题目石斛中多糖含量的测定 学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点陕西理工学院 2015 年 06 月 08 日
石斛中多糖含量的测定 高换楼 （陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，陕西汉中723001） 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国内外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定； Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou （Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi） Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;
铁皮石斛多糖的功效 了解过铁皮石斛的朋友，都知道铁皮石斛的功效卓著，可以滋养阴津、提高免疫、增强体质、补益脾胃、护肝利胆、清虚热、强筋壮骨、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼目、滋养肌肤、延年益寿等等令人诱惑的功效。 很多朋友也听说过，铁皮石斛之所以能有如此多的功效，是因为含有石斛多糖。 糖？ 最近不是报道说，糖不利身体健康吗？！ 此多糖，非彼糖。 糖尿病的人不可以吃糖，但是可以吃石斛多糖。 石斛多糖属于活性多糖的一种。在国内，活性多糖的提法比较新，应用也很少。但在国外，特别是日本，普遍多了。活性多糖是功能性食品的一种，在保健范畴之内。 活性多糖的生理功能 （一）多糖的免疫调节功能 免疫调节作用是大多数活性多糖的共同作用，也是它们发挥其他生理和/或药理作用（抗肿瘤）的基础。活性多糖可通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。大量免疫实验证明，活性多糖不仅能激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞，还能活化补体，促进细胞因子的生成，对免疫系统发挥多方面的调节作用。 （二）抗肿瘤的功能 据文献报道，已有50个属178种的提取物都具有抑制S-180肉瘤及艾氏腹水瘤等细胞生长的生物学效应，明显促进肝脏蛋白质及核酸的合成及骨髓造血功能，促进体细胞免疫和体液免疫功能。 （三）活性多糖的抗突变作用
在细胞分裂时，由于遗传因素或非遗传因素的作用，会产生转基因突变。突变是癌变的前提，但并非所有突变都会导致癌变，只有那些导致癌细胞产生恶性行为的突变才会引起癌变，但可以肯定，抑制突变的发生有利于癌症的预防。多种活性多糖表现出较强的抗突变作用。（四）降血压、降血脂、降血糖的功能 冬虫夏草多糖对心律失常、房性早博有疗效；灵芝多糖对心血管系统具调节作用，可强心、降血压、降低胆固酵、降血糖等。试验结果表明，蜜环茵多糖(AMP)能使正常小鼠的糖耐量增强，能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高；研究也发现，蘑菇、香菇、金针菇、木耳、银耳和滑菇等13种食用茵的子实体具有降低胆固醇的作用，其中尤以金针菇为最强。腹腔给予虫草多糖，对正常小鼠、四氧嘧啶小鼠均有显著的降血糖作用，且呈现一定的量效关系。云芝多糖、灵芝多糖、猴头菇多糖等也具降血糖或降血脂等活性。活性多糖可降低血脂，预防动脉粥样硬化斑的形成。 （五）活性多糖对多种病毒，如艾滋病毒(HIV-1)、单纯泡疹病毒(HSVl，HSV-2)、巨细胞病毒(CMV)、流感病毒、囊状胃炎病毒(VSV)、劳斯肉瘤病毒(RSV)和反转录病毒等有抑制作用。香菇多糖对水泡性口炎病毒感染引起的小鼠脑炎有治疗作用，对阿拉伯耳氏病毒和十二型腺病毒有较强的抑制作用。 （六）活性多糖的抗氧化作用 已发现许多活性多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。 （七）活性多糖的其它功能 除具有上述生理功能外，活性多糖还具有抗辐射、抗溃疡和抗衰老等功能。具有抗辐射作用的活性多糖有灵芝多糖、猴头多糖等。具有抗溃疡作用的活性多糖有猴头多糖、香菇多糖等。具有抗衰老作用的活性多糖有香菇多糖、铁皮石斛多糖、虫草多糖、灵芝多糖、云芝多糖和猴头菌多糖等。
几种市售枫斗的多糖含量测定 .烈斗 浙江省医学科学琏1999年9月(邑弟39期 , 多 .j 几种市售枫斗的多糖含 药帕研究所(3l0013)兰李亚芳 中药枫斗是以石斛属多种植物的茎经过 特殊加工制成的干燥品,亦称耳环石斛.传统 认为质重,嚼之粘牙,无渣者为优,老药工凭 此来判断枫斗的优劣,但无内在的质量评价 标准.近年来,石斛多糖的研究引起人们的重 视,并证明石斛多糖是评价枫斗的重要生理 活性物质之一ll.J.我们于l997年2月～ l999年6月采用苯酚一硫酸比色法,测定r 几种市售枫斗的多糖含量. 一 ,材料与方法 ∈一)材料: 1.样品:铁皮枫斗1(福建),铁皮枫斗2 (福建),枫斗1(云南),枫斗2(云南),小环叉 直条枫斗(云南),野生枫斗(云南),野生紫皮 扭斗(云南),儿洲牌铁皮枫斗(广西): 2仪器:7230型分光光度计(上海分析 仪器厂)
3试剂:苯酚试剂:苯酚(分析纯)l0 加水l50g混匀,溶解即得,置淙色瓶内,冰箱'巾备用;其它试剂(无水乙醇,硫酸等)均为国产分析纯 (二)方法: 多糖的提取与含量测定,参照文献方法i 二,结果 (一)葡萄糖标准液吸光度测定结果:标 准品浓度在495,9.90,1485,1980,2475 297O,3465,396O时,吸光度分别为o069, O135,0203,0287,0366,0428,0500 0.587,以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程: A=一0010536+0.Ol4923C.r= 25 量测定 z,7/ 丁委静张治国户.f 09994 (二)换算因素 塑重量—— 多糖液葡萄糖浓度(g/m])×多糖稀释因素结果:f为1504. (三)几种市售枫斗多糖含量见表1. 表1几种枫斗的多糖含量 三,讨论 ()结果表明,不同种石斛加工成的枫 斗.多糖含差别很大,已测的几个样品中多糖含最高低相差约4倍
齿瓣石斛多糖含量测定比较 石斛是中国名贵中药材，多糖是石斛的主要有效成分之一。本文测定了不同产地，种植方式以及不同部位的齿瓣石斛多糖含量，对齿瓣石斛栽培应用有重要意义。 标签：齿瓣石斛多糖；含量测定；比较 石斛属（Dendrobium）是兰科第二大属，全球约有1500种，主要集中分布在我国华南和西南地区[1]。石斛为我国名贵中药，具有滋阴清热、益胃生津等功效。齿瓣石斛化学成分类型多样，其中糖类也是重要化学成分，广西的加工品一级枫斗含量高达45.89%[2]。本文对不同齿瓣石斛多糖含量进行测定比较。 1仪器和试药 1.1仪器UV-2450紫外分光光度计（日本岛津）；电子天平；分析天平（FA200413）。 1.2试药对照品：D-无水葡萄糖（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201205）。 1.3试剂双蒸水：自制；无水乙醇，95%乙醇，苯酚。 1.4药材见表1。 2实验方法 2.1紫外可见分光光度法测定石斛多糖含量[3]。 2.1.1对照品溶液的配置取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml含94.66ug的溶液，即得。 2.1.2供试品溶液的制备取石斛鲜品茎约60 g，精密称定，置于九阳豆浆机中，选择五谷模式榨汁，加水定容至1000ml，混匀，离心（转速为4000转/min）20min，上清液稀释8倍，精密量取2ml置10ml塑料离心管中，精密加入无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1 h，离心，弃上清，加80%乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃上清，沉淀用热水溶解，转移至25ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置10 mL具塞棕色试管中，加水补至1.0 ml，加5%苯酚溶液（临用时配）1.0 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，置沸水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却5 min后取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在488nm
铁皮石斛有效成分及药理作用的研究进展 张绘芳1，郭慧2 【摘要】铁皮石斛主要含石斛多糖、生物碱、氨基酸、微量元素和菲类化合物等有效成分；现代研究表明，其具有增强机体免疫力、抗肿瘤、促进消化液分泌、抑制血小板凝集、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老和退热止痛等药理作用。本文通过对相关文献的整理和归纳，对铁皮石斛有效化学成分和药理作用的研究概况作一综述，为开发利用有药用价值的天然产物提供参考。 【关键词】铁皮石斛；化学成分；药理作用 铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl)为兰科(Orchidiaceae)石斛属多年生草本植物的新鲜或干燥茎。铁皮石斛又名铁皮枫斗、耳环石斛、铁皮兰、黑节草等，为石斛之上品，名列“中华九大仙草”之首。其味甘，性微寒，归胃、肾经，具有养阴清热、益胃生津的功效，药用价值历代为人们所推崇。本文就近年来对铁皮石斛的化学成分和药理作用研究情况做一次较全面回顾，旨在使该种传统中药的独特药用价值被更多地了解，为进一步研究、开发和利用提供参考。 1 有效化学成分 1.1 多糖 多糖是铁皮石斛中一种重要的活性物质，且含量较高。研究表明，多糖成分与铁皮石斛的药效，如增强机体免疫机能、杭肿瘤、杭衰老、杭疲劳、降血糖等方面，有着密切的联系。实验证明从铁皮石斛中能分离纯化得到三种多糖I、II、III，并确定它们为一类0-乙酸葡萄甘露聚糖。杨虹等运用糖组成分析、甲基化分析及NMR等方法研究铁皮石斛多糖DT2、DT3的化学结构，主要以。α-(1-4)-D-Glc为主链。这种多糖具有增长T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞功能的作用。 1.2 生物碱 生物碱类成分是石斛属植物中最早分离并进行结构确认的化合物，其研究开
Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2017, 7(1), 9-15 Published Online February 2017 in Hans. https://www.doczj.com/doc/95161438.html,/journal/aac https://https://www.doczj.com/doc/95161438.html,/10.12677/aac.2017.71002 文章引用: 果卉, 孙渺, 周婷婷. 真菌中多糖含量测定方法的研究概况[J]. 分析化学进展, 2017, 7(1): 9-15. Methods for the Determination of Fungal Polysaccharides Content Hui Guo, Miao Sun, Tingting Zhou * The Second Military Medical University, Shanghai, China Received: Feb. 6th , 2017; accepted: Feb. 20th , 2017; published: Feb. 27th , 2017 Abstract Recently fungi polysaccharides are valuable application substance, which is used in antiviral, an-tiinflammatory, anticoagulation activity, hypoglycemic and hypolipidemic action. In addition their immunoregulation and anticancer activity have been received much concern. So it’s important for a rapid and accurate analysis and determination of fungal polysaccharides. Through the study of polysaccharide in recent years literature, this paper provides a comprehensive survey on research of methods for different fungus polysaccharides. Keywords Fungus Polysaccharides, Determination, Colorimetric Method, Chromatography Method 真菌中多糖含量测定方法的研究概况 果 卉，孙 渺，周婷婷* 第二军医大学，上海 收稿日期：2017年2月6日；录用日期：2017年2月20日；发布日期：2017年2月27日 摘 要 真菌多糖是近些年来应用价值丰富的一类活性物质。不仅具有抗病毒，抗炎，抗凝血，降血糖，降血脂等生物活性，还因其具有免疫调节，抗肿瘤等活性而备受关注。因此对于真菌多糖快速准确的分析检测具有重要意义。本文综述了近年来国内外不同类的真菌多糖的含量测定方法，以期对进一步的研究提供参考。 *通讯作者。
目录 1、综述 (2) 1.1 铁皮石斛简介 (2) 1.2 铁皮石斛国内外研究的进展 (3) 1.3 铁皮石斛的育种与繁殖 (4) 1.4 本文研究的意义 (5) 2、铁皮石斛的水分测定及其多糖的提取 (5) 2.1水分的测定 (5) 2.2多糖的提取 (6) 3、铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物质抗氧化性的研究 (6) 3．1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制 (6) 3.2 实验测定原理及方法 (8) 3.2.1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定 (8) 3.2.2 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（.OH）的测定 (8) -）的测定 3.2.3 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（·O 2 (9) 3.2.4 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还原能力的测定 (10) 4、结果与讨论 (10) 4.1 对DPPH自由基的清除能力 (10) 4.2 对羟基自由基（.OH）的清除能力 (11) -）的清除能力 (12) 4.3 对超氧阴离子自由基（·O 2 4.3 还原能力的测定 (13) 5、结论 (13) 参考文献： (14)
铁皮石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究 专业：环境科学学号：200911201066 姓名：许永佳指导老师：苏小建 内容摘要：石斛多达五十余种，是市场上常见的名贵中草药和保健品。研究表明，植物的多糖及多酚含量很大程度决定了它的功效。本次实验，我们主要用铁皮石斛为主原料，选取水提醇沉法来提取它的多糖并测其含量。然后用极性较大的乙酸乙酯来萃取获得多酚物质，通过其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用以及其还原能力的测定，探讨铁皮石斛多酚物质的抗氧化活性，并与人工合成抗氧化剂BHT对自由基清除能力及还原能力进行比较。实验结果表明：石斛的多糖含量为4.73%，它的多酚物质具有很强的抗氧化性，优于合成物BHT。 关键词：铁皮石斛；多糖；抗氧化性；自由基； BHT 1、综述 1.1 铁皮石斛简介 铁皮石斛[D-officinale]，俗称吊兰,是兰科石斛属植物。茎，直立，圆柱形，节间披有白色的膜质鞘；叶，纸质，长圆状披针形，尖端钝并钩转，基部有抱茎的鞘；花，白色，生于老茎上部节间，唇瓣菱形，喉部有一紫红色的斑块。铁皮石斛为名贵草药，药名为黑节草，拥有滋阴润肺、养胃生津、明目清热、增强免疫力、医治失音沙哑、抗衰老等功效。野生铁皮石斛生于海拔100——3000米之间的山地半阴湿岩石、树皮上，喜温暖湿润气候和半阴湿的环境，不耐寒。铁皮石斛的鲜茎可直接食用，可炖汤，可泡茶，可浸酒[1]，通常加工成制成药品或饮料，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等。近年来以其为原料生产的高级保健品远销欧美和东南亚沿海发达地区。 早在1400多年前的《神农本草经》和400多年前的《本草纲目》等古典中药书籍中，就将铁皮石斛列为药材中的上品。《道藏》则称：“铁皮石斛、天山雪莲、三两人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、肉苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草为九大仙草”。由于铁皮石斛的生长环境特殊及其自身繁殖慢等原因，野生铁皮石斛资源稀缺。目前铁皮石斛主要生长于在中国安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。
不同来源铁皮石斛不同部位生物碱的分布规律研究 尚喜雨 (南阳医学高等专科学校,河南南阳473000) 摘要 [目的]分析铁皮石斛组培苗、野生植株和栽培植株中生物碱的含量及分布规律。[方法]通过绘制石斛碱标准曲线,对铁皮石斛不同部位、不同采收阶段以及不同干燥方法测定的生物碱含量进行了系统的分析比较。[结果]铁皮石斛的生物碱含量,茎上段>叶U 根>茎中段U 茎下段;石斛的生物碱含量,1年生\2年生\野生型;不同干燥方法处理的铁皮石斛中的总石斛碱含量几乎没有什么变化,但茎上段的石斛碱含量经过自然晒干处理后比杀青烘干处理的提高了23.18%~41.49%,根部的石斛碱含量也提高了8.82%~16120%,而茎中下段和叶等其他部位的生物碱含量则下降。[结论]铁皮石斛的组培苗和栽培株均有一定的药用价值,且除茎之外,其叶和根也有一定的研究应用潜力。关键词 铁皮石斛;生物碱;分布规律中图分类号 S682.31 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2010)23-12441-02R esea rch on the Distr i buti on of the Al ka l oids i n the D i fferen t P ar ts of the Dendrobi u m candi dum w ith Va r i ous O r i gi ns S HAN G X i 2yu (NanyangMed i cal Schoo,l Nanyang ,H enan 473000) Abstr act [Objecti ve]The content of a l ka l oi d and its di stri buti o n i n pl antl e,t wil d pl ant and culti vated pl ant of Den dro bi u m can d i du m was anal yzed .[M et ho d]The tested data of t he content of al kaloi d i n the plant at different parts ,different harvesti ng tm i es and different dryi ng m et ho dswere syste m atica ll y analyzed and co mpared wit h standard curve .[Results]The order of t he content of the al kaloid was hi gher ha lf sectio n of De ndrobiu m candi du m ste m >leaf U ro ot >m i ddl e secti on of ste m U l o wer half sectio n ;12year ol d \22years old \wil d 2t ype of De ndro biu m candi du m plan;t and there was no diff erence i n t he cont ent of t ot a l al kali a mong dryi ngmethods ,ho wever ,the content of t he al ka 2li i n hig her ha lf secti on st em of De ndro biu m candi dum was 23.18%-41.49%under t he co nditi on of natural dryi ng trea t m entmore t han t ha t under t he conditio n of sto vi ng treat m en;t i n t he ro o,t more t han 8.82%-16.20%;but t he co ntent of t he a l ka li i n t he m i ddle and l o wer ha lf sectio n ste m and t he l eaf of Den dro bi u m candi du m was lo wer under t he co ndi ti on of na t ura l dryi ng trea t m ent than under the conditio n of stovi ng trea t m en.t [Conc l usi on]Both t he plantlet and culti vated plant of De ndrobiu m candi du m were with so m e m edici nal v a l ue and t here was so m e potenti a l of the research on t he applicati on and deve l op m en.t K ey wor ds De ndro biu m candi dum ;A l ka l oi ds ;Distri buti on 作者简介 尚喜雨(1969-),女,河南南阳人,硕士,讲师,从事生物制 药方面的研究。 收稿日期 2010204226 铁皮石斛(D e ndrobiu m c andidum )为兰科石斛属多年生草本植物,是我国传统名贵中药材,其药用成分主要为多糖、生物碱等。近年来,由于过度采挖野生药材以及整体生态环境的不断破坏,野生铁皮石斛资源已接近枯竭,人工栽培和相关研究正在迅速而普遍的开展。栽培植株和野生植株有效成分到底存在多少差异,组织培养和细胞培养产生的愈伤组织和组培苗有没有药用价值,一直是人们感兴趣的问题。卢文芸等曾就环草石斛野生植株和组培苗总生物碱和多糖含量进行过比较 [1] ,陈云龙等研究了野生细茎石斛不同部位 的有效成分及其分别规律[2] 。笔者对铁皮石斛的组培苗、野 生植株和栽培植株中的生物碱含量及分布进行比较系统的分析和研究,以期为铁皮石斛作为药用植物进行规模化生产提供参考依据。1 材料与方法1.1 试验材料 1.1.1 植物材料及其处理。铁皮石斛野生植株采自云南绿春,组培苗取自云南蒙自,1年生和2年生栽培植株购自云南屏边。样品洗净,一部分材料95e 杀青,再于60e 烘箱中烘干;另取一部分先于25e 室温下放置20d ,再置阳光下曝晒干燥。然后所有材料按组培苗全株、野生型及1年与2年生栽培全株和各自的茎上段、茎中段、茎下段、根和叶分开粉碎,过60目筛,备用。1.1.2 试剂及仪器。苯酚、硫酸、乙醇等试剂均为分析纯;电子天平,真空干燥箱,紫外可见分光光度计等。 1.2 试验方法 1.2.1 标准曲线的绘制。精密称取石斛碱对照品1mg ,置100m l 容量瓶中,加氯仿至刻度,为石斛碱标准液。精密量取石斛碱标准液(10L g/m l)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0m l 分别置分液漏斗中,用氯仿准确稀释至10.0m,l 加入p H 值4.5缓冲液5.0m l 和0.04%溴甲酚绿溶液1.0m,l 剧烈摇振3m i n ,静置30m in ,过滤氯仿层(经氯仿浸泡处理并干燥后的药棉),取过滤液6.0m,l 加0.01mol/L 氢氧化钠无水乙醇液1.0m,l 摇匀,静置待用。以氯仿10.0m,l 同样操作作为空白对照,分别于波长620nm 处测吸光度。以石斛碱(标准液经氯仿稀释后的)浓度为横坐标,吸光度为纵坐标作图,绘制石斛碱标准曲线。1.2.2 显色稳定性试验。按/1.2.10方法操作,在氯仿提取液加氢氧化钠后,摇匀,静置,加盖,分别间隔5、15、30、60、120m i n 测定其吸光度。1.2.3 生物碱的提取。准确称取各种不同来源的铁皮石斛干燥粉末各0.500g ,置于150m l 的磨口平底烧瓶中,用5m l 氨水湿润,密塞放置30m i n 。精密加入氯仿10.0m,l 称重,置75~80e 的水浴锅上回流提取2h ,冷却后称重,补充氯仿至原重,过滤,滤液为储备液,供薄层色谱(TLC)及分光光度法测定用。 1.2.4 石斛碱的薄层鉴别。称取硅胶G ,加入90m l 2.5%聚乙烯醇溶液,调匀后铺层。为防止气泡发生,铺层前加入5~6滴乙醇,薄层厚度0.3m m 。自然风干后105e 活化30m i n 。点样器点样10L ,l 乙酸乙酯-氯仿-甲醇-二乙胺(8B 2B 2B 1)为展开剂层析,上行展开,展距10c m ,用改良碘化铋钾试液显色,以石斛碱标样作对照,R f =0.44,斑点显橘红色。 安徽农业科学,Jo urn al ofAnhu iAgr.i Sc.i 2010,38(23):12441-12442责任编辑 郑丹丹 责任校对 李岩
石斛总多糖提取工艺及测定方法研究 发表时间：2018-11-23T14:12:36.320Z 来源：《医药前沿》2018年27期作者：许磊 [导读] 确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标 许磊 （天津民祥生物医药股份有限公司天津 300000） 【摘要】目的：确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标，研究提取温度、提取次数、提取时间、料液比对石斛总多糖提取率的影响。结果：石斛总多糖最佳提取工艺条件为提取温度为100℃、提取时间为2h、料液比为5:4。结论：该工艺简单、方便、快捷，可用于不同品种石斛总多糖的提取。 【关键词】石斛；总多糖；单因素；正交试验；含量测定 【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）27-0368-02 石斛为兰科植物马鞭石斛、铁皮石斛、环草石斛、黄草石斛的新鲜或干燥茎，被称为“九大仙草”之首，为珍稀、名贵、道地中草药，当下多以其总多糖含量的高低来判断石斛品质的优劣。本研究以总多糖含量为指标，通过正交实验，优化并最终确定了石斛总多糖的最佳提取工艺，以期为石斛总多糖的提取工艺研究提供参考和借鉴。 1.材料与试剂 石斛采自安徽省霍山县，无水葡糖糖、苯酚、硫酸等化学试剂均为分析级，实验用水均为Milli-Q超纯水机制备（密理博（上海）贸易有限公司）。紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；LC-4016型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；十万分之一天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；双层铁皮电炉（上海日用电炉厂）。 2.方法与结果 2.1 石斛中总多糖含量的测定 2.1.1对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，于100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1mL含90μg/mL的溶液，即得对照品储备液。 2.1.2供试品溶液的制备 取石斛粉末（过三号筛）约0.12g，精密称定，加水80mL，加热回流2小时，放冷，转移至100mL量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置15mL离心管中，精密加入无水乙醇10mL，摇匀，冷藏1h，取出，离心（转速为每分钟4000转）20min，弃去上清液（必要时滤过），沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3总多糖含量的测定 精密量取供试品溶液1mL，置10mL具塞试管中，精密加入5% 苯酚溶液 1mL，摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得。 总多糖提取率=总多糖质量/原药材的干品重量×100%。 2.1.4标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置10mL具塞试管中，各加水补至1.0mL，振摇，精密加入5%苯酚溶液l.0mL（现配现用，注意避光），摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰水浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。在9.016～90.160 μg/mL范围内线性良好（y=0.00881x+0.11252，R2=0.99904）。 2.1.5精密度实验 按标准曲线确定的范围内，精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，各1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算RSD=2.4%，精密度良好，符合方法学要求。 2.1.6稳定性实验 在标准曲线确定的范围内，精密吸取2.1.2项下制备的供试品1mL，分别于0h，2h，4h，6h按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算其RSD=0.88%，稳定性良好，符合方法学要求。 2.1.7重复性实验 在标准曲线确定的范围内，精密量取2.1.2项下制备的供试品1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，连续测定6次，计算RSD=3.2%，重复性良好，符合方法学要求。 2.1.8加样回收率实验 取已知含量的石斛粉末100mg，精密称定，共六份，分别加入适量的对照品溶液，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算提取回收率，RSD=3.4%，加样回收率合格，符合方法学要求。 2.2 石斛总多糖提取工艺考察 以提取温度、提取时间、料液比、提取次数为因素，选用L9（34）正交表进行正交实验（表1）。进而得到石斛总多糖加热回流提取的最优条件。石斛总多糖最佳提取条件正交实验表见表2。
题目石斛中多糖含量的测定 学生高换楼学号1111034082 所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点理工学院 2015 年06 月08 日
石斛中多糖含量的测定 高换楼 （理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，723001） 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定； Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou （Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi） Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words:Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;
铁皮石斛多糖的研究进展 xx （xx，xx，xx） 摘要：以系统的文献调研为基础,对兰科石斛属植物铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成加以综述。该文对其多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面做了详细而全面的总结,为今后铁皮石斛药用资源的更好的开发利用提供参考。 关键词: 铁皮石斛多糖药效药用资源 1 引言 铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo),是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物[1],一种名 贵珍稀濒危的中药材。自古以来就有“植物熊猫”、“救命仙草”的美誉。其主要分布于安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川（地点不详）、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上[2]。铁皮石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效,位列“中华九大仙草之首” ,被录入2010版药典[3]。由于铁皮石斛在自然条件下生长的环境较为苛刻，加上人们过度采挖，导致野生的铁皮石斛资源濒临灭绝。目前铁皮石斛已经实现了人工栽培，但一般也不易成活。铁皮石斛主要含有多糖、生物碱、氨基酸、酚类化合物等化学成分。现代药理研究表明铁皮石斛在增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、降血糖、生津、镇咳等方面有多种功效[4]。本文就铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面研究工
作进行概述。 2 铁皮石斛多糖含量的研究 近年来,铁皮石斛多糖的研究得到了人们越来越多的关注。由于铁皮石斛多糖是铁皮石斛的主要成分，其含量较高,还具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤等功效,使得铁皮石斛在医学上具有极大的应用前景。 多糖的含量测定方法有苯酚-硫酸法[5]、3,5-二硝基水杨酸法[6]、分子光谱法[7]等。 不同器官组织、不同生长期多糖含量不同 无论是野生苗还是人工栽培苗，都是茎中多糖含量最高，又尤以二年生的茎中多糖含量最高。 何铁光[8]发现，野生铁皮石斛茎中的多糖含量随年份不同含量差异较大，多年生茎中的多糖含量最高，其次是叶。华允芬[9]也发现铁皮石斛的多糖含量是茎>根；尚喜雨[10]对铁皮石斛的组培苗、野生植株、栽培植株中多糖的含量及分布进行了系统的分析和研究，也发现铁皮石斛的多糖含量很高，尤以茎段为最；不同部位的含量存在一定差异，茎部的差异要大于根、叶。这说明传统用药上铁皮石斛以茎为入药部分在主要化学成分分析上是合理的。 何铁光[11]对铁皮石斛的组培产物原球茎的多糖含量进行了测定，发现原球茎与野生品的多糖和总氨基酸含量相近。初步证明以组织培养获得的铁皮石斛原球茎代替其野生品是解决铁皮石斛资源紧缺的有效途径。
石斛的成分及功效（铁皮） 1、石斛多糖 很多植物中都含有多糖，但含有活性多糖的却极其少见。多糖是铁皮石斛中一种重要的活性物质，且含量较高。经现代科学技术测定，铁皮石斛中含有丰富的石斛活性多糖，其含量在25%及以上。石斛活性多糖具有抗肿瘤、消炎、降血压、降血糖、抑制脂质过氧化、抗衰老、加快体质恢复、提高人体白细胞数量、癌症辅助治疗、提高人体免疫力等功效。人们在直接食用铁皮石斛鲜品或是铁皮枫斗时，为什么会咀嚼之后，口感粘滑、黏牙？就是因为铁皮石斛中含有丰富的石斛活性多糖。实验证明从铁皮石斛中能分离纯化得到三种多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，并确定它们为一类O-乙酰葡萄甘露聚糖[1]。杨虹等[2]运用糖组成分析、甲基化分析及NMR等方法研究铁皮石斛多糖DT2 、DT3的化学结构，主要以α-(1→4)-D-Glc 为主链。这种多糖具有增长T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞功能的作用。 2、生物碱 生物碱类成分是石斛属植物中最早分离并进行结构确认的化合物，其研究开始于20世纪30 年代。陈晓梅等[4]对铁皮石斛和金钗石斛的化学成分进行比较，两者有10 个生物碱类的相同成分，铁皮石斛中生物碱类成分数量和含量均低于金钗石斛，但就所含的相同化学成分而言，铁皮石斛的质量好于金钗石斛。生物碱的药理作用主要表现对心血管、胃肠道作用及退热止痛等。 3、石斛碱： 铁皮石斛中还含有石斛碱。据现代药理实验表明，石斛碱对肿瘤细胞具有一定的抑制生长和杀灭作用，具有明显的抗肿瘤活性，通过提高人体免疫力来降低放化疗对人体的毒副作用，还能够降低血糖、抗衰老。 4、氨基酸 游离的氨基酸也是铁皮石斛中的主要有效成分之一。黄民权等[5]通过实验分析了铁皮石斛的氨基酸组分，结果发现铁皮石斛含有除色氨酸(测定前已破坏，无法检出)以外的全部人体“必需氨基酸”，其主要氨基酸有天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、缬氨酸和亮氨酸，这5种氨基酸占总氨基酸的53.0%。其中，谷氨酸、
金钗石斛总生物碱抗秀丽隐杆线虫衰老作用及其机制研究 目的:探究金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobile Lindl alkaloids,DNLA)对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)衰老的作用及其机制研究。方法:野生型秀丽隐杆线虫同期化培养至L4期,随机挑取线虫分为四组:对照组(Control组)、DNLA 0.035μg/m L、0.35μg/m L和3.5μg/m L组。 首先观察不同浓度DNLA对线虫寿命周期的影响;在20℃条件下线虫培养72 h,分别进行35℃热应激实验和百草枯氧化应激实验,观察最佳DNLA浓度是否能提高线虫在胁迫条件下的抗压力应激能力,延长线虫寿命;显微镜观察检测DNLA 对线虫生殖能力、移动能力、吞咽频率和脂褐素荧光强度等寿命相关生理指标的影响;实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)实验检测DNLA对衰老相关基因线虫FOXO同源物(Orthology of the FOXO in C.elegans,daf-16)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,sod-3)、过氧化氢酶(Catalase,ctl-1)、热休克蛋白(Heat shock protein,hsp16.2)以及哺乳动物nrf2同源物(A homologue of the mammalian nrf2,skn-1)的m RNA表达水平的影响;试剂盒检测SOD酶活力;采用daf-16与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)结合线虫株TJ356(daf-16::GFP)荧光显微镜下检测daf-16基因核定位情况;突变线虫株CF1038(daf-16缺失)和EUI(skn-1缺失)分别进行寿命实验观测daf-16和skn-1基因缺失后DNLA对线虫生命周期的影响。结果:寿命实验中,DNLA给药后延长野生型线虫寿命,且0.35μg/m L DNLA给药浓度效果最佳。 对照组线虫平均寿命为24.62天,0.35μg/m L DNLA组线虫平均寿命为27.61天,寿命延长12.14%;35℃热应激和2 m M百草枯氧化应激条件下,DNLA能提高线