姜黄素-PVP固体分散在兔体内药代动力学参数的测定
摘要目的：研究姜黄素-PVP固体分散在兔体内的药代动力学参数。方法：HPLC法，采用乙腈作为流动相，流速：1ml/min，柱温：30℃，检测波长：428nm。结果在0.05～12.5.5 μg/mL 的线性范围内，姜黄素峰面积对其浓度呈线性关系，r=0.0008。结论所建立的姜黄素体内血药浓度测定方法可行，但由于实验操作误差，导致线性关系不明显，实验重现性不好。关键词：姜黄素；高效液相色谱法；药代动力学参数
Determination of pharmacokinetic parameters of curcumin -
pvp solid dispersion in rabbit
Author:Lin Jingyun(FJMU 2008grade Stu ID :1314408047)Instructor: Deng Yanping Abstract: Objective To determine the pharmacokinetic parameters of curcumin -pvp solid dispersion in rabbit Methods HPLC，the mobile phase was at a flow rate of 1ml/min，temperature was 30℃，the detective wavelength was 428 nm.Results: in 0.05 ~ 12.5.5 muong/mL of linear range, curcumin peak area of its concentration is linear relationship, r =0.0008 .Conclusion:the established method to determine the curcumin blood drug concentrations is feasible. But with some .improper operation，we can’t get the right conclusion. Key words : curcumin; HPLC; pharmacokinetic
姜黄素(Curcumin，Cur)是中药姜黄的一种主要有效成分，现代药理研究表明其具有抗癌、抗HIV、抗凝、抗炎、抗氧化、降血脂等多种药理作用，且毒性低，具有良好的临床应用潜力。但其在水中的溶解度低于0.125 mg·L-1，口服时大部分以原形排出体外(约89% )，导致其生物利用度低。以聚乙烯吡咯烷酮( PVP-k30 )为载体，采用固体分散技术将姜黄素制成固体分散体后，姜黄素固体分散体的溶解度达到66.28 g·L-1(以姜黄素计)，比姜黄素原料药的溶解度提高53万倍，增溶效果极为显著。由于姜黄素的血浆消除半衰期较短，在实验课教学的时间内可以观察到完整的消除过程。本实验以家兔为实验对象，通过给药后连续采样测定其血药浓度从而获得不同时刻的姜黄素血药浓度，进而得到该药的药代动力学参数。
1.材料
1.1.仪器HPLC色谱仪、涡旋混合器、水浴恒温水浴锅、台式高速离心机、水浴式氮吹仪。
1.2.试药乙酸乙酯、二甲基亚砜、冰乙酸、姜黄素均为国产分析纯；聚乙烯吡咯烷酮( PVP-k30 )、姜黄素固体分散体（自制）、肝素注射液、姜黄素标准品（中国药品生物制品检定所），甲醇、乙腈(HPLC纯)，水为乐百氏纯净水。
1.3.动物家兔1只，体重约2 kg，福建医科大学动物中心提供。
2.方法与结果
2.1. 色谱条件Amethyst(紫晶)C18-P (5μm，4.6X150 mm )色谱柱、流动相为5%冰乙酸-乙腈（42∶58）、流速1.0 mL /min，检测波长为428 nm，柱温为30℃，进样量10.0 μL。
2.2. 溶液的配制
2.2.1. 姜黄素标准溶液的配制姜黄素标准溶液的配制：精密称取7.5 mg 姜黄素标准品于10 ml容量瓶中，用甲醇加至刻度即得0.75 mg·mL-1的标准储备液。精密吸取一定量的储备液以甲醇配制成375.0、187.5、75.0、37.5、15.0、7.5、
3.0、1.5 μg·mL-1的姜黄素系列标准液，4℃冷藏保存。
2.2.2. 姜黄素固体分散体注射液以生理盐水将其配成5.56 mg/mL（以姜黄素计）的注射液。
2.2.
3. 萃取液：乙酸乙酯∶二甲基亚砜=14∶1（V/V）。
2.3.给药方法与取样取健康家兔一只，称体重，耳缘静脉注射肝素注射液0.5 mL/kg （3125 u/kg）。在耳中动脉中间处拔掉兔毛（约一元硬币大小），再斜切开耳中央动脉，取血约0.7 mL作为空白血液对照用；用两个手指以适当的力量压住动脉止血，然后在另一只耳的耳缘静脉静注姜黄素固体分散体注射液2.0 mL/kg( 11.12 mg /kg，以姜黄素计)，分别于给药后的1、2、3、5、7、10、15、20、25、35、45、55 min取血约0.7 mL于1.5 mL的EP 管，尽快12000 r/min离心3 min，准确取血浆0.3 mL于 2 mL的EP管，待测。
2.4.血浆样品的处理取血浆0.3 mL于2 mL EP管，加萃取液1.2 mL，涡旋萃取2 min，12000 r／min离心3 min后取全部上清液至1.5 mL 的EP中，于65℃水浴氮气吹干（约需8 min），取出，待冷却至室温后加流动相100 μL，涡旋1 min溶解残渣，12000 r／min离心5 min后进样10.0 μL测定。
2.5. 色谱行为在本实验的条件下，Cur峰形良好，无杂峰干扰，保留时间为4.4min,空白血浆中的内源性杂志及Cur的体内代谢物在Cur峰相应位置处物干扰。色谱图如Fig1。
A
8
7
6
5
4
3
2
1
-1
0.00.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0min mV
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0.00.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5min
B
min 0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
1.25
C
Fig1.姜黄素色谱图
A.空白血浆
B. 模拟血浆样品图谱图
C.耳缘静注家兔55min 血浆样品
2.6. 标准曲线的制备 取
8只2 mL EP 管，分别加入姜黄素系列标准液（1.5、3.0、7.5、15.0、37.5、75.0、187.5、375.0μg ·mL-1）各10 μL ，再加入空白血浆各0.3 mL ，混匀，配成姜黄素浓度分别为0.05、0.1、0.25、0.5、1.25、2.5、6.25、12.5 μg·mL -1的血浆标准溶液，按“3.3血浆样品的处理”项下操作， 进样后分析测定，以姜黄素的峰面积对姜黄素浓度进行加权最小二乘法回归处理，得回归方程A=168679.9*C-13381.3。
2.7. 家兔血药浓度测定 取家兔血浆样品供试液10.0 μL 进样测定，记录色谱图，按外标法以回归方程进行计算血药浓度。
2.8. 姜黄素的药时曲线与药代动力学参数 家兔耳缘静脉注射Cur-Pvpk30后，不同时间血药浓度见下图。以kinetica 4.4.1软件对血药浓度一时间数据进行房室模型自动拟合，通
过AIC法、拟合优度法对结果进行判断，按二室模型进行拟合能较好的表达药-时曲线，获得主要的药代动力学参数如下：A=1746.97；α=1.3074；B=291.261; β=0.0568731；t?α=0.530173 min; t?β=12.1876 min; C=Ae-αt+Be-βt
Fig2家兔耳缘静脉注射Cur后的平均血药浓度-时间曲线
3.讨论
1)姜黄素在水中的溶解度低于0.125 mg·L-1，口服时大部分以原形排出体外(约89% )，导致其生物利用度低。以聚乙烯吡咯烷酮( PVP-k30 )为载体，采用固体分散技术将姜黄素制成固体分散体后，姜黄素固体分散体的溶解度达到66.28 g·L-1 (以姜黄素计)，比姜黄素原料药的溶解度提高53万倍，增溶效果极为显著。本实验建立了HPLC的外标法测定，以家兔为实验对象，通过给药后连续采样测定其血药浓度从而获得不同时刻的姜黄素血药浓度，进而得到该药的药代动力学参数。
2)外标法的优点是不必用校正因子，不必加内标物，常用于日常控制分析。分析的结果准确度主要取决于进养的准确性和操作条件的稳定程度。
3)实验的萃取剂中加入了少量的二甲基亚砜（乙酸乙酯：二甲基亚砜=14：1），增加了萃取液的极性，使萃取率较乙酸乙酯有了较大的提高。
4)本实验建立了HPLC的外标法测定家兔血浆中的Cur浓度，血样处理简单，血浆内源性杂志无干扰，适用于Cur的家兔药动学研究。
5)由于取血时间不恰当，或是取血时不严谨的操作，导致血液样本污染，最终导致数据忽高忽低，图表不能呈现良好的线性关系。因此，在取血和样本处理的过程中，一定要严格遵循操作规程，否则，很难得到良好的线性关系。
6)
参考文献
[1]刘延敏，王传胜，韩刚，等．姜黄素固体分散体的制备及体外溶出度测定[J]．哈尔滨医科大学学报，
2006，40(4)：327— 328..
[2]韩婷，宓鹤鸣．姜黄化学成分及药理活性研究发展[J]．解放军药学学报.200l，17(2)：95-97.
[3]陈敏娟．姜黄素研究进展及应用前景[J]．海峡药学，2003,15(1)：4-6．