Trizol 试剂
试剂盒组成
组分SK1311/BS409SK1312/BS410 Trizol25 ml100 ml
操作手册1份1份
保存方法及注意事项
试剂盒于常温运输，冷藏（2-8°C）避光保存，有效期为一年。
Trizol是强腐蚀性物质，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
产品介绍
Trizol是一种新型的总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能在迅速裂解细胞或组织的同时灭活细胞释放出的核酸酶，保持RNA的完整性。Trizol 试剂适用于从人，动物，植物，真菌，细菌等各种组织或细胞中快速分离总RNA，既用于小量样品（50-100 mg 组织、5×106细胞），也可用于大量样品（≥1 g 组织/≥107细胞）。可同时处理大量不同样品。提取的总RNA质量高，可用于 Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：
1.适用范围广。
2.操作简单快速，整个过程1 小时左右完成。
3.纯度高，污染少。
试剂准备
? 自备试剂：无水乙醇、氯仿、异丙醇等。
? 去酶处理：RNase是导致RNA降解最主要的物质，非常稳定。在一些极端的条件可暂时失活，限制因素去除后又迅速复性。常规的酸、碱
以及加热方法不能使RNase完全失活。RNase广泛存在于人的皮肤
上和体液及环境中，因此制备RNA时必须经常更换手套，同时戴上一
次性口罩和卫生帽，并保证环境清洁。塑料制品、玻璃和金属物品、
实验仪器等可以使用生工生产的固相RNase清除剂去除
RNase（RT4201），对于实验溶液试剂的处理可以使用生工生产的
液相RNase清除剂（RT4202）。
? 样品保存：匀浆后，加氯仿前，样品可在-70°C 放置一个月以上；提取的RNA样品可以在70%酒精中-20°C保存2个星期以上；如果需
要长期保存，请置超低温冰箱中保存。
样品准备
1.植物组织及真菌：取新鲜样品在液氮中充分研磨，也可以将样品剪碎后直
接在Trizol中研磨。约100 mg样品使用1 ml Trizol。
2.动物组织：取新鲜或-70°C冻存组织，每30-50 mg 组织在液氮中充分研磨，
也可以加入1 ml Trizol，用匀浆器匀浆处理。
3.单层培养细胞的收集：可直接在培养容器中裂解（培养面积不超过10
cm2，细胞不超过1×107），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。
●直接裂解法：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每10 cm2面积加1
ml Trizol。用移液器吹打混匀。
●胰蛋白酶处理法：收集细胞并大致确定细胞数量，用PBS洗涤细胞后，
向细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容
器壁后，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至无
RNase的离心管中，8000 rpm 离心5 min，收集细胞沉淀，去除上清。
4.细胞悬液：离心收集细胞。每5×106-107动物、植物和酵母细胞或每107细
菌细胞加入1 ml Trizol。
地址:上海市松江区车墩工业区香闵路698号 全国免费电话:800-820-1016
Trizol试剂
5.血液处理：取0.5 ml新鲜或冻溶的血液，12,000 rpm 离心5 min，去除血
浆，加入1 ml Trizol，充分振荡混匀。
标准抽提步骤
1.将裂解后样品或匀浆液室温放置 5-10 min，使得核蛋白与核酸完全分离。
2.加入0.2 ml 氯仿，剧烈振荡15 sec，室温放置3 min。12,000 rpm 4°C离
心10 min。
3.吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，室温放置
20 min。
4.12,000 rpm 4°C 离心10 min，弃上清。
5.加入1 ml 75%乙醇洗涤沉淀。12,000 rpm 4°C 离心3 min，弃上清。室温
干燥5-10 min。
6.加入30-50 μl RNase-free ddH2O，充分溶解RNA。将所得到的RNA溶液
置于-70°C保存或用于后续试验。
Tel: 021-******** E-mail: kit@https://www.doczj.com/doc/8912627067.html, Web: https://www.doczj.com/doc/8912627067.html,
分析和定量
1.测定样品在260 nm和280 nm的吸收值确定RNA的质量。按1 OD=40 μg RNA
计算RNA的产率。OD260/280 在1.8-2.0视为抽提RNA的纯度很高。浓度在4 μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。
2.进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。
常见问题分析
1.提取的RNA量较少
A.样品裂解或匀浆处理不彻底，RNA没有被完全释放出来。
B.得到的 RNA 沉淀未完全溶解。
2.RNA样品的A260/ A280值小于1.6
A.检测吸光度时，RNA 样品用水溶解不用 TE。低离子浓度和低pH 条件
下，A280值会偏高。
B.样品匀浆时加的试剂量太少，RNA 与蛋白质，DNA不能够完全分离。
C.匀浆后样品未在室温放置5分钟，RNA 与核蛋白未完全解离。
D.水相中混有有机相，从而带有蛋白质和DNA污染。
E.抽提得到的 RNA 沉淀未完全溶解。
3.提取RNA样品发生部分或完全降解
A.所用组织或细胞不新鲜，样品没有被及时液氮冻存，导致组织或细胞
中的RNA降解。建议使用组织RNA常温保存液（RT4171），细菌
RNA Locker（RT91712），血液RNA Locker（RT91713）， 拭子和
体液RNA常温保存液（RT91714）等保存未能够及时提取的组织或细
胞。
B.细胞在胰蛋白酶时消化过长，导致未加Trizol前RNA已经部分降解。
C.溶液或离心管未经 RNase去除处理，RNase的污染导致RNA被降解。
D.电泳时使用的甲酰胺 pH 小于3.5，导致RNA发生酸解。
4.RNA 样品中存在DNA 污染
A.样品匀浆时加的试剂体积太少导致，如果已存在DNA 污染，可用非酶
DNA清除剂-A（RT71312）或非酶DNA清除剂-B（RT81912）去除。
B.样品中含组织溶剂（如乙醇等）或碱性溶液，致水相减少或pH 升高。
5.RNA 样品中存在蛋白和多糖污染
A.样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大，细胞未裂解完全。
B.水相中混有有机相，从而带有蛋白质和DNA。
地址:上海市松江区车墩工业区香闵路698号 全国免费电话:800-820-1016