疑难血型鉴定及配型
在ABO血型系统内，几乎所有缺乏抗原的人体，在其血清内必具有所缺乏抗原的抗体，若在红细胞上具有抗原时，则其血清内必缺乏对应的抗体，但这种规则偶然也有例外，血清中的抗体和细胞上的抗原不互补，正反定型相互不支持，出现血型难以确定。
另外会遇到即使ABO和RH血型相同，但由于患者血清中存在意外抗体或红细胞上致敏有意外抗体及其它原因造成交叉配血不能相合。
在ABO分型实验中，技术上的错误与各种临床情况或疾病，都能造成正反定型之间的矛盾，当预期的正反定型不能产生ABO抗原与抗体的互补结果时，首先需要排除在技术上可能发生的错误，如果细心而反复的实行对照试验产生相同形式的凝集反应，则需要考虑到细胞和血清的变异情况：
（一）、实验者技术问题
有时造成正反定型不符，并不是红细胞或血清本身的问题，而是由于操作不当造成。主要原因有：
1. 标本或试剂搞错
2.红细胞悬液过浓或过
3.标本混乱
4.未加试剂
5.试剂受到污染
6.温度在离心过程中增高
7.忽略观察溶血现象
8.细胞与血清间比例不适当，未发现弱凝集
9.如果使用血清来悬浮细胞，血清中的高浓度血型物质中和了抗体试剂，使其不能再与红细胞抗原发生反应，出现了假的阴性反应 10.在反定型试验时没有加血清，误认为是阴性结果；
11 结果判断错误
（二）如何解决技术原因造成的正反定型不符为解决ABO血型不一致而开始做深入试验之前，首先要排除技术上可能发生的错误，首先要重复作正反定性试验．使用质量合格的试剂，严格地执行正规的操作，再者则重新抽取标本。如果先前试验中红细胞悬浮在血清或血浆中，改为用盐水洗涤红细胞后配成悬液，以及细心观察和解释试验结果就可解决许多明显的问题．如果细心而反复的实行对照实验还是与先前一样的结果。就要根据情况从细胞和血清中寻找原因。
ABO血型定型中由于细胞和血清本身的原因造成正反定型不一致
一、减弱或缺少的抗原反应
二、未知的抗原反应
三、减弱或缺少的抗体反应
四、未知的抗体反应
绝大多数A和B型人红细胞用合格的抗-A和抗-B试剂检测都呈3十和4+的凝集强度，血清用合格的试剂红细胞检测绝大部分呈2+至4+的凝集强度。在A和B型红细胞凝集强度低于2+和1+的人中，有一部分是变异基因所致的亚型红细胞或者是疾病相关的抗原减弱。血清中的抗A或抗B凝集强度低于2+和1+的人中，是抗体减弱或缺乏。
（1） 这位病人的红细胞分型法与正常的强凝集反应相比，证明是减弱的反应，依据反定型法，应预期病人具有A抗原的活性。红细胞与抗AB的减弱凝集反应及抗A试剂缺乏凝集反应，都暗示为A型的亚型。（2） 补充的实验室试验：吸收和放散试验证明红细胞附着有抗A。病人唾液含有A与H物质。
（3） 讨论：A亚型的问题要比B亚型者多而常见，因
为A
2或A
2
B型的人体血清中可能有抗A
1
抗体。比A
2
型
为弱的A亚型不多见。若一位弱亚型病人错误地分型为O型而输予O型血液时，预期应无严重的后果。但若将一位弱亚型病人错误地分型而输给一位O型的病人时，则能引发严重的输血反应问题。
1.A或B抗原的亚型
当A、B及AB型红细胞与试剂抗血清作实验时，预期发生的反应皆为4+的强反应。正定型减弱的凝集反应，可暗示这可能是A、B亚型。当减弱的反应在健康供血者检查时，亚型是最可能的解释。抗AB分型血清能检出某些不与抗A抗B试剂发生反应的A及B型。
2、疾病状态：减弱的A抗原表现也可病人后天的特性，如：A型急性白血病患者在疾病活动期改变为A2型或A3亚型，在疾病缓解期又恢复到原来A型反应。抗原性强度的减弱，也能发生于B抗原与H抗原以及其他血型系统的抗原。
3、过量血型特异性可溶性物质：在患卵巢囊肿，胃癌或胰腺炎、肠道阻塞的稀有情况，能查见多量的血型特异性可溶性物质。病人血清中的ABH物质浓度极高，以抑制抗A或抗B试剂的作用，在正定型中，这种情形能产生假阴性，这种情况并非是病人的红细胞抗原发生改变，而是其血清含有过量的病人血清时，则能进行正确的ABO分型试验。
1、获得性B抗原
获得性B抗原的特性，获得性B只表现在A型红细胞上，使红细胞的反应像AB型，而血清中只有抗B 抗体，正定型中反应
的强度，A抗原大于B抗原，自身对照实
验为阴性反应且分泌型人体内有A物质，但B物质则缺乏。
当红细胞血型似乎是ＡＢ型而血清中含有抗Ｂ时，应该考虑是获得性Ｂ抗原．只有Ａ型的红细胞能获得Ｂ活性，因此称为获得性Ｂ抗原，鉴别获得性Ｂ抗原的方法如下：
１.观察细胞与抗Ａ及抗Ｂ的凝集强度，与抗Ａ的反应要比与抗Ｂ的反应强；
２.用自身的红细胞检查本人的血清．其血清中的抗Ｂ不能凝集自身红细胞中的类Ｂ抗原；
３.检查唾液是否存在Ａ、Ｂ物质，如果病人是分泌型，那么有Ａ物质而无Ｂ物质；
4. 获得性Ｂ抗原在正常PH介质中，红细胞与抗-B血清发生凝集，但在等于和低于PH6的酸性条件下，凝集消失，这是获得性Ｂ抗原最主要的血清学特征。
5. 核对病人的诊断。获得性Ｂ抗原的形成与结肠癌、直肠癌，革兰氏阴性细菌变形杆菌的感染有关。
结论：病人为A型，具有获得性B抗原
类B抗原具有下例特点
1.类B与抗B的反应一般无溶血现象。类B是获得性的，不符合遗传规律，病情好转，类B就消失，真正B抗原符合遗传规律终生不变。
2.类B与抗B结合疏松，用类B红细胞作吸收放散试验，可放散出大量抗B抗体，类B病人的唾液中不含B血型物质。
3.因类B抗原而错定血型，其血清中天然抗体不合规律，如是AB型血清中应该不含天然抗B抗体。但A型类B表现似AB型，血清中却含有抗B 抗体，此抗体并不凝集患者本人的红细胞，只要按正规操作，在血型鉴定中很容易发现被检者红细胞所含抗原与血清中所含抗体的矛盾。在AB型的交叉配血时，如发现主侧凝集，应考虑类B存在，重新鉴定血型并检查唾液中的血型物质，测出被检者真正的血型，最后选择同型人输血。
4.类B与全凝集或多凝集红细胞不同，前者只与抗B反应，在AB型血清中不凝集。
（二）改变的抗原
红细胞表面遗传产生的多凝集反应可分为先天性的或为获得性的。红细胞被大多数正常人类血清所凝集的反应称为多凝集反应。三种形式的多凝集反应包括：T抗原活化， Tn 抗原活化多凝集性。
所有正常人的血清含有抗T抗体，所以T活化的红细胞都是多凝集的。 T活化的红细胞与血清的反应，是一种混合视野的凝集反应， T活化的红细胞不为脐带血清所凝集，因为脐带血清中缺乏抗T抗体，预备T活化的红细胞，使其吸附血清中的抗T抗体，就能正确定出ABO分型法。
血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理包括： 一、血型相容性检测 二、ABO血型正反定型型不一致的原因分析及处理 三、交叉配血中常见问题分析及处理 四、意外抗体筛选的意义和检测方法 五、弱D检测的的意义和检测方法 一、血型相容性检测 1、受血者和供血者AB0血型是否相容。 2、受血者和供血者RhD血型是否相容。 3、主次侧交叉配血是否相容。 4、受血者血清中是否有临床有意义的意外抗体。 二、ABO正反定型不符的原因分析和处理 （一）原因 1．实验者操作技术的错误： 导致假阴性的有：①未加入抗体或血清。②未识别溶血。③血清与红细胞比例不当 ④离心速度或时间不够。⑤使用失效或错误试剂。⑥实验结果记录或解释错误 导致假阳性的有：①离心速度过大或时间过长、②使用了受到细菌污染的试剂、③试验器皿不干净、④实验结果记录或解释错误 2、红细胞标本问题：①患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型红细胞 ②某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，应用抗－A、抗－B试剂未能出现预期的凝集反应 ③红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞，人血清抗－A、抗－B试剂可能与这些异常的红细胞反应
④使用未洗涤的红细胞标本，其表面黏附的血浆或血清中含针对抗－A、抗－B 试剂中染色剂或其他成分的抗体，出现假阳性反应 ⑤患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏（包被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致 ⑥红细胞表面包被IgG类抗体 3、血清标本的问题：①小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集，如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。 ②免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老年人ABO抗体减弱 ③4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱，一般只测正定型 ④血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集，如缗钱状红细胞的非特异凝集 ⑤血清中含抗－A、抗－B以外的其他红细胞抗体，如抗－M、抗－I等。 ⑥患者接受了ABO血型不同的骨髓移植 ⑦患者血清中含有针对红细胞保护剂的抗体 ⑧大量C 1分子由于异常高效价的补体结合抗体抗－A、抗－B作用，结合到红细胞膜上，遮蔽了A、B抗原位点，不发生凝集 （二）、分析和处理 基本程序：1.重新采集标本，以避免采集、标记、污染等错误 2.查询患者既往病史、输血史、用药史、骨髓移植史 3.彻底洗涤标本或试剂红细胞 4.应用抗－AB、抗－A1、或抗－H检测红细胞 5.分析抗筛结果，确定结果是否受同种异型或自身冷抗体干扰 6.室温孵育30min后，离心观察结果，以检测弱的抗原抗体反应 7. 做自身红细胞做对照，以确定自身抗体的干扰 ABO正反定型型不符的分类：
ABO血型鉴定和交叉配血实验 [实验目的] 观察红细胞凝集现象。 学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。 [实验原理] ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B 凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。 同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。 [实验对象] 正常人。 [实验药品] A型B型标准血清。 [仪器器械] 双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜。 [实验方法与步骤] 1.ABO血型的鉴定： （1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。 （2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。 图6.9-1 ABO血型鉴定示意图 （3）75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。 （4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9-1）。
2.交叉配血实验： （1）分别对供血动物和受血动物消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。红细胞悬浮液是将受检者的血液一滴，加入装有生理盐水约1 ml的小试管中，即为2%的红细胞悬浮液。加盖备用。 （2）取双凹玻片一块，在两端分别标上供血动物和受血动物的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。 （3）将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血,图6.9-2）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。放置10～30 min后，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。如果两次交叉配血均无凝集反应，说明配血相合，能够输血。如果主侧发生凝集反应，说明配血不合，不论次侧配血如何都不能输血。如果仅次侧配血发生凝集反应，只有在紧急情况下才有可能考虑是否输血。 [注意事项]
ABO血型鉴定与交叉配血 ABO血型鉴定与交叉配血 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A 和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象（见图4-3-1-1）。输血时，一般主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集；其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。前者叫交叉配血试验的主侧（也叫直接配血），后者叫交叉配血的次侧（也叫间接配血）。只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”，才能进行输血；如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。本实验的目的是学习ABO血型鉴定的原理、方法以及交 叉配血方法。 1．仪器显微镜，离心机。 2．器械采血针，消毒注射器，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔。 3．药品标准A血清，标准B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。
（一） ABO血型鉴定 1. 玻片法 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别 各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相 接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5） 10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细 胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 2. 试管法 （1）取试管2只，分别标明A，B字样，分别加入相应标准血清2滴，各管加入受试者的红
ABO血型鉴定操作规程 1.目的： 为准确鉴定ABO血型 2.要求： 要求全科人员熟练掌握原理及操作，对有疑问的结果能够做出解释及妥善解决。 3.原理： 根据红细胞上有无A抗原和/或B抗原，将血型分为A型、B型、O型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和/或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和/或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。 4.试剂和材料 4.1 A、抗B分型血清，效价1：128以上 4.2 2%~5%A、B、O标准红细胞。 4.3 受检者血样 5.方法．（试管法） 5.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B分型血清1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。 5.2 另取洁净小试管3支，标明A C、B C、O C，各加入受检者血清2滴
于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%标准红细胞1滴，混匀。 5.3 以1000g离心15秒，将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，以肉眼观察有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，这将有助于A、B亚型、类B、或CisAB的发现。★ 6.结果判断： 血型抗A血 清 抗B血 清 A细 胞 B细 胞 O细胞 A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - - 7.正反定型不一致的原因： 有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下数种： 7 1 分型血清效价太低，亲和力不强。 7.2 红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当（出现前带或 后带现象），使反应不明显误判为阴性反应 7.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 白血病或恶性肿瘤）以及类B或CisAB等。 7.4 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血病）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。 7.5 受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏
疑难血型鉴定及交叉配血处 理流程(1)(1) -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 一、正反定型不一致 1、重复试验（严格正规操作）。 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原 抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+ 以上）； ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 二、交叉配血不合 （一）主侧端不相合 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚 合物的血浆扩容剂引起假阳性。 5、试验系统被污染。 （二）次侧端不相合 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可 输血）。 （三）配血不合的主要因素 1、血型是否正确。 2、是否有自身抗体。 3、是否有同种异体抗体。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 一、正反定型不一致 1、重复试验（严格正规操作）。 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）； ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 二、交叉配血不合 （一）主侧端不相合 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂 引起假阳性。 5、试验系统被污染。 （二）次侧端不相合 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。 （三）配血不合的主要因素 1、血型是否正确。 2、是否有自身抗体。 3、是否有同种异体抗体。
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤 一. 1. 血型鉴定 排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。 2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者 2%-5%红细胞悬液。 3.加样 ABO正定型： 1 滴（ 50ul ）抗 A、抗 B 试剂加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。 ABO反定型： 1 滴（ 50ul ）患者血清加 1 滴（ 50ul ）反定型试剂红细胞。 RhD定型： 1 滴（ 50ul ）抗 D 血清加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。 4. 二. 结果判断 离心（ 2 档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法） 1.排管标记 01、 02、 03 及自身对照管 2. 加样各试管分别加入相应的患者血清 2 滴（ 100ul ）及筛选细胞 1 滴（ 50ul ）。 3.结果观察 离心（ 2 档），观察结果 先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。 各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书） 各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心 先观察上清液有无溶血 弃去上清液，留约，轻轻混匀 肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验） 各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀 肉眼观察凝集是否在1min 内消失 显微镜检查 三. 交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）
1.标本准备 分离供血者血浆与红细胞 三次洗涤，制备供血者 2%-5%红细胞悬液 2.排管标记 排管，主侧、次侧及自身对照管 3.加样 各试管分别加入相应的备检血清 2 滴（ 100ul ）及 2%-5%备检红细胞悬液 1 滴（ 50ul ）4.结果观察 离心（ 2 档），观察结果 先看上清液有无溶血 轻轻混匀，肉眼观察有无凝集 结果判断并记录 各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书） 各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心 先观察上清液有无溶血 弃去上清液，留，轻轻混匀 肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验） 各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀 肉眼观察凝集是否在1min 内消失 肉眼观察阴性者，显微镜检查 记录交叉配血结果 A、 B、O试验红细胞悬液的制备
宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程 一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型） 二．方法试管法 三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 四．试剂上海血液生物医药有限公司 抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体） 五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成2-5%红细胞悬液六．操作 1 取试管2支并分别标注抗A和抗B。 2 抗A试管中加入抗A试剂一滴，在抗B试管中加入抗B试剂一滴。 3 在抗A、抗B试管中分别加入受检者2-5%的红细胞悬液一滴，混匀。 4 用离心机3400离心15秒。 5 检验是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞 再悬浮。 6 观察凝集情况，并记录结果。必要时借助显微镜。 7 许多红细胞亚型（如Ax）能在抗AB试剂的盐水中凝集，但与抗A不凝，在室温（23±3℃）中放置几分钟，可以增强反应，但放置时间不宜超过30分钟。 8 检验结果的解释 ABO血型反应格局表 正定型 血型抗A试剂抗B试剂 + - A - + B - - O + + AB 七．检验方法的局限性 与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。 八．注意事项 1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3 次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。 2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。同时可能含有母亲血液中的抗A 或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。 3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。
疑难血型鉴定及配型
在ABO血型系统内，几乎所有缺乏抗原的人体，在其血清内必具有所缺乏抗原的抗体，若在红细胞上具有抗原时，则其血清内必缺乏对应的抗体，但这种规则偶然也有例外，血清中的抗体和细胞上的抗原不互补，正反定型相互不支持，出现血型难以确定。 另外会遇到即使ABO和RH血型相同，但由于患者血清中存在意外抗体或红细胞上致敏有意外抗体及其它原因造成交叉配血不能相合。
在ABO分型实验中，技术上的错误与各种临床情况或疾病，都能造成正反定型之间的矛盾，当预期的正反定型不能产生ABO抗原与抗体的互补结果时，首先需要排除在技术上可能发生的错误，如果细心而反复的实行对照试验产生相同形式的凝集反应，则需要考虑到细胞和血清的变异情况：
（一）、实验者技术问题 有时造成正反定型不符，并不是红细胞或血清本身的问题，而是由于操作不当造成。主要原因有： 1. 标本或试剂搞错 2.红细胞悬液过浓或过 3.标本混乱 4.未加试剂
5.试剂受到污染 6.温度在离心过程中增高 7.忽略观察溶血现象 8.细胞与血清间比例不适当，未发现弱凝集 9.如果使用血清来悬浮细胞，血清中的高浓度血型物质中和了抗体试剂，使其不能再与红细胞抗原发生反应，出现了假的阴性反应 10.在反定型试验时没有加血清，误认为是阴性结果； 11 结果判断错误
（二）如何解决技术原因造成的正反定型不符为解决ABO血型不一致而开始做深入试验之前，首先要排除技术上可能发生的错误，首先要重复作正反定性试验．使用质量合格的试剂，严格地执行正规的操作，再者则重新抽取标本。如果先前试验中红细胞悬浮在血清或血浆中，改为用盐水洗涤红细胞后配成悬液，以及细心观察和解释试验结果就可解决许多明显的问题．如果细心而反复的实行对照实验还是与先前一样的结果。就要根据情况从细胞和血清中寻找原因。
疑难血型鉴定和疑难交叉配血 1.疑难血型鉴定 疑难血型是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）的现象，多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。因此，疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体和特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学和分子生物学研究方法对患者样本进行检测。而对于不规则抗体筛查和鉴定，主要是对抗体种类和特性进行研究，尤其是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确的分析患者血清抗体的特异性。在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析和处理：（1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，主要包括抗原类影响因素和抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等，抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。 （2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。 流程图1 疑难血型鉴定流程
2014年1月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例，经一系列血清学试验确证该患者为P1Pk血型系统的p表型，经分子生物学基因测序，初步推断A4GALT 基因第3外显子的903C＞G突变是患者p表型形成的分子生物学基础，该研究成果从不同角度和深度撰写论文，先后发表《临床军医杂志》和《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。在此之后的工作中，通过阅读文献自修学习，鉴定出Am、Bm、B3等血型亚型，形成了一套相对完整的疑难血型鉴定思路和流程。 2014年2月和2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗的患者，经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查和鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体的分布特征有了较为清晰的了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》，并形成了一套相对完整的不规则抗体筛查和鉴定流程。 2.疑难交叉配血 交叉配血是确保安全有效输血的最重要环节，只有交叉配血真正相合（相容）才能保障临床输血治疗的安全性。现一般进行供者和受者ABO、RhD同型配血，只有配血相合时才能输血（特殊情况例外），当出现配血不相合时，则视为“疑难配血”。目前，输血科常用的交叉配血的方法主要包括聚凝胺法、卡式法和抗球蛋白法。当遇到异常的配血实验结果时，应以抗人球蛋白法为准，但任何一种实验方法都存在假阳性或假阴性的可能。因此，需在不同的情况采取不同的检测技术，建立适合本实验室的血液免疫学检测流程。在工作中遇到疑难配血时，可按照以下步骤进行分析和处理： （1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，交叉配血不合包括主侧配血不合和次侧配血不合，其产生原因主要如下：①主侧配血不合：患者血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素；供着红细胞直抗阳性（相对少见）。②次侧配血不合：患者红细胞黏附免疫球蛋白或抗体，直抗阳性，全凝集或多凝集；供着血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素（相对少见）。 （2）设计实验进行配血疑难配血流程见流程图2。
疑难血型鉴定与疑难交叉配血 1、疑难血型鉴定 疑难血型就是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）得现象,多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。因此,疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体与特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学与分子生物学研究方法对患者样本进行检测。而对于不规则抗体筛查与鉴定，主要就是对抗体种类与特性进行研究，尤其就是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确得分析患者血清抗体得特异性。在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析与处理：(１)分析可能存在得原因先排除人为操作因素,再通过了解患者临床资料分析可能得原因，主要包括抗原类影响因素与抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等,抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。 （2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。 流程图1 疑难血型鉴定流程
2014年１月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例,经一系列血清学试验确证该患者为P１Pｋ血型系统得ｐ表型，经分子生物学基因测序,初步推断Ａ4GALT 基因第3外显子得９０3Ｃ＞G突变就是患者p表型形成得分子生物学基础,该研究成果从不同角度与深度撰写论文,先后发表《临床军医杂志》与《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。在此之后得工作中，通过阅读文献自修学习,鉴定出Am、Bm、B３等血型亚型，形成了一套相对完整得疑难血型鉴定思路与流程。 ２014年2月与2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗得患者,经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查与鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体得分布特征有了较为清晰得了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》,并形成了一套相对完整得不规则抗体筛查与鉴定流程。 2、疑难交叉配血 交叉配血就是确保安全有效输血得最重要环节,只有交叉配血真正相合（相容)才能保障临床输血治疗得安全性。现一般进行供者与受者AＢO、ＲｈD同型配血，只有配血相合时才能输血（特殊情况例外），当出现配血不相合时，则视为“疑难配血"。目前,输血科常用得交叉配血得方法主要包括聚凝胺法、卡式法与抗球蛋白法。当遇到异常得配血实验结果时,应以抗人球蛋白法为准，但任何一种实验方法都存在假阳性或假阴性得可能。因此,需在不同得情况采取不同得检测技术，建立适合本实验室得血液免疫学检测流程。在工作中遇到疑难配血时,可按照以下步骤进行分析与处理： （1）分析可能存在得原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能得原因，交叉配血不合包括主侧配血不合与次侧配血不合，其产生原因主要如下：①主侧配血不合:患者血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素;供着红细胞直抗阳性（相对少见).②次侧配血不合：患者红细胞黏附免疫球蛋白或抗体,直抗阳性，全凝集或多凝集；供着血清中存在同种抗体、自身抗体、冷凝集素、药物抗体、血浆蛋白紊乱等因素（相对少见）。 (2）设计实验进行配血疑难配血流程见流程图2.
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 1 2 一、正反定型不一致 3 1、重复试验（严格正规操作）。 4 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 5 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗6 原抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 7 8 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 9 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+ 10 11 以上）； 12 ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 13 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 14 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生15 抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 16 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，17 或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 18 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性19 后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 20 21 二、交叉配血不合
22 （一）主侧端不相合 23 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 24 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 25 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 26 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分27 子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。 28 5、试验系统被污染。 29 （二）次侧端不相合 30 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 31 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 32 33 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通34 过可输血）。 （三）配血不合的主要因素 35 36 1、血型是否正确。 37 2、是否有自身抗体。 38 3、是否有同种异体抗体。 39 （四）交叉配血不合常见原因分析
人体解剖学实验讲义 制药与生命科学学院 主编：王永录 2008年9月
目录 实验一小白鼠、大白鼠及兔的解剖实验 (1) 实验二人体解剖学实验 (2) 实验三ABO血型鉴定与交叉配血 (4) 实验四心音听诊 (9) 实验五人体心电图的记录 (12) 实验六人体动脉血压的测量 (16)
实验一小白鼠、大白鼠及兔的解剖实验 【目的】：掌握小白鼠、大白鼠及兔的基本解剖结构。 【实验对象】小白鼠、大白鼠、兔 【实验器材和药品】乌拉坦、手术台、手术器械（止血钳、手术刀、动脉夹、手术剪、手术镊等）、注射器、手术线、纱布、脱脂棉等【实验步骤及观察项目】 取实验动物，乌拉坦麻醉后固定于手术台，解剖。观察以下组织器官，注意与人体组织结构的区别。 1.神经系统：中枢神经系统：脑：大脑、小脑、间脑、脑干。脊髓。 2.骨骼肌：肌肉的构造和形态。 3.皮肤：表皮、真皮结构。皮肤的附属器，汗腺、毛发、指甲、皮脂腺。 4.消化系统：口腔、咽、食道、胃、小肠、大肠、肛门，唾液腺、胰腺、肝及胆囊。 5.呼吸系统：鼻、咽、喉、气管、支气管、肺、胸膜及胸膜腔。 6.循环系统：心脏(心壁、心腔、瓣膜、乳头肌、腱索、冠状血管)。 7.泌尿系统：肾、输尿管、膀胱、尿道。 8.生殖系统：雌性生殖系统：卵巢、输卵管、子宫、阴道、雄性生殖系统：睾丸、输精管、精囊、前列腺、射精管。 【思考题】 小白鼠、大白鼠及兔与人体结构的区别？
实验二人体解剖学实验 【目的】： 1.了解人体主要系统器官的概貌。对人体有一个全面的了解。 2.掌握人体各个系统主要器官的基本结构。 3.重点掌握循环系统及神经系统的基本结构和功能。 【实验对象】 1 人体各组织器官模型标本。 2 人体实物标本。 【实验步骤及观察项目】 观察以下组织器官： 1.骨骼系统：骨的基本形态构造，骨连结的形式，关节的基本构造，骨骼组成，颅骨、脊柱、胸廓及骨盆的组成。上肢骨，下肢骨。 2.骨骼肌：肌肉的构造和形态。肌肉的连结与肌肉的作用。头面肌群、胸腹肌群、腰背肌群、上下肢肌群。 3.皮肤：表皮、真皮结构。皮肤的附属器，汗腺、毛发、指甲、皮脂腺。 4.消化系统：口腔、咽、食道、胃、小肠、大肠、肛门，唾液腺、胰腺、肝及胆囊。 5.呼吸系统：鼻、咽、喉、气管、支气管、肺、胸膜及胸膜腔。 6.循环系统：心脏(心壁、心腔、瓣膜、乳头肌、腱索、冠状血管)、心脏的特殊传导系统、动脉、毛细血管、静脉。体循环、肺循环、淋巴循环。 7.泌尿系统：肾、输尿管、膀胱、尿道。 8.生殖系统：女性生殖系统：卵巢、输卵管、子宫、阴道、男性生殖系统：睾丸、输精管、精囊、前列腺、射精管。 9.神经系统：中枢神经系统：脑：大脑、小脑、间脑、脑干。脊髓。周围神经：脑神经、脊神经、植物性神经。 10.内分泌系统：甲状腺、甲状旁腺、肾上腺、胰岛、性腺、垂体、下丘脑、松果体。
第一部分血型鉴定 一、主要流程 离心→核收→登记→鉴定→复核→报告 二、详细流程及操作步骤 1.接收并检查标本是否合格（有无凝块，条码是否清晰完整等），若不合格则联系临床医生处理并登记； 2.3000RPM离心5分钟，使红细胞与血浆分离； 3.将标本核收入LIS系统中“戴安娜手工合血”项目下，并依次编号； 4.登记：在“血型鉴定原始记录本”上登记病人信息和编号； 5.检测前准备： (1)红细胞悬液配制：取软管，加入1ML生理盐水，再加入10UL红细胞后混匀待用； (2)反定型准备：取两只软管，分别标记“反A/反B”及编号，并分别加入混匀后的 A1\B标准红悬一滴； 6.检测： (1)正定型：取正定型鉴定卡片并标记病人姓名，检测日期和编号，撕开铝箔，每孔加 入50UL上述制备并混匀好的红悬，卡式离心机离心9分钟后观察结果； (2)反定型：向上述制备并混匀好的“反A\反B”管中每管加入100UL待检者血浆， 混匀静置1分钟后，3000RPM离心1分钟后观察结果； 7.结果判读：先以反定型判读血型，再以正定型进行验证 (1)反定型：于灯光下轻轻摇晃试管，出现絮状物表明有凝集，判定方式与正定型判断 相反； (2)正定型：以凝胶柱上端出现红细胞凝集物为阳性，直接判读ABO和RH血型，并注 意检查质控是否失效； 8.结果登记并签字：将结果登记至“血型鉴定原始记录本”并签字； 9.录入并审核发布报告：将结果录入“戴安娜手工合血”项目下，点击保存，最后检查一遍后审核报告。
第二部分临床配血及发血流程 （一）主要流程：申请单与标本接收→大血型和抗筛检测→交叉合血→出库收费→发血（二）详细步骤： （1）申请单与标本接收： ①接收到临床用血申请单后，首先明确用血类型为常规用血还是紧急用血，如果 是紧急用血则需问清楚紧急用血的原因，病人目前全身情况等，并涉及后续交 叉配血方法学选用的区别，常规用卡式合血法，紧急用凝聚胺合血法； ②核对病人信息并检查标本合格之后，请医生在“标本接收与血袋回收记录本” 上签字；大血型和抗筛检测： ③检测前准备： 1)大血型用标准红悬：取两只软管分别标记A1/B，按照4滴生理盐水：1 滴混匀后红悬的比例配制适量的A1/B标准红悬待用； 2)抗筛检测用红悬：同样取三支软管，分别标记I/II/III，按照4滴生理盐水： 1滴相应抗筛红悬的比例配制适量待用； 3)待检者红悬：按1ML生理盐水：10UL红细胞的比例于软管中配制并混匀 待用； (2)抗筛检测：取抗筛卡三孔，标记病人姓名/日期及I/II/III编号，按编号分别加入I/II/III 型红悬50UL，再向每孔加入25UL待检者血浆，温育器中温育15分钟后，于卡式 离心机离心9分钟后观察结果并记录于输血申请单上； (3)大血型鉴定：取大血型鉴定卡标注病人信息，检测日期后于A\B\C\D\E\Ctl孔每孔 加入50ul待检者红悬，A1/B孔分别加入50ul相应的标准红悬和50ul待检者血浆 后离心9分钟后观察结果并记录于输血申请单； (4) 交叉合血 根据患者的血型，申请量，病人血色素及全身状况结合库存及效期选择合适的血液 品种和血量进行配血→取软管一支，将血袋上标记标签1贴于其上并扯下一段血 辫将其内血液转移至软管中离心（3000RPM 3分钟）备用→以1ML生理盐水：10UL 红细胞的比例分别配制献血者和受血者红悬备用→将血袋上另一标记标签撕下贴 于申请单，同时将“病例备查”和“存档备查”两个标签撕下备用→用小纸片标注 病人姓名和血袋号后与血袋一起放回冰箱保存。 ①常规用血合血---卡式法 取配血卡两孔，分别标注好主次侧，并写好病人姓名，血袋号，日期等信息， 主侧加入50UL献血者红悬和25UL受血者血浆，次侧加入50UL受血者红悬 和25UL献血者血浆，于温育器中温育15分钟后卡式离心机离心9分钟后观 察结果；同时需使用ABO/RH(D)血型卡复查献血员血型，方法同血型鉴定。 ②紧急用血合血---凝聚胺法 取2支试管分别标记主/次侧，主侧加入50UL献血者红悬、100UL受血者血 浆和4滴低离子介质，次侧加入50UL受血者红悬、100UL献血者血浆和4 滴低离子介质→混匀后置于室温孵育1分钟→3000RPM离心10秒后轻摇试 管观察红细胞是否凝集，如有凝集则表明配血不合，需查找原因，无凝集则继 续下一步操作；→每管加2滴凝聚胺溶液并混匀后静置15秒→3000RPM离 心10秒后彻底弃上清，轻摇试管确保每一管均凝集→每管加入2滴重悬液后 轻摇试管，观察红细胞是否凝集，若出现凝集且轻摇不消散则说明配血不合， 需进一步寻找原因。 （5）出库及收费
生理实验二------ABO 血型鉴定 [实验目的] 1.观察红细胞凝集现象。 2.学习ABO 血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。 [实验原理] （一）ABO 血型的分型 血型是指红细胞膜上特异性抗原的类型。ABO 血型系统有两种不同的抗原，即A 抗原、 B 抗原。而血清中还存在对应的两种抗体，即抗A 抗体和抗B 抗体。ABO 血型的分型是根据红细胞膜上是否存在A 抗原和B 抗原将血液分为A 、B 、AB 和O 型四类。 A 抗原与抗A 抗体相遇或 B 抗原与抗B 抗体相遇时，会发生红细胞凝集反应。当给人输入血型不相容的血液时，可发生血管内红细胞凝集和溶血反应，严重时可危及生命。 表1 ABO 血型系统的抗原和抗体 血型 红细胞膜上的抗原 血清中的抗体 A 型 A 抗 B B 型 B 抗A AB 型 A+B 无 O 型 无 抗A+抗B （二）ABO 血型的鉴定---正向定型 常规ABO 血型的定兴包括：正向定型和反向定型。 1.正向定型是用抗A 抗体和抗B 抗体检测未知红细胞上有无A 或B 抗原；反向定型是用已知血型的红细胞检测血清中有无抗A 或抗B 抗体。 表2 ABO 正向定型 正向定型 血型 B 型血清 （抗A ） A 型血清 （抗 B ） O 型血清 （抗A ，抗B ） - - - O 型 + - + A 型 - + + B 型 + + + AB 型 一般A 型标准血清中含有抗B 抗体，B 型标准血清中含有抗A 抗体，因此可以用标准血清中的抗体与被测者红细胞反应，以确定其血型。 （三）ABO 血型的遗传由三个等位基因控制
人类ABO血型系统的遗传由9号染色体上的A、B和O三个等位基因来控制。在一对染色体上只可能出现上述三个基因的两个，分别由父母双方各遗传给子代。三个基因可组成六组基因型。由于A和B基因为显性基因，O基因为隐性基因，故血型的表现型仅四种。血型相同的人，其遗传基因型不一定相同。见表3 表3 ABO血型的基因型和表现型 思考题：A型、B型的父母，子女可能的血型？ 利用血型遗传的规律，可推知子女可能有的血型和不可能有的血型，可从子女的血型表现型来推断亲子关系。必须注意的是，法医学上依据血型来判断亲自关系时，只能做出否定的判断，而不能做出肯定的判断。 （四）正常人的血量 约占体重的7～8%，可分循环血量和储存血量。 （五）失血量对机体的影响 <10%，不出面明显的临床症状； 20%时，机体代偿功能不足以维持血压，就会出现一些列临床症状。 >30%，可能危及生命。 （六）安全输血的原则 输血是抢救伤员生命和治疗某些疾病的重要手段。输血不当，会给病人造成严重的损害，甚至危及生命。 1.输血前必须鉴定血型，坚持同型输血 要求供血者与受血者的ABO血型相合。对于生育年龄的妇女和需要反复接受输血的病人，还必须使供血者与受血者的Rh血型相合，特别要注意Rh阴性受血者产生抗Rh抗体的情况。 2.即使ABO血型相同，仍必须进行交叉配血试验 为保证输血安全，即使已知ABO血型相同，还必须分别将供血者的红细胞和受血者的血清以及受血者的红细胞与供血者的血清进行混合，观察有无凝集反应，称交叉配血试验。 交叉配血试验主要是检测受血者的血浆有无使供血者的红细胞发生凝集的抗体，
一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。 (4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有
无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。