黄芪多糖的提取工艺研究及应用展望 微生物与生化药学生研1001班 2010001295：王朝绚 摘要：本文综述了从中药黄芪中提取多糖的不同方法并对其进行比较以及黄芪多糖在抗病毒，免疫调节及血糖调节等方面的生物活性；对黄芪多糖的应用前景进行了展望。 关键词：黄芪，多糖，提取分离，生物活性 1 黄芪 我国的中草药资源丰富，种类繁多，多达12800多种，其中又以植物类的占大多数。中草药黄芪（membranaceus），属于豆科（Leguminosae），又名黄耆，是植物和中药材的统称，产于内蒙古，山西，甘肃，黑龙江等地。中药材黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪，膜荚黄芪的根，味甘，性温，具有补气固表、利水退肿、脱毒排脓、生肌等功效，《中华人民共和国药典》上明列有扶正固本，补中益气的功效。现代医学发现黄芪的药理作用很广，其能增强机体免疫功能，加强细胞代谢，调节DNA复制、RNA和蛋白质的合成，具有固肾、降压、保肝、抗炎的功能[1]。 2 黄芪多糖 黄芪多糖（APS）是葡萄糖和阿拉伯糖的多聚糖，是黄芪中含量最多、免疫活性较强的一类物质，是黄芪中重要的天然有效成分。具有促进免疫提高巨噬细胞活性，抑制EAS、双向调节血糖作用[2,3]。其分子量小于8万级的多糖可制成静脉注射液，适用于化疗后的滋补，提高人体免疫力[4]。也可以在化学上对其进行改性使其活性增强，因而具有很好的抗艾滋病和抗凝血的应用前景[5,6]。目前黄芪多糖主要用于出口国外，国内需求量也很大，具有广阔的发展前景[7,8]。 但是目前黄芪多糖的提取分离工艺不成熟，效率较差，而且提取的成本较高。因此严重阻碍了黄芪多糖的研究与开发，本文综述了近年来有关黄芪多糖提取工艺的研究，为进一步的研究提供一定依据。 3 黄芪多糖的提取工艺 判断黄芪多糖提取工艺的优良，有以下几个方面需要考虑：黄芪多糖的得率；所提粗黄芪多糖的含糖量；整个工艺流程是否经济；不破坏所提取的黄芪多糖的活性。近年来有以下几种提取方法： 3.1 水提醇沉法 水提醇沉法的基本工艺为：黄芪根粉—以不同的次数不同量的水煮沸回流不同的时间—合并滤液—调节PH为中性—浓缩—加入一定浓度的乙醇—离心分离—加水溶解—过滤—滤液浓缩至小体积—加乙醇至浓度的80%—乙醇或丙酮洗涤—干燥—粗多糖。 水提醇沉法是应用最多的提取黄芪多糖的传统方法，按这种方法得到的黄芪多糖的的
1.多糖的提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。1．1溶剂法 1．1．1水提醇沉法 水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。多糖是极性大分子化合物，提取时应选择 水、醇等极性强的溶剂。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置 5 h，多糖的质量分数和得率均较高。影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。 1．1．2酸提法 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。因此酸提法也存在一定的不足之处。 1．1．3碱提法 多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。 1．1．4超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。超临界流 体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。由于CO2的超临界条件（TC＝304．6 ℃，Tp＝7．38 MPa）容易达到，常用于超临界萃取的溶剂，在压力为8～40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物。 该法的缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限。 1．2酶解法 1．2．1单一酶解法 单一酶解法指的是使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率的生物技术。其中经常使 用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利于多糖的浸出。
实验五海带多糖的提取及含量测定（3学时） 1、实验目的及原理 海带是褐藻门植物，海带多糖是海带药用价值的最集中体现，海带多糖的种类很多。本实验的主要目的是掌握海带多糖的提取及测定方法。对海带多糖的提取方法有很多，碱提取法是其中重要的一种。多糖中的己糖能与苯酚-硫酸试剂发生显色反应，颜色的深浅与己糖含量成正比。颜色的深浅可通过分光光度计测定，因此，可建立不同浓度的标准己糖与吸光度间的呈线性关系，绘制标准曲线，测定样品的吸光度值，再从表中曲线中查到样品中多糖的含量。 2、实验基本内容和要求 （1）掌握碱提取法提取海带多糖 （2）掌握利用绘制标准曲线方法测定多糖含量 3、实验所用仪器设备和试剂 （1）基本仪器：分光光度计，离心机 （2）实验材料及试剂：干海带 1 %碳酸钠溶液：称取15g无水碳酸钠加入1500ml蒸馏水 95%乙醇溶液，氯化钙溶液(2g/100ml)，1.0ml 6%的苯酚溶液，98%浓硫酸 标准糖溶液：用岩藻糖和半乳糖fuc/gal(3:1)作为标准糖，取其混合物 0.1g，其中0.075g的岩藻糖，0.025g的半乳糖，将其溶解 到1000ml的水中，制成0.1mg/ml的标准溶液。梯度稀释， 用蒸馏水稀释分别配成，0,0.02,0.04,0.06,0.08,0.1mg/ml。 4、实验步骤
4.1海带多糖的提取 （1）购买海带后,用自来水将其洗净,晒干，研磨，过60目----80目的筛,收 集备用。称取制备好的2g海带粉,置于烧杯中,加入28ml刚配好的碳酸钠溶液。 （2）在50℃水浴中水浴,趁热用棉纶网进行吊滤,并不断用热水冲洗保持温度, 获得的吊滤液于5000r/min离心15min,保留上清液。上清液经减压浓缩(40℃)后,加入三倍体积95%乙醇,沉淀过夜。离心后获得海带粗多糖。 4.2海带多糖的测定 （1）将标准糖配成0.1mg/ml溶液 （2）取少量标准糖溶液，用蒸馏水稀释到2.0ml，向其中加入1.0ml 6%的苯酚溶液，振荡器混匀，再加入浓硫酸5.0ml，振荡混匀。静置5min，沸水浴 15min，冷却至室温后于490nm比色测定吸光度， （3）将测得的吸光度填写到下表中： （4）根据A值，制作糖含量标准曲线，对比多糖提取的海带多糖的A值，求得糖含量。
植物多糖及其提取方法 1 前言 多糖是自然界和生物体中广泛存在的物质，它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子。它具有多种生物活性，与生物机能的维持密切相关，与蛋白质、脂类形成的糖蛋白、脂多糖在细胞的识别、分泌以及在蛋白质的加工、转移方面起着不容忽视的作用。近年来，植物、海洋生物及菌类等来源的多糖已作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现，各种多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已相继被发现。我国对多糖研究始于20世纪70年代，植物多糖由于它们独特的功能和低毒性，作为新药发展的方向具有广阔的应用前景，越来越多的研究人员将目光投向植物多糖。 2 植物多糖的结构 植物多糖是由许多相同或不同的单糖以a或p一糖苷键所组成的化合物，普遍存在于自然界植物体中，包括淀粉、纤维素、多聚糖、果胶等。多糖有复杂的四级结构，一级结构指糖基的组成、排列顺序、相邻糖基的连接方式、异头碳构型及糖链有无分支、分支的位置与长短等；二级结构指多糖主链以氢键为主要次级键而形成的有规则构象；三、四级结构是指以二级结构为基础，糖单位之间的非共价相互作用，导致二级结构在有序地空间产生规则构象。植物多糖的
主链与支链形成了特殊的构型一凹形槽。凹形槽是一级结构与构象的体现。凹形槽的支链与活性关系为：支链度越大，凹形槽越多，生物活性越大。近年来，人们对多糖的结构和活性的研究不断深入，进一步阐明了多糖作用机制与结构的关系，其多样性的生理活性更加受到重视。 3 植物多糖的功能 多糖与蛋白质一样，具有生物大分子的复杂结构，具有一定的生理和生物学活性，概括起来多糖的生物活性包括：免疫调节性、抗肿瘤活性、降血糖活性、降血脂活性、抗病毒活性、抗衰老活性(抗氧化活性)、抗疲劳、抗突变活性，除此之外，还具有其他生物活性，包括抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等作用。 (1)免疫调节功能。由于现代医学、细胞生物学及分子生物学快速发展，人们对免疫系统的认识越来越深入。免疫系统紊乱，会导致人体衰老和多种疾病的发生。植物多糖是一种免疫调节剂。多糖对肌体的免疫调节作用，包括激活巨噬细胞，激活网状内皮系统，激活T和B细胞，激活补体，进干扰素的生成，促进白细胞介素的生成，诱生肿瘤坏死因子等。 2)抗肿瘤活性植物多糖主要是通过增强机体的免疫功能来达到杀伤肿瘤细胞的目的，许多高等植物中都含有抗肿瘤活性的多糖，如芦荟多糖、香菇多糖提取物、人参多糖具有
紫菜多糖的提取与理化性质研究 Made by Zilong 【摘要】水提法分离纯化了紫菜多糖；采用TLC法分析证明紫菜多糖组成中含有半乳糖、甘露糖和葡萄糖；苯酚-硫酸法显色结果为黄色；溶液酸催化分解后加入氯化钡可产生沉淀。 【关键词】苯酚-硫酸法紫菜多糖TLC 前言： 紫菜属于海藻类主要为红藻门红毛菜科植物甘紫菜的叶状体是一种深受人们喜爱的食物。紫菜多糖一般分为紫菜胶和琼胶两类主要区别在于琼胶中硫酸基含量比紫菜胶中的少,而3,6-内醚-半乳糖含量前者比后者高。紫菜多糖的含量由于种类、生长环境和生长季节等不同而有很大差异各种多糖的单体组成也不同主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖和木糖组成是一种含糖醛酸的酸性异多糖。研究表明紫菜多糖具有多种生物学活性及药用价值如降血脂、抗血栓、降血糖、抗炎、抗疲劳、增强免疫、抑制肿瘤生长等作用在保健品和医药中具有广阔的开发前景。 1.材料与方法 1.1原料与试剂 原料：干紫菜粉末（实验指导教师提供） 试剂：苯酚、浓硫酸、氯化钡、氯仿、正丁醇、三氟乙酸、苯胺、二苯胺均为国 产分析纯试剂。 主要仪器：硅胶薄层板、电热恒温水浴锅、DHG-9145型电热恒温鼓风干燥箱、电子天平、烧杯、安瓿瓶、滴管。 1.2 实验方法 1.2.1 紫菜多糖的提取 取1.0g干紫菜粉末于烧杯中，按照液料比20:1加入20ml蒸馏水，搅拌均匀后用保鲜膜封口，置于水浴锅中80℃恒温提取2h，抽滤后得提取液。 1.2.2 紫菜多糖除杂蛋白 将提取液与saveg试剂（氯仿：正丁醇=4:1）按照体积比1:4混合，按照saveg 法除蛋白得上清液。 1.2.3紫菜多糖的分离纯化 取上清液，加入4倍体积的无水乙醇得到沉淀。抽滤分离沉淀后用80%的乙醇及无水丙酮洗涤干净，在干燥箱中烘干3小时得紫菜粗多糖。 1.2.4紫菜多糖的理化性质分析 1.2.4.1苯酚-硫酸法显色反应 配制0.1mg/ml的粗多糖溶液。取1ml多糖溶液于试管中，加入1ml 0.6%苯酚溶液混匀后加入4ml浓硫酸，室温下放置15min观察颜色变化。 1.2.4.2硫酸钡沉淀反应 取紫菜粗多糖溶解于2M的三氟乙酸中，滴入氯化钡溶液观察有无沉淀产生。 1.2.4.3紫菜多糖组成定性分析（TLC法） 取紫菜粗多糖溶解于2M的三氟乙酸中，将溶液转移至安瓿瓶中，封口，在干燥箱中105℃放置3h得多糖分解液。取薄层色谱板分别点上浓度均为5mg/ml的半乳糖、葡萄糖、甘露糖溶液以及多糖分解液。将薄层色谱板于展开剂（正丙醇:
多糖分离纯化的基本原则和方法 多聚糖(polysaccharide)，简称多糖，常由一百个以上甚至几千个单糖基通过糖苷键连接而成的，其性质已大不同于单糖，如甜味和强的还原性已经消失，广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中，是构成生命的四大基本物质之一，与生命功能的维持密切相关。近年来，大量研究表明多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。 1、基本原则 在不破坏多糖活性的前提下进行多糖的分离纯化。尽量不引入新的杂质，或引入的新杂志易于除去，如小分子盐类可经过透析作用除去，铵根离子可通过加热挥发除去等[1]。 2、分离纯化方法 多糖的生物活性倍受关注，但不少多糖的提取方法和工艺尚未成熟，基于效率、成本多方面的考虑，各种方法的开发、比较、分析是研究工作的焦点之一。目前多糖提取方法主要有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法。首先要根据多糖的存在形式及提取部位不同，决定在提取之前是否做预处理：提取时需注意对一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在用水提取前，应先加入甲醇或l：l的乙醇乙醚混合溶液或石油醚进行脱脂，而对含色素较高的根、茎、叶、果实类，需进行脱色处理。 2.1多糖的提取与分离方法 由于各类多糖的性质及来源不同，所以提取方法也各有所异，主要归纳为以下几类： 第一类难溶于水，可溶于稀碱液的主要是胶类，如木聚糖及半乳糖等。原料粉碎后用0.5mol/L NaOH水溶液提取，提取液经中和及浓缩等步骤，最后加入乙醇，即得粗糖沉淀物。 第二类易溶于温水，难溶于冷水的多糖，可用70~80℃热水提取，提取液用氯仿：正丁醇（4:1）混合除去蛋白质，经透析、浓缩后再加入乙醇即得粗多糖产物[2]。 第三类粘多糖的提取。在组织中，粘多糖与蛋白质以共价键结合，故提取
黄芪多糖提取 一、实验目的 学习并掌握黄芪多糖的提取技术 二、实验原理 黄芪为豆科植物的干燥根，主要药理成分是黄芪多糖和黄芪甙， 黄芪多糖在医药和畜医临床上研究应用较为广泛，可作为免疫促进剂和调节剂同时具有抗病毒和抗肿瘤，抗衰老，抗应激，抗氧化等作用。能提高未成年家畜的抗病能力，对幼仔猪幼畜经常添加可以减少疾病。 三、实验材料 黄芪根，氧化钙，95%乙醇，托盘天平，粉碎机，电磁炉，白瓷缸，稀盐酸，纱布，烧杯，玻璃棒 四、实验步骤 黄芪多糖的提取用CaO溶液提取法。采用PH9~10氧化铝溶液, 煮沸提取，浓缩时调PH6.5左右。 ①称取黄芪根（500g）100g,去掉杂质和泥土，粉碎成粉末。 ②黄芪根加入6~7倍的CaO溶液，煮沸1h,用8层纱布过滤。 ③合并滤液调PH至6.5左右。 ④将浓缩液加入2倍量的95%乙醇沉淀。 ⑤倾去上清液，沉淀物再加入95%乙醇，至浓缩为80%，静置倾出上 清液，滤渣即为黄芪多糖。 五、实验结果及分析 结果
黄芪多糖的物理性状，提取的黄芪多糖为灰白色粉末，易溶于水, 溶液乳白色，无杂质。最后得到的黄芪多糖在酒精中形似豆腐花，灰白色，经洗涤沉淀后的滤渣为黄芪多糖。 分析 黄芪多糖作为黄芪纤维质的组成部分。纤维在水中的溶胀作用和溶解性差，因此水提取法吸收率低。在碱性溶液中的溶胀作用溶解性显著增加。纤维之间的酯键易断裂而发生剥皮反应，使更多的多糖得以游离而被提取出来。从而提高多糖的回收率。因此黄芪多糖应尽量避免在酸性条件下提取。【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】
海带多糖的提取及鉴定 1、实验目的及原理 海带是褐藻门植物，海带多糖是海带药用价值的最集中体现，海带多糖的种类很多。本实验的主要目的是掌握海带多糖的提取及测定方法。对海带多糖的提取方法有很多，碱提取法是其中重要的一种。多糖中的己糖能与苯酚硫酸试剂发生显色反应，颜色的深浅与己糖含量成正比。颜色的深浅可通过分光光度计测定，因此，可建立不同浓度的标准己糖与吸光度间的呈线性关系，绘制标准曲线，测定样品的吸光度值，再从表中曲线中查到样品中多糖的含量。 2、实验基本内容和要求 （1）掌握碱提取法提取海带多糖 （2）掌握利用绘制标准曲线方法测定多糖含量 3、实验所用仪器设备和试剂 （1）基本仪器：分光光度计，离心机 （2）实验材料及试剂：干海带1 %碳酸钠溶液：称取15 g无水碳酸钠加入1500 mL蒸馏水，95%乙醇溶液，氯化钙溶液(2g/100mL) 4、实验步骤 4.1 海带多糖的提取 （1）购买海带后，用自来水将其洗净，晒干，研磨，过60目-80目的筛，收集备用。称取制备好的2 g海带粉，置于烧杯中，加入28 mL 刚配好的碳酸钠溶液。 （2）在50℃水浴中水浴，趁热用棉纶网进行吊滤，并不断用热水冲
洗保持温度，获得的吊滤液于5000 r/min 离心15 min，保留上清液。上清液经减压浓缩（40℃）后，加入三倍体积95%乙醇，沉淀过夜。离心后获得海带粗多糖。 二．鉴定 Molisch反应（α-萘酚反应）此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。α-萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α-萘酚一样。除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。 三，硫酸-蒽酮法测定海带多糖含量 1.配制硫酸-蒽酮试剂:取2 g蒽酮溶解于1000 mL浓H2SO4中，当日配制使用。 2.绘制葡萄糖标准曲线:准确量取100g/mL葡萄糖标准溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL，注入糖管中，补充纯水至1.00 mL （下表）。并分别加入4.00 mL硫酸-蒽酮试剂，盖塞后立即摇匀，迅速浸入冷水浴中，各管加完后一起置于沸水浴中10 min，，封口防蒸发，取出流水冷却，室温放置10分钟，于620 nm处比色，测定吸光度值。以测得的吸光度为纵坐标，标准葡萄糖含量为横坐标，作出标准曲线。 3．海带多糖含量测定:将海带粗多糖以适量水溶解（约为10-80
一、植物多糖的提取 1 溶剂提取法 1．1 水提法 水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。 1．2酸碱提法 有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。 有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。与
酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法 酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。 1．5 超声提取法 超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。另外，超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。超声提取的影响因素有：超声时间、超声频率（一般低频中提取效率高，但也有例外）、料液比和温度等。 1．6 微波提取 微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。微波技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力强、选择性高、加
绝对是极品，一字一句翻译的，都有点不舍得上传 说明：下面提供的是中文翻译，对应的英文原文下载方式： ①谷歌学术搜索搜“Optimization of polysaccharides extraction from Gynostemma pentaphyllum Makino using Uniform Design”进入相关链接下载 ②中国知网搜索“Optimization of polysaccharides extraction from Gynostemma pentaphyllum Makino using Uniform Design”下载 ③大学里的图书馆网站外文数据库搜索“Optimization of polysaccharides extraction from Gynostemma pentaphyllum Makino using Uniform Design”下载 ④百度直接搜索“Optimization of polysaccharides extraction from Gynostemma pentaphyllum Makino using Uniform Design”进入相关链接下载 ⑤实在懒得不想下载的，和我联系。注明需要英文原文QQ：1025325761 原文的部分截图 应用均匀设计优化提取绞股蓝多糖工艺的研究 罗巅辉王昭晶蔡婀娜
摘要：本文应用均匀设计优化提取绞股蓝多糖提取率的工艺条件，对以下四个工艺条件进行了研究，包括水提时间(min），料液比（g/ml），浸泡时间(min），水提温度(℃) 。确定了优化条件，并通过数学模型绘制了三维响应曲面图。T检验和P值表明浸泡时间和水提时间(X2X4)在响应值中出现了互动效应，接着还出现了水萃取时间 (X4)的线性项，浸泡时间和水提温度(X2X3)的互动效应。考虑到效率因素，绞股蓝萃多糖提取的优化条件是：料液比比为1:67，浸泡时间10分钟，水提温度为95℃，水提时间为15分钟。在优化条件下，多糖提取率为11.29%，接近预测提取率。因此，应用均匀设计法从绞股蓝中提取多糖，能够极大缩短提取时间。 关键词：绞股蓝；多糖；提取；均匀设计
** 学院
本科生毕业论文
龙葵粗多糖提取工艺条件的优化
院(部)、专 业 生命科学学院 生物科学 研 究 学 生 学 方 向 姓 名 号 生物化学
指导教师姓名 指导教师职称 讲师
2014 年 06 月 01 日
大庆师范学院本科生毕业论文
摘
要
本实验以龙葵为实验材料 ，通过单因素和正交法相结合的实验方法对龙葵粗 多糖提取工艺进行优化， 考察因素分别是料液比、 冲泡时间、 水浴时间和水浴温度， 最终确定最优工艺条件为料液比 1:25、冲泡时间 50℃、水浴时间 25min、水浴温 度 90℃，粗多糖的提取率为 0.1%。 关键词：龙葵；粗多糖；条件优化
I
大庆师范学院本科生毕业论文
Abstract
This experiment by morel as experiment material, using single factor and orthogonal method, experimental method of solanum nigrum polysaccharide extraction process was optimized, examine factors are respectively and solid-liquid ratio, brewing time, water bath time and water bath temperature, and ultimately determine the optimal process conditions for the material liquid ratio, the brewing time 50℃ , and water bath time 25min, water bath temperature 90℃ , the coarse polysaccharide extraction yield of 0.1%. Key words：morel；crude polysaccharide；condition optimization
II
毕业论文开题报告 生物工程 海带多糖的提取工艺研究 一、选题的背景、意义 多糖是组成生物高分子家族中的一个最丰富多采的成员，它是由单糖组成的天然高分子化合物，已知的天然多糖化合物约有300加多种，广泛存在于植物、动物和微生物组织中，具有多种重要的功能，其中两种最重要的功能是结构物质和能量物质。如组成植物细胞壁的纤维素和组成虾蟹的甲壳属于结构物质，使组织具有强度。而植物中的淀粉及动物中的糖元是贮存的食物，它能随代谢的需要转变成能量。近二十多年来，由于分子生物学和细胞生物学的发展，发现多糖及缀合物参与细胞的各种生命现象的调节，如免疫细胞间信息的传递和感受，这与细胞表面的多糖体的介导有密切关系。而且多糖又是细胞表面对各种抗原和药物的受体，因此多糖作为支持组织和能量来源的传统观念已被突破。科学家们从大量药理和临床研究发现，从天然产物中分离出的多糖往往是一种免疫调节剂，它能激活免疫细胞，提高机体免疫功能而对正常细胞没有毒副作用。自1983年美国发现第一例AIDS病患者，1983年从患者血清中分离出一种淋巴结病毒（HIV）以来，多糖作为免疫治疗药物正越来越受到重视 ,已成为新药研究的热点之一，而其中最为重要的是从药用植物中提取的水溶性多糖。现已发现多糖化合物对机体的免疫调节作用主要是通过激活巨噬细胞，激活网状内皮系统，激活T和B淋巴细胞，激活补体以及促进各种细胞因子的生成等方式和途径来实现的。这种免疫调节作用具有以下两个特征：（1）最佳剂量的选择。对多糖不论进行动物的免疫功能试验还是抑制肿瘤试验都发现有一个最佳剂量值,剂量过高或过低都会影响实验结果。多糖在最佳剂量时，其活性最高，超过或低于最佳剂量，活性就会明显降低，这与一般药物不同。（2）没有直接细胞毒性。多糖作为药物的最大优点就在于毒副作用很小，它的抗肿瘤活性是宿主介导性的，因此在体外试验时，肿瘤细胞的存活率几乎可达100%。 至今多糖的结构与功能的关系并不十分清楚，但高级结构对功能的影响比一级结构还重要，这一点已为科学家们所首肯。而决定高级结构的重要因素是多糖分子链内与链外的氢键。除了主体构型是决定多糖生物活性的决定因素外，多糖的分子量、溶解度等也能影响其生物活性。近来多糖受体的发现对阐明其作用机理有重要意义。当多糖与受体作用时，只有分子
超声波法提取香菇多糖 研究背景： 香菇多糖的性质：香菇多糖以β~1，3葡聚糖为主，含有少量的木糖和甘露糖，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能 用途：抗肿瘤药。为化、放疗辅助药。主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。 生产技术状况：因为香菇多糖的用途广泛，提取比较方便，越来越多的人投身于这方面的研究，是的提取技术方面的大幅度提升。状况良好。 操作过程： 方案设计：香菇多糖的提取 香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用 香菇多糖的测定：1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质：采用氯化钙法：将溶液PH 调节至8---9，加热到85℃，加入氯化钙使浓度达5% (w/v)，搅拌，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。 2.制作标准曲线：准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0ml 置于50ml 容量瓶定容，准确吸取该系列溶液各2ml ，然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 3. 样品的测定：取去完蛋白的样液2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度。将吸光度控制在0.2-0.8 人员分工：我们分成两组来完成实验，因为有两组待测夜要进行测定。然后标准溶液是由第一大组完成。由于操作比较简单，我们就一起完成。1人对溶液进行去蛋白，2人制作待测液，1人对待测液进行测定，并记录数据。 实验现象：配置待测液时，加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。从而可来额定吸光度。（附照片）总结分析
食用菌多糖的提取方法有水提法、碱提法和酶提法等，其中酶提法是利用酶对细胞结构的破坏作用，使存在于细胞内部的多糖释放出来，从而提高了多糖的得率。 本次实验采用纤维素酶和果胶酶对紫蘑菇进行水解，研究香菇多糖的最佳提取工艺，并探讨蘑菇粒度、蘑菇溶解方法以及酶法提取中多糖提取效果的评价方法。 可以同步做三组对比试验：⑴采用水提，不加酶；⑵采用酶法提取；⑶采用酶空白（只加酶，不加蘑菇粉）。 由于酶中也含有少量的糖类成分，其存在将会对蘑菇多糖的提取产生影响。因此，在计算酶法提取多糖的效果时，要减去酶本身所引入的糖。在确定最佳酶浓度时更要考虑。 一、实验流程：蘑菇干燥→粉碎过筛→加水浸泡0.5h→调PH→加入纤维素酶→提取→离心过滤→测多糖提取率 式中：n一提取液稀释倍数； C一提取液中多糖的浓度（mg/mL）； V一提取液体积（mL）； m一蘑菇的质量（mg）。 测定时取三个平行样，结果数据为平行样的平均数值。 二、具体实验步骤： 1、多糖标准曲线的绘制 精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖标准品100mg,置于100 mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8 mL分别置于50 mL 容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取上述各种溶液2.0 mL,分别加入5%苯酚溶液1.0 mL,摇匀,迅速加入5.0 mL浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15 min,然后置冷水浴中冷却30 min,随行空白,在490 nm波长处测定吸光度。以标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，并计算其标准曲线回归方程。 （1）精密度试验:精密吸取1.0 ml供试液按“标准曲线的制备”项下操作，分别测定吸光度，求得RSD。 （2）重现性及多糖含量测定:精密称取巴西蘑菇多糖0.1000g，按“供试液
1、多糖的提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理。动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,释放多糖。植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。 1.1溶剂法 1.1.1水提醇沉法 水提醇沉法就是提取多糖最常用的一种方法。多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择 水、醇等极性强的溶剂。用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置 5 h,多糖的质量分数与得率均较高。影响多糖提取率的因素有:水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取的提取方法。但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。 1.1.2酸提法 为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。因此酸提法也存在一定的不足之处。 1.1.3碱提法 多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖的浸出,可提高多糖的收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓的碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品的风味与色泽。 1.1.4超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术就是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。超临界流 体就是指物质处于临界温度与临界压力以上时的状态,这种流体兼有液体与气体的特点,密度大,粘稠度小,有极高的溶解,渗透到提取材料的基质中,发挥非常有效的萃取功能。而且这种溶解能力随着压力的升高而增大,提取结束后,再通过减压将其释放出来,具有保持有效成分的活性与无溶剂残留等优点。由于CO2的超临界条件(TC＝304.6 ℃,Tp＝7.38 MPa)容易达到,常用于超临界萃取的溶剂,在压力为8～40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物,在加入改性剂后则可溶解极性化物。 该法的缺点就是设备复杂,运行成本高,提取范围有限。 1.2酶解法 1.2.1单一酶解法 单一酶解法指的就是使用一种酶来提取多糖,从而提高提取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用,使其结构变得松散;蛋白酶还会使糖蛋白与蛋白聚糖中游离的蛋白质水解,降低它们对原料的结合力,
山药多糖的提取及含量测定 摘要：山药又称薯蓣、土薯、山薯蓣、怀山药、淮山、白山药，是《中华本草》收载的草药，药用来源为薯蓣科植物山药干燥根茎。冬季茎叶枯萎后采挖，切去根头，洗净，除去外皮及须根，用硫黄熏后干燥，也有选择肥大顺直的干燥山药，置清水中，浸至无干心，闷透，用硫黄熏后，切齐两端，用木板搓成圆柱状，晒干，打光，称“光山药”。有滋养强壮，助消化，敛虚汗，止泻之功效，主治脾虚腹泻、肺虚咳嗽、糖尿病消渴、小便短频、遗精、妇女带下及消化不良的慢性肠炎。山药在食品业和加工业上大有发展前途。 关键词：山药提取含量测定 1 概述 山药的名称很多，例如淮山、淮山药、大薯、脚板苕、佛掌薯、扇子薯等，为一年生或多年生缠绕性藤本植物。山药为薯蓣科，是植物薯蓣的地下肉质块茎，既是一味重要中药，又是一种常见蔬菜。目前其营养价值和药用价值已逐步被人们重视和认可。山药始载于《神农本草经》，列为上品，谓其“味甘、温，补虚赢、除寒热邪气、补中益气力、长肌肉、久服耳目聪明。”不仅如此，历代古书对山药的平补作用均有记载。现代的研究表明，山药不仅具有多种营养成分，而且具有很高的药用价值，是卫生部公布的药食兼用植物之一。 1.1 结构 山药中具有较多的粘液质，粘液质是多糖与蛋白质的复合体经分析其内蛋白质占47.6%，多糖占52.4%不同山药中含量有所不同山药中多糖含量0.06%-1.09%分为酸性多糖和中性多糖，主要成分是甘露聚糖，半乳糖，木糖，葡萄糖和阿拉伯糖等。 1.2 山药多糖的药理作用 1.2.1 降血糖作用 山药是中医治疗消渴症的主要药物，山药多糖的降糖作用是近年来山药多糖研究的热点。山药提取物对禁食大鼠和兔有降血糖作用，能控制四氧嘧啶引起的高血糖。山药多糖可降低四氧嘧啶诱发的糖尿病大鼠血糖，大剂量山药多糖降糖更明显，降糖百分率随剂量增大而增加。山药多糖治疗糖尿病的具体机制目前还
植物多糖的研究 摘要：本文对植物多糖的研究进行了综合性的论述，包括多糖的生物活性，提 取分离，含量测定方法及多糖制剂研究。 关键词：多糖提取分离活性含量测定制剂 前言：多糖普遍存在于动植物及微生物中。植物多糖是普遍存在于植物细胞壁 及细胞中的一种重要成分。关于多糖的研究，在近几年的发展很快，实验证明多科属，多组织部位的多糖成分都有一定的生物活性。这些具有生物活性的多糖及糖的复合物与细胞的各种生命现象的调节有着密切的关系。多糖已成为当今新药及保健品发展的主要方向之一，在人们的生活及医学上越来越显示出更为广阔的应用前景。 1多糖的生物活性 1.1免疫及抗肿瘤特性 多糖最为突出的特性是加强机体的免疫功能。张振凌[1]等用环磷酰胺造模法证明多糖对正常及免疫抑制小鼠均有兴奋作用。李海瑞等[2]用四基偶氮唑盐检测法证明多糖能显著提高淋巴细胞的增值反应。 与免疫相关的是抗肿瘤作用，近几年来对多糖的此特性进行的研究主要有以下几个方面：⑴影响细胞的新城代谢，进而能影响肿瘤细胞的转移和相关抗原的表达。⑵影响细胞的周期，使肿瘤细胞的生长停留在某一个分裂期[3]。⑶影响膜蛋白及肿瘤细胞的附着，而是与细胞表面蛋白结合[4]。 1,2 抗衰老作用 近几年对多糖抗衰老作用主要涉及到一下四个方面：⑴加强DNA的复制与合成，为生物的生长提供必需的微量元素和营养，进而延长生物的生长周期。⑵调节蛋白质和核酸、及脂质的代谢。⑶抗脂质过氧化和抑制脂褐质的作用。⑷提高机体超氧化物歧化酶的活力，达到清除机体内部脂质过氧化物和丙二醛的效果，已达到抗衰老的目的。 此外，芦荟多糖，南沙多糖，板蓝根多糖，天门冬多糖，野甘草多糖等均具有一定程度的清除自由基，延缓衰老的作用。 1.3降血糖作用 目前，糖尿病已经成为我国的多发病和常见病。开发安全无毒副作用、预防和治疗高血糖的药品及保健食品迫在眉睫。在近几年植物多糖的研究过程中，在对有三多一少症状的糖尿病小鼠实验时发现人参，南瓜，玉米，大麦等天然植物中含有的多糖成分具有显著地降低血糖的作用，有些多糖如茶多糖对小鼠代谢的影响还有类似胰岛素的作用[6]。 1.4降血脂的作用 高血脂症常常继发于糖尿病，肾病综合征的疾病，是动脉粥样硬化，冠心病的危险因素之一。利用动物实验（主要利用小白鼠），对多糖的降血脂作用进行研究，结果表明，部分多糖（如枸杞多糖，茶多糖，金樱子多糖，桑叶多糖，黄芪多糖等）均具有显著地降低胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和游离脂肪酸含量的作用[6-9]。
１.多糖得提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类、多糖得提取首先要根据多糖得存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理、动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚得混合液进行回流脱脂,释放多糖。植物多糖提取时需注意一些含脂较高得根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性得有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖得提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。 １.１溶剂法 １.1.1水提醇沉法 水提醇沉法就是提取多糖最常用得一种方法。多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择 水、醇等极性强得溶剂。用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到７０％左右,利用多糖不溶于乙醇得性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5h,多糖得质量分数与得率均较高。影响多糖提取率得因素有:水得用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取得提取方法。但由于水得极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性得成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续得分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。 １、1.2酸提法 为了提高多糖得提取率,在水提醇沉法得基础上发展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团得多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 由于H＋得存在抑制了酸性杂质得溶出,稀酸提取法提取得到得多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键得断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用、因此酸提法也存在一定得不足之处。 1.1、３碱提法 多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖得浸出,可提高多糖得收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓得碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品得风味与色泽、 1、1、4超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术就是近年来发展起来得一种新得提取分离技术、超临界流 体就是指物质处于临界温度与临界压力以上时得状态,这种流体兼有液体与气体得特点,密度大,粘稠度小,有极高得溶解,渗透到提取材料得基质中,发挥非常有效得萃取功能。而且这种溶解能力随着压力得升高而增大,提取结束后,再通过减压将其释放出来,具有保持有效成分得活性与无溶剂残留等优点、由于CＯ2得超临界条件(ＴC=3０4.６℃,Tp＝7.3８MPa)容易达到,常用于超临界萃取得溶剂,在压力为8~40MＰa 时得超临界ＣO2足以溶解任何非极性、中极性化合物,在加入改性剂后则可溶解极性化物、 该法得缺点就是设备复杂,运行成本高,提取范围有限、 1、2酶解法 １.2.1单一酶解法 单一酶解法指得就是使用一种酶来提取多糖,从而提高提取率得生物技术。其中经常使