大肠菌群测试片
产品名称：大肠菌群测试片
?产品规格： 24片/包
?产品用途：食品、饮用水、原料和食品加工设备表面大肠菌群的检测
产品说明
1、原理及适用范围
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生检验工作中。
大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。大肠菌群测试片（Filmplate TM Enumeration of Coliform BE211）含有选择性培养基、大肠菌群特异性半乳糖苷酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品。本产品适合于食品、饮用水及原料中大肠菌群的计数，也可用于食品加工设备表面的卫生检测。执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数（GB/T 4789.3—2010）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）
的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液。
2.2、接种：一般食品选2～3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯
水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固。每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱
内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、计数原则及报告方式
3.1、培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15CFU～150CFU之间的纸片
进行计数。
3.2、若两个稀释度的菌落数均在15CFU～150CFU之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数报
告之，即为每毫升（或每克）样品中的大肠菌群菌落数。
3.3、如果所有稀释度的测试片上的菌落数都小于15CFU，则计数稀释度最低的测试片上的
平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
3.4、如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
3.5、如果最高稀释度的测试片上的菌落数大于150CFU个时，计数最高稀释度的测试片上
的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。计数菌落数大于150CFU的测试片时，也可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20(纸片生长面积为20cm2)即为测试片上估算的菌落数。报告单位以CFU/mL（或CFU/g）表示。
4、附加说明
4.1、大肠菌群测试片不但可以大大缩短检测时间，而且检测结果与传统方法很接近，符
合率可达90％左右。
4.2、样品匀液的pH值应在 6.5～7.5之间，必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L
盐酸（HCl）调pH。
5、保存条件
本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。
霉菌酵母测试片
产品名称：霉菌酵母菌测试片
?产品规格： 24片/包
?产品用途：食品中霉菌酵母菌检验
产品说明
1、原理及适用范围
霉菌和酵母菌广泛存在于空气、水和土壤中，绝大部分对人体无害，但有些霉菌对人体有
害，比如说黄曲霉，它分泌的黄曲霉毒素是一种强致癌物。霉菌还可引起食物霉变，会刺激人体消化道、胃部等，严重的还可损伤肝脏，造成食物中毒。霉菌酵母菌测试片
（Filmplate TM Enumeration of moulds and yeasts BM207）由营养培养基、吸水凝胶和酶显色剂等组成。与传统方法相比，省去了配制培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，随时可以开始进行抽样检测，而且操作简便，通过酶显色剂的放大作用，使菌落提前清晰地显现出来，培养时间由一周缩短为72h。本品可用于各类食品（如糕点、饼干等）中霉菌和酵母菌的计数，非常适合于食品卫生检验部门和食品生产企业使用。执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数（GB/T 4789.2010）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL无菌水的取样罐或均质杯内，振摇30min，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL无菌水的试管内，反复吸吹50次成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。
2.2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将霉菌酵母菌测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固。每个稀释度接种两片，同时用无菌水做空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为28℃±1℃，培养48～72h。
3、结果判读
霉菌和酵母菌在测试片上生长后会显示蓝色斑点，霉菌菌落显示的斑点略大呈放射状，酵母菌落则较小而圆滑，许多霉菌在培养后期会呈现其本身特有的颜色。选择菌落数在10CFU～150CFU的纸片进行计数，计算两个测试片的平均值乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中霉菌和酵母菌的数目。
4、计数原则及报告方式
4.1计数
4.1.1 若所有稀释度的平均菌落数均大于150CFU，则对稀释度最高的测试片进行计数，按平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见例1）。
4.1.2 若所有稀释度的平均菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见例2）。
4.1.3 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之（见例3）。
4.2报告
4.2.1 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。
4.2.2 菌落数大于或等于100时，前三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
4.2.3 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
5、附加说明
由于霉菌常以孢子的形式在空气中到处传播，而多种样品是要求霉菌酵母菌不得检出，因此检测霉菌时需特别小心操作，取样用品、稀释用水和吸管吸头等都需仔细消毒，接种时尽量避免空气流动，动作要干净利落，每次最好用无菌水接两片空白对照，以免出现假阳性结果。
6、保存条件
本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。
大肠杆菌大肠菌群测试片
?产品名称：大肠杆菌大肠菌群测试片
?产品规格： 24片/包
?产品用途：大肠杆菌大肠菌群检测
产品说明
1、原理及适用范围
大肠杆菌（Escherichia coli）和大肠菌群（Coliform）都是存在于温血动物肠道和粪便的细菌，是条件性致病菌，主要造成水体污染，也可能引起食物中毒的发生。大肠杆菌大肠菌群测试片（Filmplate TM E.coli&coliform count plate BE203）是一种预先制备好的一次性培养基产品，可以同时检测大肠杆菌和大肠菌群，含有大肠菌选择性培养基、冷水可溶性的吸水凝胶和半乳糖苷酶（GAL）和葡萄糖醛酸酶（GUD）指示剂。大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总的大肠菌群数。本产品适合于食品及原料中大肠菌群的计数，如消
毒牛乳、冷饮和调味品等样品的检测，也可用于表面的卫生检测。执行标准：食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数——Petrifilm TM测试片法（GB/T 4789.38—2008）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，依次往下稀释。
2.2、接种：一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将大肠杆菌大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、结果判读
培养后大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总大肠菌群数。
4、计数原则及报告方式
4.1、选择菌落数在15～150个之间的纸片进行计数。
4.2、若两个稀释度的菌落数均在15～150之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数，即为每毫升（或每克）样品中的大肠菌群菌落形成单位数；
4.3、如果所有稀释度的测试片上的菌落数都小于15，则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之；如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之；
4.4、如果所有稀释度的菌落数都大于150，计数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。计数菌落数大于150的测试片时，也可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20（滤纸区面积为20cm2），即为测试片上估算的菌落数。报告单位以CFU/mL（或CFU/g）表示。
5、附加说明
5.1、样品匀液的pH值应在
6.5～
7.5之间，必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L 盐酸（HCl）调节pH。
5.2、我国的食品卫生标准大多都以大肠菌群（Coliform）作为检测指标，而欧盟等许多国家则以大肠杆菌（E.coli）作为检测对象，因此，本产品对于出口食品和国际航空配餐等企业具有更广泛的应用前景。
6、保存条件
本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。
菌落总数测试片
?产品名称：菌落总数测试片
?产品规格： 24片/包
?产品用途：饮用水、各类食品检测
产品说明
1、原理及适用范围
菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是最常用的微生物检测项目。菌落总数测试片（Filmplate TM Aerobic BB202）是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定，也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定（GB/T 4789.2-2010）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）
的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。
2.2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿
泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（BB202）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，
堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。
3、结果判读
细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。
4、计数原则及报告方式
4.1、若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。
4.2、若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算：
公式中：
N——样品中菌落数；
∑C——测试片上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；
n1——第一个适宜稀释度测试片数；
n2——第二个适宜稀释度测试片数；
d——稀释因子(第一稀释度)。
示例：
上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。
4.3、若所有的稀释度菌落总数均大于300CFU，则对稀释度最高的测试片进行计数，其他测试片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
4.4、若所有的稀释度菌落总数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍
数计算。
4.5、若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
4.6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.7、菌落总数的报告
4.7.1、菌落总数在100CFU以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。
4.7.2、大于或等于100CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
4.7.3、若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。
4.7.4、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
4.7.5、称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
5、表面取样方法
加1mL灭菌磷酸缓冲液（或生理盐水）在测试片上，至少静置10S，使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。
6、附加说明
6.1、菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80％以上，山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明，24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87％。
6.2、磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至
7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。
6.3、生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中，先煮开后进行分装，取9mL加入到10mL洁净试管中，盖上硅橡胶塞或棉纱塞，放入红外线消毒柜中消毒。
7、保存条件
本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
病原微生物快速检测箱 内置 单元 配置物品数量主要技术规格配置依据 快速检测试剂单元炭疽抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录炭疽抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼠疫抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼠疫抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录土拉热抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录土拉热抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录布鲁氏菌抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录布鲁氏菌抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼻疽抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼻疽抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录类鼻疽抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录类鼻疽抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录A型肉毒毒素快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录B型金球肠毒素快检试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录 现场采样设备单元一次性注射器10支5ml 卫生装备参考目录采血管10支5ml非抗凝卫生装备参考目录一次性采血针10支7# 卫生装备参考目录脑脊液管50个2ml 卫生装备参考目录碘药水棒1盒0.5%有效碘卫生装备参考目录医用棉签1包略卫生装备参考目录酒精棉球1盒医用，独立包装卫生装备参考目录止血带1根医用卫生装备参考目录医用乳胶手套2副医用，一次性，独立包装卫生装备参考目录医用防护口罩4个N95口罩卫生装备参考目录 现场采样辅助用品单元医用垃圾袋2个一次性，防护生物污染卫生装备参考目录剪刀1把12.5cm直尖卫生装备参考目录敷料镊1个12.5cm 卫生装备参考目录记号笔1支略卫生装备参考目录签字笔1支略卫生装备参考目录
食品微生物快速检测方法的研究进展 【摘要】本文从食品安全与卫生的角度出发，介绍了分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法、PCR技术检测法的检测原理及优缺点、在食品微生物检测中的应用。 【关键词】食品微生物、快速、检测、分子生物学 随着世界食品开发、生产、销售的迅速发展与人们生活水平的不断提高，研究和建立食品微生物快速检测方法以加强对食品卫生安全的监测越来越受到各国科学家的重视，其关键是及时、准确地检测出食品中的微生物。传统的检测方法准确性、灵敏性均较高，但有涉及的实验较多、操作繁琐、效率低等缺点。近年来，微生物的快速检测和自动化研究进展声速，主要包括微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等方面及其它们的结合应用。本文主要介绍分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法和PCR技术检测法 分子生物学方法 随着微生物学、生物化学和分子生物化学的飞速发展，对微生物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是从分子生物学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中，核酸探针和聚合酶链反应，以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术革命的新产物，已逐步应用于信源性病原菌的检测。 1 核酸探针法 细胞核酸DNA 和RNA 是唯一一类可以传递遗传信息的大分子，而每一种病原体都有独特的核酸片段，核酸探针是带有将已知核苷酸DNA或RNA片段用同位素或其它方法标记的基因特异片段，它主要利用碱基配对原理，使互补的2条核酸单链形成双链。 根据核酸探针中核苷酸成分的不同，可将其分为DNA探针或RNA探针；根据选用基因的不同又可分为两种，一种探针能同微生物中全部DNA分子中的一部分发生反应，它对某些菌属、菌种、菌株有特异性，另一种探针只能限制性同微生物中某一基因组DNA发生杂交反应，它对某种微生物中的一种菌株或仅对微生物中某一菌属有特异性。 美国GENE-TRAK公司研制出了脱氧核糖核酸杂交筛选比色法，主要利用特异的基因探针对沙门菌、李斯特菌和大肠杆菌的rRNA进行检测。检测步骤如下：先设计出与细菌rRNA互补的基因探针，待检样经过增菌培养后，溶解细菌并加入带有标记的探针进行液相杂交：如果待检样中存在靶细菌rRNA、荧光素标记的检测探针和多聚脱氧腺嘌呤核苷酸末端捕获将与目标rRNA序列杂交；此后，把包被多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸的固相载体测杆插入杂交溶液中，利用多聚脱氧腺嘌呤核苷酸与多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸间的碱基配对将杂交核酸捕获于固体载体中，并将固相载体真培养于过氧化酶-抗荧光素接合剂中，使探针上的荧光素与结合剂结合；最后，将固相载体置于酶底物-色原溶液中，使过氧化酶与底物反应，在450nm处测量吸光度值，以确定样品中是否存在靶细菌。 总的来说，核酸探针技术是一种理想的快速检测技术，它最大优势是特异性和敏感性，而且兼备组织化学染色的可见性和定位性，主要用于食品致病性病原微生物的检测。但是也存在一定问题，如每检测一种菌就需要制备一种探针，而且目前尚未建立所有菌种的探针；要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养；对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测出，所以该技术还有待进一步发展。 2基因芯片技术 基因芯片的基本原理是将各种寡核苷酸点样于芯片表面，微生物样品DNA经PCR扩增制备荧光标记探针，然后再与芯片上寡核苷酸点杂交，最后通过扫描仪定量和分析荧光分布模式来确定检测样品是否存在某些特定微生物。
微生物限度检查方法（平皿法） 验证方案 目录 一、验证方案的制定 二、验证方案的起草与审批 三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案 1．验证目的和原理 2．验证方法步骤 3．试验实施 3.1试验前的准备 3.2验证试验操作 3.3试验结果 4．验证结果评价分析
5．附件 微生物限度检查方法（平皿法）验证文件一、验证方案的制定 二、验证方案的起草与审批 1验证方案的起草
2．验证方案的审核与批准 验证方案审核人：审核日期：年月日验证方案批准人：批准日期：年月日三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案 1．验证目的和原理 1.1 验证目的 为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。 1.2 原理 通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。 2．验证方法步骤 2.1验证前的准备进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。 2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。 2.3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。 3．试验实施 3.1试验前的准备 3.1.1主要仪器设备：高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、
(一)、概述 食用被微生物污染的食品而导致的疾病，称作食源性疾病。导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥用，人类对病菌的抵抗能力却在不断下降，食源性疾病一直呈上升的趋势。因此，对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性，常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染，这些方法需要一定的培养时间，少则2～3天，多至数周，才能确定。而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面，以做到快速、简便、准确。快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。 （二）、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下： 1、活细胞计数的改进方法 （1）、旋转平皿计数方法 （2）、疏水性栅格滤膜法（HGMF）或等格法（isogrid method） （3）、血膜系统（Pertrifilm） （4）、酶底物技术（ColiComplete） （5）、直接外荧光滤过技术（DEFT） （6）、“即用胶”系统（SimPlate） 2、用于估计微生物数量的新方法 （1）、阻抗法 （2）、A TP生物发光技术 3、其他方法 （1）、微量量热法 （2）、接触酶测定仪 （3）、放射测定法 （三）、食品中沙门氏菌的快速筛检方法 1、沙门氏菌显色培养基法 2、免疫学方法 3、分子生物学方法 4、自动传导法 （四）、大肠杆菌O157：H7快速检测方法 大肠杆菌O157：H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型，自1982年在美国被分离并命名以来，陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关，是食源性疾病的一种重要致病菌。E.coli O157：H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛。近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点，E.coli O157：H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。利用其生化特征、免疫原性建立的方法以及现代分子生物学技术的应用，可以从多方面对E.coli O157：H7进行检测。 1、E.coli O157：H7鉴别培养基及显色培养基 2、免疫学检测方法 3、分子生物学方法 （五）、金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈普通串状排列无芽孢，无鞭毛，不能运动。该菌在自然界中分布广泛，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，是最常见的化脓性球菌之一，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌食物中毒是其肠毒引起的，目前已确认的肠毒素至少有A,B,C1,C2,C3,D,E和F8个型。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的中毒爆发事件，近年来
微生物检验（完整版） 名解 微生物：是一群个体微小结构简单肉眼不能看见的微小生物的总称 种：亲缘关系较近的微生物群体在进化发育阶段上有一定的共同形态和生理特征 微生物学：生物学的一个分支是研究微生物在一定条件下的形态结构生理生化遗传变异特性及微生物的进化分类生态等生命活动规律以及微生物之间与人类动植物自然界互相关系的一门科学 抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质 细菌素：是某些细菌菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质 条件致病菌：正常菌群在宿主体内具有相对稳定性一般不致病 消毒：指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法 灭菌：指杀灭物体上所有的微生物的方法 防腐：指防止或抑制微生物生长繁殖的方法 无菌：指没有货的微生物的存在 质粒：是细菌染色体外的遗传物质也是环状闭合的双联DNA分子比染色体小存在于细胞质中可自主复制 突变：是指细菌遗传物质的机构发生突然而稳定的改变所致的变异现象可遗传给后代 基因转移：外源性物质由供体菌转入受体细胞内的过程 基因重组：供体菌的基因进入受体菌细胞并在其中自行复制与表达或矛受体菌DNA整合在一起的过程 病毒：是一类个体微小结构简单只含一种核酸只能在活的易感细胞内以复制方式增殖的
非细胞型微生物 复制周期：病毒的增殖被人为分成吸附穿入脱壳生物合成装配成熟与释放七个步骤的完整过程 缺陷病毒：是指因病毒基因组不完整或因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒 顿挫感染：病毒进入宿主细胞若细胞缺乏病毒复制所需的酶能量和必要成分等则病毒无法合成自身成分不能够装配和释放子代病毒的现象 干扰现象：两种病毒感染同一种细胞时可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象 人工自动免疫：是将疫苗等免疫原接种于人体刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答使机体获得特异性免疫力 人工被动免疫：是指注射含某种病毒特异性中和抗体的免疫血清等一系列细胞因子是机体立即获得特异性免疫 干扰素：是由病毒或干扰素诱生剂作用于中性粒细胞成纤维细胞或免疫细胞产生的一种糖蛋白 致病性：一定种类的病原微生物在一定的条件下能在特殊的宿主体内引起特定疾病的能力半数致死量：在规定时间内通过一定途径能使一定体重或年龄的某种动物半数死亡或感染需要的最小病原体数量或毒素量 急性感染：发作突然病程较短一般是数天或数周 局部感染：病原体侵入机体后局限就在一定部位生长繁殖引起病变的一种感染类型 毒血症：致病菌侵入宿主体后只在机体局部生长繁殖病菌不进入血液循环但其产生的外毒素入血引起特殊的毒性症状 败血症：致病菌侵入血流后在其中大量繁殖并产生毒性产物引起全身性毒性症状 内毒素血症：革兰阴性菌侵入血流并在其中大量繁殖崩解后释放出大量毒素也可有病灶
病原微生物检测新方法 检测高致病性病原微生物样本时存在前处理困难，步骤多、时间长、重复性与可扩展性差、需要高温灭活等问题，所以在临床实验室难以实现标准化。自动聚焦声学技术是在传统超声波处理基础上的技术革新，聚焦声波能够以极低的能量输入获得良好的样本处理结果，避免传统超声能量过剩可能引起的样本处理过度及热损伤。 AFA技术在DNA剪切中的准确稳定的表现使其在NGS领域备受推崇。其实该技术在微量珍贵以及难处理的医学样本制备中也有不俗的表现，可有效提高生物大分子得率，获得足够且高质量的核酸样本用于下游分析。这是现有条件下提高检测灵敏度的有效手段，可减低可疑或者假阴性结果。 有数据表明：对于珍贵/微量及难处理的样本，基于AFA聚焦超声技术的生物大分子制备方案，其优势不仅仅表现在得率，纯度，完整性等表面价值，更重要的是提升了下游数据价值：1.qPCR 扩增效率提高；2医学样本如痰液中病毒核酸有效释放；3宏基因组样本有效破碎以便下游检出更多革兰氏阳性菌；4
文库复杂度提升，基因密集区以及GC富含区测序深度提升；5融合基因检出提升等。 呼吸道合胞病毒（Human Respiratory Syncytial Virus, RSV）是一种RNA病毒，可导致发热、鼻炎、咽炎及上呼吸道感染等症状。在老年人患者中，病毒载量较低，为了保证检测的准确性，需要灵敏度更高的检测方法如RT-PCR法。 在呼吸道合胞病毒的鉴定案例中，比较了聚焦超声技术(AFA)处理痰液结合MNAzyme探针法与Glass beads研磨方法处理痰液结合探针法对RSV病毒提取及扩增效率的影响。 结果显示，与Glass beads方法相比，经Covaris AFA超声法处理后提取的核酸样本，检测到的Ct值明显减小(变化范围1.0 - 4.0 log)，即经Covaris AFA 超声法处理的样本提取的病毒RNA得率更高。尤其是在7号样品中，使用Glass beads方法处理的样本，检测RSV-B呈阴性，而Covaris方法处理的样本检测结果为阳性。 在这个案例中，Covaris AFA超声法处理痰液的时间仅为30秒。这是因为聚焦超声技术的声波频率（500kHz）远远高于普通水浴超声，集中的能量可以
精心整理 摘要： 微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 体积，是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重
量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 取一 5为（ 可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母
（activity dry yeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。 比浊法： 微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸 公司的紫外 OD600 或数法 血球计数板法: 血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，
病原微生物的检测方法研究进展 摘要：本文章主要对病原微生物的检测方法研究进展进行综述，具体介绍食品、环境方面的病原微生物的检测方法研究进展。以及本人对病原微生物检测方法发展的一些看法及体会。 关键词：病原微生物检测方法PCR技术食品检测 Abstract: This article mainly summarized research progress on detection methods of pathogenic microorganism，Specific introduction food, environment research progress of methods used for the detection of pathogenic microorganisms. And I have some views on the development of pathogenic microorganism detection method and experience Key words: Pathogenic microorganisms Detection method PCR technology Food testing 病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。 病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒。本文主要介绍的是在食品、环境、医药方面病原微生物检测方法的应用及研究，目的在于了解病原微生物的检测方法及其研究进展，增加生物学科普知识。 1病原微生物概述 1.1 病原微生物概念 病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。 病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒。
食品病原微生物快速检测技术及研究进展 王 辉，张 伟，王 燕，顾 希 （山东东营出入境检验检疫局， 山东东营 257091） 摘 要：食品病原微生物传统检验方法费时、敏感度低、特异性差；随社会和食品工业快速发展， 研究和建立食品病原微生物快速检测方法越来越受到世界各国重视。该文介绍免疫学技术、分子生物学技术、代谢技术、仪器分析技术、生物传感器技术等检测微生物基本原理，及这些技术在食品病原微生物检测中研究进展。关键词：病原微生物；食品检测；食品安全 Research progress on rapid detection technology of pathogenic microorganism in foods WANG Hui ，ZHANG Wei ，WANG Yan ，GU Xi （Dongying Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau ， Dongying 257091，Shandong ，China ）Abstract ：Co nventi o nal m et ho d are ti m e –co n sum ing ，l o w s en s itivity and h yp os en s itivity in f oo d pat ho geni c m i c r oo rgani sm dete c ti o n ，wit h t h e rapid devel o p m ent o f soc iety and f oo d pr o d uc ti o n in t h e w o rld ，s t u dy and t h e e s tabli shm ent o f f oo d pat ho geni c m i c r oo rgani sm rapid dete c ti o n te ch n o l o gy i s in c rea s ingly paid attenti o n t o by vari ous cou ntrie s. In t h i s arti c le ，t h e ba s i c prin c iple o f i mmu n o l o gy te ch n o l o gy ，mo le cu lar m i o l o gy te ch n o l o gy ，m etab o l o gy te ch n o l o gy ，in s tr um ental analy s i s te ch n o l o gy ，bi os en so rte te ch n o l o gy were intr o d uc ed ，and t h e pr o gre ss o f t h e s e dete c ti o n te ch n o l o gie s o n f oo d pat ho geni c m i c r oo rgani sm were reviewed .Key words ：pat ho geni c m i c r oo rgani sm ；f oo d dete c ti o n ；f oo d s afety 中图分类号：TS207.4 文献标识码：A 文章编号：1008―9578（2012）04―0001―05收稿日期：2012–03–06作者简介：王辉（1982~ ），男，工程师，硕士，研究方向：食品微生物快速检测。 随着世界经济全球化、贸易自由化和食品工业化迅速发展，食品安全已成为全球关注热点问题，而食品中病原微生物是影响食品安全最主要因素。食品病原微生物传统检验方法步骤非常繁琐，需耗费大量人力、物力，且检测周期长、灵敏度较低，难以满足目前国内外对食品安全检测要求。因此，研究和建立灵敏度更高、特异性更强、简便快捷食品病原微生物快速检测技术迫在眉睫。本文对目前国内外改进和开发一些病原微生物快速检测技术及其在食品方面应用进行综述。1 免疫学技术 免疫学检测技术是应用免疫学理论而设计一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌细胞因子的实验方法，其基本原理是利用抗原、抗体间能发生特异性免疫反应以检测病原。1.1 免疫荧光技术（IF T ） 免疫荧光技术是将不影响抗原、抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应抗原（或抗体）结合后，形成免疫复合物在一定波长光激发下可产生荧光，借助荧光显微镜可检测或定位被检抗原。目前免疫荧光技术可用于沙门氏菌、葡萄球菌毒素、E.Coli O157和单核细胞增生李斯特氏菌等快速检测。张晓 华等〔1〕利用副溶血弧菌免疫家兔制备多克隆血清，建立中国对虾病原菌―副溶血弧菌间接荧光抗体检测技术，不仅可用于诊断发病感染对虾，也可用于检测带菌状态或未发病感染对虾。1.2 酶免疫技术 酶免疫技术是利用抗原、抗体反应高度特异性和酶促反应高度敏感性，通过肉眼或显微镜观察及分光光度计测定，达到在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体部位，及对其进行定量目的。根据抗原、抗体反应是否需要分离结合和游离酶标记物而分为均相和非均相两种类型。非均相法较常用，包括液相与固相两种免疫测定法。非均相酶固相免疫测定法即ELISA 在目前应用最为广泛。Cryan 等〔2〕在研究大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli.）内毒素时，将ELISA 法与DNA 探针技术等进行比较，发现ELISA 技术更灵敏、快速。此外，ELISA 法还可用于食品介导病毒检测。葛翠翠等〔3〕使用双抗夹心ELISA 检测食品中大肠杆菌O157∶H7，结果表明，该法稳定性、重复性良好，对纯培养菌液检出限为105 cfu/mL，具有良好敏感性及特异性。杨静〔4〕等用沙门氏菌特异性单克隆抗体CB8和de7建立直接检测沙门氏菌方法，即用被检样品直接包被ELISA 板固定加酶标抗体作用一段
微生物检测手段及注意事项
微生物检测手段及注意事项 微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文对生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而
测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 1. 微生物计量法 1.1 体积测量法 又称测菌丝浓度法，通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10 mL）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5 min）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法 可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10~20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1~5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80 ℃或40 ℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40 ℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（Activity Dry Yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
一、总则 1.范围 本规范规定了化妆品微生物检验的基本要求。 本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。 2.仪器和设备 2.1 天平。 2.2 高压灭菌器。 2.3 振荡器。 2.4 三角瓶，250mL。 2.5 玻璃珠。 2.6 琉璃棒。 2.7 刻度吸管，1mL、10mL。 2.8 研钵或均质器。 2.9 恒温水浴箱。 3.培养基和试剂 3.1 生理盐水 成分： 氯化钠8.5g 蒸馏水加至1000mL 溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90 mL，103.43kPa (121℃15 lb)20min高压灭菌。
3.2 SCDLP液体培养基 成分： 酪蛋白胨17g 大豆蛋白胨3g 氯化钠5g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖1g 吐温80 7g 蒸馏水1000mL 制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH为7.2～7.3分装，103.43 kPa (121℃15 lb)20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。 注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。 3.3 灭菌液体石蜡。 3.4 灭菌吐温80。 4.样品的采集及注意事项 4.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。 4.2 供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。 4.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。 4.4 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。
1.菌落总数操作步骤 1.1检样稀释及培养 1.1.1以无菌操作,取样25 g放入225mL灭菌生理盐水或灭菌乳钵中，经充分振摇作成1：10均匀稀释液。 1.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。 1.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。 1.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。 1.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃营养琼脂培养基，注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照 1.1.6待琼脂凝固后，翻转平板(使平皿底朝上)，置36±1℃温箱内培养48±2h。 1.2菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 1.3菌落计数的报告 1.3.1平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。 1.3.2 稀释度的选择 1.3. 2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。 1.3. 2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。 1.3. 2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。 1.3. 2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)。 1.3. 2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6)。 1.3. 2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 1.3. 2.7 若只有一个稀释度菌落在适宜计数范围内，计算平均值X 稀释倍数；作为结果；若两个连续稀释度的菌落都在适宜计数范围内时按公式计算：
病原微生物的检验项目及结果解释 微生物检查包括：细菌、真菌、衣原体、支原体及病毒等。这对于查明致病原因 和选择用药十分重要。但除细菌和真菌外，直接查找方法比较复杂。细菌培养， 采集血、痰、咽试子、大便、小便、创面分泌物等标本进行培养，看有无致病菌 生长，正常应为阴性或少量非致病菌；真菌检查，
标本涂片或培养，检出真菌为 不正常。 病原微生物的检验主要是检测与l 临床患者致病 性有关的病原性微生物，对感染性疾病进行快速、准确地诊断，密切结合临床提出及时有效的治疗方案，防止微生物产生耐药性和医院内感染的发生。 基础知识 1.什么是微生物?什么是病原微生物? 微生物是需借助光学显微镜或电-y：显微镜放大观察到的结构简单，个体微小的生物的总称。微生物的种类很多，医学微生物尤其是临床微生物主要有细菌、病毒、真菌、支原体、衣原体等。
绝大多数对人微生物在自然界中广泛存在，与人类和自然界其他生物共生共存，这部分微生只有少部分可以引起人类和动植物发生疾病，类和自然界是有益的， 痢疾杆菌可以引起痢疾物才称为病原微生物，比如结核分枝杆菌可引起结核病， 等。 2.什么是细菌?细菌分哪几种? 细菌是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。其体积微小，以微米作为测量单位，无色半透明，只有经过染色才能观察到细菌的轮廓及其结构。经革兰染色，可将细菌分为两大类，即革兰阳性菌和革兰阴性菌。细菌主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成，有的细菌还有夹膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。根据形状则可分为三类，即：球菌、杆菌和 螺旋菌(包括弧形菌)。
?病毒分哪几种?什么是病毒3. 病毒是结构最简单、体积最微小(纳米)的一类非细胞型微生物，介于生命和非生 命之间的一种物质形式，其必须严格寄生在活细胞内，含有单一种核酸即脱氧核糖核酸(DNA) 或核糖核酸(RNA) 的基因组和蛋白质外壳，没有细胞结构，对抗生素不敏感，但对于干扰素敏感。按传播途径病毒可分为呼吸道病毒、胃肠道病毒、经性传播感染的病毒和狂犬病毒等。按感染部位与症状特征则分为肝炎病毒、出血热病毒、疱疹病毒、侵犯神经系统的病毒和肿瘤病毒等。 4.什么是真菌? 真菌是一大类具有细胞壁和典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。细胞核高度分化，有核膜和核仁，细胞内有完整的细胞器。 5.什么是支原体和衣原体?
微生物快速检测方法及应用进展 随着人们生活水平不断提高，各种安全问题越来越受到人们的重视，微生物的污染问题也相应地备受关注。在食品和环境等各个方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物将大量繁殖而导致食源性疾病或环境污染甚至医院内感染。特别是近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏，导致感染的致病菌的种类越来越多，病原微生物对人类的威胁越来越大。传统的检验方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与［1，2］。所以，迫切需要准确、省时、省力和省成本的快速检验方法。本文对微生物快速检测方法的进展情况及实际应用进行综述，以利于预防食源性疾病及公共卫生突发事件的发生。 1 即用型纸片法 3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物测试片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数［3］。由RCP Scientific Inc 公司开发上市的Regdigel系列，除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的产品［4］，这两个系列的产品与传统检测方法之间的相关性非常好。如用大肠菌群快检纸片检测餐具的表面，操作简便、快速、省料，特异性和敏感性与发酵法符合率高，已经被列为国标方法。使用时应正确掌握操作技术和判断标准，从而达到理想的检测效果［5］。美国3M公司生产的PF(Petrifilm)试纸还加入了染色剂、显色剂，增强了菌落的目视效果，而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。霉菌快速检验纸片，应用于食品检验中的霉菌具有操作简便，仅需36℃培养，不需要低温设备；快速，仅需2 d就可观察结果，比现在的国家标准检验方法缩短3～5 d，大大提高了工作效率。纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义，且菌落典型，易判定。纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点而建立的一种酶—底物反应法。只需检测食品中大肠菌群、大肠杆菌的有关酶的活性，将荧光产物在365 nm紫外光下观察即可。同时纸片可高压灭菌处理，4℃保存，简化了实验准备、操作和判断［6］。但由于它们价格昂贵，限制了在基层单位的实际应用。 2 生物化学技术 2.1 PCR技术PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DNA片段，再通过扩增产物来识别细菌。由于PCR灵敏度高，理论上可以检出一个细菌的拷贝基因，因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚至不增菌，即可通过PCR进行筛选，节约了大量时间，但PCR技术也存在一些缺点：食物成分、增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有抑制作用，可能导致检验结果假阴性；操作过程要求严格，微量的外源性DNA进入PCR后可以引起无限放大产生假阳性结果，扩增过程中有一定的装配误差，会对结果产生影响。由于以上原因，PCR技术对操作者的自身素质要求很高，对于基层单位而言难以做到。短时间内也不会有经济效益和社会效益，因此影响了这项技术在基层的应用。 2.2 基因探针技术基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单链在适当条件下互补形成稳 定的或链的原理，采用高度特异性基因片段制备基因探针来识别细菌。基 因探针的优点是减少了基因片段长度多态性所需要分析的条带数。如法国生物一梅里埃公司的 基因探针检测系统，对于分离到的单个菌落，30 min完成微生物的确证试验［7］， 基因探针的缺点是不能鉴定目标菌以外的其他菌。 3 选择、鉴定用培养基法
◆大肠埃希菌 4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。 思考题： 1.最可能的病原菌是什么？ 2.针对该病例应做哪些微生物学检查？ 提示： 4岁患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。 应及时进行常规微生物学检查并快速进行毒力和血清型等特征鉴定以确定防治措施。 ◆志贺菌属 患者，男，23岁。急性腹痛2天，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38℃，血压正常，白细胞增高，未见阿米巴原虫。 思考题： 1.可初步诊断为哪种疾病？ 2.采用哪种方法能进行快速诊断？ 提示： 急性腹痛2天，每天10次左右脓血便，有明显里急后重感，肠鸣音亢进、低热等临床表现，初步诊断为急性细菌性痢疾 急性细菌性痢疾起病急，病情进展快，进行快速诊断显得特别重要。此案例可根据各医院开展的以上四种快速诊断方法进行快速诊断。 ◆沙门菌属 患者，女，25岁。发热6天入院，食欲不振、乏力、腹胀。查体：体温40℃，相对缓脉，肝脾略肿大，腹部见玫瑰疹。血细胞无变化。便中查到少量脓球和白细胞，但2次血和粪便培养均未发现致病菌。两次取血做肥达试验，其结果如下：入院时TH1:80，TO：1:80 PA：1:40 PB:1:40;入院 12天TH 1:320，TO：1:320 PA：1:40 PB:1:20 思考题： 1.根据此结果可初步诊断为什么疾病？ 2.为进一步确诊，应首先做什么检查？ 提示： 患者持续发热6天，食欲不振、乏力、腹胀。体检体温40℃，相对缓脉，肝脾略肿大，腹部见玫瑰疹。可初步诊断为肠热症。对患者进行两次取血做肥达试验，第二次结果较第一次高4倍，考虑伤寒可能性较大。患者的2次血和粪便中未检出细菌，为进一步确诊，应及时对患者进行骨髓伤寒沙门菌的分离培养和鉴定。 ◆霍乱弧菌 某地举行600余人参加的婚宴，70人相继出现腹泻、呕吐、腹痛，患者中有6人
微生物快速检测方法及应用进展【关键词】微生物快速检测 随着人们生活水平不断提高，各种安全问题越来越受到人们的重视，微生物的污染问题也相应地备受关注。在食品和环境等各个方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物将大量繁殖而导致食源性疾病或环境污染甚至医院内感染。特别是近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏，导致感染的致病菌的种类越来越多，病原微生物对人类的威胁越来越大。传统的检验方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与［1，2］。所以，迫切需要准确、省时、省力和省成本的快速检验方法。本文对微生物快速检测方法的进展情况及实际应用进行综述，以利于预防食源性疾病及公共卫生突发事件的发生。 1 即用型纸片法 3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物测试片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数［3］。由RCP Scientific Inc 公司开发上市的Regdigel系列，除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的产品［4］，这两个系列的产品与传统检测方法之间的相关性非常好。如用大肠菌群快检纸片检测餐具的表面，操作简便、快速、省料，特异性和敏感性与发酵法符合率高，已经被列为国标方法。使用时应正确掌握操作技术和判断标准，从而达到理想的检测效果［5］。美国3M公司生产的PF(Petrifilm)试纸还加入了染色
剂、显色剂，增强了菌落的目视效果，而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。霉菌快速检验纸片，应用于食品检验中的霉菌具有操作简便，仅需36℃培养，不需要低温设备；快速，仅需2 d就可观察结果，比现在的国家标准检验方法缩短3～5 d，大大提高了工作效率。纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义，且菌落典型，易判定。纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点而建立的一种酶—底物反应法。只需检测食品中大肠菌群、大肠杆菌的有关酶的活性，将荧光产物在365 nm紫外光下观察即可。同时纸片可高压灭菌处理，4℃保存，简化了实验准备、操作和判断［6］。但由于它们价格昂贵，限制了在基层单位的实际应用。 2 生物化学技术 2.1 PCR技术 PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DNA片段，再通过扩增产物来识别细菌。由于PCR灵敏度高，理论上可以检出一个细菌的拷贝基因，因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚至不增菌，即可通过PCR进行筛选，节约了大量时间，但PCR技术也存在一些缺点：食物成分、增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有抑制作用，可能导致检验结果假阴性；操作过程要求严格，微量的外源性DNA进入PCR后可以引起无限放大产生假阳性结果，扩增过程中有一定的装配误差，会对结果产生影响。由于以上原因，PCR技术对操作者的自身素质要求很高，对于基层单位而言难以做到。短时间内也不会有经济效益和社会效益，因此影响了这项技术在基层的应用。 2.2 基因探针技术基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单