蛋白超滤操作规程
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蛋白超滤操作规程
1.选取适当规格的超滤管(orencia和Her1-ECD-his用
10KD的超滤管,IL17A-his用3KD的超滤管),先将之前保存在超滤管中的PBS倒掉,加入一些新的PBS,7500g离心5min,洗一下超滤管。
2.倒掉超滤管中的PBS,加入要超滤浓缩的样品,7500g离
心至截留部分剩余200-300ul液体(orencia用时8min,Her1-ECD-his8min,IL17A-his16min)。为了避免流下去的液体中可能含有蛋白而导致浪费,先将流下去的液体收集到一个管中。
3.向上层截留住的液体中加入4mlPBS,混匀后7500g离心至
截留部分剩余200-300ul液体。
4.重复第3个步骤三次,取出最后一次截留住的200-300ul
液体,以PBS作空白,测浓度即可。超滤管中的废液倒掉,加入PBS保存在4℃即可。
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