电路计数.
嗜碱性粒细胞系统:该系统检测原理与嗜酸性粒细胞相同,不同的是其溶血剂只能保留血液中的嗜碱性粒细胞.
幼稚细胞检测系统:该系统也是利用电阻抗方式计数.其原理是由于幼稚细胞上的脂质较成熟细胞少,在细胞悬液中加入硫化氨基酸后,由于脂质占位不同,结合在幼稚细胞上的硫化氨基酸较成熟细胞多,且对溶血剂有抵抗作用,故能保持幼稚细胞的形态完整而溶解成熟细胞,即可通过阻抗法检测.
网织红细胞计数
网织红细胞(简称网红)计数是反映骨髓造血功能的重要指标.迄今国内仍多采用显微镜目测法,由于受主观影响,其计数精度较差.20世纪90年代初,日本SYSMEX公司首先推出R-1000网红细胞分析仪,开始用分析仪代替目测法,无论从实验方法还是临床应用,均取得了良好的效果.
网红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞之间的过渡细胞,由于其胞浆中残存嗜碱性物质,在活体可被蓝染成蓝色细颗粒或网状物而得名.,在红细胞的发
育过程中,RNA含量有明显规律性的变化,即由原始阶段较为丰富逐渐减低,至细胞完全成熟后消失或接近消失.在流式细胞仪的测量中,一般用某些染料与网红中RNA结合发出特定颜色的荧光,进行RNA的测定,RNA可精确表示网红细胞占成熟红细胞的百分率(RET%).
1993年以来,可进行网红计数的血细胞分析仪相继问世,使血细胞分析仪的应用进入了新的阶段.Coulter,Abbott,Bayer,Sysmex等众多厂家的高端机型皆有网红细胞计数和分析的功能.检测原理大致以Coulter Maxam和Technicon H*3型为代表.Coulter Maxam采用了两种试剂,一为新亚甲蓝着染红细胞内的RNA,另一为"透明"剂使红细胞内血红蛋白溢出,成为"影细胞"减少测试干扰.处理后的血液
在仪器上通过VCS原理进行网红细胞的检测,可得出RET#,RET%,网红平均体积(MCVr)和网红成熟指数(MI).实验证明其结果与FCM法高度相关
(r=0.961).Technicon H*3测试网红则先将3ul血液加入已标准化的染液中孵育15分钟,将仪器转换到网红计数程序进行检测,即可得到网红细胞的实验参数.包括RET#,RET%,MCVr,RDWr(网红体积分布宽度),CHr(网红内血红蛋白
量),HDWr(网红内血红蛋白分布宽度)及网红细胞分类.根据荧光强度,可将网红细胞分成低(LFR),中(MFR),高(HFR)三部分.幼稚的网红显示最强的荧光,反之成熟红细胞极少或没有荧光.
综上所述,由于近年来综合性高科技的飞速发展,血细胞分析仪上也不断采用最新的电子,光学,化学和计算机技术,从而不断满足临床工作对血细胞分析的要求,各厂家朝着高速度,多参数,多功能合成及操作更灵活和方便上发展,近期各厂家更是推出了血液分析仪的全自动流水线化,将血液常规分析,网织红细胞分析,血片的制备(选择,涂片,编号,染色,干燥)等系列步骤通过仪器自动完成.血液先经血细胞分析仪检测,根据红细胞情况决定是否作网红计数,根据HCT改变涂片机的角度和速度,以保证合格的血涂片.根据实验数据和直方图的变化,计算机选择是否需要进一步的显微镜检查,特别是自动加样系统和真空采血管的应用,不但可能避免实验的随机误差,加快标本的处理速度,而且避免了某些实验环节造成的血行感染,对工作人员的劳动保护起了关键作用,同时使许多操作更加的标准化,成为仪器使用和发展的潮流
深圳大学实验报告 课程名称：体外诊断仪器原理与实践 实验项目名称：血细胞分析仪 学院：医学院 专业：医疗器械工程 指导教师： 报告人：学号：班级： 实验时间： 2014-05-09 实验报告提交时间： 教务部制
方法、步骤： 实验仪器: 三分类血细胞分析仪: 一、简要操作指南及注意事项 1、开机前的准备 检查试剂是否足量，有无浑浊变质，试剂管道有无扭结，并倒空废液瓶2、开机
综上可知: 不同脉冲波的大小表示细胞体积的不同. 不同脉冲波的数量即为细胞的个数 库尔特原理主要由测量杯、小孔管、内外电极等组成。其中 , 小孔管（主要是红宝石孔）下图 是整个测量系统的主要部分 , 它决定了血球分析仪的测量准确度。小孔越小(大概100
μ米那样) , 测量准确度越高 , 但易造成堵孔 ; 小孔越大 ,测量准确度越低 , 但不易堵孔。目前市场上销售的利用电阻抗法设计的血球分析仪的竞争焦点就在于把小孔做得小而不易堵孔 ,为了实现细胞逐个通过可采用鞘流法,根据两侧鞘流的流速不同使细胞一个个的进入孔内从而不造成堵孔和细胞并排进入的误差的问题(如下图): 其排堵方法大致有反冲法和电灼烧法两种 , 或二者兼而有之。测量系统得到的电平信号经放大、阈值调节、甄别、整形后进行计数 , 得到 RBC、WBC、PLT 的数量。但三者的计数原理又略有不同。白细胞计数时 , 机内微型计算机按体积大小将白细胞从 30～45fl 分为 256 个通道 , 每个通道为1164fl。根据细胞大小被分别放在不同的通道中得到白细胞体积的直方图 , 根据体积大小可分为不同的细胞群 , 第一群主要是淋巴细胞 , 第二群主要是单核细胞 , 第三群为粒细胞 , 这就是“三分群法”也就是常说的三分类。 红细胞计数原理同白细胞计数原理大致相同。在红细胞计数的同时 , 把各脉冲幅度相加 , 得到红细胞的总体积 , 经计算得到红细胞的平均体积。血红蛋白的测量通常用比色法得到。红细胞的平均体积 (MCV) , 红细胞平均血红蛋白含量 (MCH) , 平均血红蛋白浓度 (MCHC) , 红细胞体积分布宽度(RDW) 都是通过计算得来的。血小板计数时 , 微型计算机按体积分成 64 个通道 , 范围为 2～28fl 之间 , 血小板的平均体积(MPV) 是计算得来的
ACT.5 diff AL血液细胞分析仪操作规程1 目的 此程序用于ACT 5DIFF AL全自动血液分析仪的操作与维护。 2 适用范围 适用于ACT 5DIFF全自动血液分析仪。 3 检测项目 ACT-5DIFF AL各检测参数的方法见表1。 表1. Coulter ACT-5DIFF AL各检测参数的方法
4 检测原理 ACT 5DIFF AL可以提供完整的WBC五项分类，这是由A C V（吸光率细胞化学和体积）技术和WBC/BASO方法同时决定的。 A C V技术使用吸光率、细胞化学和聚焦流阻抗原理。WBC/BASO方法则使用了差别溶解、阻抗技术及差别阈值的原理。 5 运行条件 1．工作环境温度：+15℃～+30℃ 2. 工作环境相对湿度：≤85% 3. 仪器工作场所：水平放置在清洁、干燥、无尘、无腐蚀性气体、无阳光直射、无强磁场的工作台上。 6 开关机程序 （一）开启电源并登录/关闭电源并退出 开机之前请检查电源线是否连接，试剂是否足够，废液桶是否需要倾倒，打印纸是否足够。 1、打开电源并登录 ①打开工作站电脑以及显示器，等待完全电脑启动； ②打开分析仪电源，将电源开关置于“ON”的位置（a），并检查红色的LED是否点亮（b）。
③登录系统：选择登录名称（Login Name），输入密码， 点击。 ④如果启用“自动启动”，那么“启动”会自动运行；如果禁用了“自动启动”，将会闪烁，点击它运行“启动”。 ⑤启动完成，出现如下主菜单（Main Menu）。根据相关设定，可能会打印启动的本底报告。 ⑥如果本底结果合格――“Pass”，表明“启动”成功；如果结果失败――“Failed”，点 击，再点击查看本底报告。重新点击，再次进行“start up启动”操作。如果本底仍然失败，请联系Beckman－Coulter代表。 说明：启动（Start Up）过程大约耗费3分钟时间。 本底限值: WBC≤0.3 ×109/L RBC≤0.03 ×1012/L Hgb≤0.3 ×g/dL
?继续教育园地? 血细胞分析仪检测原理 乐家新 周建山 兰亚婷 传统的血细胞检查完全采用手工方法,不仅操作繁琐费时,而且由于多种原因,计数结果的准确性和精密度难以保证。1958年,库尔特采用电阻率变化与电子技术相结合的方法,发明了性能比较稳定的电阻抗法血细胞计数仪,开创了血细胞分析的新纪元。20世纪90年代以来,随着各种高新技术在血细胞分析仪中的应用,使其检测原理不断完善,检测水平不断提高,测量参数不断增加,各种类型的血细胞分析仪已在国内外各医院广泛使用。但从根本上讲,其检测原理大致分为两部分,即电阻抗法与光散射法。 图1 细胞计数电阻抗原理 作者单位:100853北京,解放军总医院临床检验科 一、电阻抗法血细胞分析技术 (一)电阻抗法白细胞计数和分类原理 电阻抗法白细胞计数原理是根据血细胞非传导性的性质,以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行白细胞计数和体积测定。在等渗电解质溶液(稀释液)中,有一个用于细胞计数的小孔管,其内侧充满了稀释液,并有一个内电极,其外侧细胞悬液(稀释液)中有一个外电极,小孔两侧的电极之间有稳定的电流。细胞为相对不良导体,其导电性质比稀释液低,当有一个细胞通过小孔时,于瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。脉冲的数量与细胞的数量成正比,脉冲的高度与细胞的体积成正比。脉冲信号经放大、阈值调节、甄别、整形后,送入计数系统进行处理,得出被测细胞的数量。图1显示出血细胞计数仪应用电阻抗原理进行细胞计数及体积分析的方 法及过程。 目前,许多仪器除给出细胞数外,还同时提供可以表示细胞群体分布情况的图形———直方图。可显示出某一特定细胞群的平均细胞体积、细胞分布情况和是否存在明显的异常细胞群,由脉冲累积得到。如图2所示,左图为示波器显示的所分析细胞的脉冲大小,右图为相应的体积分布直方图,横坐标为体积,纵坐标为相对数量。 在进行白细胞分析时,仪器将体积范围从35～450fl 分为256个通道,每个通道约为1164fl ,并将每个白细胞的脉冲根据其体积大小分类并储存在相应的体积通道中。再由计算机拟合成一条平滑曲线,从而得到白细胞体积分布直方图(见图3),其纵坐标表示白细胞的相对数量(REL No 1),横坐标表示白细胞体积(单位:fl )。 电阻抗法得到的白细胞分类值是根据各群细胞在白细胞直方图上所占面积的大小计算得来的(见图4)。白细胞计数池中除加入一定量的稀释液外还加入了溶血剂,此溶血剂一方面使红细胞溶解;另一方面使白细胞浆经胞膜渗出,胞膜紧裹在细胞核或存在的颗粒周围,使白细胞成为“膜包核”。仪器将体积在35～450fl 的这种颗粒认定为白细胞,并根据其体积大小在直方图上从左至右初步确认其相应的三个细胞群。在正常白细胞直方图上,小细胞群是位于左侧又高又陡的峰,分布在35～90fl 范围,以成熟淋巴细胞(L YM )为主要特征细胞;大细胞群是位于右侧较低且分布宽的峰,
1 仪器设备检验项目 适用于血液白细胞计数及分类，红细胞计数，血红蛋白，血小板计数，红细胞压积，红细胞体积分布宽度，平均红细胞血红蛋白含量，平均红细胞血红蛋白浓度，平均红细胞体积，血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 2 仪器设备试剂 BC-5380血液细胞分析仪专用试剂：M-53D稀释液；M-53LEO(I) 溶血剂；M-53LEO(II) 溶血剂；M-53LH 溶血剂；M-53 清洁液；M-53P 探头清洁液。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备标本 原始样品采集、制备、处理、检验和存放见检验科相关规范。 4 仪器设备性能参数 BC-5380血液细胞分析仪一般资料见附件1；BC-5380血液细胞分析仪性能指标见附件2。 5 仪器设备环境要求，使用安全措施 5.1 仪器设备环境要求 5.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间，以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间，以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5380血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5380血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 5.1.2 运行条件 环境温度要求：10℃～40℃。 环境相对湿度要求：10%～90%。 电源电压要求：100～240VAC，50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰；仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；不应放在通风条件差、阳光直射的环境中，或热源及风源前。 5.2 仪器安全 在仪器设备上面和周围不要使用可燃性危险品，避免引起火灾和爆炸。 在电源打开状态下，禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板，以免损害线路板；禁止触摸BC-5380血液细胞分析仪外壳里面的电子元件，尤其避免湿手触摸，以免造成电击。
迈瑞血细胞分析仪 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT
BC-3000PLUS血细胞分析仪工作原理及故障分析 摘要：本文主要介绍了BC-3000PLUS血细胞分析仪的工作原理和其常见的一些故障分析与处理方法。 前言 目前我国大型医院在血常规检查时多采用五分类血球仪，但其机器及试剂成本过高，在医院大型体检和乡镇医院，三分类的血细胞分析仪任占有不可取代的地位，迈瑞BC-3000PLUS血细胞分析仪以其价格合理，性能稳定，重复性好等优势，成为市场上占有率最高的三分类血球仪。现将其工作原理和使用过程中可能遇到的问题与分享，介绍如下。 工作原理：该仪器采用库尔特.贝克曼原理对血液中的WBC、RBC、PLT进行计数，并对WBC分类，利用朗伯.比尔定律对HGB进行测量。 常见故障：该血球仪常见的故障主要分为机械故障、液路故障、结果异常等 一机械故障 BC-3000PLUS机械运动部分主要有采样针组件，用其实现标本采集、稀释、混匀等功能；注射器及注射器电机组件，用其实现样本和试剂的定量及机器管路的清洗； 1升降/偏转电机故障 BC3000PLUS血细胞分析仪采用德国进口步进电机，（）上下各一个，上面的控制升降，下面的控制偏转，在工作时，功率驱动板接受CPU板的控制信号，给电机提供驱动电压，带动采样针的上下左右的动作。在特定的位置，装有光耦，用来确定采样针的位置，上面一个长线的为升降电机光耦，下面两个短线
的为偏转电机光耦。若在规定的时间，光耦没有被触发，或者光耦没在规定时间就被触发，则机器报相对应的电机故障。 故障处理方法：若出现这样的报警，先进入服务菜单进行自检，其步骤如下，“菜单——服务——系统检测——升降/偏转电机检测”，如果结果正常，则故障消除。若故障无法消除，检测1温度是否太低2丝杆脏，阻力大3运动过程中是否有东西阻挡运动部件4上下光耦故障5电机故障6驱动板坏。另外，由于升降电机的运动优先于偏转电机，当升降电机故障时可能会导致机器报“偏转电机故障”的警。 维修案例 现象采样针无法正确偏转到计数池上方机器，机器报“偏转电机故障” 处理过程及故障分析进入维修菜单，做偏转电机自检，正常，但是再做标本，故障依旧。因为可以完成自检过程，而且上下左右的运动都比较流畅，可以排除电机自身故障、阻力过大故障、阻挡、驱动板供电不足故障，而且光耦能传递位置信号。再仔细观察计数过程，发现给偏转定位并控制采样针搅拌的那个小孔（在偏转电机上方的一个两层塑料环上）通过右光耦时机器没能控制偏转电机停下，判定是该光耦的问题，拆下擦拭后机器正常。 2注射器电机故障 BC-3000PLUS一共有三个注射器、两个电机，其中10ml注射器由一个电机推动、另外50ul和的注射器由同一个电机推动。电机工作原理跟升降/偏转电机原理相同，每个电机对应一个光耦。当光耦没有按规定被触发时，机器报相应的电机故障。
血细胞分析仪50年的发展历史和展望 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科张时民 1590 年荷兰人米德尔堡和詹森设计制造了最原始的显微镜（图1），1610 年伽利略使用望远镜观察小的物体并将其放大，后来被列文霍 克改进成为原始的显微镜。1658 年意大利人马尔皮基应用最 原始的显微镜首先观察到了红细胞，他是第一个见到红细胞 的人，开始进行红细胞计数则是200 年后的事情了。而设计 并生产出第一台血细胞计数仪则又过了近100 年。 自从发明了显微镜以后，人们从微观世界中了解和观察到 了血液的组成，并根据他们的特点分别将它们称为红细胞和 白细胞和血小板。在以后的研究中，人们发现许多疾病的发 生和发展与血液中的细胞数量之间存在一定的关系。依据对 疾病诊断的需求，人们开始寻求对血液中细胞的数量进行计数。1852 年就有人开始设计对红细胞的计数办法，1855 年发明了用于计数血细胞的计数板，目前仍然使用的改良Neubauer 计数板就是应用最为广泛和持续时间最为长久的 经典一种，虽然各种类型的血细胞计数仪已在广泛使用，但血细胞计数板法仍然是最为可靠和最为经典的计数技术，它不仅适用于血细胞计数，还可用于其他细胞、动物血细胞、微小粒子及需要在显微镜下计数的各种样品，因此计数板仍然是检验工作者应该掌握的基本技能，是不应该忘记和放弃的手段。 随着对血细胞计数和分析需求的不断增加，对血细胞计数的方法进行改进，实现自动化、高速度、准确性、标准化和智能化的要求也越来越高，现代的血液细胞分析技术与50 年前的发明虽然有着本质上的相同或相似，但已经有了显著的飞跃。作者力图通过有限的资料对细胞计数和分析技术的发展进程进行回顾，并对最新的进展进行介绍和展望，期望对关注这一领域和从事血细胞分析工作的同行有所帮助。 一、血细胞计数仪的发展历史 谈到血细胞计数仪的发展史，在这个领域首开先河的人是1912 年出生在美国阿肯色州一个小城的人Wallance H. Coulter （图2a，b），他年青时对电子学
DIRUI迪瑞 BF-6700 全自动无分类血细胞分析仪操作规程 一、开机程序 1.1开机前的检查、准备 （1）试剂：检查稀释液、溶血剂是否充足，有无过期；试剂管路是否弯折，连接是否可靠。（2）废液桶：废液桶是否有足够的空间盛装废液，如废液桶满，应及时倒掉并清理。（3）打印机：检查打印机是否正确安装，打印纸是否充足。 （4）供电电源：检查电源线是否正确连接。 （5）连接：检查分析仪与计算机主机之间通讯电缆是否正确连接；外置条码扫描仪的电缆线是否与计算机连接就绪。 1.2开机 （1）打开分析仪右侧的电源开关，电源指示灯亮。 （2）打开电脑电源后启动分析仪软件。输入用户名和密码，登录软件。（初始用户名为Admin，初始密码为1。） （3）自检过程结束后，系统进入操作界面。 二、校准 分析仪提供三种校准方式：人工校准、校准物校准和新鲜血校准。 2.1人工校准 在“人工校准”界面直接更改校准系数，点击“保存”键。 2.2校准物校准与新鲜血校准 在校准物校准和新鲜血校准中，所有与校准相关的数学计算都由分析仪自动完成，同一次校准物校准测试需用同一批号的校准物，测试3—5次，建议5次。新鲜血校准测试需3—5各样本，每个样本测5次。校准后得到的校准系数自动保存在“人工校准”界面。 校准物校准步骤： 在校准物校准界面点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将校准物放置在封闭进样器3号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧的计数键进行测试，测试结构自动保存，测试5次后点击【保存】键，校准系数自动存入“人工校准”界面的“校准系数”中。
新鲜血校准的操作步骤与上述相同。 三、质控程序 每天开机后要先进行质控测试。 3.1质控设置 在“质控”的设置界面下，设置质控品信息。 3.2质控测试 在“质控计数”界面进行质控测试。点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将质控品放置在1号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧计数键进行质控测试。可在“质控图”及“质控列表”中查询质控结果。 四、常规操作程序 4.1试剂注册 4.1.1自动扫描 在分析仪软件上点击【服务】，在“维护”栏中点击【试剂注册】，用手持条码阅读器扫描试剂条形码，软件提示“注册成功”。 4.1.2手动输入 如果条形码由于脏污、脱落等原因不能被扫描时，可手工输入条形码信息：在输入框中录入正确的条码信息，点击【确定】键，试剂条码注册成功。 注：更换整瓶/整桶试剂时，注册成功后，在“服务”→“维护”→“更换/灌注”界面下点击【更换】键，软件提示“正在更换……”，当软件提示“操作完成”时，点击【确定】键，即完成试剂的更换。 4.2样本登记 （1）在分析仪软件上点击【样本登记】，然后点击【设置】，可以设置患者信息的输入项目。设置完成后可按此设置内容作为默认项目类型进行样本信息输入。 （2）点击【新增】，在界面左侧编辑区可直接输入样本编号、条码号、病历号、患者姓名、年龄、床号；采样/送检时间可在其右侧的下拉框中直接选择时间；参考值、性别、科室、送检医生均可在其右侧的下拉框中选择，或直接输入预先在“设置”中设置的代码。编辑后点击【保存】键或者按键盘回车键即可进行下一样本的编辑。 注：也可先进行样本测试，测试后在“数据浏览”界面编辑样本信息。
血液细胞分析仪各项分析参数的临床意义 血液细胞分析仪各项分析参数的临床意义--血常规--血细胞分析 (一)红细胞分析参数的临床意义 1.定义及参考值范围 (1)红细胞数量(red blood cells，RBC) (2)血红蛋白浓度(hemoglobin，HGB，Hb) (3)红细胞比积(hematocrit，HCT) (4)平均红细胞体积(mean corpuscular volume，MCV) (5)平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin，MCH) (6)平均红细跑血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration.MCHC) 以上各参数的定义参看红细胞一般检查。 (7)红细胞体积分布宽度(RBC volume distribution width，RDW)是定量反映红细胞体积异质性的参数，以所测红细跑体积大小的变异系数表示。 2.临床意义 (1)RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC各项的I陆床意义见红细胞一般检查。 (2)RDW ①用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时RDW值增大，当给以铁剂治疗有效时RDW值一过性进一步增大，随后逐渐降到正常。 ②对小细胞低色索性贫血的鉴别诊断.缺铁性贫血时RDW值增大而轻型海洋性贫血时RDW值正常。 ③用于对贫血的分类(Bassman MCV/RDW分类法)，根据MCV、RDW值变化共分为六种类型贫血。 A.小细胞均一性贫血：WCV减小，RDW正常，如轻型海洋性贫血。 B.小细胞不均一性贫血：WCV减小，RDW增大，如缺铁性贫血。 C.正细胞均一性贫血：WCV、RDW均正常，如慢性病所致贫血。 D.正细胞不均一性贫血：WCV正常，RDW增大，如早期缺铁性、营养性贫血。 E.大细胞均一性贫血：MCV增大，RDW正常，如再生障碍性贫血。 F.大细胞不均一性贫血WCV、RDW均增大，如巨幼细胞性贫血。 (二)白细胞分析参数的临床意义 1.定义及参考值范围 (1)白细胞数量(white blood cells，WBC) (2)白细胞分类计数.根据溶血剂处理后皱缩白细胞体积的大小分为三类细胞，coulter JT3型血液细胞分析仪将35～90fl大小的定义为淋巴细胞(lymphocytes，Lym)，91～160fl大小的定义为中间细胞(middle cells，Mid.)，161～450fl大小的定义为粒细胞(granulocytes，Gran.)，不同仪器对细胞大小
血细胞分析仪也就是我们所说的血液细胞分析仪，也被叫做血球仪、血球计数仪等。是临床检验中较为常见的检验分析仪器，它可以检查红细胞,白细胞,血小板计数. 该仪器提高了实验结果的准确性，还提供了许多实验指标，对疾病的诊断和鉴别诊断起了重要的作用。了解血细胞分析仪的工作原理可以让我们更好的使用该设备。 选择一款好的血细胞分析仪我们需要考虑很多，像品牌、质量、口碑、价格等等。综合看来国产血细胞分析仪的性价比相对较高，而如今也已有越来越多的医院开始选用国产设备了。可见国产设备也是很好的选择。 （普朗医疗品牌-- XFA6100A型血液细胞分析仪） XFA6100A型血液细胞分析仪，该设备是三分类双通道二十二项，全部中文（或英文）菜单显示，设备采用嵌入式、触屏式双操作系统以及成熟稳定的管路设计和精确的丝杆传动方式。 XFA6100A特点： 1、采用嵌入式、触屏式双操作系统对测量数据和图形自动进行运算、分析、处理保证测量准确、可靠。 2、TFT 显示各种测量参数和直方图、全部中文（或英文）菜单显示。 3、由中文打印机直接打印测量结果，八种报告单打印模式。还可外接打印机。 4、仪器具有自检和维护功能，开、关机时自动清洗取样器和管路，在待机状态时自动定时清洗。
5、具有自动和手动排堵方式，采用智能化瞬时高压电蚀和正压反冲双功能排堵，有效避免堵孔。 6、采用时间计数和先进的波形分析技术，配合高速数据采集和强大的数据处理系统，保证测量准确有效 7、成熟稳定的管路设计结合先进的扫流技术，，精确的丝杆传动方式，保证系统的稳定和可靠 8、浮动界标算法和异常提示功能，可有效帮助用户识别和筛选异常血样 9、系统可进行通用、成男、成女、儿童和新生儿参考值设定和编辑 10、仪器具有RS232接口、USB、PS2、并口接口。
BC-5380五分类血液细胞分析仪简易操作规程 1.主要内容与适用范围 本规程规定了BC-5380五分类血液细胞分析仪操作程序及日常维护保养。 本规程适用于BC-5380五分类血液细胞分析仪的日常使用。 2.参考文件：BC-5380五分类血液细胞分析仪使用说明书。 3.操作程序 3.1开机前的准备 检查试剂是否足量，有无浑浊变质，试剂管道有无扭结，与主机的连接是否可靠。 3.2开机和用户登录 将主机左侧的“O/I”电源开关置于“I”以开启主机电源。启动外置计算机，进入操作系统后，双击桌面上终端软件的图标，运行已安装的终端软件。在弹出的登录对话框中，输入用户名和密码后，进入主界面，并执行开机初始化程序。开机初始化结束后，可进入“图形回顾”界面，以查看开机本底的检测结果。3.3本底检查 在主界面点击快捷按钮区的“图形回顾”按钮，检查显示在“图形回顾”界面的本底结果是否满足以下要求： WBC≤0.3?109/L RBC≤0.03?1012/L HGB≤1g/L HCT≤0.5% PLT≤10?109/L 3.4每日质控 在进行样本分析前，每日需对分析仪进行质控分析（详见使用说明书第8章质量控制）。 3.5选择工作模式 在样本分析前，操作者可在主界面点击快捷按钮区的“工作单”按钮，录入或修改第一条待分析样本的完整工作单信息，以选择工作模式。 3.6全血测量 A 混匀用K2EDTA（1.5～2.2mg/mL血）抗凝的样本，放到采样针下，确保采样针插入足够深度的血样内；
B按吸样键，采样针自动吸入样本，听到蜂鸣器响后，直接移开样本管，分析仪自动执行样本分析。 3.7预稀释测量 A 在主界面点击快捷按钮区的“加稀释液”按钮，按照界面提示，取一个干净的离心管，开盖后将采样针竖直顶到离心管底部； B 按吸样键，让分析仪自动排出稀释液。在稀释液排出的过程中，需小心避免产生气泡、挂液或溅出。听到蜂鸣器响后，移开离心管。操作者也可使用移液器移取180μL稀释液到离心管中； C 加稀释液完毕，点击“取消”按钮，关闭并退出加稀释液的操作； D 人工采集20μL血样注入盛有稀释液的离心管中，盖好盖子后混匀； E 将该预稀释血样放置3分钟后，再次混匀，放于采样针下，按吸样键，采样针自动吸入样本，听到蜂鸣器响后，移开样本，分析仪自动执行样本分析。3.8休眠 液路相关操作停止的时间超出设定的时间间隔后，分析仪会自动进入休眠状态。此时，仍可以执行与液路无关的任意操作。操作者也可在主界面点击“菜单”按钮，在弹出的菜单中，选择“关闭仪器”→“仪器休眠”，使分析仪进入休眠状态。 分析仪处于休眠状态时，可按吸样键取消休眠，也可在主界面上点击“菜单”按钮，在弹出的菜单中选择“关闭仪器”→“取消休眠”，使分析仪退出休眠状态。 3.9关机 每日工作完毕，在主界面点击快捷按钮区的“关闭仪器”按钮执行关机，并按照界面的提示将主机左侧的“O/I”电源开关置于“O”以关掉主机电源。 4.维护保养注意事项 4.1根据仪器自身的定时、定量维护功能进行维护保养。 4.2根据实际使用情况，按需进行清洗。 桐妇保院检验科制
血细胞分析仪五分类检测技术与原理 血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着近几年计算机技术的日新月异的发展，血细胞分析的技术也从三分类转向五分类，从二维空间进而转 向三维空间，而且我们也注意到现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了和当今非 常先进的流式细胞仪相同的技术，如散射光检测技术、鞘流技术、激光技术等等。本 文重点就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以阐述 1、电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法 这是Coutler公司1987年推出的新技术，血球悬浮在电解液中，用一定的电流通过传感器的内外两个电极，由于血细胞电阻抗很大，当血细胞通过两个 电极时，电极间阻抗瞬间增大，形成幅度与血细胞体积成正比的电脉冲，根据 脉冲的大小可测出细胞的体积。在测量红细胞时，利用一个脉冲甄别器，将幅 度较小的血小板脉冲去掉，保留红细胞和白细胞脉冲，因血液中白胞的数量不 及红细胞的1/500，故其总数据近似认为是对红细胞计数。在测量白细胞时， 利用溶血素，使红细胞溶解，再对剩下的白细胞计数。在对血小板计数时，调 低脉冲甄别器的阈值，计出总数，再减去红细胞的计数（其中已包括白细胞的 计数），即为血小板计数。由于不同类型但体积相同的细胞产生的脉冲幅度相 同，故仅靠体积是不能完全区分，利用高频电导法和激光散射分析白细胞内部 结构可以弥补这一缺陷。虽然细胞壁不能使低频电流通过，但能通过高频电流，细胞核的大小和密度不同，它们对高频电流的阻抗也不同，因此可以用来区分 白细胞。激光散射技术主要用来检查细胞膜表面特征和内部结构。激光散射对 细胞颗粒的结构和密度的区分能力强，粗颗粒产生的光散射比细颗粒强，借此 可将粒细胞区分开来，美国COULTER公司的STKS、MAXM系列血细胞分 析仪五分类就是利用电阻法、高频电导及激光散射联合检测法 2、光散射和细胞化学染色联合检测法 它利用激光散射和过氧化物酶染色技术进行细胞分类。嗜酸性粒细胞有很强的过氧化氢酶活性，中性粒细胞浆内含有较为丰富的过氧化氢酶，单核细胞 次之，原始细胞则极少，而淋巴细胞和嗜碱性细胞则缺管此酶。使用微量血液 经与含有清洗剂和甲醛的高渗液体进行适当稀释并孵育几十秒钟，此时细胞被 清洗剂所破坏，白细胞浆内酶固定，此后继续再进行第二次反应，加入过氧化 氢和四氢一萘酚加热，此时待测细胞中过氧化氢酶分解过氧化氢产生氧，后者 使四氯一萘酚显色并沉淀定位于含酶的颗粒中，此类细胞经激光束，由于光散 射及细胞大小不同而被分类。显然暑碱性细胞、淋巴细胞、原始细胞由于不含
i-STAT? 1 System SOP 床旁血液分析仪标准操作规程
目录 一、系统概述 (1) ●使用目的 (1) ●CDS及CDS PLUS数据管理系统 (2) 二、分析仪、卡片及质控存储要求 (2) ●分析仪安装环境 (2) ●测试卡 (2) ●质控品（如采用卡片配套质控品，请参照以下注意事项） (2) 三、样本要求 (2) ●各种卡片适合的血液类型及采集方法 (3) ●注意事项：避免出现以下情况 (3) ●合适的测试时间 (3) 四、系统检测 (4) 五、样本检测 (4) ●准备卡片 (4) ●样品测试 (4) 六、质控检测（如采用卡片配套质控品，请参照以下操作流程） (5) 七、结果分析 (5) ●显示结果 (5) ●取消的结果 (5) ●打印多个结果 (6) ●传输结果到CDS数据管理系统 (6) 八、日常维护 (6) 九、附录 (7) ●参考范围 (7) ●危急值结果范围 (9) ●干扰物质 (10) ●临床意义 (12) ●测量原理 (15)
一、系统概述 i-STAT1 血液分析仪由以下主要部件组成：分析仪、充电底座、打印机及模拟器 ●使用目的 i-STAT1血液分析仪可以用于血气、生化、血凝、心脏标记物项目的监护。 ●分析时间 ?ACT测试卡：检测终点-最高1000秒（16.7分钟） ?PT/INR测试卡：检测终点-最高300秒（5分钟） ?cTnI和BNP测试卡：600秒（10分钟） ?CK-MB测试卡：300秒（5分钟）
?其他测试卡：通常为130至200秒 ●CDS及CDS plus数据管理系统 CDS系统为血液分析仪提供了信息管理功能，可对数据进行存储、分析、编辑以及连接医院的LIS/HIS系统。 CDS结合CDS plus系统可以打印中文报告，绘制质控数据图，绘制动态曲线。 i-STAT1 血液分析仪通过充电底座，可以把数据传输到CDS以及CDS plus系统。 二、分析仪、卡片及质控存储要求 ●分析仪安装环境 ●测试卡 测试卡封存在独立包装袋中。存储在温度介于2-8℃的环境中。 请勿冷冻测试卡。测试卡可以在室温18至30℃下储存。 一旦在室温放置，不能再将测试卡放还至冷藏箱，而且不能置于超过30℃的温度下。 如果包装袋被刺破，就不能再使用该测试卡。请勿在标明的失效期之后使用。 ●质控品（如采用卡片配套质控品，请参照以下注意事项） ●血气、生化、ACT和PT/INR 的i-STAT质控品 ●储存于2至8℃。质控品可以在室温18至30℃下储存5天。 ●用于cTnI和BNP 的i-STAT质控品 ●储存于≤-18°C的无霜冷冻库中。解冻后，开封或未开封1.0ml小瓶在盖着盖子的情况 下于2至8℃可以稳定4小时。请勿冷冻。 ●电子模拟器，室温储存并且在使用后通过将塑料盖和电子模拟器置于保护罩内来防止接 触垫被污染。 三、样本要求
BC—6８00血液细胞分析仪标准操作程序 1 仪器得检测原理及检验项目 BC-６800采用鞘流阻抗法、激光散射法、结合荧光染色得流式细胞技术进行细胞分类、计数;采用比色法进行血红蛋白测定.输出３3项测量参数加14项研究参数；两个直方图、六个二维散点图、三个三维散点图。 ２仪器设备试剂 ＢC-6８00血液细胞分析仪专用试剂:Ｍ-68DS稀释液、Ｍ—68DR稀释液；Ｍ－６8FD 染色液、M—６8FＮ染色液、M—６8FR染色液;M—６8LD 溶血剂、Ｍ—６8LB 溶血剂、M—６8ＬH 溶血剂、M－６8LN溶血剂；探头清洁液。所有试剂应参照试剂得使用说明进行保存。变质、超过效期得所有试剂不能使用。 3 仪器设备标本 原始样品采集、制备、处理、检验与存放见检验科相关规范。 4 仪器设备性能参数 BC—68００血液细胞分析仪一般资料见附件1;BC—68００血液细胞分析仪性能指标见附件２。 5 仪器设备环境要求，使用安全措施 5、１仪器设备环境要求 5。1。１空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米得空间，以方便维护与保养.仪器与气源后部分别至少要有0。50米得空间，以防止阻碍热气得排放并保证主机后得液路管道不受挤压.将BC-６８00血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少得地方.避免在过热或过冷以及日光直射得环境中使用BＣ—６8００血液细胞分析仪.保证操作台面以及主机下方有足够得空间放置稀释液、废液桶。 ５。1。2 运行条件 环境温度要求：15℃~32℃. 环境相对湿度要求:30%～85%。 电源电压要求: 主机:（220V/23０V）±10％，50Hz／60Hz±2Hｚ。 气源：(220Ｖ)±10％，5０Ｈｚ±1Hz. 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源与电源干扰；远离强电磁场干扰源；不要靠近电刷型电机、闪烁荧光灯与经常开关得电接触性设备；建议在运行设备之前对实验室得电磁环境进行评估；避免强光直接照射；避免置于热源及风源前;选择一个通风良好得位置;具有良好得接地环境；不要将主机放置在斜面上;室内使用。 5、2 仪器安全 在仪器设备上面与周围不要使用可燃性危险品，避免引起火灾与爆炸。 在电源打开状态下,禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板,以免损害线路板；禁止触摸BC-6800血液细胞分析仪外壳里面得电子元件,尤其避免湿手触摸，以免造成电击。 仪器设备使用前,必须认真检查设备之间连接及外接线（件）就是否正确（连接方法见BC—６8００使用说明书4、３节）、正常，电源插头就是否正确插接，设备就是否处于正常状态。实验过程中如遇水、电故障或中断，应立即关闭影响仪器设备安全得有
自动血细胞分析仪操作规 程 Prepared on 22 November 2020
4．操作程序 开机启动 首先开启仪器主机侧面板的电源开关，然后开电脑主机，仪器主机前面板状态指示灯变为橙绿闪烁，仪器主机初始化后开始自检，自检时仪器会自动灌注稀释液、清洗液及溶血剂，并清洗液路。自检完成后，仪器进入血液细胞分析窗口。 本底测试 4.2.1放置洁净的空试管于采样针下，应确保采样针轻挨试管底部。在血液细胞分析窗口，点击“排液”图标，仪器通过采样针排出稀释液到试管中。 4.2.2在血液细胞分析窗口，点击“编号”图标，进入下一个编号操作，输入“0”，再点击“确定”按钮返回血液细胞分析窗口。（注意：仪器系统软件将本底测试的顺序号设定为0，试测试数据将不存储在仪器中，但禁止将血液样本的顺序号设定为0）。 4.2.3将盛有稀释液的试管放在采样针下，按仪器前面板的“RUN”键，待听到“滴”的一声后，方可移走试管。仪器开始自动计数、测量。 4.2.4计数过程中，在窗口的右下方有WBC、RBC的计数计时器，显示WBC、RBC的计数时间。当计数时间过长或过短时，仪器会发出故障报警，并给出报警提示。若出现报警提示，即参照说明第9章《故障处理》进行处理。 质量控制 首次装机或在每天进行血液样本测试之前必须对仪器进行质控，具体参照说明第5章《质量控制》进行处理。 4．4标定 若本底测试，质控结果达不至要求，且某些参数漂移变化较大，则必须对仪器进行重新标定，具体参照说明第6章《标定》进行处理。 4．5血液样本的采集 4．5．1由于所有的临床样本、质控物、标定物均可能含有人血或人的血清，具有潜在的传染性，因此在处理这些物品时必须遵守已建立的实验室或临床操作规程，穿好工作服，戴好医用手套及安全眼镜。
电阻抗法血液分析仪检测原理 电阻抗 电阻抗法血液分析仪检测原理 2009-8-7 9:52 【大中小】电阻抗法血细胞计数原理又名库尔特原理。 1. 红细胞检测原理：将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器红细胞检测原 理中，将小孔管（也称传感器）插进细胞悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。当接通电源后，位于小孔管两侧电极产生稳定电流，稀释细胞悬液从小孔管外侧通过小孔管壁上宝石小孔（直径 <100um，厚度约75um）向小孔管内部流动，使小孔感应区内电阻增高，引起瞬间电压变化形成脉冲信号，脉冲振幅越高，细胞体积越大，脉冲数量越多，细胞数量越多，由此得出血液中血细胞数量和体积值。 三分类血球分析仪工作原理示意图 2. 白细胞分类计数原理根据电阻抗法原理，经溶血剂处理的、脱水的、不同体积的白细胞通过小孔时，脉冲大小不同，将体积为35～450fl 白细胞，分为256 个通道，其中，淋巴细胞为单个核细胞、颗粒少、细胞小，位于35～90fl 的小细胞区，粒细胞（中性粒细胞）的核分多叶、颗粒多、胞体大，位于160fl 以上的大细胞区，单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始细胞、幼稚细胞等，位于90～160fl 的单个核细胞区，又称为中间型细胞。仪器根据各亚群占总体的比例，计算出各亚群细胞的百分率，医学教育网整理并同时计算各亚群细胞的绝对值，显示白细胞体积分布直方图。 3.血红蛋白测定原理当稀释血液中加入溶血剂后，红细胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（530～550nm）下比色，吸光度变化与稀释液中Hb 含量成正比，最终显示Hb 浓度。不同类型血液分析仪，溶血剂配方不同，所形成血红蛋白衍生物不同，吸收光谱不同，如含氰化钾的溶血剂，与血红蛋白医学教育网整理作用后形成氰化血红蛋白，其最大吸收峰接近540nm。
4．操作程序 4.1开机启动 首先开启仪器主机侧面板的电源开关，然后开电脑主机，仪器主机前面板状态指示灯变为橙绿闪烁，仪器主机初始化后开始自检，自检时仪器会自动灌注稀释液、清洗液及溶血剂，并清洗液路。自检完成后，仪器进入血液细胞分析窗口。 4.2本底测试 4.2.1放置洁净的空试管于采样针下，应确保采样针轻挨试管底部。在血液细胞分析窗口，点击“排液”图标，仪器通过采样针排出稀释液到试管中。 4.2.2在血液细胞分析窗口，点击“编号”图标，进入下一个编号操作，输入“0”，再点击“确定”按钮返回血液细胞分析窗口。（注意：仪器系统软件将本底测试的顺序号设定为0，试测试数据将不存储在仪器中，但禁止将血液样本的顺序号设定为0）。 4.2.3将盛有稀释液的试管放在采样针下，按仪器前面板的“RUN”键，待听到“滴”的一声后，方可移走试管。仪器开始自动计数、测量。 4.2.4计数过程中，在窗口的右下方有WBC、RBC的计数计时器，显示WBC、RBC的计数时间。当计数时间过长或过短时，仪器会发出故障报警，并给出报警提示。若出现报警提示，即参照说明第9章《故障处理》进行处理。 4.3质量控制 首次装机或在每天进行血液样本测试之前必须对仪器进行质控，具体参照说明第5章《质量控制》进行处理。 4．4标定 若本底测试，质控结果达不至要求，且某些参数漂移变化较大，则必须对仪器进行重新标定，具体参照说明第6章《标定》进行处理。 4．5血液样本的采集 4．5．1由于所有的临床样本、质控物、标定物均可能含有人血或人的血清，具有潜在的传染性，因此在处理这些物品时必须遵守已建立的实验室或临床操作规程，穿好工作服，戴好医用手套及安全眼镜。 4．5．2采血过程避孕必须干净、无污染，必须使用合格的抗凝剂。严禁剧烈摇动采血管。在室温下，静脉血只能保存4个小时，若在短时间内不能将血样处
血细胞分析仪五分类检测技术及原理 血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着科学技术日新月异的发展，血细胞分析的技术也从几年前的三分类转向现在的五分类，从二维空间进而转向三维空间，同时现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了先进的技术，如鞘流技术、激光技术等。下面就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以说明。 1 采用阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法 直流电阻抗法（DC）用于测量细胞体积大小。激光散射产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光可用于探测白细胞体积大小、细胞内含物的情况（细胞核以及颗粒情况），侧向荧光则可以反映细胞内脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的含量，特有的嗜酸性粒细胞检测溶血剂Str-matolyzer-EO可将除了嗜酸细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜酸细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。在嗜碱细胞通道中，使用特殊溶血剂Strmatolyzer-BA可将除了嗜碱细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜碱细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。幼稚细胞检查通道（IMI）可以根据幼稚细胞膜比成熟细胞膜表面含有脂质较少的现象，在细胞稀释悬液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞表面的氨基酸较多，对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解，而幼稚细胞不易被破坏，可通过电阻法检测出来。综合各个测量方法，得到白细胞五分类的图形和数据。这种技术主要应用在Sysmex研制和开发的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中。 2 电阻抗和射频电导联合检测法 这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞:（1）淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞三个群体。（2）嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统:在细胞悬浮液中加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解或萎缩，再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。（3）幼稚细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。目前日本东亚公司的NE1500、SYSNEX公司的SE9000血细胞分析仪就是采用这种方法进行五分类的。 3 多角度激光偏振光散射检测法
血细胞计数仪操作规程 （SOP）
血细胞计数仪操作规程 一．仪器性能 1.操作简便 一旦标本经过吸氧管吸样后，其他的所有操作都自动完成，包 括稀释和价溶血剂等步骤。 所有操作功能菜单，例如校正、改变设置和数据确定，都可通 过按屏幕上的触摸按钮完成。 2.高精密度和良好的重复性 该仪器在低稀释比例的情况下（WBC200：1；RBC40，000：1； 稀释样本360ul），提供了高精密度和良好的重复性。内置式电 路能自动补偿液体温度的变化，和纠正由于细胞同时通过引起 的细胞计数错误。计数孔能避开外部噪音。 3.可选择但计数和双计数模式。当选择双计数模式时，屏幕将显 示每个参数二次测定的平均数。 4.自动自检 当仪器打开后，会自动注入液体管道，进行一次校正自检。如 发现问题，LCD会显示出错误信号，例如气泡、无稀释剂、堵 孔，使操作着能迅速地确认和解决问题。 5.内置式质控程序 仪器内安装有内置式质控程序，可对 WBC,RBC,PLT,HGB,HCT(MCV),PLT,LY%.MO%,RDW和MPV 标准，正常范围设置，平均数和CV值校正和X-R，X B，X D.CV
控制。 6.数据储存和读取功能 仪器可储存400个标本数据和20个标本的图谱，只需触摸屏幕按钮就可随时取出储存的数据。 7.自动充液和清洗 仪器打开后，管道内自动注入液体。仪器关闭后仪器自动清洗管道。 8.吸样管自动清洗 仪器自动清洗残留在吸样嘴上的血液。使操作者在测定过程中无需接触血样。 9.自动排除堵孔 仪器在每次计数完毕后，从小孔周围中去除血液蛋白或杂质颗粒，以防止堵孔。即便发生堵孔，也能自动排除堵孔，bongo 重新计数标本。 10.自动处理废液 清洁剂（标准附件）含有次氯酸盐，可溶解废液中的氰化钾（KCN）。每测定10分样品后，用DH-620清洗自动清洗液体管道。 二．准备工作 1. 环境要求：不要在阳光直射出安装仪器 仪器必须在下列条件中使用 温度15~30℃