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动物细胞融合与单克隆抗体
经典例题剖析
1.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是
A.经过免疫的B淋巴细胞
B.不经过免疫的T淋巴细胞
C.经过免疫的T淋巴细胞
D.不经过免疫的B淋巴细胞
[解析]此题考查对细胞工程的了解。单克隆抗体的产生是利用了细胞工程中的细胞融合技术。小鼠的骨髓瘤细胞与经过免疫的B淋巴细胞融合成杂交瘤细胞，在体外培养的条件下无限繁殖，产生特异性的单一抗体。
[答案]A
2.动物细胞融合的目的中最重要的是
A.克服远源杂交不亲和
B.制备单克隆抗体
C.培育新物种
D.生产杂种细胞
[解析]考查动物细胞融合的目的。动物细胞融合就是指不同动物细胞的原生质融合，形成杂种细胞的过程。动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体。
[答案]B
3.下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是
A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织
B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞
C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液
D.动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞就会衰老死亡
[解析]动物细胞培养的过程是：先制备培养液，然后取动物细胞，用于培养的细胞大都来自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织。将组织取出后，用胰蛋白酶等处理使组织分散成单个细胞，将单个细胞配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将悬浮液放入培养瓶中在培养箱中培养。细胞在培养瓶中贴壁生长，细胞的数目越来越多，需定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，再配制成悬浮液，分到两个瓶中继续培养。动物细胞培养50代可成为细胞系，50代以前10代以后称为细胞株。50代以后生存下来的细胞的遗传物质发生了变化，也就是说细胞发生了癌变，癌细胞会无限增殖。
[答案]D
4.能使动物细胞融合的特有的诱导因子是
A.离心
B.灭活的病毒
C.电刺激
D.振动
[解析]在体外培养条件下，动物细胞会自发融合，但是频率很低。因此，一般都需要添加具有诱导细胞融合效应的生物药剂或化学药剂，或者采用电融合技术，人为地促进细胞融合。常用的动物细胞融合的诱导因子是聚乙二醇和灭活的病毒。其中聚乙二醇既可用于促进植物原生质体融合，又可用于促进动物原生质体融合。而灭活的病毒只能用于促进动物细胞的融合，如灭活的仙台病毒是最常用的诱导因子，其诱导原理是因为病毒具有侵染细胞的能力，优点是融合率高，对各种动物细胞都适用。
[答案]B
基础试题训练
一、选择题
1．单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT培养基
上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养，最终可在HAT培养基上存
活并能产生单克隆抗体的细胞是（）A．骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞B．脾细胞之间形成的融合细胞
C．骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞D．脾细胞
2．(2006，广雅中学考题)研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞
B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞
C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成
D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合
3．（2001，天津、山西理综卷）科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是
（）
A．经过免疫的B淋巴细胞B．不经过免疫的T淋巴细胞
C．经过免疫的T淋巴细胞D．不经过免疫的B淋巴细胞
4．（2004年，全国）用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞
B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
D．筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体
5．只能使动物细胞融合的常用诱导方法是
（）
A．PEG B．灭活的病毒C．电刺激D．离心
6．单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的
（）
A.B淋巴细胞B．T淋巴细胞C．骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞
7．用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要
原因是这样的组织细胞
（）
A.容易产生各种变异B．具有更强的全能性
C.取材十分方便D．分裂增殖的能力强
8.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是
（）
①诱导融合的方法完全相同②所用的技术手段不相同③所采用的原理完全相同
④都能形成杂种细胞
A.①②
B.①③
C.②④
D.③④
9．动物细胞融合和植物原生质融合决定于（）
A.细胞膜的流动性B．细胞膜的选择透过性
C.细胞质的流动性D．细胞质酶的活性
10.从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状（）
A.难以预测
B.像甲
C.像乙
D.像丙
11.“生物导弹”是指（）
A.单克隆抗体
B.杂交瘤细胞
C.产生特定抗体的B淋巴细胞
D.在单抗上连接抗癌药物
12.动物细胞工程技术的基础是（）
A.动物细胞融合
B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
13．下列哪—项属于克隆（）A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中
B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
C．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
D．将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
14．单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活．增殖的细胞是
①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞
③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞
⑤杂交瘤细胞
A．①②③④B．①③⑤C．②④D．①③
15．（2005年，广东）关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（）A．可以制成诊断盒．用于疾病的诊断B．可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C．可以利用基因工程技术生产D．可以在生物体内生产，不能体外生产16．（多选）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，正确的是
（）
A．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般不需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B．融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体
C．体外培养时，一个效应B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
D．单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显
17．（多选）1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是（）
A.效应B细胞B．T淋巴细胞
C.骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞
二、非选择题
1.下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：
（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得_____________细胞，该细胞能够产生_____________。从小鼠体内提取分离该细胞之
前，应给小鼠注射_____________类物质。
（2）B过程是一个_____________过程，该
过程的进行需要灭活的_____________或
_____________的诱导。
（3）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防
方面，与常规抗体相比，其特点是
_________________。
2.(06佛山一模）两场筹备了10年的“太空结合”
首次在神舟八号飞船上举行了,“新人”之一是小
白鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞,新人在“产房”—
—电融合仪内孕育新生命。160min后,中国首批
“太空娃娃”终于顺利诞生。“太空娃娃”诞生
和地面实验如图所示。请回答下列问题：
(1)小白鼠B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞能融合在一起,体现了细胞膜具有__________的特点。
(2)若用于SARS 的预防上,则宜采用_______细胞。科学工作者正在研究治疗癌症使用的生物
导弹是_______。
(3)B 淋巴细胞和T 淋巴细胞都是由________________细胞形成的。这种相同细胞的后代,在
形态、结构和生理功能上产生稳定差异的过程,叫做__________ _____。
(4)鼠的淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后,在培养时通过_______________（有丝/减数）分裂方
式大量繁殖。细胞中染色体数目与淋巴细胞相比有何特点？_____________；要观察融合后
的细胞中的染色体形态、数目,可用一定浓度的____ ___________处理。
(5)融合的细胞具有两种细胞的特性,即_________________和____________________。
3．1975年科学家首次利用B 淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。请观察下图，回答问
题：
（1）单克隆抗体是指 ，其特点
是 。
（2）1984年以来，科学家针对如右图所示的单克隆
抗体来自 ，应用于人体，会作为
产生 ，加速排斥反应，以及完整
的抗体分子的相对分子质量过大，难以穿透肿瘤组
织，达不到有效治疗的浓度等问题，制备出可用于肿
瘤治疗的相对分子质量小的单克隆抗体。
（3）制备单克隆抗体的B 淋巴细胞一般从
（器官）
中采集。从下表看，用于筛选杂交瘤细胞的是特定
的 培养基。
（4）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：
①体外培养法，可获得10μg/mL 的抗体；②动物体内诱生
法可获得5~20m g/mL 的抗体。你选择的方法及原因
是 。
创新应用训练
2．右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤
风杆菌抗体的实验方案。据图回答：
（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是。
（2）图中②为过程，常用作为诱导剂。该细胞继承了，因此不仅能分泌，还有本领。
（3）该方案的目的是。
参考答案：
一、选择题
参考答案：
一、选择题
CDABB DDCAB DDDAD （BCD）（ABCD）
二、非选择题
1.（1）效应 B 抗体抗原（2）细胞融合仙台病毒聚乙二醇（3）特异性强、灵敏度高
2.（1）一定的流动性（2）SARS病毒感染后产生的效应B细胞,单克隆抗体+抗癌药物（3）
造
血干细胞细胞分化（4）有丝,加倍,龙胆紫（5）无限增值,产生单一抗体39（1）卵巢和精巢
4×10-3 既保证了染色体形态的正常,又使细胞分裂处于中期的细胞比例最高。
3．（1）化学性质单一，特异性强的抗体特异性强，灵敏度高
（2）鼠异物免疫反应（3）脾选择
（4）大量生产选①，小规模生产选②（答案合理即可）
三、应用创新
1、（1）不能没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞
（2）细胞融合灭活病毒（或PEG）双亲细胞的遗传物质特异性抗体在体外培养条件下大量增殖（3）制备单克隆抗体
姓名班级 13级生命基地班学号同组者： 科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合 【实验题目】 动物细胞融合 【实验目的】 1.了解动物细胞融合的常用方法。 2.学习化学融合的基本操作过程。 3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。 【实验材料与用品】 1、材料 鸡血红细胞 2、试剂 50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。 3、器材 倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。 【实验原理】 细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。 1、病毒诱导融合 仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。 2、化学诱导融合 很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG 是广泛使用的化学融合剂。 3、电激诱导融合
姓名班级 13级生命基地班学号同组者： 科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合 包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。 【实验步骤】 在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法，利用PEG使鸡血红细胞发生融合。具体实验步骤如下： 1、取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4℃保存）【老师已做好，可直接使用】 2、取（1）中悬液1ml+4ml的0.85%的NaCl溶液，进行以下三次离心处理： ①在1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml； ②1000-1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml； ③1000-1200r/min下离心7min 【因时间关系此次实验只离心一次】 3、将离心后的沉降血球（去上清后约0.1-0.2ml）加入GKN至1-2ml，使之成为10%的细胞悬液； 4、取上述10%的血球悬液1ml,加入3mlGKN液，使每毫升含血球15000000个； 5、分别取（4）1ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+1.0ml50%PEG，混匀滴片，编号分别为①②③号溶液。在常温下2-3min后，显微镜下观察。 【实验结果】 1、实验中可观察到两个和多个细胞发生质膜融合现象,可看到不同融合状态的细胞： ①两细胞的细胞膜相互接触、粘连； ②接触部分的细胞膜崩解，两细胞的细胞质相同，形成一个细胞质的通道，呈现哑铃状； ③通道扩大，两个细胞连成一体，呈现一个长椭圆形细胞； ④细胞融合完成形成含有双核或者多核的细胞，呈圆形。 比较典型的细胞融合时的形态如下图：
单克隆抗体导学案2.2.2 班级姓名 问题生成阶段 【温故知新】 免免 结分泌的，能和抗原 1．抗体的化学本质是，是由合。诱导融合细胞2.动物细胞融合：不同DNA的两种细胞 筛选杂交细胞 3.动物细胞培养：分散的单个细胞制成原代培养 培养 【新知预学】 1．传统抗体的获得 (1)方法：①向动物体内反复注射某种，使动物产生；②从
动物 中分离所需抗体。 (2)特点：、纯度低、。 2．单克隆抗体的制备原理 细胞特点 能产生，但不能B淋巴细胞 能，但不能骨髓瘤细胞 既能融合细胞，又能 单克隆抗体的制备过程3. (1)制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的，然后从小鼠 获得相应的B淋巴细胞。 1 (2)细胞融合：融合的方法常用聚乙二醇、、电激等，这时得到的融合细胞除了杂交瘤细胞，还有相互融合的细胞和相互融合的细 胞。 (3)筛选：用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞。这时候的杂交瘤细胞既能 同时又能。 (4)克隆化培养和抗体检测：从杂交瘤细胞群中选出能产生的特异性杂交瘤细胞。 相关资料：先在多孔培养皿上培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是由单个杂交瘤
细胞克隆来的，所以产生的抗体一定是化学性质单一、特异性强的单克隆抗体。 (5)培养杂交瘤细胞获得单克隆抗体：将杂交瘤细胞在条件下做大规模培养或注射到小鼠内增殖，从 ______或小鼠的 ______ 中提取单克隆抗体。 4．由上述抗体的产生过程我们可将单克隆抗体的定义归纳为：由 大量繁殖所产生的、的抗体。 5．单克隆抗体的应用 (1)优点：、、并可能大量制备。 (2)应用 ①作为诊断试剂，具有准确、、简易、的优点。 ②用于和。 问题解决阶段 【合作探究】单克隆抗体的制备 B淋巴细胞？如何得到已免疫的1. B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？2.如何诱导效应 融合过程中会出现几种类型的细胞？3. 怎样淘汰我们不需要的细胞？上述过程得到的细胞哪种是我们需要的？其特 点是什么？4. 淘汰后的细胞所产抗体是单一的吗？如何检测？5. 如何获得大量“单克隆抗体”？6. 2 注意：制备单克隆抗体过程中两次筛选的方法及目的
山东大学细胞生物学实验报告 聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验 2012/9/11 实验目的： 了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。 实验原理： 1. 细胞融合的概念 两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。 2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理 细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物 理诱导。1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台 病毒（HVJ ）[1]。1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒 （HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒 的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细 胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。 1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇 （Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对 实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛 的细胞融合方法。化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化 学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重 排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。 80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5] ，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。 图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。 图1. 仙台病毒示意图。a 和b 是病毒套膜，c 为糖蛋白，d 为类染色体。
2020年4月16日磨课教案 第二单元动物细胞工程 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 一、学习目标 1．知识目标： ⑴掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。 ⑵简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。 ⑶了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说其应用实例。 2．能力目标： 让学生尝试设计单克隆抗体的制备过程，指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法，使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力。 3．情感、态度和价值观目标： 通过向学生介绍动物细胞融合与单克隆抗体技术的发展动态及一些新的研究成果，使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入，知识不断更新并向前发展，认识到学无止境，形成终生学习的意识。 二、教学重点难点单克隆抗体的制备过程。 三、流程 1、小结植物细胞工程涉及的技术，让学生回顾有关植物体细胞杂交技术的基本知识 2、探究一：动物细胞的融合 教师提出思考问题，布置学生进行讨论探究，四人一组，探讨交流。 多媒体展示探究思考题。 1）、植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别 2）、植物体细胞杂交和动物细胞融合的主要区别是什么？ 3）、为什么可以使用灭活的病毒促进动物细胞融合？ 4）、不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 3、探究二：单克隆抗体制备的原理 多媒体展示探究问题。 1）、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来的？
2）、B淋巴细胞有什么特点？ 3）、若要想获得大量的单一抗体，如何做呢？ 4）、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的，那么，怎样解决这一问题的呢？ 5)、小结以下内容： ◆利用____________________产生特异性抗体的功能。 ◆利用____________________无限增殖的特性 ◆利用____________________技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。 ◆利用____________________技术大量培养杂交瘤细胞 4、探究三：单克隆抗体制备的过程 教师通过多媒体展示单克隆抗体的制备过程，同时提出问题，教师展示讨论问题，学生分组讨论。 1）、如何获得B淋巴细胞？ 2）、如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时，会有几种融合方式（类型）？ 3）、选择杂交瘤细胞的两步筛选的目的各是什么？ 4）、如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？（教师讲解为主） 5、探究四：单克隆抗体的应用 教师引导学生阅读课本进行回答，多媒体展示问题 1）、单克隆抗体的应用有哪些？ 2）、生物导弹的组成及优点 四、二次备课
题目：PEG促细胞融合 一．实验目的: 1.掌握细胞融合的方法 2.学习使用PEG促进细胞融合的方法和步骤 二．实验原理 1.细胞融合：在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上 的细胞合并形成一个细胞的过程。由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率大约在10?4-10?6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞融合。 2.促进细胞融合的方法 a)生物方法：病毒（Sendai virus，Newcastle disease virus，Vaceine virus） b)化学方法：聚乙二醇、盐类融合剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油-醋酸酯、油酸盐、脂 质、Ca2+配合物等。PEG相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为 聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏 散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用， 从而使细胞发生融合。在众多的化学试剂中，PEG应用最为广泛，因PEG液比病毒 更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。 c)物理方法：电融合:电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，是 融合率大为提高。电脉冲作用时引起膜结构局部扰乱，出现小孔洞。而相对的脂 双层间分子在范德华力作用下，形成脂分子桥。由于连接处的细胞膜表面曲率大， 处于高张力状态，在热力学上是不稳定的，所以最终导致两细胞逐渐融合成一个圆 形的大球状细胞。与ⅣG法比较，电融合法融合率高：重复性强：诱导仅发生在 质膜接触部位，对细胞或原生质体伤害小：融合是在同步状态下进行，活细胞数目 多；装置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的 洗涤过程，诱导过程可控制性强。 三．实验材料及设备 1.实验材料： a)50%PEG混合液
动物细胞融合与单克隆抗体(讲课教案) 黄冈中学 屈泽兵 一、教学重点 1．细胞融合的概念及原理 2．单克隆抗体的制备过程及原理 3．单克隆抗体在实际生活中的应用 二、教学难点及突破 1．杂交瘤细胞的筛选。课文中的相关介绍语言简洁，但是此处也是学生理解单抗制备的最大难点，教师可以将该过程分解，设置一些小问题，带领学生仔细阅读，从课本寻求答案，最终准确理解该知识点。 2．“生物导弹”中单克隆抗体的作用。抗体本身具有清除抗原的作用，学生在这里容易形成误解，认为“生物导弹”中治病的是抗体，此处教师也应该设置问题，引导学生仔细读书，准确理解课本语言，避免形成错误的认识。并可以组织一场短时间的讨论，讨论在什么样的情况下，应该采取这种治疗手段。 三、教学过程 导入：在植物细胞工程的内容中，我们学习了植物体细胞杂交，从而克服了植物种间杂交生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型。那么，我们能不能用类似的方法，对动物体细胞进行融合，从而获得新的动物类型呢？今天，我们就来学习一下动物细胞融合技术。 1．动物细胞融合（也称细胞杂交） 概念分解：两个或多个动物细胞 → 人工诱导 → 一个细胞（即杂交细胞） 杂交细胞：融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 融合原理：细胞膜具有流动性 诱导方法：物理、化学、生物方法。 2．单克隆抗体 单克隆：用一个细胞作为祖细胞，通过分裂得到很多相同的细胞，称之为单克隆。 克隆则指的是获得相同的物质，有时候DNA 的复制也可以称为克隆。在抗体的生产中，用于生产抗体的细胞起源于一个杂交细胞，所以称之为单克隆抗体。 （1）制备 带问题去看书： ① 总结单克隆抗体制备的生物学原理基础。 ② 诱导动物细胞融合之后，我们会得到哪些种类的细胞？ ③ 单抗制备过程中用到了哪些筛选手段？ ④ 单克隆抗体在“生物导弹”中的基本作用？ 原理：一个B 细胞分泌一种抗体，瘤细胞能无限增殖 过程： 分解筛选步骤，设置小问题引导学生思考： ① 第一次筛选我们获得的是什么细胞？ ② 第二次筛选是怎样实施的？获得的是什么细胞？ B 淋巴细胞 小白鼠 注射抗原 骨髓瘤细胞杂交细胞 能产生特定抗体的细胞 筛选 杂交瘤细胞 抗体鉴定 筛选 培养
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
动物细胞工程试题 1用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（C）A都须用液体培养基 B都需用培养箱 C都要在无菌条件下进行 D都可体现细胞的全能性 解析：动物细胞离体培养主要是获得细胞的代谢产物，植物体细胞离体培养体现的是全能性。植物体细胞是固体培养基。动物体细胞培养需要二氧化碳培养箱。 动物细胞培养： 1、动物细胞的培养：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 2、动物细胞培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。 3、动物细胞培养液的特点：液体培养基含动物血清。 4、动物细胞培养需要满足以下条件 (1)充足的营养供给——微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。 (2)适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。 (3)无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 (4)气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 5、动物细胞培养的过程： 取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 2下列关于细胞工程的叙述，错误的是（D） A. 电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D. 某种植物甲乙两品种的体细胞杂交与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同 解析：A正确诱导原生质体融合的方法有物理法（离心振动电刺激）化学法（聚乙二醇PEG）生物方法（灭活的病毒）. B正确去除植物细胞壁需要纤维素酶和果胶酶，将动物组织分散成单个细胞需要胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间。C正确小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合既可以无限增殖，又可产生特异性抗体。D错误，假设甲植物体细胞是2N,乙植物体细胞是2M，甲乙体细胞杂交染色体数目为2N+2M；而甲乙品种杂交染色体数目是N+M。 3制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（A） ①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植 A．①②B．①③C．②③D．③④ 解析：单克隆抗体的制备过程是人工诱导经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，再经筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，经过培养获得的杂交瘤细胞获得单克隆抗体。 4利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（D） A. 用纯化的核衣蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体 B. 体外培养单个浆细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体
学校：临清二中 学科：生物 编写人：黄丽平 审稿人：于振玲 专题二细胞工程一一.动物细胞工程 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 课前预习学案 一、预习目标 预习动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程， 应用实例。 “二、预习内容 ㈠、动物细胞融合 1概念： _________ 或 ________ 动物细胞结合形一个细胞的过程，也称细胞杂交。 2、 结果：形成 。 灭活的病毒或 PEG 3、 过程：两个或多个细胞 ________________________________________ 4、 意义：克服了 ___________ 的不亲和性，成为研究 _________________ 、 ____________ 、肿瘤和 _________________ 培育的重要手段。 ㈡、单克隆抗体 1抗体 ⑴产生细胞： ____________________ 。 ⑵成分： ____________ 。 ⑶特点：从 ___________ 中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。 2、单克隆抗体的制备 (1)过程 一 给小鼠注射特 从 ________ 中分、 r 未融合细胞 定的抗原蛋白 f 离B 淋巴细胞 灭活病毒融合 -------------- 培养骨髓瘤细胞 I V ___________ f 骨髓瘤细胞 \ 体外培养 ⑵杂交瘤细胞的特点： _________________________ 、 _______________________ 。 ⑶单克隆抗体的优点： _______________ 、 _______________ 、 _____________ 。 ㈢、单克隆抗体的应用 1、 作为诊断试剂，具有 _____________ 、 ___________ 、 ___________ 、 ____________ 的优点。 2、 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗 _____________ 、可制成 _____________ 。 三、提出疑惑 同学们，通过你的自主学习，你还有哪些疑惑，请把它填在下面的表格中 了解单克隆抗体在医学实践中的应用， 并说其 选择培养基 小鼠体内培 ＜养 抗体
动物细胞工程专项练习题 1．美国科学家已经在实验室中成功培育出膀胱，并顺利移植到7名患者体内。这种技术为那些急需器官移植的患者带来福音。回答下列问题： （1）科学家从患者的膀胱上取下一小块活细胞样本，将其中的肌肉细胞和膀胱上皮细胞分别置于不同的培养皿中培养。在培养之前，需用 _____处理以分散细胞，将动物组织块消化后的初次培养称为 代培养。与植物组织培养的培养基相比，其培养基的主要不同点是含有 等一些天然成分。 （2）约一周后将培养皿中培养的细胞放在由胶原质制成的“支架”上继续培养，再过7周左右，原先的数万个细胞已经繁殖到15亿个左右，布满“支架”，膀胱上皮在内，肌肉在外，形成“新膀胱”。细胞数目大量增加，其增殖方式是 ；由这些细胞再形成肌肉和膀胱上皮的过程中要经过 。 （3）医生将“新膀胱”移植到患者膀胱的上面，这样新器官会继续生长并与老器官“重组”取代老器官中丧失功能的部分。新器官与老器官的“重组” （填“是”或“不是”）基因重组；“新膀胱”移植后， ______________（填“会”或“不会”）引起免疫排斥反应。 （4）除上述方法外，还可将患者的体细胞核移入去核的 ______中，利用体细胞 技术，形成相应组织、器官用于疾病的治疗。 2．下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物（二倍体）的流程。 回答下列问题： （1）图中A 表示正常细胞核，染色体数为2n ，则其性染色体的组成可为____________。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用_________________的方法。②代表的过程是__________。 （2）经过多次传代后，供体细胞中_______________的稳定性会降低，因此，选材时必须关注传代次数。 （3）若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是__________________________________。 （4）与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了__________________________。 3．下图为利用小鼠制备抗埃博拉病毒的单克隆抗体过程示意图，图中A ～F 分别表示生物技术或细胞名称，请同答有关问题： （1）若A 细胞是经抗原刺激的小鼠B 淋巴细胞，则B 细胞一般选用__________，C 过程不同于诱导植物原生质体融合的常用诱导因素是____________________。 （2）在杂种细胞的培养过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的__________。 （3）单克隆抗体的制备过程需要经过多次筛选，首先用特定的选择性培养基筛选出杂交瘤细胞，其具有的特点是_______________，还需进行克隆化培养和__________，最终获得足够数量的________________________，选出符合要求的细胞后，可在体外条件下培养或注射到__________内增殖。 （4）利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒，用于准确、快速诊断埃博拉病毒的感染者，这体现了单克隆抗体____________________的特性。 4．人乳头状瘤病毒（HPV ）与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV 的单克隆抗体可以准确检测出HPV ，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV 衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答： （1）单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有________________。 （2）将经融合处理后的细胞转到HAT 培养基上培养的目的是 ，该细胞 （填“能”、 “不能”）产生专一性抗体，所产生的抗体 （填“一定”、“不一定”）能抗HPV 。 （3）对于抗体检测呈______性的杂交瘤细胞克隆应进行克隆化培养，克隆化培养的方法最常用的是有 限稀释法，即稀释细胞到3～10个/mL ，每孔加入细胞稀释液______mL （填“0．1”、“1”或“10”），使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。 （4）科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因（prG ），该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路 __________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________。 5．不同类型的细胞表达不同的基因组合。那么不同类型的动物细胞都具有全套基因吗？科学家进行了如图所示的克隆研究。Ⅰ～Ⅶ代表有关过程，a ～h 代表有关结构或个体。据图回答问题： (1)a 细胞的名称是________，选用该细胞作为核移植受体细胞的原因是 ________________________________________________________________________。 (2)对b 的操作方法通常是__________。若g 是能产生人生长激素的羊，则培育g 时，应将人生长激素基因导入___________，为了尽快获得大量的生长激素，但让g 进行有性生殖会丢失目的基因，你将通过________________技术来实现。 (3)从 d 中取出细胞进行培养时，一般不超过______代，原因是 ________________________________________________________________________。 此培养过程中与植物细胞培养过程中所用的培养基有何不同？_________________________________。 (4)如果图中的细胞均是人体细胞，则获得的h 细胞或器官可用于供体本人组织器官的移植，其优点是
动物细胞融合 【实验目的】 1.了解动物细胞融合的常用方法 2.学习化学融合和电融合的基本操作过程 3.观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化 【实验原理】 A.细胞融合的方法 细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。 1.病毒诱导融合 仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。这类病毒的被膜中有融合蛋白，可介导病毒同宿主细胞融合，同时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。但该法由于病毒的灭活较为复杂，故实验室多不采用此法用于细胞的融合。 2.化学诱导融合 很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇()、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG是广泛使用的化学融合剂。 3.电激诱导融合 包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。 B.PEG诱导细胞融合 聚乙二醇(PEG)结构为：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，为一系列不同相对分子量的多聚体。相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为聚乙二醇分子能与水分子借氢键结合，导致细胞膜由于脱水而膜结构发生改变，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合：细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。该方法的优点是：用法简单，容易获得融合体，融合效果好。 实验室常用分子量为400-6000D的PEG用于动物细胞的融合，动物细胞的融合受到很多外界因素的影响，如：PEG的浓度，作用时间，PH等。一般来说，PEG相对分子量越大，融合效果越好，而PEG的浓度通常为40%～60%。PEG的作用时间通常为：1～5min,作用温度为：38～40℃，常使用GKN液将溶液的PH 调节至8.0～8.2。同时GKN液还可以调节动物细胞的渗透压从而使细胞保持一定的形态。
动物细胞融合 山东大学2016级生命基李洁 周四下午 一、实验目的 1.了解细胞融合的常用方法 2.学习化学融合的基本操作过程 3观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化 二、实验原理 1.细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融合额电激诱导融合。 2.很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇（PEG）、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG是被广泛使用的化学融合剂。 3.PEG可与水分子借氢键结合，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，从而引起细胞融合。 三、实验用品 1.材料 鸡血红细胞、兔血 2.试剂 50%PEG、0.85%氯化钠溶液等 3.器材 离心机、普通光学显微镜、滴管、离心管等。 四、实验操作 1取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4℃保存）。 2.取上述悬液1ml+4m0.85%氯化钠溶液,进行以下三次离心： ①1200r/min离心5min，去上清液加至5ml0.85%氯化钠溶液 ②1000-1200r/min离心5min，去上清液，加入至5ml0.85%氯化钠溶液 ③1000-1200r/min离心7min 3.将③去上清液后加入GKN液至1-2ml,制成10%细胞悬液。 4.取上述10%细胞悬液1ml，加入3mlGKN液。 5.取上述悬液1ml+0.5ml50%PEG液，停留40s-1min，混匀，停留1min-2min，再充分混匀滴片，镜下观察。 6.取4中悬液0.5ml+0.5ml50%PEG液，停留40s-1min，混匀，停留1min-2min，再充分混匀滴片，镜下观察。 7.取4中悬液0.5ml+1ml50%PEG液，停留40s-1min，混匀，停留1min-2min，再充分混匀滴片，镜下观察。 8.取4中悬液0.25ml+0.25ml兔血悬液+1ml50%PEG液，停留40s-1min，混匀，停留1min-2min，再充分混匀滴片，镜下观察。 五、实验结果
中国海洋大学实验报告 姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学 科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006 PEG 介导的动物细胞融合技术 一、实验目的 （１）、通过实验，对体细胞融合有一个清醒的认识 （２）、通过ＰＥＧ介导鸡血细胞融合，初步掌握利用ＰＥＧ介导动物细胞融合的实验技术。 二、实验原理 真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核的细胞的过程称为细胞融合，通过此技术可以实现不同种类的细胞的融合。基因型相同的细胞融合称为同核体（ｈｏｍｏｋａｒｙｏｎ），基因型不同的细胞融合称为异核体（ｈｅｔｅｒｏｋａｒｙｏｎ） 目前，诱导细胞融合的技术主要有三种：病毒，聚乙二醇（ＰＥＧ），电激。第一种方法是通过生物病毒的方式，诱导细胞与细胞之间的融合。后两种方法通过化学物理的手段使得细胞膜的膜脂类分子的排列发生变化，去掉作用因素后，质膜分子的排列恢复原有的形态，
在恢复的过程中，可以诱导相接触的细胞发生融合。 ＰＥＧ介导的细胞融合，其融合效果受到以下几个因素的影响 ①、ＰＥＧ的分子量与浓度 ＰＥＧ的分子量及其浓度越大，细胞融合效果越明显，但对细胞的毒性也越大。本实验使用的ＰＥＧ分子量为４０００Ｄ，浓度为５０％ ②、ＰＥＧ的ｐｈ值 经验证，ＰＥＧ的浓度在８.０～８.２时，融合效果最好 ③、ＰＥＧ处理时间 处理实验越长，融合效果越好，但对细胞的毒性也越大。故一般将处理时间限制在１分钟以内。本实验不涉及后续的细胞培养，所以处理时间可适当放宽至数分钟 ④、融合时的温度 温度越高，细胞膜脂质的流动性越好，故在细胞可以承受的范围内，适当的提高温度有利于细胞的融合 三、实验材料 新鲜鸡血 ０.８５％生理盐水 ＧＫＮ液 ５０％ＰＥＧ液
第三节动物细胞工程 动物细胞与组织培养、细胞核移植与动物体细胞克隆 学习目标： 1.简述动物细胞培养的过程、条件及其应用； 2.简述克隆动物的概念含义和基本原理； 3.简述体细胞核移植技术和动物克隆技术，以及应用前景； 课前导学： 一、动物细胞工程包括的主要技术 动物细胞工程的主要技术包括____ 、_____ 、___ ___、_______________、________________等技术。其中_________________________是其他动物细胞工程技术的基础。 二、动物细胞与组织培养 1．概念：动物细胞与组织培养是指在体模拟____ _ __，将动物细胞或组织在无菌、温度适宜和营养充足的条件下培养，使其、并维持原有和的技术。 2. 材料：动物或出生不久的的器官或组织。 3. 过程： （1）动物细胞培养： （2）动物组织培养： （3）动物细胞培养和动物组织培养的区别：动物细胞培养过程中需要用 __________________等使________________________________________________。 4.培养条件： （1）温度：最适温度是°C左右。 （2）PH：最适PH范围是_______。 （3）气体：主要是和，气体的含量不仅影响培养环境的，还直接影响。 （4）营养物质：如、无机盐、氨基酸、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶、和生长因子等。 5.培养基的种类： 天然培养基：主要取自动物血清、动物组织提取液和鸡胚汁等，具有营养价值高、成分复杂的特点。 合成培养基：人工配制的，具有成分明确、便于控制实验条件的特点。缺点是缺乏天然培养
专题2 细胞工程 2.2..2 动物细胞融合与单克隆抗体 教材预览 导言我们知道，运用植物体细胞杂家技术，可以跨越植物种属间生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型.那么，能不能采用类似的方法，让不同动物的体细胞进行杂交呢？1DQxtBWmHhb5E2RGbCAP 1、动物细胞融合 <1 ）概念：指 ________________ 或__________________ 动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称 为细胞杂交.1DQxtBWmHhp1EanqFDPw <2 ）结果：形成 ________________________ 细胞. <3 ）过程：不同_____________________ 的两个细胞___________________________________ 细 胞.1DQxtBWmHhDXDiTa9E3d <4 ）意义：克服了______________ 杂交的不亲和性，成为研究_______________ 、 ____________ 、 1DQxtBWmHhRTCrpUDGiT 肿瘤和生物___ 培育的重要手段. 思考：1、动物细胞的融合最有价值的应用是什么?细胞融合完成的标志是什么？ 提示：远缘杂交；细胞核融合成一个核 2、若a和b 两种细胞融合，则融合的方式有三种 _________________ 、 ______________ 和 ___________________________ .满足要求的为________________________ ，所以融合后要筛 选.1DQxtBWmHh5PCzVD7HxA 提示：a-a b-b a-b 2、单克隆抗体 <1）抗体：由淋巴细胞< 浆细胞）产生，成分为球蛋白，具有 _______________________ . 从血清 中分离出来的抗体产量低、纯度低、特异性差.1DQxtBWmHhjLBHrnAILg <2 ）单克隆抗体的制备 a.过程 ____________________ 1DQxtBWmHhxHAQX74J0 X b.杂交瘤细胞的特点：既能大量___________________________________ ，又能产生 ___________________________ . 1DQxtBWmHhLDAYtRyKfE c.单克隆抗体的特点： _________________________ 强、____________________ 高、产量 大.1DQxtBWmHhZzz6ZB2Ltk 思考：①单克隆抗体的确切定义是什么？ 提示：特异性强，灵敏度高的单一抗体 ②制备单克隆抗体时，为什么要选用B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞？在融合的过程中你可以找出几种类型的细胞？1DQxtBWmHhdvzfvkwMI1 提示：b-b 骨- 骨b- 骨 问题探讨 制备单克隆抗体的过程有两次筛选，两次筛选的目的是什么？ 第一次筛选是 ___________________________________________ 第二次筛选是 ___________________________________________ 提示：第一次筛选出杂交瘤细胞；第二次筛选出能够产生单一抗体的杂交瘤细胞.
基于web的动物识别系统 一、实验目的 理解和掌握产生式知识表示方法及产生式系统的基本过程，能够利用Web编程技术建立一个基于产生式知识表示的简单的智能系统。 二、实验环境 (1) 硬件环境：网络环境中的微型计算机。 (2) 软件环境：Windows操作系统，Microsoft Visual Studio C#语言。 三、实验原理 该系统用到的表示方法是产生式表示方法，是陈述性知识表示方法的一种。 3.1 产生式表示的基本方法 （1）事实的表示
在产生式表示方法中，事实通常是用三元组或四元组来表示的。对确定性知识，一个事实可用一个三元组 （对象，属性，值）或（关系，对象1，对象2） 来表示。这种表示方式，在机器内部可用一个表来实现。 （2）规则的表示 规则描述的事物间的因果关系。规则的产生式表示形式常称为产生式规则，简称为产生式，或规则。其基本形式为 P→Q 或者 IF P THEN Q 其中，P是产生式的前提，也称为产生式的前件，它给出了该产生式可否使用的先决条件，用事实的逻辑组合来构成；Q是一组结论或操作，也成为产生式的后件，它指出当前提P满足时应该推出的结论或应该执行的操作。产生式的含义是：如果前提P满足，则可推出结论Q或执行Q所规定的操作。 2．产生式系统的基本结构及过程 通常，把用产生式知识表示方法构造的智能系统统称为产生式系统。一个产生式系统的基本结构包括综合数据库、规则库和控制系统这三个主要部分。 2.1综合数据库 综合数据库也称为事实库，是一个用来存放与求解问题有关的各
种当前信息的数据结构。在推理过程中，当规则库中某条规则的前提可以和综合数据库中的已知事实相匹配时，该规则被激活，由它推出的结论将被作为新的事实放入综合数据库，成为后面推理的已知事实。 2.2规则库 规则库是一个用来存放与求解问题有关的所有规则的集合。它包含了将问题从初始状态转换成目标状态所需要的所有变换规则。 2.3控制系统 控制系统也成为推理机，它由一组程序组成，用来控制整个产生式系统的运行，决定问题求解过程的推理路线，实现对问题的求解。其主要工作如下： （1）按一定策略从规则库中选择规则与综合数据库的已知事实进行匹配。 （2）当匹配成功的规则多于一条时，推理机构应该能够按照某种策略从中选出一条规则去执行。 （3）对要执行的规则，如果该规则的后件不是问题的目标，则当其为一个或多个结论时，把这些结论加入到综合数据库中；当其为一个或多个操作时，执行这些操作。 （4）对要执行的规则，如果该规则的后件满足问题的结束条件，则停止推理。 （5）在问题求解过程中，记住应用过的规则序列，以便最终能够给出问题的解路径。