批准确认作成分类
制造管理责
任人制造管理
副责任人
制作人
大项目中项目
王茹半干转膜仪使用操作
作业程序作业内容
No.
1
使用方法
为防止膜被污染，本过程请带手套操作。
1. 打开外盖和不锈钢电极板。
2. 先在铂金阳极板放上预先浸泡过的厚滤纸。用移液管或玻璃棒在
滤纸表面滚动，驱除气泡，排出空气。
3. 放置预先浸泡过的转移膜，排出空气。
4. 放置平衡过的凝胶，排出空气。凝胶放在膜的中间。
5. 放置预先浸泡过的厚滤纸，排出空气。
6. 若同时转移超过1张全大小的膜，以预先浸泡过的透析膜隔开，
然后在继续2-5步。若是小的凝胶，可以将它们挨着平铺在一起转膜
。排出所有空气。
7. 小心的装上电极板。装好电极板，使啮合，但不要弄坏滤纸堆8.
安上外盖。插上电源。正常的转膜是从阴极到阳极，红色插红色，
黑色插黑色。不要弄反，否则不锈钢板就会坏掉。
9. 打开电源。转移较小的膜15-30min，10-15V。大的膜30-
60min，15-25V。额定电流：大凝胶3mA/cm2,小凝胶5.5mA/cm2，过
大会过热烧毁一起。一些蛋白可能会功过膜转移到滤纸上。
10. 转膜完毕，关闭电源开关，切断电源连接。打开外盖和阴极
板，去掉滤纸与透析膜（如果有的话）。转膜的效率可以以此为半干转膜仪
2转移效率低
A． 分子仍留在凝胶（根据 凝胶染料Coomassie blue 或者
Silver Staining判断）
1. 转膜时间过短。
2. buffer的pH不在等电点附近，电荷不是最大的。改变合适pH的buffer。
3. 滤纸太干。
4. 电路错误。
5. 凝胶浓度太大。低浓度→大孔径→高效率。
6. transfer buffer中的甲醇将阻滞蛋白从凝胶中洗提。除去甲醇，则提高转移效率，但去降低与硝化纤维的结合效率。改使用PVDF膜。
7. 蛋白沉淀在凝胶中。使用含SDS的transfer buffer。SDS提高转移效率，但去降低与硝化纤维的结合效率且和影响某些抗体的结合反应。
B． 转移物弥散；丢失；紊乱
1. 膜与凝胶接合不紧。
2. 凝胶没有完全平衡。
3. 如果一次转移多张膜，将会产生这种影响。
4. 电压过高。
3准备工作
1. 准备转移缓冲液.不要无故调整缓冲液的pH值。不适当的buffer 将使仪器过热出错。
2. 电泳后在transfer buffer中平衡凝胶。平衡可以去处凝胶中所带的electrophoresis buffer中的盐和清洁剂。如果不去处盐，将影响buffer的传导性变大，并使仪器过热（在转移过程中）。另外，低浓度的凝胶（<12%的聚丙烯酰胺）在buffer中会缩水。平衡使凝胶调整在最终大小，便于电泳转移。平衡所需时间取决于凝胶的浓度。如0.75mm的SDS-PAGE gel需要15min。可以平衡多次。
3. 根据凝胶剪裁膜到适宜大小。以45度夹角将膜缓慢滑入transfer buffer，并浸泡15-30min，使完全湿润。否则易起气泡，气泡会阻滞转移。为防止膜被污染，请带手套或使用镊子。
4. 根据凝胶剪裁滤纸到适宜大小。需要加厚型滤纸2张或厚滤纸4张或薄滤纸6张。在transfer buffer中完全浸透滤纸。
5. 如果一次转膜超过1张（full-size），以透析膜隔开。透析膜也要完全浸透transfer buffer。推荐Spectr/PorTM透析膜。
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