2015年上半年洛阳市商品住宅供应153.18万㎡，环比下降33.24%；截止2015年6月底全市商品住宅库存量为443万㎡，整体呈现逐年下降态势。2015年上半年，得益于政府出台的各大利好楼市政策，洛阳市商品住宅库存压力得到有效缓和，去化周期由25个月下降至17个月。
其中，洛阳市洛龙区是是全市的经济、文化、金融和商贸中心，地理位置优越，设施配套齐全，是大部分富有人群在洛阳的居住意向地，升值潜力可期。其2015年上半年商品住宅成交量为41.55万㎡，占全市商品住宅成交量的31.3%，占据洛阳市主要市场份额。洛龙区2015年上半年商品住宅成交均价为5345元/㎡，为全市最高水平。2015年上半年洛龙区商品住宅供应面积为74.96万㎡，去化周期约为9个月，去化情况较为乐观。
洛阳市伊滨区发展定位是“城市综合新区”，生态环境优美，是未来10年洛阳城市发展的主要方向。伊滨区2015年上半年商品住宅成交面积为7.79万㎡，供应面积为1.15万㎡，商品住宅市场整体呈供不应求状态，基本不存在去库存压力。位于伊滨区的洛阳碧桂园项目在建业态包括别墅、高层洋房、综合楼等，其中别墅已售罄，高层洋房去化率超过40%。可见，洛阳市伊滨区商品住宅市场潜力巨大，开发空间广阔。
数据来源：洛阳市房产管理局
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细胞周期同步化 借助某种实验手段(自然地或经人为地),使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相的现象。 细胞周期同步化分：自然同步化和人工同步化。 自然同步化：是自然界存在的现象, 在动、植物细胞都有发现。它们不受人为条件的干扰, 因而有可能在接近自然的条件下进行观察, 但自然同步化的细胞群体受到诸多条件的限制, 对结果有很大的影响。 人工同步化：是利用细胞培养的方法, 用各种理化因素处理获得的同步化生长的细胞。常用的细胞人工同步化的方法分为选择同步化、诱导同步化或者两者的结合。 同步化分类及方法 （一）自然同步化 1．多核体 如粘菌只进行核分裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中，进行同步化分裂，使细胞核达108，体积达5~6cm。疟原虫也具有类似的情况。 2．某些水生动物的受精卵 如海胆卵可以同时授精，最初的3次细胞分裂是同步的，再如大量海参卵受精后，前9次细胞分裂都是同步化进行的。 3．增殖抑制解除后的同步分裂 如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。 （二）人工同步化 1．选择同步化 1) 有丝分裂选择法：使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃，分裂指数高,MI高。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，这样每隔1h摇一次并收获一次，倾出培养液贮存于2~4℃冰箱中保存可连续收集24h，则可获得一定数量的中期细胞。其优点是，操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害，缺点是获得的细胞数量较少。（分裂细胞约占1%～2%） 2）细胞沉降分离法：不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比，因此可用离心的方法分离。其优点是可用于任何悬浮培养的细胞，缺点是同步化程度较低。 2．诱导同步化 1）DNA合成阴断法：选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成，而不影响其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断在S期或G/S交界处。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高浓度ADR、GDR和TDR，均可抑制DNA合成使细胞同步化。其中高浓度TDR 对S期细胞的毒性较小，因此常用TDR双阻断法诱导细胞同步化：
工程施工阶段工期索赔的计算 摘要 本文主要分析了工期索赔的种类、特点以及在工程工期索赔中常用的几种计算方式。并对几种计算方式进行了详细的说明和比较。对于不同种类的工期索赔，索赔的计算方法也不相同。同时还说明了工期索赔与费用索赔之间的关系，并举例分析了由工期索赔引起的费用索赔。 关键词：工期索赔、计算方法、比较。 Abstract This article mainly analyzes the type of project claims,characteristics and claims of several commonly used methods of calculation in the construction period And explained and compared several calculation methods in detail. The claims are calculated differently for different types of duration claims. It also illustrates the relationship between duration claims and cost claims and provides an example of cost claims arising from time limit claims. Keywords: duration claim, calculation method, comparison. 前言 在工程管理中，工程索赔是一项重要的管理工作。如果总工期被延误，业主要向施工方索赔，而施工方要追究责任，处理造成总工期延误的团体和个人。这就涉及到责任的分摊问题。而责任的分摊不但是体现实际的工作，更是涉及到一系列的重大理论问题。在过去，人们研究的重点放在责任分摊的政策问题上，以及行为科学中的人际关系问题上，尤其是公平原则问题上。之所以这样做，认为造成总工期延误的原因是很容易搞清楚的。但是随着科学技术的迅猛发展以及经济国际化的特点，重大工程项目迅速增多。重大项目的特点是投资多，工期长。工期时间的拉长，遇到各种不稳定的因素，不可知的因素越多，因而总工期延误的可能性就增大。又因为工程投资巨大，哪怕一点微小的误差也会造成巨大的损失。 正文 如今，随着建设工程项目的复杂化，多样化，重大工程总工期的延误已经成为世界性的现象。因此这也使工期索赔变得更加突出，尤其是重大工程计划的索赔的数量巨大、工期延误原因多、内容复杂、责任界定困难、后果严重。工期不能如期完工，业主不能按时接收并获得收益：不能移交工程，承包商也要为此付出很多，还要承担合同中通常规定的误期损害赔偿费。所以，工程工期索赔问题对于业主和承包商都很重要。 工期延误有多重分类方法，分类如下， 按索赔结果可以划分为， 1.可原谅可补偿的延误：由于业主或者工程师的错误或失误而造成的工期的
细胞周期同步化 在细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中，其中有少数细胞在进行有丝分裂活动，其余细胞分别处于G1、S和G2各期。不同时相的细胞对药物干预存在不同反应，会影响实验的重复性，因此，需要获得周期一致性的细胞。利用细胞同步化技术可使细胞大 量的处于同一细胞时期，并可获得该时期大量的物质，如细胞中期时的染色体。细胞周期同步化(synchronization)是指为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，借助某种自然或人为的实验手段,使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相( 除了G0期的细胞)的现象。细胞同步化本质上包括用一定的方法获得一定数量的同步化细胞群和使细胞进入同步化生长的两层含义。 DNA 合成抑制法是通过抑制DNA合成将细胞同步于同一时期的方法。高浓度TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法是目前常用的抑制DNA 合成的同步化方法。它可逆地抑制DNA 合成，而不影响其他时期细胞的转运，最终可将细胞群阻断在S 期或G1 /S 交界处。其原理是: TdＲ是细胞DNA 合成不可缺少的前体，但向培养基中加入过量TdＲ，可形成过量的三磷酸腺苷，后者能反馈抑制其他核苷酸的磷酸化，从而抑制DNA 合成。它将细胞同步于G1 /S 期交界处，同步化程度高，适用于任何培养体系，可将几乎所有的细胞同步化，但是容易产生非均衡生长，个别细胞体积增大。TdＲ双阻断法因为简单易行且可逆，在肿瘤药理方面对细胞周期同步化的实验中得到了广泛的应用。羟基脲、5-氟脱氧尿嘧啶、阿糖胞苷、氨甲蝶呤和高浓度ADR、GDR也属于DNA合成抑制剂，它们与TdR作用相似，均可通过抑制DNA合成达到同步化的目的。 中期阻断法是利用破坏微管的药物将细胞阻断在M期从而得到同一时期细胞的方法，常用的药物有秋水仙素等。秋水仙素通过抑制微管的聚合，进而抑制有丝分裂装置的形成，将细胞阻断于有丝分裂中期然后再释放使细胞达到同步化。中期阻断法非平衡生长问题不明显，但可逆性比较差，当阻断时间过长时，许多细胞产生异常分裂。过去研究中也发现，同步后的细胞的生长能力明显不如撤去阻断剂后得到的S期细胞旺盛。秋水仙胺、Nocodazole也是目前常用的中期阻断剂。 经过同步化之后的细胞可以通过流式细胞术对其周期进行分析。将细胞用PI（碘化丙啶）染液进行染色，使用流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。由于细胞的DNA含量在不同时期有显著的差异，因此可以将细胞分成 G1/G0期（1倍），S期（1-2倍）和G2/M期（2倍）。流式细胞仪可以根据DNA含量在不同时间内的变化,从而确定细胞周期的长短,也可以直接标记DNA复制（放射性同位素标记）,统计细胞数量与标记细胞的百分比,对细胞周期进行综合分析. 连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程为细胞周期(cell cyc1e)。细胞周期包含四个阶段：①G1期(first gap),又称合成前期，指前一次有丝分裂完成到DNA复制前的一段时期；②S期(synthesis phase),即DNA合成期，为真核细胞分裂(cell pision)间期中进行DNA合成的阶段；③G2期(second gap),为DNA合成后期，指DNA合成结束至有丝分裂开始之间的一个阶段；④M期 (mitosis or pision) ,又称D期，是染色体真正开始分离时期。细胞周期又可分为有丝分裂期（M期）和分裂间期(即G1→S→G2)两个时期。尽管细胞周期中各期的持续时间因不同细胞类型而异，但相对而言M期最短，S期较长。流式细胞仪（flow cytometer；FCM）的工作原理是在样品管中放入待测细胞，在气体的压力下使待测细胞进入充满鞘液的流动室。在细胞流动室里单细胞悬液被鞘流液包绕通过流动室内一定孔径的孔，形成细胞柱。然后通过对流动液体中单列的细胞进行逐一检测，得到单个细胞的光散射和荧光指标，在功能水平上定量分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等的物理、化学特征等多个参数。流式细胞
工程施工进度计划对比纠偏措施 为保证总工期目标的实现和形象进度节点工期满足要求，公司将在整个工程施工过程中，对工程实际进度与计划进度进行实时监控对比，当发现偏差时及时纠正：组织措施上由项目经理统一落实，协调进度，合同措施上实行工期奖惩制度；经济措施上做到工程款及时拨付，满足工程进度；技术措施上做到应用新技术提高工效和控制好关键工序。 一、组织措施 （一）整个工程由总承包负责检查督促分包进度计划实施情况，以便在分包超前或滞后于进度计划时实时采取纠偏措施。 （二）根据施工总进度计划，在实施过程中，按节点部位绘制实际计划完成情况横道图，对照总计划和完成情况，分析出偏差的项目，在下节点部位进度计划安排中进行调整。 （三）每周例会通报工程进度情况，确定薄弱环节，以解决工程施工过程中的相互协调配合问题，部署下周工作安排。 二、具体办法 （一）分析原因及影响，追回落后工期 如果出现进度偏差，首先进一步分析此偏差对进度控制目标的影响程度及其产生的原因，要求各分包及各专业工种进行调整，定出追回落后工期的措施和时间表。 （二）关键工序的纠偏措施 只有关键工序进度有保证，总工期进度才能有保证。因此当实际进度出现偏差时，首先是从关键工序入手部署纠偏措施，保证关键工序、节点
工期与计划进度稳合。关键工序的调整以避免影响原定计划工期和其他工作的顺利进行为原则。 1、关键工序超前于计划进度 当关键线路的实际进度比计划进度提前时，若不拟缩短工期，则结合工程实际选择资源占用量大或直接费用高的后续关键工作，适当延长其持续时间以降低资源强度或费用；若要提前完成计划，则将计划的未完成部分作为一个新计划，重新进行调整，按新计划执行。 2、关键工序落后于计划进度 当关键线路的实际进度比计划进度落后时，在未完成关键线路中选择资源强度小或费用率低的关键工作，缩短其持续时间，并把计划的未完部分作为一个新计划，按工期优化方法对它进行调整。 （三）非关键工序的纠偏 充分地利用资源、降低成本或满足施工的需要，非关键工作时差的调整，在其最早开始时间与最迟完成时间范围内将工作持续时间进行延长或缩短。 （四）资源不足的纠偏措施 由于施工能力或调整不足而产生延误的情况下，采取加大人力投入或加班施工来赶上工期。若业主一时资金短缺，经共同协商后，本公司财务部将提供临时资金周转。 （五）增减工作项目时的纠偏措施
成纤维细胞生长因子及其与受体作用机制 的研究进展1 姜媛媛，任桂萍，王文飞，郝建权，李德山 东北农业大学生命科学学院生物制药教研室，哈尔滨（150030） E-mail：deshanli@https://www.doczj.com/doc/8c9285569.html, 摘要：成纤维细胞生长因子(FGF)是一类多肽类物质，其中大多数成员可与肝素结合发挥作用。目前已知FGF至少包括23个因子，即FGF1～23。部分FGF家族成员N末端有大约3O个氨基酸残基组成的典型信号肽序列，可以分泌到细胞外。FGF家族成员是一类生理功能较广泛的生长因子，功能包括促进细胞有丝分裂、趋化与血管生成、促进中胚层和神经外胚层细胞的存活与生长等。本文根据最近的研究成果对 FGF因子及其受体研究进展做一综述，并主要对FGF因子特征及其研究趋势进行了探讨。 关键词：FGF，FGF受体，肝素 中图分类号:Q74 引言： 成纤维细胞生长因子最早是从脑和垂体的提取液中发现的，该物质是一种能促进成纤维细胞生长的多肽类活性物质，可以通过与细胞膜特异性受体结合对细胞生长进行调节。从70年代中期到目前已进行了大量广泛的研究，目前已知FGF至少包括23个因子，它们在一级氨基酸序列上有一定的同源性，并有类似的生物学功能，且广泛存在于体内多种组织中。FGF对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有十分明显的促细胞分裂增殖作用，并且在机体内的胚胎发育、细胞生长分化、创伤组织愈合及肿瘤发生发展中起着十分重要的作用。 1. 成纤维细胞生长因子（FGF）家族 成纤维生长因子（Fibroblast growth factor, FGF）又被称为肝素亲和生长因子(Heparin binding growth factor, HBGF)，是一类通过与细胞膜特异性受体结合发挥作用的多肽分子。现已知FGF家族至少包括23个成员，即FGF1～FGF23。FGF家族成员之间的氨基酸序列同源性约为25%～50%，其每个成员都有140个氨基酸的中轴，该中轴在不同的成员中有高度的同源性。结构分析表明，此中轴折叠成12条逆向平行的β链，它们又进一步形成圆柱状的结构。部分FGF家族成员N末端有大约3O个氨基酸残基组成的典型信号肽序列，使得它们可通过内质网一高尔基复合体的经典(即自分泌和旁分泌)途径被分泌到细胞外，但其中也有部分FGF则因本身缺乏信号肽结构，不能向外分泌，只能在细胞受损时释放[1]。多数FGF（如FGF3～8、10、15、17～19、21～23）的N末端具有典型的信号肽序列。而FGF16和FGF20虽然没有明确的信号肽序列却也能高效地分泌到细胞外[12]。FGF1 和FGF2也缺乏信号肽序列和正常的分泌途径，却也能出现在胞外基质，推测两者可能来自受伤的细胞，或者通过与内质网-高尔基体通路不同的细胞脱颗粒机制释放至胞外的。此外，FGF 11～14没有典型的信号肽序列，因此认为这些FGF是在胞内发挥作用[13]。由于FGF家族成员之间的氨基酸序列有25％～50％的同源性，分子结构有一定的共性，故FGF不同分子之间的生物学效应既有相似性，又有各自的特点[1-3]。 FGF1(aFGF)和FGF2(bFGF)是最先被发现，也是迄今为止研究最充分的两个成员，因其1本课题得到黑龙江省科技厅重点攻关项目（编号：2006G0461-00）的资助。
Cell synchronization of Drosophila cell line Cell synchronization of Drosophila Kc cells Kc cells were cultured in 15-cm plates at a density of 1×106cells/mL in Schneider’s Media (Invitrogen 11720034) supplemented with 10% FCS and penicillin/streptomycin. The cells were arrested in G2 by the addition of the hormone Ecdysone (Sigma H5142, 蜕皮激素, C27H44O6) at a final concentration of 1.7 μM. To arrest the cells at the G1/S transition, the cells were released from Ecdysone into 1 mM HU. For replication timing, cells were pulsed with 50 μg/mL BrdU (Roche 280 879) for 1 h at either 0 or 6 h following release from HU. For identification of early origins, cells were released from G2 into medium containing both BrdU and HU at the same concentrations as above. Cell cycle progression was monitored by FACS. Molecular formula of Ecdysone Cell synchronization of Drosophila S2 cells: Briefly, log-phase (2x106/ml) cells were first incubated with 0.2 nM ponasterone (甾酮A, C27H44O6) A for 24 h to obtain G2 cells. Cells were then rinsed with phosphate-buffered saline (PBS) three times, resuspended in fresh Schneider’s Drosophila medium (GIBCO) containing 5% each of Fetal Bovine Serum and Bovine Calf Serum (JRH Biosciences), along with 1.5 mM hydroxyurea (HU, 羟基脲, CH4NO), and cultured for 18 h to obtain G1/S cells. Afterwards, these cells were rinsed with PBS three times, cultured in the above-specified medium without HU and harvested at various time points for analyses. Molecular formula of ponasterone BrdU-FACS or FACS analyses : Cells grown in 6-well plates were treated with BrdU (10 μM) for 45-60 min, fixed with 80% cold ethanol, treated with 3N HCl, washed and incubated with anti-BrdU MAb (Becton Dickinson) for 60 min. After washing, cells were incubated with Alexa Fluor ? 488 goat anti-mouse IgG (Invitrogen) for 30 min. These cells, or ethanol-fixed cells (for direct FACS assays), were treated with propidium iodide and RNase A for 30 min before FACS analyses. Reference: Lee et al.,2010, JBC. Drosophila Octamer Elements and Pdm-1 Dictate the Coordinated Transcription of Core Histone Genes. David M. MacAlpine., 2004, Genes Dev., Coordination of replication and transcription along a Drosophila chromosome.
不同浓度秋水仙素和nocodazole对绒山羊成纤维细胞周期同步化的影响 杨惠茹，肖红梅，蔡婷，俎红丽，于新蕾，刘志红，李金泉，王志新 （内蒙古农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖重点实验室，呼和浩特 010018 ） 摘要：本文旨在探索更加优化的条件，使绒山羊成纤维细胞经处理后更多的处于有丝分裂G2/M 期。本研究分别采用秋水仙素和nocodazole （诺考达唑）试剂对绒山羊成纤维细胞进行周期同步化处理，用流式细胞仪检测G2/M 期的细胞数量进行比对，观测最佳作用浓度。结果表明，秋水仙素的使用浓度不宜过大；其次，添加秋水仙素时间的不同也会对试验结果产生明显的影响。另外在相同条件下，经nocodazole处理的绒山羊成纤维细胞周期同步化效果比秋水仙素好，最优的处理条件是300 ng/mL nocodazole处理成纤维细胞24 h，所得G2/M期的细胞所占比例为15.10%。结果提示对于绒山羊的成纤维细胞来说，细胞周期同步化处理时，选择nocodazole更好一些。 关键词：绒山羊；成纤维细胞；秋水仙素；nocodazole（诺考达唑）；细胞周期同步化；流式细胞仪 Dolezel等（2011) 报道随着测序技术的发展，使用流式细胞仪分离单条染色体，将拓展测序技术应用的领域，对于山羊这种大基因组动物更有广泛的应用价值。流式细胞术可以分选出指定的染色体，能快速精确地检测染色体数目和结构的畸变，以及非整倍体和染色体缺失。目前已在l7个植物物种中利用流式细胞术对染色体进行分析与分选。Macas等（1993）利用FCM对碗豆的流式核型进行分拣，结合PCR技术对其DNA进行物理定位，成功实现了USP基因、碗豆球蛋白基因和假基因在相应染色体区域上的定位。施家琦等 (1998) 在人类的染色体分选研究中，通过采用流式细胞技术分离染色体实现对人二倍体成纤维细胞的单分散染色体核型的分析及分选。最近的研究中，Yang等（2011) 通过流式技术分离出单个染色体已经完成了基因组的测序工作。翟中和等（1992) 采用流式分离单条染色体工作的核心在于富集足量同步化的中期染色体的细胞核型，因此细胞同期化的处理是研究中最基础最为重要的一步。细胞周期时间长短的主要差别在G1期，而S期、G2期和M 期的总时长相对恒定，尤其是M期持续的时间更为恒定，常常仅持续半小时左右。通过添加有丝分裂抑制剂，来阻滞细胞的有丝分裂使其停滞在G2/M 期，人工调控增加G2/M期的细胞数量，为单条染色体分选做前期准备。目前，秋水仙素是一种最为常用的有丝分裂抑制剂，起作用机理在于抑制中期纺锤体的形成。nocodazole是一种类似于秋水仙素的细胞微管抑制剂,也可阻止微管蛋白聚合和纺锤体形成,使细胞同步于M期,从而使大部分细胞的发育停滞在G2/M期和M期，与秋水仙素试剂相比毒性较低。Tanaka等（1995）研究表明采用nocodazole处理法对大鼠进行同期化处理后，M 期细胞的数量显著增加。因此，本研究将采用这两种试剂对成纤维细胞同期化的最优化条件做探索。 1 材料和方法 1.1材料 1.1.1 试剂耗材和动物 秋水仙素、nocodazole、胎牛血清（Hyclone）、，0.25%胰酶（Gibco）、DMEM/F12培养基（Hyclone）、无水乙醇（国产）、DPBS（Hyclone）、青链霉素（Gibco）、PI(碘化丙啶)、15 mL离心管（corning）、50 mL离心管（corning）、细胞培养瓶（corning）25 cm2、塑料吸管。 本研究选用绒山羊公羊耳源组织，来自于内蒙古鄂尔多斯农场。 1.1.2 主要仪器设备 流式细胞仪( Beeton Diekinson FACSCalibur )、CO2恒温培养箱 ( Galaxy A，RXBiotech) 、
四综述四乳腺癌相关成纤维细胞的研究进展 陈珊珊 姚和瑞 DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0807.2012.03.013 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30973505,30945201);广东省科技计划资助项目(2009B030801005);广州市科技计划资助项目(2009Y?C011?1) 作者单位:510120广州,中山大学孙逸仙纪念医院肿瘤科 通信作者:姚和瑞,E?mail:yaoherui@https://www.doczj.com/doc/8c9285569.html, 恶性肿瘤严重威胁着全人类的健康与生命三近年来,肿瘤基础研究领域的一个重要进展是发现肿瘤微环境对肿瘤生物学行为的调控,即不再认为肿瘤的发生二发展仅与肿瘤细胞有关,而是肿瘤细胞与间质成分构成的肿瘤微环境相互作用的结果三肿瘤相关成纤维细胞(tumor?associated fibroblasts,TAFs)是肿瘤间质的主要成分,参与肿瘤的结构支持并可分泌多种细胞因子三越来越多的研究者认为TAFs 不仅仅是肿瘤结构的机械性支持,而且通过多种信号途径直接参与肿瘤的发生及发展三笔者就TAFs 的来源二功能及其在乳腺癌中的作用进行综述三 1 TAFs 的来源及特征1.1 TAFs 的来源(1)20世纪90年代的研究已证实,间质内的成纤维细胞在难以修复的组织损伤或慢性炎症等因素刺激下可活化为TAFs;血管平滑肌细胞和周细胞亦可转化为TAFs [1]三(2)近几年研究发现,发生上皮?间质转化(epithelial?mesenchyonal transition,EMT)的肿瘤细胞[2]以及内皮细胞也可能转化成为TAFs [3]三肿瘤细胞发生EMT,并通过转化生长因子?β(transforming growth factor?β,TGF?β)下调上皮钙黏着蛋白(E?cadherin)的表达,促使上皮细胞向间质细胞转化三(3)来源于骨髓的CD34+干细胞也可转化成为TAFs三Quante 等[4]的最新研究证实至少有20%的TAFs 来源于骨髓及间充质干细胞三1.2 TAFs 的特征 形态及标志:TAFs 的形态与正常成纤维细胞相似,呈长梭形,核不规则,细胞质中含有多种收缩纤维蛋白二丰富的粗面内质网二细胞间连接和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)三TAFs 可合成分泌蛋白质二胶原纤维二弹性纤维二网状纤维及有机基质等,除表达间质细胞的标志物波形蛋白(vimentin)外,还表达其特征性标志物平滑肌肌动蛋白α(α?smooth muscle actin,α?SMA)三这是其
对影响工期的因素分析及应对措施 一、影响工期的因素 1、业主因素 如因业主使用要求改变而进行设计变更；应提供的施工现场条件不能及时提供或所提供的场地不能满足工程正常需要；不能及时向施工承包单位或材料供应商支付工程款等。 2、勘察设计因素 如勘察资料不准确，特别是地址资料错误或遗漏；设计内容不完善，规范应用不恰当，设计有缺陷或错误；设计对施工的可能性未考虑或考虑不周；施工图纸供应不及时、不配套或出现重大错误。 3、影响建设工程进度的不利因素 如施工影响建设工程进度的施工工艺错误；不合理的施工方案；施工安全措施不当；不可靠技术的应用等。 4、自然环境因素 如复杂的地质条件；不明的地下埋藏文物的保护、处理；不可抗拒的天气条件如大风、暴雨、冰雹、霜冻等影响苗木生长及种植的条件等。 5、社会环境因素 如其他临近施工单位对苗木种植的干扰；节假日交通、市容整顿的限制；临时停水、停电、断路；外界社会分子的
扰乱等。 6、组织管理因素 如向有关部门提出各种申请审批手续的延误；合同签订时遗漏条款、表达失当；计划安排不周全，组织协调不力，导致停工等料、相关作业脱节；项目经理领导不力，指挥失当，使施工各部门、各环节之间交叉作业、配合上发生矛盾等。 7、材料、设备因素 如材料、构配件、机具设备供应环节的差错，品种、规格、质量、数量、时间不能满足工程建设的需要，需调换；特殊材料及新材料的不合理使用；施工设备不配套，选择失当，安装错误，机械故障等。 二、对影响工期因素的因对措施 1、项目管理机构 项目管理部工程作为管理的核心部分，针对工程特点，在项目经理下设各部分。分工要明确，责任与义务要落实到每个人的身上。项目经理为全权负责人，明确对由于非正常原因造成工期延误，包括建设、设计、施工等各单位之间及其内部原因，以及项目机构内部原因，造成工期延误，均由项目经理承担协调不力的责任。 2、施工管理中提高网络计划技术的应用水平
成纤维细胞衰老的研究进展 王文浩胡火珍 四川大学生命科学院 摘要：皮肤是人体最大的器官，是机体最外观的表现，而随着人们生活水平的提高，人们对于皮肤抗衰老的意识较前增强，因此皮肤抗衰老的研究已经成为时代的热点。皮肤是由三部分组成：表皮层，真皮层以及角质层组成，而表皮层和真皮层是由结缔组织细胞—成纤维细胞构成。所以成纤维细胞的衰老会使表皮和真皮的功能紊乱从而导致了色斑以及皱纹的产生。目前的研究已经表明，成纤维细胞的老化，其特征在于作为损失的稳定性和生理完整性和增加细胞损伤死亡并且细胞的老化至少在某些方面是被调控的。一般来说，我们将细胞损伤导致细胞增殖能力下降作为细胞衰老的依据。对于成纤维细胞的衰老，其不仅受到了遗传学调控如一些衰老相关特定基因的调控，也受表观遗传学调控。在这篇综述中，我们总结了之前对于成纤维细胞衰老的研究和可能的衰老机制以及对抗衰老的展望。 关键词：成纤维细胞；衰老；皮肤老化 Research progress of fibroblasts’ aging mechanisms Abstract: Skin consist of three parts:epidermis dermal and hypodermic.And the dermal and hypodermic is composed of syndesm cells—fibroblasts .Fibroblasts’ senescence will cause dysfunction of dermal and hypodermic which may contribute to wrinkles and chloasma’s appearance on the surface of skins.Current study has suggested that fibroblasts’ aging is characterized as loss of stability and physiological integrity and increase cell damage to death.Over recent years,aging research showed that aging is a controlled progress—at least in some aspects. Generally,we consider cellular senescence as disabled proliferation due to cellular damage.As for fibroblast,we emphasis not just on intracellular such as genomic instability,epigenetic alteration,and also on its function such as collagen secretion. In this review we conclude several candidate mechanism of fibroblasts’ aging and prospect of some classic or evolutionary way to anti-aging. key words : Fibroblasts,anti-aging,senescence,skin’s aging 引言 从古代开始，长寿一直是人们不断追求的一个目标。人类衰老的异质性和寿命周期[1]的差异说明衰老过程是基因和环境因素共同作用的结果。细胞衰老是细胞周期重要的一个阶段。生物学家将衰老定义为年龄相关的或年龄渐进的内在生理功能下降,导致与年龄相关的死亡率的增加和年龄相关生殖再生率的下降.细胞衰老则是年龄相关的细胞固有功能的丧失,如细胞分裂复制、细胞内和细胞间的运输及通讯功能丧失,最后导致衰老的细胞死亡或被其他细胞清除。在细胞的生长过程中，积累的有害物质增多比如活性氧浓度导致细胞受损，从而激活相应的细胞信号通路，使细胞周期停滞或者诱导细胞凋亡。所以在衰老的过程中，一些蛋白或者特异性的基因表达可以作为检测细胞衰老的指标。 细胞衰老的研究始于第一次在秀丽隐杆线虫分离得到一个长寿的株系[2]。大量的研究表明了许多因素可导致衰老，如紫外线光老化[3]、活性氧簇和DNA损伤[4]、炎症因子[5]诱导均可导致衰老。最近的研究表明，成纤维细胞的老化有几个显著的特点，我们找出和分类了衰老的细胞和分子特征。我们考虑六个可能的通常被认为是与衰老相关的或是导致衰老的特殊标记。 基因组不稳定性（Genomic Instability） 基因组不稳定性常见类型有两种，即核苷酸水平的不稳定性与染色体水平的不稳定性[6]。核苷酸水平的不稳定性主要包括DNA 修复基因功能障碍与微卫星不稳定性 ( MSI)[7] 。DNA 修复基因功能障碍主要是与错配修复[8]、核苷酸切除修复(NER)[9]、碱基切除修复(BER)[10] 和双链断裂修复(DSB)[10]相关的基因障碍。微卫星是由1～5个核苷酸组成的具有高度多态性的简单串联重复序列，MSI 是这些简单重复序列的异常改变，多由 DNA 错配修复基因(hMSH2，hMLH1，hPMS2，hMSH6)失去正常修复能力引起[8]。染色体不稳定 [9](CIN) 是指细胞在有丝分裂过程中发生的染色体数目或
影响工期的因素分析及应对措施 一、影响工期的因素 、业主因素 如因业主使用要求改变而进行设计变更。应提供的施工现场条件不能及时提供或所提供的场地不能满足工程正常需要。不能及时向施工承包单位或材料供应商支付工程款等。 、勘察设计因素 如勘察资料不准确，特别是地质资料不对或遗漏。设计内容不完善，规范应用不恰当，设计有缺陷或不对。设计对施工的可能性未考虑或考虑不周。施工图纸供应不及时、不配套或出现重大不对。 、影响建设进度的不利因素 如施工工艺不对。不合理的施工组织技术指导文件。施工安全措施不当。不可靠技术的应用等。 、自然环境因素 如复杂的地质条件。不明的地下埋藏文物的保护、处理。不可抗拒的天气条件如大风、暴雨、冰雹、霜冻等。 、社会环境因素 如节假期交通、市容整顿的限制。临时停水、停电、断路。外界社会分子的扰乱等。 、组织管理因素 如向有关部门提出各种申请审批手续的延误。合同签订时遗漏条款、表达失当。计划安排不周全，组织协调不力，导致停工等料、相
关作业脱节。项目经理领导不力，指挥失当，使施工各部门、各环节之间交叉作业、配合上发生矛盾等。 、材料、设备因素 如材料、构配件、机具设备供应环节的差错，品种、规格、质量、数量、进度不能满足工程建设的需要，需调换。特殊材料及新材料的不合理使用。施工设备不配套，选择失当，安装不对，机械故障等。 二、对影响工期因素的应对措施 、施工全过程管理组织 工程部作为工程管理的核心部分，针对工程特点，在项目经理领导下进行工作。分工要明确，责任与义务要落实到每我的身上。项目经理为全权负责人，明确对由于非正常原因造成工期延误，包括建设、设计、施工等各单位之间及其内部原因，以及项目组织内部原因，造成工期延误，均由项目经理承担协调不力的责任。 、施工管理中提高网络计划技术的应用水平 网络计划方法不仅仅是一种编制计划的方法，而且是一种科学的施工管理方法，首先要制定一种合理的计划与方法，严格控制关键工序，关键分项、分部工程或单位工程的工期。 如果在执行过程中发现没有达到目标或是没有做好计划从而可能引起工期的拖延需要施工人员采用因果分析图、影响因素分析表、工程量、劳动效率对比分析等方法，详细分析工程施工拖延的影响因素及各因素影响量的大小。采取积极的赶工措施，以弥补或部分地弥补已经产生的工期拖延。主要通过调整后期计划，采取赶工措施，采
细胞周期同步化常用的方法 在一般培养条件下，群体中的细胞处于不同的细胞周期时相之中。为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，常需采取一些方法使细胞处于细胞周期的同一时相，这就是细胞同步化技术。 细胞同步化的方法有选择同步化和诱导同步化，其中，选择同步化常用的方法有有丝分裂选择法和细胞沉降分离法。 选用DNA合成抑制剂可逆地抑制S期细胞DNA合成而不影响其他细胞周期运转，最终可将细胞群体阻断在G1/S期交界处；一些抑制微管聚合的药物，因抑制有丝分裂装置的形成和功能行使，可将细胞阻断在有丝分裂中期，即使细胞同步于M期。 一、M期同步化方法 1．振荡收集法 该法利用M期细胞变圆易脱落的特点，将生长旺盛的贴壁细胞按一定的时间间隔振荡，使M期细胞脱落，逐步收集培养基，并补充新的培养基。收集的细胞放4℃冰箱中保存，离心沉淀后即获得M期细胞。 2．秋水仙素阻抑法 （1）将细胞传代培养至指数生长期。 （2）加入秋水仙胺，使最终浓度为0.05－0.1μg/mL培养基，作用6－7 h。如使用秋水仙素，使用浓度应加大5～10倍。 （3）振荡收集细胞，800 r/min离心5－10 min，弃上清，收集的沉淀细胞即为M期细胞。加入一定量培养基将细胞接种到培养瓶中或直接进行离体实验。由于秋水仙素或秋水仙胺对细胞有一定毒性，用量较小或作用时间较短细胞活性尚可恢复，而用量过大或时间过长则细胞不能存活，因此使用时应严格控制其剂量和作用时间。 3．N2阻断法此方法较秋水仙素阻抑法好 （1）将细胞传代培养至指数生长期。 （2）将培养瓶置于N2罐中通入适量CO2（约相当于罐中体积的5％）。 （3）关闭好N2罐，接上N2管子及压力表，缓缓向罐中充气一直到压力为80-90磅/英寸2为止。 （4）将N2装置放在37℃培养箱中10－16 h（通常过夜）。次日从培养箱中取出，然后缓缓将N2放出（最好放出窗外）。 （5）取出细胞在镜下观察同步化效果，用振荡法收集细胞于离心管中。 （6）800 r/min离心10 min收集细胞。 二、S期同步化方法 胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法：该法利用过量TdR能阻碍DNA合成的原理而设计，为了加强细胞同步化效果，常采用两次TdR阻断法，即双阻断法。第1次阻断时间相当于G2、M 和G1期时间的总和或稍长，释放时间不短于S期时间，而小于G2+M+G1期时间，这样才能使所有位于G1/S期的细胞通过S期，而又不使沿周期前进最快的细胞进入下一个S期。第2次阻断时间同第1次，再释放。 现以HeLa细胞为例加以说明（HeLa细胞周期时间为21 h，其中G1期为10 h，S期为7 h，G2期为3 h，M期为1 h）。 1．将细胞培养至指数生长期的早期。 2．加入含2 mmol/L TdR的培养基（2－2.5 mmol/L用于肿瘤细胞的同步化培养），作用16 h。3．弃掉TdR培养基，用Hanks液洗2－3次，再换上新鲜培养基继续温浴9 h。 4．重新加入TdR培养基（浓度同上）进行第2次阻断，作用16 h。 5．再弃掉TdR培养基，Hanks液洗2－3次后换上普通培养基。第2次TdR释放0 h时取样
细胞通讯（cell communication)（p156） 一个信号产生细胞发出的信息通过介质传递到另一个细胞并与靶细胞相应的受体相互作用，然后通过细胞信号转导产生靶细胞内一系列生理生化变化，最终表现为细胞整体的生物学效应的过程。 信号转导(signal transduction) 是细胞通讯的基本概念, 强调信号的接收与接收后信号转换的方式(途径)和结果, 包括配体与受体结合、第二信使的产生及其后的级联反应等, 即信号的识别、转移与转换。 信号转导(signal transduction) 强调信号的接受与放大 ③信号分子与靶细胞表面受体特异性结合并激活受体； ④活化受体启动靶细胞内一种或多种信号转导途径； ⑤细胞内信号作用于效应分子，进行逐步放大的级联反应，引起效应。 ⑥信号的解除，细胞反应终止。 受体(receptor)(p158) 一种能够识别和选择性结合某种配体(信号分子)的大分子，多为糖蛋白，至少包括两个功能区域：配体结合区域和产生效应的区域。 根据存在部位分为： ①细胞内受体（intercellular receptor) 离子通道耦联受体 ②细胞表面受体 G蛋白耦联受体（GPCR） (cell-surface receptor) 酶联受体 G蛋白 G蛋白是细胞内信号传导途径中起着重要作用的三聚体GTP结合调节蛋白的简称，位于质膜胞浆一侧，由α，β，γ三个不同亚基组成。 细胞质膜：围绕在细胞最外层，由脂质、蛋白质和糖类组成的生物膜 生物膜（biomembrane）：细胞内的膜系统与细胞质膜统称为生物膜 单位膜（unit membrane） 生物膜内外两侧为电子密度高的暗线，约为2nm，中间位电子密度低的明线，约为3.5nm，总厚度为7.5 nm，这种“暗-明-暗”的结构。 流动镶嵌模型 生物膜的流动镶嵌模型是一种生物膜结构的模型，它认为生物膜是磷脂以疏水作用形成的双分子层为骨架，磷脂分子是流动性的，可以发生侧移、翻转等。蛋白质分子镶嵌于双分子层的骨架中，可能全部埋藏或者部分埋藏，埋藏的部分是疏水的，同样，蛋白质分子也可以在膜上自由移动。因此称为流动镶嵌模型。 膜脂 存在于质膜及细胞内膜的脂质。主要是甘油磷脂、固醇和少量的鞘脂。膜蛋白则镶嵌在膜脂中。所有的膜脂（membrane lipids）都具有双亲媒性（amphipathic），即这些分子都有
在细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中，其中有少数细胞在进行有丝分裂活动，其余细胞分别处于G1、S和G2各期。不同时相的细胞对药物干预存在不同反应，会影响实验的重复性，因此，需要获得周期一致性的细胞。利用细胞同步化技术可使细胞大量的处于同一细胞时期，并可获得该时期大量的物质，如细胞中期时的染色体。细胞周期同步化(synchronization)是指为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，借助某种自然或人为的实验手段,使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相( 除了G0期的细胞)的现象。细胞同步化本质上包括用一定的方法获得一定数量的同步化细胞群和使细胞进入同步化生长的两层含义。 DNA 合成抑制法是通过抑制DNA合成将细胞同步于同一时期的方法。高浓度TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法是目前常用的抑制DNA 合成的同步化方法。它可逆地抑制DNA 合成，而不影响其他时期细胞的转运，最终可将细胞群阻断在S 期或G1 /S 交界处。其原理是: Td Ｒ是细胞DNA 合成不可缺少的前体，但向培养基中加入过量TdＲ，可形成过量的三磷酸腺苷，后者能反馈抑制其他核苷酸的磷酸化，从而抑制DNA 合成。它将细胞同步于G1 /S期交界处，同步化程度高，适用于任何培养体系，可将几乎所有的细胞同步化，但是容易产生非均衡生长，个别细胞体积增大。TdＲ双阻断法因为简单易行且可逆，在肿瘤药理方面对细胞周期同步化的实验中得到了广泛的应用。羟基脲、5-氟脱氧尿嘧啶、阿糖胞苷、氨甲蝶呤和高浓度ADR、GDR也属于DNA合成抑制剂，它们与TdR作用相似，均可通过抑制DNA合成达到同步化的目的。 中期阻断法是利用破坏微管的药物将细胞阻断在M期从而得到同一时期细胞的方法，常用的药物有秋水仙素等。秋水仙素通过抑制微管的聚合，进而抑制有丝分裂装置的形成，将细胞阻断于有丝分裂中期然后再释放使细胞达到同步化。中期阻断法非平衡生长问题不明显，但可逆性比较差，当阻断时间过长时，许多细胞产生异常分裂。过去研究中也发现，同步后的细胞的生长能力明显不如撤去阻断剂后得到的S期细胞旺盛。秋水仙胺、Nocodazole也是目前常用的中期阻断剂。 经过同步化之后的细胞可以通过流式细胞术对其周期进行分析。将细胞用PI（碘化丙啶）染液进行染色，使用流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。由于细胞的DNA含量在不同时期有显著的差异，因此可以将细胞分成 G1/G0期（1倍），S期（1-2倍）和G2/M期（2倍）。流式细胞仪可以根据DNA含量在不同时间内的变化,从而确定细胞周期的长短,也可以直接标记DNA复制（放射性同位素标记）,统计细胞数量与标记细胞的百分比,对细胞周期进行综合分析. 连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程为细胞周期(cell cyc1e)。细胞周期包含四个阶段：①G1期(first gap),又称合成前期，指前一次有丝分裂完成到DNA复制前的一段时期；②S期(synthesis phase),即DNA合成期，为真核细胞分裂(cell pision)间期中进行DNA合成的阶段；③G2期(second gap),为DNA合成后期，指DNA合成结束至有丝分裂开始之间的一个阶段；④M期 (mitosis or pision) ,又称D期，是染色体真正开始分离时期。细胞周期又可分为有丝分裂期（M期）和分裂间期(即G1→S→G2)两个时期。尽管细胞周期中各期的持续时间因不同细胞类型而异，但相对而言M期最短，S期较长。流式细胞仪（flow cytometer；FCM）的工作原理是在样品管中放入待测细胞，在气体的压力下使待测细胞进入充满鞘液的流动室。在细胞流动室里单细胞悬液被鞘流液包绕通过流动室内一定孔径的孔，形成细胞柱。然后通过对流动液体中单列的细胞进行逐一检测，得到单个细胞的光散射和荧光指标，在功能水平上定量分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等的物理、化学特征等多个参数。流式细胞仪不仅可以根据不同时间内DNA含量的变化来确定细胞周期的长短，还可以直接用放射性同位素标记DNA复制，通过统计细胞数目与比较各时相细胞的百分比来检测是否达到预期目的，从而对细胞周期各时相进行综合分析。流式细胞分析法与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，已成为当代最先进的细胞定量分析技术。