中国农业大学
博士后学位论文
酶法合成海藻糖的研究
姓名：马莺
申请学位级别：博士后专业：食品科学与工程指导教师：李里特
20030301
瘫士后工搏援番耱臻套或海藻持蝣麟竞马鸯
Ｉ｝｛ｌ文摘要
海藻耩避出甄个葡萄稚分，ｊ｜噩过Ｇｕ，１一Ｉ键缝合弼成的１ｌ：还原性戳耱。肖ｔｌ：物卸ｌ胞处丁口Ｉ饿、
予潍、悫浚、低滚冷凉、辐射、ｌ锈渗透｛｝ｉ及商毒试粼等静秘魏追玮壤时，照内海菠糖禽麓迅速』二＇；｝．｝，
对多转又分子都具有镶护俸翊，扶积保护生命奉身。矫潍泣麓海凝糖弼群对生黝｛誊ｉｉｔ／ｌ：秘又努子有良好的苛特舜性的保护作Ｊｔｊ，能箕在分子生物学、医学、食晶ｊｉ．业、化投描ｉ：姚、农业等领域有ｒ阔的应心前景。
以碳水化台物为底物，酶浊台成海藻糖是降低海藻糖的！｜ｊ产：成本的最有效方法，也是Ｉ－ｔ前国际Ｌ的研究热点。本课题立足ｒ以淀粉雨Ｉ麦芽糖为底物，※川微生物酶合成海藻糖，由淀粉和麦芽黼合成海藻糖掰采心静是２种不闲∞海藻耱合成酶。催他麦芽糖转他为海藻糠的黪祢为海藻耱台酶，
菠耨食酶缝匈：｛；特嚣我的ｆｌｌ！ｆｔ，麦芽穰转纯为海藻藏，滚戆鲢一秘分ｆ妇羲穰蒋转移瓣，ｎｌｉ：Ｉ骞安棼穰滟ａ．１，４糖｛｝键转纯为ａ—Ｉ，ｌ糍蓊键。庄反麻过程中，不需要有磷酸盐共存。海藻耱奇酶沟疯穆专一性强，强作Ｈ』丁麦芽糠ｑ－ｓ茂海藻糖及使海藻耱生成发芽糖。淀粉转化为海藻糖魁淀粉经过商温液化后加入支链淀粉酶水解为炭芽寡糖，由麦芽寡糖基海藻糖台酶（ｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＭＴＳａｓｅ）年¨麦芽寡糖基海藻糖水解酶（ｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈ８ｌｏｓｅｔｒｅｈａｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ，ＭＴＨａｓｅ）酶协同作ＪｌＪ可从发岿’寒糖生成海藻糖；其殷虑机制分为两步：Ｍ’ｒＳａｓｅ催化麦芽寡糖避原端的葡糖基ｔｉｌＪｌ＜１．ｔ邻瓣稳藏基瓣的ｔｔ．１，４萄旃萤键转｛￡戒为ｎ一１，ｌ｛｜ｊ｝耱髂缝，驮麦芽寡糖’｝戚麦芽褰糖基海藻辘，楚一静分子内转耱萋酶。ＭＹｔｌａｓｅ专…窳麓麦芽寡蘩纂海藻穰瓣麦芽寡蘩萋霹海藻蒺褥静ｆｌ。１，４戆ｆ｛＾键。褥到海藻糖和眈相赢底物少两个葡萄糖单位的麦芽寡精。两种酶循环佟聪下残物，每次扶麦芽寡糖生成海藻糖和少两个葡萄糖荦能的麦芽寡糖。
本研究经过人域实验筛选¨Ｊ２株分别产海藻糖合酶年¨ＭＴＳａｓｅ、ＭＴＨａｓｅ的菌株，升对其酶学特性和合成方法进行了研究。
ｌ透瞧纯海藻骧会酶台或海藻糠的礴突
（１）首先比较了八株能产生海藻糖的微生物的产海藻糖台酶的能力，确定瑟奥假单胞杆萄Ｈ７６为产酶黹株，弗对其培养特性进行了研究。恶臭假单胞杆莳的摄佳培养基配方为霾芽糖３％，葡萄耥３％，蚩ＩＧ臁２％．酵母粉ｏ．７％，ＭｇＳ０４．７１ｔ２０ｏ．２％。熟展健发酵Ｉ．艺条仆为：发酵温度３０６Ｃ．技酵ｐＨ７．２，５００ｍｌ三ｆ『｛瓶装赦蜒１００ｍｌ，发酵终点５２ｈｒｓ。
（２）磺究毙较了多耱蠢罄ｌ溶翅发表蕊溪瞧蠢ｌ渗透聪奥缘蕈ｌｔｆｇ｛：ｔ：蘸细您的方法，确定２％Ｇ‘笨ｔ９．ｓ镕ＯＰ．１００褒３５＂Ｃ渗透蹋藏０，５ｈｒ掰褥鹣透性耽纲魏海藻耱食簿嚣力最赢，这藏纲穗瓣１１７。８嵇。薅遴性他纲胞酶低温速冻，真空冷凉干燥而，细胞酶的活力Ｘ有所提高（约２．６倍），且易’ｒ保存。
（３）对这种透性化细胞海藻糖含酶的性质系统研究的结果为：①在底物嶷芽糖浓度为１０％，艇应液ｐＨ７．０，反麻时问为１０ｈｒｓ条什下，细胞酶的最适厦麻温度为３５。Ｃ，在３０～４０。Ｃ范丽内稳定；②该透性化细胞海藻糖台酶的最适ｐ｝｛在７．Ｏ～７．８之间．在ｐＨ６．６～７．８范围内最稳定；③Ｍ９２＋及Ｋ＋对该细胞酶ｌ羁明曩激活馋矮，Ｎａ＋鞘有激活佟ｊ艇，ｃａ２＋，Ｂ矿＋霹渡酶稿有雄制作羽，褥Ｚｎ”，Ｍｎ“及ｃｕ”潮胃强烈穗麴翻酶活力；④逢缝捷缳蕤海藻耱台酶戆疯秘符舞洼掇强，器鼗瓣麦势蕤转倪为海藻耱，同时其有微弱豹求解诈蹋，生成少最豹蔼萄耱，两对箕它糖类均不起伟瑚：⑤潺性化细胞海藻糖合酶在冷冻溅玲藏条什Ｆ保存１个月，酶活力稍有卜降，ｆＨ谯室流ｒ保存酶活力会有较人的损火。
（４）以麦芽糖为底物合成海藻糖的Ｅ：艺研究，首先研究了麦芽糖浓度、艇麻时间与反应温度铸Ｉ疆素列海藻糖产率的影响。结果表明：麦芽糖浓度刘海藻穗广：率影响较小；随反廊时Ｉ＇ｉｉｌ的延匠，海藻糖的产率逐溉增加；反应时间邈殴，海藻糖鹈产率会闵海藻糖台酶的弱承解作用蔼Ｆ降。反应澡皮媾
博士后工件报告醇珐合成洚藻糖的研丸马鸯
高，反应初始速度越快，而末｝｜＿ｌｊ速度！Ｉ！Ｉ｜越慢。经止交试验改计得到以友芽糖溶液为底物生产：海藻糖的Ｉ：艺条什为：反应漏度３０。Ｃ，反应ｐｌｔ７０，反应时问２４ｈｒｓ，透性化细胞海藻糖合酶的川阜：为３７５Ｕ／ｇ麦芽排ｆ。
２麦芽寡糖基海藻糖合酶（ＭＴＳａｓｅ）和麦芽寡糖基海藻糖水解酶（Ｍ’Ｈｌａｓｅ）合成海藻糖的研究
（】）首先通过对选定的实验菌株进行紫外线诱变选育，采ＪｆＪ将黼株随接拨种种：川体培养基上，
立刻进行紫外线照射的方法，筛选出性能优良菌株ＳＰ，其中产性能比Ⅲ发曲株提高了７倍，而ｌ；＿Ｌ能够保持一定的稳定性。通过对该菌株进行的形态特征鉴定、化学分类鉴定和生理生化特征鉴定，表明该凶为藤黄灰链霉菌，简称ＳＴ４１２。
（２）剥凶株ｓ’Ｆ４１２培养特性的埘究结果表州：租哺株Ｓｑ’４１２的，“酶过科中，麦芽糖为墩仕碳源；蛋川ｌ￥；ｆＨ牛肉青为最佳氮源；Ｋ２ＩＩＰ０４和ＭｇＳ０４＊７１ｔ２０为最仕无机盐：通过¨！交试验确定的最佳诱导培养基组合配力为麦芽糖Ｉ％、甾门胯ｏ．５％、牛肉商ｏ．２％、Ｋ２ＩＩＩ’０４０．２％、ＭｇＳ０４＂７１１２００．０５％。产二酶的虽佳培养条件为：温度为３１℃，ｐＨ值为７．０，该菌株在供氧充分条件下酶活力较高，所以选择５００ｍｌ三角瓶中装１００ｍｌ液体培养基为最佳装液昂，培养终点为培养衍１４４ｈｒｓ。
（３）对Ｍ．ＩＳａｓｅ平¨ＭＴＨａｓｅ系统研究表明：在淀粉液化液浓度为１０％、液化３０ｍｉｎｆ；｜｛Ｊ条什Ｆ，凶株ｓＴ４１２产生的Ｍ，ｒＳａｓｅ和Ｍ１１Ｈａｓｅ最适作＿Ｌ｝ｊ温度为４０℃，耐热性较差；最适作川ｔｐｌｔ值为７．０；
Ｃａ：＋平¨Ｍｎ”刑酶略有激活作川，Ｂ一＋和Ｚｎ“抑制酶７舌Ｉ删湿，最严重抑制酶酒’肚的是Ｃｕ“、ＥＤＩＡ、
Ｆｅ”、Ｆｅ”．分别抑制了酶括性的９６％、６９％、７７％、和７９％。通过对ＭＴＳａｓｅ和ＭＴＨａｓｅ底物特异性的研究，排除了以葡萄糖和麦芽糖为底物的可能性，确定在ＭＴＳａｓｅ和ＭＴＨａｓｅ的作川ｒ，以淀粉为底物将低聚糖转变为海藻精的合成过抖。粗酶液４。Ｃ时的保存稳定性很鼙，不适宵稿：４４Ｃ长期９Ｅ存。
（４）采刚平板式超滤膜对酶液进行浓缩，选川截留分子量１万的再生纤维索超滤膜，温度控制温度在３０＂Ｃ，压力控制在ｏ．０４Ｍｐａ以Ｆ对酶进行浓缩，酶液浓缩收率达到６０％以上。出丁超滤烂一种物理变化的操作，酶的活性不会被破坏，不仅在经济上可行，而且可达到部分纯化雨｜脱盐的Ｅ｛的。
（５）以淀粉为底物合成海藻糖的合成ｊＩ：艺研究，首先采用单因素确定淀粉液化液浓度为１０％、液化３０ｒａｉｎ，然Ｉｆ亓对其它五个影响闻素采川Ｊｉ＂冈素旧水甲１１：交试验设计进行Ｉ．艺优化。确定的展佳反应一１：艺为：反应温度４０＂Ｃ，反麻时间３６ｈｒｓ，磷酸盐缓冲溶液浓度ｏ．１ｍｏｌ／Ｌ、反戍ｐＨ值７．０和酶）Ｊ【Ｉ八昔２７Ｕ／ｇ淀粉。在此最优１Ｉ＋艺条件Ｆ，海藻糖的得率为２８．１４％。
关键词：恶臭假单胞：ｆ｜＝曲，藤黄灰链霉凶ＳＴ４１２，海藻糖合酶、麦芽寡糖基海藻糖台酶（Ｍ＇１１Ｓａｓｅ）
麦芽寡糖基海藻糖水解酶（Ｍ７ｒＨａｓｅ），透性化细胞，诱变、淀粉、麦芽糖、海藻糖、酶法合成
Ａｂｓｔｒａｃ！
Ｔｒｅｈａｌｏｓｅｉｓａｌｉｏｎ—ｒｅｄｕｃｉｎｇｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅｂｙ“ａ。１—１ｇｋｍｏｓｉｄｌｃｌｉｎｋａｇｅｔｈａｔｂｉｎｄｓｔｈｅ１ｗｏｇｌｕｃｏｓｅｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｔｒｅｈａｌｏｓｅｉｎｓｉｄｅｏｒｇａｎｉｓｍｃｅｌｌｗｉｌｌｒｉｓｅｐｒｏｍｐｔｌｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｔｓｅｌｆｗｈｅｎｉｔｉｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｓｈｕｎｇｅｒ，ｄｒｙ，ｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｆｒｅｅｚｉｎｇ，ｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｈｉｇｈｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｐｒｅｓｓｕｒｅａｎｄｐｏｉｓｏｎｏｕｓｒｅａｇｅｎｔ．Ｔｈｕｓｔｒｅｈａｌｏｓｅｉｓｐａｉｄｃｌｏｓｅａｔｔｅｎｔｉｏｎ．Ｔｒｅｈａｌｏｓｅｅｘｔｅｒｉｏｒｏｒｇａｎｉｓｍｃａｎａｌｓｏａｃｔｏｎｏｒｇａｎｉｓｍａｎｄｂｉｏｉｃｌｇｉｃｍｏｌｅｃｕｌｅｔｏｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅｍｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅｔｒｅｈａｌｏｓｅｉｓｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｂｉｏｌｏｇｙ，
ｐｈａｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ，ｃｏｓｍｅｔｉｃａｎｄａｒｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｉｔｉｓｐｒｉｍａｒｉｌｙｕｓｅｄｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｔｒｅｈａｌｏｓｅ
ｗｉｆｉｃｈｔｒａｎｓｆｏｒｍａｍｙｌｏｓｅｗｉｔｈｌｏｗｃｏｓｔｏｆｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅａｎｄｈｉｇｈｏｖｅｒａｌｌｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅ．
７Ｆｈｅｍｏｓｔｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｔｏｐｒｏｄｕｃｅｔｒｅｈａｌｏｓｅｉｓｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｔｒｅｈａｌｏｓｅｂｙｅｎｚｙｍｅｓ，ｕｓｉｎｇｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓａｓｓｕｂｓｔｒａｔｅ．１ｔ｛ｓｏｎｅｏｆｔｈｅｆｏｃＯＳｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙａｎｄｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅ。１’ｈｉｓｓｔｕｄｙｍａｉｎｌｙｄｉｓｃｕｓｓｅｄｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｗｉｔｈｓｔａｒｃｈｏｒｍａｌｔｏｓｅｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｎｚｙｍｅｓｙｓｔｅｍｓ．１’ｈｅｏｉｌｚｙｍｅｔｈａｔｃａｎｐｒｏｄｕｃｅｔｒｅｈａｌｏｓｅｆｒｏｍｍａｌｔｏｓｅｉｓｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅ．Ｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅｉｓａｎｅｗｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ．Ｉｔｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｎ一１，４－ｇｌｕｃｏｓｉｄｉｃｌｉｎｋａｇｅｏｆｍａｌｔｏｓｅｉｎｔｏｔｈｅｕ以．１一ｇｉｕｃｏｓｉｄｉｃｌｉｎｋａｇｅｗｉｔｈｏｕｔｒｅｑｕｉｒｉｎｇｐｈｏｓｐｈａｔｅ。ＢｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｐｅｃｉｔｉｃＲｙ，ｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅｏｎｌｙｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｍａｌｔｏｓｅｉｎｔｏｔｒｅｈａｌｏｓｅａｎｄｔｒｅｈａｌｏｓｅｉｎｔｏｍａｌｔｏｓｅ．Ｔｏｃｏｎｖｅｒｔｓｔａｒｃｈｉｎｔｏｔｒｅｈａｌｏｓｅ，ｆｉｒｓｔｌｙ，ｓｔａｒｃｈｓｈｏｕｌｄｂｅｌｉｑｕｅｆｉｅｄｕｎｄｅｒｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｎｄｂｅ
ｂｅｃｏｎｖｅ！‘ｔｅｄｉｎｔｏｈｙｄｒｏｔｙｚｅｄｉｎｔｏｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｂｙａｍｙｔｏｐｅｃｔａｓｅ．’ｔｈｅｎｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈ蠢ｒｉｄｅｓｃａｎ
ｔｒｅｈａｌｏｓｅｂｙｔｈｅｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎｏｆｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ＭＴＳａｓｅ）ａｎｄｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅｔｒｅｈａｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ＭＴＨａｓｅ）＋Ｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｉｌｅｅｎｚｙｍｅｓｙｓｔｅｍｈａｓｔｗｏｓｔｅｐｓ，Ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｓｔｅｐ，ＭＴＳａｓｅｃａｔａｌｙｚｅｓｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｔｈｅⅡ一１，４－ｇｌｕｃｏｓｉｄｉｃｌｉｎｋａｇｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｒｅｄｕｃｉｎｇ－ｅｎｄｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｔｈｅｎｅｘｔｏｎｅｏｆｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｅｈａｒｉｄｅｓｉｎｔｏｄ一１。Ｉ—ｇｔｕｃｏｓｉｄｉｃｌｉｎｋａｇｅｂｙｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｔｄａｒｔｒａｎｓｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ，ｔｏ
ｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｔｉｌｅｐｒｏｄｕｃｅｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅｆｒｏｍｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＭＴｔｌａｓｅｃａｔａｌｙｚｅｓ
＊１，４一ｇｌｕｃｏｓｉｄｉｃｌｉｎｋａｇｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｍａｌｔｏｏｔｉｇｏｓｙｌａｎｄｔｒｅｈａｌｏｓｙｌｒｅｓｉｄｕｅｓｏｆｄ’ｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅ，ｔｏ
ｌｉｂｅｒａｔｅｔｒｅｈａｌｏｓｅ．Ｔｈｅｓｅｅｎｚｙｍｅｓａｃｔｏｎｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｃｉｒｃｕｌａｒｌｙ，ｔｏｐｒｏｄｕｃｅｔｒｅｈａｌｏｓｅａｎｄｔｈｅｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｈａｖｉｎｇ２ｌｅｓｓｇｌｕｃｏｓｅｒｅｓｉｄｕｅｓｔｈａｎｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ．Ｔｈｉｓｓｙｓｔｅｍｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ?ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅ．
Ｉｎｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈ，ｗｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ２ｓｔｒａｉｎｓ，ｏｎｅｏｆｗｈｉｃｉｌｃａｎｐｒｏｄｕｃｅｓｔｒａｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ａｎｄａｎｏｔｈｅｒｏｆ
ｗｈｉｃｈｃａｎｐｒｏｄｕｃｅｓＭＴＳａｓｅａｎｄＭＷｌａｓｅ．Ｗｅａｌｓｏｓｌｎｄｉｅｄｔｈｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｈｅｓｅｅｕｚｙｕｌｅｓａｎｄｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ、
ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ’ｌ＇ｒｅｈａｌｏｓｅｂｙ’Ｉ＇ｒｅｈａｌｏｓｅＳｙｎｔｈａｓｅｉｎｌ＇ｅｒｍｅａｂｉｌｉｚｅｄＣｅｌｌｓ
（１）＋ｌ＇ｈｅｂｅｓｔｓｔｒａｉｎｗｈｉｃｈｐｒｏｄｕｃｉｎｇｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａＨ７６，ｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｉ＇ｏｍ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ豳ｍｅｄｉｕｍａｎｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ，ＴｈｅｆｏｒｍｕｌａｏｆｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｗａｓｅｉｇｈｔｓｔｒａｉｎｓＩｔｓ
０２％．ＴｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄａＳ：ｍａｌｔｏｓｅ３％．ｇｌｕｃｏｓｅ３％，ｐｅｐｔｏｎｅ２％，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎＯ．７％，ＭｇＳ０４．７１１２０
ｏｐｔｉｍｕｍｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅ：ｔｅｎｐｅｒａｔｕｒｅ３０“Ｃ，ｐＨ７．２，ｃａｐａｃｉｔｙ１００ｒａｌｐｅｒ５００ｍｌｔｒｉａｎｇｕｌａｒｂｏｔｔｌｅａｎｄ
ｔｉｍｅ５２ｈｒｓ．
（２）ＴｈｅｐｅｎｎｅａｂｉｔｉｚａｔｉｏｎｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａｃｅｌｌｓｉｎｒｅｌａｔｉｏｎ｛。ｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｕｓｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｇａｎｉｃｓｏｌｖｅｎｔｓａｎｄｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｓｅｓｏｌｖｅｎｔｓｗａｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｔｈｅｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｓ。ＭａｘｉｍｕｍｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔＹｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｗｉｔｈ２％ｔｏｌｕｅｎｅａｎｄＯ．５％ＯＰ．１００，ａｔ３５℃，０５ｈｒ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｔｒｅｈａｌｏｓｅ
ｕｎｔｒｅａｔｅｄｃｅｌｌｓ．Ａｆｔｅｒ静ｅｅｚｅ—ｄｒｙｉｎｇ，ｉｔｓａｃｔｉｖｉｔｙｓｙｎｔｈａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｌ１７，８一ｆｏｌｄｗｉｔｈｒｅｓｐｅｃｔｔｏ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ２６一ｆｏＩｄｍｏｒｅ
（３）Ｔｈｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅｉｎｔｈｅｐｅｒｌｎｅａｂｉｌｉｚｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ．
Ｔｂｅｅｎｚｙｎｌｅｅｘｈｉｂｉｔｅｄａｎｏｐｔｉｎｍｍｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ３５℃．ａｎｄａｕｏｐｔｉｍｕｍｐｌＩｏｆ７．０－７．８．’Ｉ＇ｈｅｅｎｚｙｍｅｗａｓｓｔａｂｌｅａｔ３０～４０。Ｃ，ｐｉｔ６．６Ⅶ７８＋ＦｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｒｅｈａｋｍｅｓｙｎｔｈａｓｅｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙａｄｄｉｔｉｏｎｏｆＭｇ…．Ｋ＋ａｎｄＮａ＋，ｂｕｔｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙＺｎ２。，Ｍｎ２＋，Ｃｕ２１，Ｃａ”，Ｂａ”．’Ｆｈｅｅｎｚｙｍｅｃａｔａｌｙｚｅｄｔｈｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｍａｌｔｏｓｅｉｎｔｏｔｒｅｈａｌｏｓｅｂｙｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒｎ’ａｎｓｇｌｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｉｔｃａｎｓｌｉｇｈｔｌｙｈｙｄｌ－ｏｌｙｚｅｍａｌｔｏｓｅｉｎｔｏｇｌｕｃｏｓｅ，ｂｕｔｉｔｗａｓｉｎａｃｔｉｖｅｏｎｏｔｈｅｒｓａｃｃｈａｒｉｅｄｓ．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｅｎｚｙｍｅｓｙｓｔｅｔｎｒｅｍａｉｎｅｄｐｒａｃｔｉｃａｌｌｙｕｎａｌｔｅｒｅｄｄｕｒｉｎｇｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎｆｏｒｕｐｔｏ１ｍｏｎｔｈ
（４）Ｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｂｙｔｒｅｂａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅｗｅｒｅｄｅｔａｉｌｅｄｓｔｕｄｉｅｄ．
７ｒｂｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｍａｌｔｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄａｂｏｖｅａ１１．Ｔｈｅ
ｍａｌｔｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｈａｓｌｉｔｔｌｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄ．Ａｔｔｈｅｂｅｇｉｎｎｉｎｇｏｆｒｅａｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｌｏｎｇｅｒｔｈｅｔｉｍｅ，ａｎｄ
ｔｈｅｈｉｇｈｅｒｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅ１１３０ｒｅｔｒｅｈａｌｏｓｅ．Ｔｈｅｏｐｔｉｕｔｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｒｅａｃｔｉｏｎｗｅｒｅｇａｉｎｅｄｗｉｔｈｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｄｅｓｉｇｎ：ｔｅｍｐｅｒａｔｍｅ３０”Ｃ，ｐｉｔ７．（），ｔｉｍｅ２４ｈｒｓ，ｔｈｅａｎｌｏｏｎｔｏｆｅｎｚｙｎｌｅ
３７５Ｕ／ｇｍａｌｔｏｓｅ．
２ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆ’ｌ＇ｒｅｂａｌｏｓｅｆｒｏｍＣｏｒｎＡｍｙｌｏｓｅｂｙｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅａｎｄ
ｍａｌｔ００１ｉｇｏｓｙｌｌｒｅｈａｌｏｓｅｔｒｅｈａｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ
（１）ＴｈｅｓｔａｒｔｓｔｒａｉｎｗａｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＵＶ－ｒａｙｉｎ＂ａｄｉａｔｉｏｎｔｏｏｂｔａｉｎａｓｔｒａｉｎｏｆＳＴ４１２ｗｉｔｈｈｉｇｈｙｉｅｌｄ
ｔｒｅｌｍｌｏｓｅ．Ｓｔｒａｉｎｗａｓｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｄｉｒｅｃｔｌｙｏｎｓｏｌｉｄｍｅｄｉｕｍａｎｄｉｒｒａｄｉａｔｅｄｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙｕｎｄｅｒｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ
ｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｓｔｒａｉｎｗｉｔｈｓｔａｂｉｌｉｔｙ．ｌａｍｐＰｒｏｄｕｃｉｎｇｃａｐａｃｉｔｙｉｔｓｏｆＳＴ４１２ｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ７ｔｉｍｅｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ
Ｍｏｄａｌｉｔｙｃｈａｒａｃｔｅｒ，ｃｈｅｍｉｃａｌｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｙ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆＳＴ４１２一ｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｉｓｓｔｒａｉｎｉｓＳｔｒｅｐｔｏｍｅｙｃｅｓｌｕｔｅｏｇｒｉｓｅｕｓ．
（２）ＴｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｒｏｆＳＴ４１２－ｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｄｉｓｃｕｓｓｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ：④Ｍａｌｔｏｓｅｗａｓｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅ，ｐｅｐｔｏｎｅａｎｄｂｅｅｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｅｒｅｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅ，Ｋ２ＨＰ０４ａｎｄＭｇＳ０４?７Ｈ２０ｗｅｒｅｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｉｎｏｒｇａｎｉｃ．②ｒｒｈｅｆｏｒｍｔｆｌａｏｆｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｔｈｒｏｕｇｈｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｄｅｓｉｇｎｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄａｓ：ｍａｌｔｏｓｅｌ％．ｐｅｐｔｏｎｅ０５％．ｂｅｅｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ０．２％，Ｋ２ＨＩ’０４０．２％ａｎｄＭｇＳＯｄ?７Ｈ２００．０５％．③Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｆｅｒｍｔｅｎｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅ：ｔｅｍｐｒｅｔｕｒｅ３Ｉ℃，ｐＨ７．０，ｃａｐａｃｉｔｙ１００ｍｌ
ｔｉｍｅ１４４ｈｏｕｒｓ．
ｐｅｒ５００ｍｌｔｒｉａｎｇｕｌａｒｂｏｔｔｌｅ，ｆｅｒｍｅｎｔｉｏｎ
（３）Ｔｈｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｃｒｅａｔａｓｅｗｅｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒｄｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ：Ｉｆｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｌｉｑｕｅｆｉｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆａｍｙｌｏｓｅａｎｄｌｉｑｕｅｆｉｅｄｔｉｍｅｗｅｒｅ１０％ａｎｄ３０ｍｉｎｕｔｅｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ．①ｃｈｅｅｎｚｙｍｅｅｘｈｉｂｉｔｅｄａｌｌｏｐｔｉｍｕｍｌｅｌｎｐｒｅｔｕｒｅｏｆ４０。ＣａｕｄｑｌｔｅｏｐｔｉｍｕｍｐｌＩｖａｌｕｅｏｆ７，０．㈤ｔｈｅｅｎｚｙｌｎｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｖａｄｄｉｔｉｏｎｏｆＣａ”ａｎｄＭｎ”，ｂｕｔｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄ９６％，６９％，７７％ａｎｄ７９％ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｂｙＣｕ”，ＥＤＴＡ，Ｆｅ”ａｎｄＦｅ”，ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ．③Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｘｉｔｙｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｃｒｅａｔａｓｅｈａｄｂｅｅｎｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．ｗｌｆｉｃｈｅｌｉｍｉｎａｔｅｄｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｍａｌｔｏｓｅａｓｉｔｓｓｕｂｓｔｒａｔｅ．④ｔｈｅｃｏｎｓｅｒｖｉｎｇｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｃｒｕｄｅｅｎｚｙｍｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｉｎｆｅｒｉｏｒ．Ｉｔｉｓｕｎｓｕｉｔｂｌｅｔｏｃｏｎｓｅｒｖｅｅｎｚｙｍｅｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒｌｏｎｇｔｉｍｅａｔ４。Ｃ．
（４）Ｉｔｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｏｆｔｈｅｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｕｓｉｎｇｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｔｒｅｈａｆｏｓｅ．ｃｒｅａｔａｓｅ．Ｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｌｅｄｃｅｌｌｕｌｏｓｅｕｌｔｒａｆｉｌｌｒａｔｆｏｎｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｏｎｅｔｅｎｔｈｏｕｓａｎｄｄａｌｔｏｎｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｔｏｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｔｒｅｂａｌｏｓｅ．ｃｒｅａｔａｓｅｌｉｑｕｏｒ．Ｔｈｅｔｉｍｅｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｙｉｅｌｄｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｒａｔｉｏｏｆｒｅｊｅｃｔｉｏｎｗｅｒｅｄｅｔｅｌｍｉｎｅｄＡｎｄｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｆｌｕｘ．ｔｏｏ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ１０，０００ｄｉｓｆｅａｓｉｂｌｅｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ（ｐｒｅｓｓｕｒｅｏｆ０．０４Ｍｐａ，ｔｅｍｐｒｅｔｕｒｅｏｆ３０～４０。Ｃ），ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅｙｉｅｌｄｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｃｏｕｌｄｓｕｒｐａｓｓ６０％．Ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｕｓｉｎｇｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｎｏｔｏｎｌｙｗｏｕｌｄｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｅｎｚｙｍｅ．ｂｕｔａｌｓｏｃｏｕｌｄｒｅｍｏｖｅｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｍｐｕｒｅｔｉｅｓｐａｒｔｌｙｅｆｆｅｃｔｉｄｖｅｌｙ．
博士后工作报告酶法合成海藻糖的研究马蕾
。２２２０。。２２２。。。亳２＝＝＝＝２＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝：＝：：＝＝：：：：：＝＝＝＝：＝：：：＝：：
（５）Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｗｅｒｅｍａｄｅ
ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙＡｂｏｖｅａ１１．ｉｔｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈａｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｌｉｑｕｅｆｉｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆａｍｙｌｏｓｅａｎｄｌｉｑｕｅｆｉｅｄｔｉｍｅｗｅｒｅ１Ｏ％ａｎｄ３０ｍｉｎｕｔｅｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｂｙｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒａｎａｌｙｓｅ．ＩｔＷａＳｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｏａｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｄｅｓｉｇｎｆｏｒａｎｏｔｈｅｒｆｉｖｅｉｎｆｌｕｅｎｔｆａｃｔｏｒｓｓｕｃｈａｓｔｅｍｐｒｅｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ，ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｂｕｆｆｅｒａｎｄ口Ｈａｎｄｔｈｅｍｏｕｎｌｏｆｅｎｚｙｍｅ．Ｔｈｅｅｘｐｅｌｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｌｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｔｅｍｐｒｅｔｕｒｅ４０℃．ｔｉｍｅ３６ｂｏｕｒｓ，ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｂｕｆｆｅｒＯ．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．０ａｎｄｔｉｌｅｍｏｕｎｔｏｆｅｎｚｙｍｅ２７Ｕ／ｇａｍｙｌｏｓｅｆｏｌｌｏｗｅｄｗｉｔｈ２８１４％ｔｒｅｈａｌｏｓｅ．
ＫｅｙＷｏｒｄｓ：ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＭＴＳａｓｅ，ＭｑｌＨａｓｅ，Ｓ＇１１４１２－ｓｔｒａｉｎ，Ｐｓｅｕｄｏｌｎｏｎａｓｐｕｔｉｄａ，ａｍｙｌｏｓｅ，ｍａｌｔｏｓｅ，ｔｒｅｂａｌｏｓｅ，
ｔｒｅｌｍｌｏｓｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚｅｄｃｅｌｌ，ｍｕｌａｇｅａｅｓｉｓ，ｓｙｎｌｈｅｓｉｓｂｙ￡＇ｌｌＺｙｌｌｌｅ
兰圭：皇耋竺兰兰：＝＝＝竺兰竺垒兰！兰竺竺兰：＝：：＝兰！
筇～一章前言
海藻糖（‘Ｆｒｅｈａｌｏｓｅ）烛由两个葡萄糖分子通过ａａ，１—１键结合而成的非还原性舣糖。海藻糖Ｊ’泛存在ｙ－，ｆ氐；｝９：植物、藻类、细菌、真幽、酵何、昆虫及无脊椎动物中，既是一?种贮藏性糖类，Ｘ烛麻激代谢的重要Ｊ“：物。
海藻糖不仅卅以作为碳源利能源，而Ｈ还具有保存生物活力的特殊功能，它具有保护生物细胞年¨生物活性物质在脱水、干旱、高温、冷冻、高渗透胝及有毒试荆等不良环境条件ｒ活性免遭破坏的功能。由丁‘海藻糖具有Ｊ１泛而独特的生物学功能，』、泛受到各个国家的密切关注．以致引发了世界性的海ｉ！ｉｌ糖研究和开发热潮。
１海藻糖的理化特性
１．Ｉ海藻糖的结构及分布
篙彩飞；
海藻糖（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）是由两个葡萄糖分子通过ｕ“，１—１键耋占台而成的１Ｆ还原性舣糖。它构对称，无小缩醛羟基，冈此既无还原－肚，也无变旋光性。海藻糖的分子构象式与Ｈａｗｏｒｔｈ式如图Ｉ－１所示忆
淅澡鞯的分ｒ怕象－℃
菇ＣＨｔ≥ＯＨ。磷Ｈ
海藻糖分丁的ｔｌａｗｏｒｔｈ式
围１．Ｉ海藻糖的特构
Ｆｉｇ１－１ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＴｒｅｈａｌｏｓｅ
海藻糖的发现可以追溯到上一个１什纪。１８３２年．Ｗｉｇｇｅｒｓ苘先从黑麦的麦角闰中提取了这种烈糖。１８５８年，贝尔绥洛斯特叉从茎虫的茧蜜中分离山该糖，被命名为茧蜜糖。随厉发现它在自然界的动植物和微生物中广泛存ｎ?，例如，磬菲等真汹类，霉悄、酵母锝微生物，海藻类，地农，虾类及很多昆虫，包括卵、蛹、幼虫中都禽有该糖…。但是直到进入２０世纪９０年代，随着其独特的生物学性质及功能的发现，海藻糖才逐渐成为国际上的一人研究热点。冈海藻糖能从海藻中获得，我国一般就将其称为海藻糖了。
１．２海藻糖的物理化学性质
海藻精有ｕｕ、ｕＢ、ｐＢ¨二种光学并牛勾忭，具一｛ｆａａ异构体足［Ｊ然界叫ｌＪ’泛分撕的种异｛＝｛！Ｊ体，其他两种异构体不能由生物合成，但已经通过化学方法合成出米。海藻糖的摹本物理化学性质［２Ｉ见表１．１。
表卜１海藻糖的理化性质
Ｔａｂｌｅｌ—１Ｔ１１ｅｐｈｙｓｉｃａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａＩｐｒｏｐｅｒｔｙｏｆｔｒｅｈａ【ＯＳｅ
溶解性易溶ｒ水、热乙醇，不溶＿ｒ乙醚
９７０。Ｃ（一水结品），熔解热５７．８ＫＪ／ｔｏｏｌ，１３０。Ｃ火水熔点
２ＩＯ．５℃（无水结晶），熔解热５３４ＫＪ／ｍｏｔ
旋光度１７８（２０。ＣＩ％水溶液）
尤吸沮性（Ｒ１１９０％以Ｉ、一：水结“）
吸湿性
有吸湿性（ＲＨ３０％以上，无水结品）
甜度蔗糖的４５％，无斤昧，嗣而爽口
消化性小肠内消化吸收
ｐＦｌ稳定性＞９９％（ｐ１１３．５一１０，１００。Ｃ，２４ｈ）
水溶液热稳定性＞９９％（１２０℃．９０ｍｉｎ）
氨基酸水溶液热稳定性无褐变（１００＂（２，９０ｍｉｎ）
蛋白质水溶液热稳定性无褐变（１００。Ｃ，９０ｒａｉｎ）
水溶液的保存性无褐变（３７＂Ｃ．１２个月）
酶的分解性海藻糖酶对海藻糖的水解有专性
．２．１稳定性
海藻糖同蔗糖是同分异构体，义具有类似的结构，经常在生物中同时存在虽然作为甜味刺１ｉ能和处丁主导地位的蔗糖相比，但在其它方面，海藻赫义具有蔗糖升；可比拟的功能。海藻糖是无毒、产热的烈糖”１，但它对热对酸非常稳定，是大然烈糖中最稳定的糖质。由１：不具有还原性即使与氨拭酸、蛋向质等混合力¨热也不会发生美拉德反麻。具体表现为：①ｐＨ稳定性．枉ｐｔｔ３．５～１０、１００℃条什Ｉｉ保持２４ｈ．有９９％的海藻糖残存（见蚓ｌ。２）：②水溶液热稳定性：；ｆ＿＿｜：１２０＂Ｃｌｉ保持９０ｒａｉｎ，海藻糖不发生褐变：③食氢基酸水溶液的热稳定性：仡含氰麟酸的沸水中保持９０ｒａｉｎ，海藻帮不发生褐变；④含蛋白质水溶液的热稳定性：存含蛋白质的沸水中保持９０ｍｉｎ．海藻１ｊ：ｆｆ不发！㈦目变；⑤水溶液的长期保存稳定性：海藻糖水溶液在３７℃Ｆ保存１２个月，海藻糖不分解、不褐变ＩＩＪ。
１００
８０
＾
邑１５０
糌
暴４０
２０
０
２．２溶解性、甜度及渗透压
—◆一海藻舶
—Ｉ｝＿ｍ：辅
ｍ
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融％
ｍ…
．篙
Ⅲ瑟
ｏ
１．三
图…
２
叶
海藻糖易溶ｒ水、热乙醇、小溶Ｊ。乙醚，海藻糖的溶解艘为蔗柑的２／３，海凛糖ｎ：水－ｔ?ｎ０溶解度随温度变化较明显（见㈦Ｉ．３），当温度低］一１０。ＣＮ＇Ｊ，溶解皮远小＿ｒ蔗糖，而肖温度高】：８０。ＣＩＨ，
则人１‘蔗‰，ｒｉｆ”。
《
划
黠
堆
１０
２（１３０ｄ０５０
６Ｕ７０８０９０
．．
温度／。ｃ
围１－３海藻糖的；睿解度
Ｆｉｇ．１—３ＴｈｅＳｏＩｕｂｉｌ【ｔＹ
ＩＩｆ１ｒｅｈａｌｏｓｏ
—●卜海凛籼
—●ｒ蔗糖
海藻糖甜度为砂糖的４５％，食ＪＩｊ后口ｒ｝－小留后昧，味质爽口。其渗透压与砂糖、麦芽糖等裂糖
相同。
１．２．３吸湿性
含２分ｆ水的结品海藻糖，没有吸湿性；佣无水结品有很强的ｌ嫂湿性。海藻精的无水结品Ｈ有
很强的吸湿性，是优异的灭然脱水剂。在相对湿度３０％以上时能转化成含两分子水的结晶，而含两分子水的海藻糖结晶在相对湿度９０％以Ｆ时不具有吸湿性（见图Ｉ．４）１４１。天然的蔗糖只有死水结品
一利ｔ形态，它没有吸取其它物质水分子的特性；乳糖和麦芽精与海藻糖一样具有禽水结晶羽Ｉ无水结
ｒ帚两种结品态，它们的无水结晶粉末也有吸水性，但它们吸取的水景只有海藻糖的１／２。而．Ｈ，这两种糖具有还原性末端．对ｏｊ之配合的物质的稳定性产，卜很人的损害，它，ｆｆＴ．＇ｌｃｆｔ＆Ｊｔｊ做脱水稳定剂。
３０５０６０７０８｛ｌ９（】ｌ｛）Ｏ
丰¨刈湿Ｊ壁／％
图卜４海藻糖的吸湿性
Ｆｉｇ．卜４
ＨｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃＰｒｏｐｅｒｔｙ
ｏｆ
ＴｒｅｈａＩ
ＯＳｅ
—●一＾ｊ水，＿ｌｉ品
－－ＩＩ－－－卉水结晶
１．２．４海藻糖的防腐性质
海藻糖最奇特的功能特性是其具有防腐性。海藻糖剥由环境变化形成的戍激状态只有商抗性。讯：多含有海藻糖的动植物完全干燥火水后仍维持活性，一丑遇水就立刻复活。这一现象前先从昆虫
中发现，海藻糖不仅被昆虫用作能源，而且对昆虫的耐寒性、抗冻结性发挢重要作州”】。其后发现
沙漠中－；９１＇隐生生物为膜叶卷柏．以抗早能力而闻名。这种简单的类羊齿梢物能够柏：沙漠中干燥和
雨水化的过｝。圳，保存活性，其脂肪、蛋Ｐｌ质、碳水化台物及绸成细胞绸纵的核酸不被损坏，在干燥
状态ｒ看上去如酬枯死，
ｕ．吸水，数小Ｉ…～植株枯黄卷缩的部分ｉＪ以迅速张”，升重新变为绿色
进行光合作刚。后来研究表明外源性的海藻糖对生物体Ｉｌｌ＇Ｊ－物人分子也有良好的二Ｉ｝。特异性保护作川
０
ｊ０
００
０
００
卜＿６５４３
２０８
５
２
ｇ
６
３
ｊ
Ｐ函喇督
ｔｔｌｉ防腐ｆ１：ＪＩＪｎ其作川机制口前有：种假酏。
‘种称为“水替代”假说‘“”，它认为当生物人分子火太
维持其结构羽ｆ功能特性的结构水麒叫，海藻糖能竹，牛物分Ｊ’的火水部似以氯键形式腹接，形成一层
保护膜以代替火玄的结构水膜。另一利，假说为“玻璃态”假说‘”，这一假说认为通过海藻糖玻璃化
转变的趋势，导致无定形婆续相的形成，在结构七与玻璃状的冰相似，在这种结构ｒ１１分：ｆ运动和分于变性反应一ｍ常微弱，英国剑桥的Ｑｕａｄｒａｎｔ研究基金会的研究室主任Ｊｏａｐｋａｐｉｎｇａ协ｌ：称这种状态
为琥珀态。但目前这二种假说还不能完全解释某些现象，如海藻糖与葡萄糖对限制内切酶稳定性影
响的显著差别是与“水替代”假说不相符的ｐｌ。随着分ｆ生物学的发展，对海藻糖的防腐特性做了
进一步的研究。
１．２．４海藻糖的其他性质
海藻糖能防Ｉｔ淀粉老化（见图１．５）和蛋向质变性（见图１－６）。海藻糖能在小肠内被消化吸收，可以做为营养源。但若一次性大量摄入海藻糖，对体内缺乏海藻糖分解酶的人来说则会引起海藻糖不耐症。不过对海藻糖显示山不耐症的人很少。
Ｖ
糌皋郴
引
：｜｝
海藻糖麦芽糖
蔚精
｛｛ｆｉ耱
窄白
图卜５各种糖防止淀粉老化效果比较
Ｆ【ｇ１—５
Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔ
ｓ
ｏｆ
Ｓｕｇａｒｓｕｐｏｎ
ｔｈｅ
ｒｅｔｒｏｇｒａｄａｔｉＯｌｌ
ｏｆ
Ａｍｙｌｏｎ
２海藻糖的生物学性质
海藻糖麦芽精蔗精
饴精
守妇
图卜６各种糖防止蛋白变性效果比较
Ｆｉｇ．１—６Ｔｈｅ
Ｅｆｆｅｃｔ
ｓ
ｏｆ
Ｓｕｇａ
ｒｓ
ｕｐｏｎ
ｔｈｅＭｕｄｉｆｉｅｄＰｒｏｔｅｉｎ
海藻糖是对环境变化形成的麻激（ｓｔｒｅｓｓ）状态（或称之为紧张状态）具有高抗性的物质。这种抵抗环境冷暖、于湿等变化的奇特作川是从昆虫中发现的，历在酵母菌、生息丁沙漠地带的…种缓步类昆虫和一种卷枇植物及蛙类生物等中，都发现了此类现象。这些现象被认为是海藻糖在冻结、干燥、高渗透压等这类严酷的环境ｒ，对生物体膜、膜蛋向、ＤＮＡ等发挥着保护功效之故。
人量研究表明，某些物种对外界恶劣环境，如脱水、干早、高温、冷冻、高渗透压及有毒试剂
等，所表现山来的抗逆耐受力和它们体ｔｑ存在的海藻糖有直接关系。对这一现象的深层原因所进行
的研究显示，在上述极端严酷的条件Ｆ，海藻糖可以刑生物膜、蛋白质和核酸等生物人分子发挥保护作朋，从而使富含这种奇妙化合物的生命体对外界恶劣环境表现出独特的生物学特性””１ｌｌ
ｏ
２．１海藻糖能提高植物的抗寒、抗盐能力
经海藻糖处理的绿豆幼苗ＮＮ上ＮＭ９２＋、Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的活性显著提高㈣。川０．１％的海藻糖溶液浸水稻种，经２＊Ｃ｝Ｎ６℃低温处理后，水稻幼苗细胞电解质渗透率显著降低，而淀粉酶活性及幼凿可溶性糖含量则提高，对寒害的修复能力也提高。而且处理温度愈低，海藻糖的相对效应就愈显著。用海藻糖预处理的小麦幼苗在ＮａＣＩ溶液中生长，其细胞电解质渗透率和游离脯氨酸的含量均显著降低，而叶绿素的含茸、根系活力、千物质的积累莆ｆ生Ｋ述度！ＪｌＩＪ提高１”１。这是因为海藻糖能在作物幼前遭受低温、
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博士后工昨报告酶法合成海藻糖的研究马莺盐害而脱水时，维持了细胞膜结构的稳定性，从１『ｉＩ提高ｒ１１：物幼曲的抗逆能力ｆ”。“。
２．２海藻糖能稳定脂质体
脂质体是１种人Ｉ‘制造的细胞样结构，ｒｌｌＪｔ日敝展包ｍ１个含水小审．水溶件物质司被封ｉｂｉ】件脂质体内部。因此脂质体可咀作为水溶性物质的载体。但脂质体不易｜支期贮存，且在冷冻干燥时易发生融合并导致脂质体内容物的泄漏。实验证明，当有足够数量的海藻糖存在时，包载抗肿瘤药物阿糖胞营及阿霉素的脂质体经真空干燥再水化＿Ｉ亓，其原内容物保存率可迭８０％以上，远远人丁无海藻糖处理时的保存率”…。海藻糖可使爿匕质体处于一种干燥状态，而不损坏其结构的完整性，有利丁脂质体的贮存、包装驯运输，有利１：脂质体在制药¨ｋ中的廊ｊＨ。
２．３海藻糖抗冷冻保护作用
｛ｉＪｆ究…１发现添加外源海藻糖明显地提高了酵母细胞旧存活率。细胞经预先短时温和热处理或预先短时低温冷处理，可以增加酵母细胞在冷冻和冷冻干燥处理Ｈ＿Ｊ，对低温的耐受能力，短时间的温和热处理可增加细胞内海藻糖的积累，然而在短时间的低温冷处理时，细胞内海藻糖含最未发生改变。在冷、热处理时都观察到这种细胞对抵抗逆境耐受能力的提高，并认为其主要原闪是延缓了自｝Ｉ胞流动性。预先短时间的温和热处理使细胞存活率得以提高的具有说服力的解释是，在此条什Ｆ细胞ｌ』Ｊ有较高的海藻糖积累；柏：预先短ｌｌ；ｔｆＦｉＪ的低温冷处邢时，细胞ＩＪ、Ｊ海藻糖没彳丁改变，细胞山海藻糖水平似乎并不是促使酵母细胞对冷冻忍受能力获得提高的唯一因素，尽管预先短时间的低温冷处理对细胞抵抗冷冻的保护作ｊ｜ｊ韵事实还没有完全被理解，它仍然被认为是保护细胞抵抗冷冻的一种有前途的方法。
２．４海藻糖对生物抗脱水保护作用
海藻糖的积累是与隐生生物及其它生物干燥忍耐力相关的。过去十几年来，对糖类在膜、蛋向质雨ｆ细胞脱水中的稳定作用进行了７“泛的研究。近几年来的结构化学研究表明，由于几乎所有物质都能够转变成无定形态的普遍性，以及无定形Ｉ舂１体的种种应用，使人们对非品态（或无定形态）１州体的兴趣有了极大的增加ｉｌｉ９Ｉ。物料由丁外界作用，如干燥、冷冻等，减少了体系中的自由水，就有可能使物料成分由胶质态（品态）转变成玻璃态（非品态或无定形态），即玻璃态转变，这一转变点的温度被称为玻璃态转变温度（ｇｌａｓｓ－ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，简称Ｔｇ）。海藻糖的高效力生物保护作川ｆ与它的玻璃态形成有关，糖类在生化保护作川中效力的顺序由强到弱依次为海藻糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖，这恰蚶与它们玻璃态转变温度（Ｔｇ）由高到低的顺序一致，海藻糖具有高Ｔｇ值常常被认为是它在生物保护作用中比其它糖类具有优越性的原因。研究发现样品贮存期间，海藻糖能在高下№温度提供较好的蛋白质保护作用，在相同的ＴｇＦ，对６．磷酸葡萄糖脱氢酶的保护作用，海藻糖明显优于蔗糖。经分析认为，上述现象可能与有海藻糖存在的样晶，在高于Ｔｇ时，具有较低的门南体积和较低的白由体积膨胀系数相芙。在贮存样品中，有蔗糖（无海藻糖）的样品迅速发生相分离，并完全失去它们的非品形状态（玻璃状态），丽有海藻精存在的样品相分离明显地延迟，并且只有一小部分（小１：４％）结晶，其余部分仍然在未变化的Ｔｇ温度下保持非结晶状态。以上结果说明了有海藻糖的样品具有优越的稳定性与海藻耱玻璃态的一些性质相关，包括较小的自由体积、受限制的分子流动性和在贮存中抵抗相分离和结晶的能力“““。
２．５海藻糖抗高渗保护作用
博士后工作报告酶珐合成海藻糖曲研竞马鸯
研究发现伴随盐逆境烈歧藻属凶种细胞内海藻糖平ｌ｜蔗糖浓度的增加，当机体再恢复止常生艮条什（即解除盐逆境的ｆｉ＋Ｊｌｊ），细胞内这些海藻糖年¨蔗糖浓度下降。蔗糖和海藻糖被认为具有共存的溶解物（ｃｏ…ｐａｔｉｂＩｅｓｏｌｕｔｅｓ）的作川性质，它们比其他糖的优越之处在丁它们是非还原性糖，不会与蛋ｌｆｌ质中氩基酸发生美拉德反应¨…。在稳定蛋白质作川中，海藻糖的表现优丁＿．蔗糖，这可以部分地解释为什么海藻糖在上述形成的海藻糖和蔗糖共存的溶解物中『’主导作用。海藻糖另一个滞在的优势是它同蔗糖一样，不是关键的中问代谢物，比其它非还原双糖包括蔗糖更稳定。微生物在盐逆境戍激状态涉及到低分子跫共存溶解物的产生和一系列应激蛋白质的产生，海藻糖雨１蔗糖的合成代表烈歧藻菌盐应激状态Ｆ的一种保护性作用。对蛋白质的合成或嘲‘１砷ｌ制仍需进一步研究１２”。
酿酒酵母在高渗条什Ｆ存活与体内的海藻糖相关，这表明了海藻糖可作为渗透｛；；｝三保护剂‘２”。史戈峰等”ｑ研究发现ＮＯ．２５酿酒醉母对高糖浓度贝＿仃较高的抵抗能力，其原冈是在高糖浓度Ｆ细胞俞成较多的海藻精，以保护自己，维持较高的存活率，酵母细胞内海藻糖含最的高低可作为选育耐高浓度羽Ｉ耐高温酒精酵母的琥要指标之一。ｎ１丁环境条什的涨落变化，门然界中微生物会遭受不同的逆境（如脱水、冷冻、高渗透压等），作为对这些逆境的反应，微生物会形成巧妙的保护机制来维持它们的适席性或保证能在不利条ｔＩ。ｒ生存下来。微生物为了适应环境变化而对逆境所作出的反应，通过基冈嵌达的重建而改变其生理状态，包括分子伴侣（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ）的合成和应激蛋白的台成，以及酶活性、蛋白质雨ｆ膜结构状态朐改变。微生物除了合成新的蛋内质外，人多数微生物还合成低分子能共存的溶解物（如海藻糖年¨蔗糖等），这些物质能调１，渗透压，计有助Ｊ‘维持膜的完整性和蛋白质的稳定性。
２．６海藻糖保护生物分子的机制
关下海藻糖对生物分ｆ的保护作川，人制进｛丁ｒ人域探索，提山了种种假说。目前主要有两种假说解释海藻糖稳定生物分子的机制；一种称为“水替代”假说，另一种称为“玻璃态”假说ｍＩ。
“水替代”假说认水是维持生物膜结构雨ｌ功能完整性的一个十分重要的成分，通常情况下，膜磷脂的极性头部都有～定程度的水化，基团头部被这些分子相互隔离。当磷脂脱水时，基团头部的填充密度将增加，从而也增加了碳氡链间的范德华力．这导致存某一温度时，脱水脂类是凝胶桐，而水化脂类在同一温度是液品相。也就是说，与水化脂相比较，作为构成生物膜主要成分的磷脂酰胆碱（ＰＣ）脱水斤相转变温度Ｔｃ升高（Ｔｃ为ＰＣ的烃链由凝胶相转变为液晶相时的温度）。因此，细胞膜在一定温度下脱水时，处于液品相的磷脂酰胆碱会随着脱水的进行转变为凝胶相，从而造成磷脂酰胆碱、其它脂类和膜内蛋向质的横向相分离。在这一过程中，如果磷脂酰胆碱由液晶相转变为凝胶相的行为被阻ＪＰ，膜的损伤就可以减轻甚至消除。海藻糖抑制相转变的可能机制是干燥脱水时海藻糖取代了生物膜结构中水的位置，海藻糖的羟基和磷脂的头部基团之闻形成氢键，这些氧键替代了原有的脂和水之间的氢键，阻Ｉｔ了膜磷脂头部的相互靠近，从而降低了磷脂的相转变温度．稳定了生物膜的结构平¨功能ｆ２４ｌ。Ｃｍｗｅ等以海藻糖对人生氏素的保护性研究支持此假说１２”。Ｃｒｏｗｅ等指山一些糖和一些多羟基化合物的保护特性是由丁糖结台人分子代替了水化作川的水分子，尽管这是一种理想的解释，遗憾的是，很少有赢接的证据支持它。
“玻璃态”假说如果海藻糖水溶液在室温Ｆ干燥，则溶液的粘度就会随着浓度的增加而增人，当浓度足够大且糖的结晶不会发生时，海藻糖一水混合物就会玻璃化，这时海藻糖所处的状态称为玻璃态。研究表明，单糖、双糖、多羟基化台物以及结构蛋白质、酶都能显示玻璃行为，只是玻璃化转变温度Ｔｇ不同。玻璃态物质既具有胤体的行为，义具有流体的行为，它的粘度很人，约为１０”Ｐａ－ｓ。在这么赢粘度的流体中，即使存在固体晶核，由Ｔ－横向扩散速度极慢，短期内也不会有结晶出现。事实上，玻璃态糖能稳定存在几年。另外．由于玻璃化．高粘度使分子扩散受阻，导致玻璃态物质干燥速率变得极其缓慢，结果使其水含量增加，这对再水化有利。“玻璃态”假说认为，当干燥生物活性物质时，海藻糖紧密地包住相邻近的分子，形成一种在结构上与玻璃状的冰相似的碳水化台物
博士后工作报告酶法合成海藻培的研兜马鸯
玻璃体。由于这种ｊ限晶体绡构的扩敬系数穰低，敞在这种结构ｔｐ分子运动霸吩子交健反应嚣嚣徽弱，能够使生物分子维持‘定的空问结构。Ｃｏｌａｃｏ罅发现ｆｆ｛｝藻糖与乍物人分子形成一种类似水品状的玻璃体结秘，葳丽在＝Ｆ僚及冷冻醚可得到有效舔护，这越上建靛巍静有力薤Ｅ搀㈣。
目前，这两种假说逐不能完全解释现有实验现象，如海藻糖与葡镝糖对限制性内切酶稳定性的影蛹靛显装筹ｇｌ楚与“永饕我”瑕说不镣靛；鞠毒莩；“玻璃态”假说也管一些＝＿｛；糍髂辣的翔艇，如藏濑下海藻糖剥生物制晶的稳定性问题。因此，海藻糖保护生物活性物质的机理，仍需深入研究。总之，海藻糖是一秘棼特搀性天然镙护剂，具商保护生物妇织、细胞剥生物火分子的佧ｊＨ，为其在食品、生命科学和睦药卫生蒋领域的麻ｊ；Ｉ；｜中展开了广阔的前景。随着对海藻稀作用机理研究的避一步深入，人们姆会发现海藻糖具有更多更火的川途。
３海藻糖的仑成及相关酶系
３．１翻臻微生物骞然套戏海藻糖
霉落、酵母期一些寞麓类郝禽商海藻糖，可班选ｊ｝｛其中巅禽颦老佧为提墩源，谯一定激发ｒ来』４ｊ溶剂抽提出来，或｝｛＿｜高压处理等从键取源中提取出来“”６’。目前美国、捷克生产海藻糖主要是秘刚酵母，ｇ本剩削一釉缀基艘生产菌，每公厅达２００美元”。”’。唐传核””等人从活性干酵母中提取海藻糖．通过控制抽提温度、乙醇浓度黻及抽提时问，得｛蟊较佳的掇教’ｌ：芑条荇。ｊ目瞬阳褰乎交换挂去赊杂质，同时起到一定的脱色作用。进ｉ耐运用超滤进行澄清。最后经浓缩、结ｌ绍以及干燥，制成海藻祷产晶，箕褥牵冒这每ｌＯＯｇ漭住子释撵产ｌ《．繇海藻耱。
某些食削真麓和药用真菌包括其突变株和经遗传改造的滴株均有生产海藻糖的匿火潜力。据报道有记载盼真赫青２０』Ｌ个耩３３令稀““，弼奇聚藤（国‘ｉ点ｏｌａ）、蘩ｌ茸（ｔ；］ｅｕｒｏｔｕｓ）、寒禳拿（Ｌｙｏｐｈｙｌｌｕｍ）、香菇（ＬｅｎｔＪｎｖｓ）、蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓ）、异栓汹（Ｃｏｒｉｏｌｅｌｌｕｓ）、栓菌（Ｔｒａｚａｅｔｅｒｓ）、革辆莲（Ｌｅｎｚｉｔｅｓ）、矮摆莲（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、革耳（Ｐａｎｕｓ）、魏耳（ＣｒｅｐＪ如ｔｕｓ）、女自孔落（Ｌａｅｔｉｐｏｒｕｓ）、拟多孔菌（Ｐｏｌｙｐｏｒｅｌｌｕｓ）、梭孔曲（Ｆａｖｏｌｕｓ）、ｌ＇ｒｉｃｈａｐｔｕ￥、小奥底麟（国ｇ∞∞５ｊｇｊｊ。）、港缝拿（燎ｅ镕ａｔｏｌｏｍｓ）、蠹耀菇（１７ｈｏｄｏｐｈｙｌｌｕｓ）、糙袒莹（Ｇｌｏｅｏｐｈｙｌｌ拍ｅ）、层孔菌（Ｆｏｍｅ＃）、Ｃａｎｏｄｅｒｍａ、扁芝（Ｅｔｆｖｉｎｇｉａ）、拟层孔盛（Ｆｏｍｉｔｏｐｓｉｓ）、假撩环葡（Ａｒｍｉｌｌａｒｉｅｌｔａ）、强帮据ｆ嘲辨船、鳞拿（ＰｈｏｌＪｏｔ，８），懿蘑（Ｔｒｉｃｈｏｌｏ燃ｓｐｐ．）等均照舞发海藻糖的笾物种子源。搦报道某贱蘑舔中海藻糖的含罱较为半错、?ｌ戴－Ｉ：重的１１～１５％。鄣德军”…等Ａ．；｝ＩＪＪＩＪ香菇生产中的蒋辨热，破簿楚、熬埂焱蟪取蠡热多糖时综合剃删提取激、生产海藻糠，海藻糖的收率为４。３％。
朋一定的撼质培养微生物，通过微生物发酵产生海藻糖，再由培养液中精制而得。王觅在ｔ主礤霹巅蚓驰微生物包摄酵辑、革兰氏｜！｝｜性落，特划是徽球凿变科，等，避过采川诱变、细胞融☆缄基川重组选育产海藻糖高的倚株，然后采¨ｊ高浓废的培养基及赢渗发酵，得到含海藻糖黼的产物。例如以正烷烃为碳辣培养：镑轩蕊属（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ，?）的发酵生产，蚪砂糖刺葡钧糖为基质培养棒扦苗属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）替氨基酸发酵微生杨的靛酵生产，醣及利用诺。舞氏菌麟（Ｎｏｃａｒｄｉａ）簿徽生铹的培养渡米制造””“。目前采用的碳源主要柯淀粉、砂糖、麦芽精以及葡鞠糖等。
３，２酶法合成海藻糖
生物台成海藻糖的酶分为磷酸化酶利非磷酸化酶两大类蔗中磷酸化合成酶主要包括海藻糖－６－磷酸合成酶（ＥＣ２．４，１．１５）嚣｛海藻耱．６一骥羧磷酸熬薅（ＥＣ３．１。３。１２）【５～７】｛海藻糖磷酸姥酶（ＥＣ２．４．１．６４）；海藻精酶（ＥＣ３．２．１．２８）：麦芽糖磷酸化酶（ＥＣ２。４．１．８）和海藻糖磷酸化酶。这些酶鼹主蛩畿秘为蘩甍赘拳｝麦芽菠（～分子麦芽蘩经磷酸｛乏酶馋ｊ｜｛变成一分子麓楚糖黎｜～分子蔼萄耱＊ｊ－
磷酸）。海藻糖磷酸化代鲥途径表明１１７］：葡萄糖进入胞内形成…系列磷酸化中间产物（如Ｇ．６．Ｐ、Ｇ－１－Ｐ、ＡＤＰＧ、ＵＤＰＧ、Ｔ－６?Ｐ等）而后形成海藻糖。由ＪＪ这些磷酸化物质也是糖酵解、戊糖磷酸化、糖原分解及台成途径的中问产物，Ｗ而上述酶台成海藻糖较为复自￥，诸如ｌ磷酸化偶联、副产物多样性以及随之带来的提取凼难，人量研究表明磷酸化酶合成海藻糖的产率波动很人（５～６０％％）。到九一ｒ年代ｚ１。捌合成海藻糖的非磷酸化新酶被发现，使淀粉、麦芽寡糖或麦芽糖合成海藻糖的产率达到７０％以上，另外相关新酶及其分子生物学的研究也取得进展””。
３．２．１海藻糖一６，磷酸合成酶和海藻糖．６．磷酸磷酸酯酶
研究表ｌ碉ｐ“，海藻糖在真菌和细菌，如火肠杆菌，酿酒酵母中的合成主要是通过海藻糖一６一磷酸合成酶（０ｔｓＡ，ｔｒｅｈａｌｏｓｅ?６＿ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｓｔｈｅｓ８ｓｅ，ＥＣ２４．１．１５）平｜ｌ海藻精一６一磷酸磷酸酯酶（Ｏｔｓｇ，ｔｒｅｈａｌｏｓｅ．６一ｐｈｏｓｐｈａｌｅｐｈｏｐｈａｔａｓｅ，ＥＣ３．Ｉ．３．１２）旧途径。海藻糖一６一磷酸合成酶的底物专一眭强，只能以海藻糖一６一磷酸为葡萄糖基受体，ＵＤＰＧ，ＧＤＰ—Ｇ城ＡＤＰＧ为葡萄糖基给体。该系统可¨＝｜Ｆ列反虑表示：ＵＤＰ—Ｇ＋Ｇ一６一Ｐ—Ｔｒｅ一６一Ｐ＋ＵＤＰ
Ｔｒｅ一６一Ｐ一海藻糖＋无机磷酸
这种方法需要高能物质ＵＤＰ参与反应，冈而在Ｉ：业生产中是不实际的。
人肠丰ｆ菌种这２种酶（０ｔｓＡ．０ｔｓＢ）的基闪（ｏｔｓ）已被克隆ｌ”ｌ，它们构成了一个操纵冈子ｏｔｓＢＡ．二基因重叠２３ｂｐ，并由ｒｐｏＳ基因编码的Ｏ”因子激活而肩动。ＯｔｓＢ和ＯｔｓＡ的分子量分别为２９．１ｋｕ雨ｌ５３．６ｋｕ，它们与酵母ＴＰＳ蛋白具有较多的同源性。
酵母菌中这２种酶是由３个肽链组成的复台体，相应的基冈已经被克隆１３ｑ。ＴＰＳＩ基因编码５６ｋｕ的海藻糖．６．磷酸合酶，其参与葡萄糖调：常、海藻糖的代谢及１ｌＯＯｋｕ蛋白的折叠。ＴＰＳ２基因编码ｌＯＯｋｕ的海藻糖．６．磷酸磷酸酯酶。ＴＰＳ３基因编码１３０ｋｕ蛋白，该弧基似乎涉及复合体的聚集。３个蛋１７１基田都含有ＧＡＡＮＮｑＴＣ和ｃ。Ｔ热休克单元，这是热诱导提高酶火星的遗传基础。这３个基冈的表达均受葡萄糖的阻遏。
３．２．２麦芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶
麦芽糖磷酸化酶（ｍａｌＩｏｓｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ，ＥＣ２．４．１．８）和海藻糖磷酸化酶（ｔｒｅｂａＪｏｓｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ，ＥＣ２．４．１．６４）能以麦芽糖为底物合成海藻糖１３９‘４…。其中，麦芽糖磷酸化酶可由短乳杆菌得到，海藻糖磷酸化酶可从变异微球菌，毕赤酵母，细氏眼虫藻及Ｃａｔｅｌｌａｔｏｓｐｏｒａｆｅｒｒｕｇｉｎｅａｐｌ４２１得到。该反应可Ｊ｛｛｜Ｆ式表示：
麦芽糖＋磷酸盐一葡萄糖磷酸｝葡萄糖?海藻糖，磷酸盐
该反戍最适ｐＨ为６５～７．０，当反应混合物中含有低浓度磷酸时，反应速率会加快。
１９９８年５月，日木食品化Ｉ。公司报道，用该酶系催化麦芽糖液底物生产海藻糖水饴已商业化，该产品为含３０％的海藻糖和５０％的麦芽糖的液体制品”“。
３．２．３蔗糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶
蔗糖磷酸化酶（ｓｕｃｒｏｓｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ，ＥＣ２．４．１．７）和海藻糖磷酸化酶能以蔗糖和葡萄糖为底物，合成海藻糖。其中，蔗糖磷酸化酶可由从十壤中分离山的肠膜样明串球菌属肠膜样弧种及葡聚糖Ⅱ种中提取山来１４…。该反应可表示如Ｆ：
蔗糖＋无机磷酸盐一葡萄糖磷酸＋果糖
葡萄糖磷酸＋葡萄糖一海藻糖＋无机磷酸盐
、
３．２．４海藻糖酶
海藻糖酶（ｔｒｅｈａｌａｓｅＥＣ３．２ｌ２８）存在丁各种生物种，从酿酒酵母．１０ｒｕｌａｓｐｏｒａｄｃＪｂｒｕｅｃｌ（ｉｉｌ”】，绿藻Ｌｏｂｏｓｐｈａｅｒａ［４６１及兔的肾脏中获得。但是这种方法的产率极低，只有５％左☆。从酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中曾经获得２种海藻糖酶【ｘ】，中性海藻糖酶（存在］：胞质中）承ｆ酸性海藻糖酶（存在于空泡中）。前者可被ｃＡＭＰ辅助的磷酸化而激活，最适ｐＨ为７．０，屙者为４５。
海藻精酶是水解酶，水解海藻糖为２个分子的葡摘糖，同样海藻糖酶可以通过逆反应，将两分子葡萄糖缩合成海藻糖。从不同来源（酵母菌、人肠杆菌、兔小肠）的海藻糖酶顺序比较可以看山，兔小肠海藻糖酶的动力学实验平¨抑制实验表明，在该酶的不同区域。存在３个不周活性部位基团，其中位丁第二个结构域的ｔｔｉｓ可能涉及催化反映。
中性海藻糖酶的基冈（ＮＴＨｌ）已经被克隆，在肽链的Ｎ端取存在２个可能的磷酸化何点：Ａｒ９１７ＡｒｇＬｙｓＳｅｒ２０（ｓｅｒ２０被磷酸化）和Ａｒｇ”’ＡｒｇＧｌｙＳｍ”（ｓｅｒ”被磷酸化），麸磷酸化参’ｊ调１Ｉ细胞千¨应不同环境ｒ的海藻糖浓度。
３．２．５麦芽寡糖基海藻糖合酶与麦芽寡糖基海藻糖海藻糖水解酶
由”协杆菌（Ａｒｔｌｌｏｂａｃｔｅｒｓｐ）Ｑ３６及硫化Ｉｔ｝＿菌（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ３３９０９纯化的２种新酶被研究者命名为麦芽寡糖基海藻糖合成酶（ｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＭＴＳａｓｅ）”““‘平ｕ麦芽寡糖基海藻糖水解酶（ｍａｌｔｏｏｌｉｇｏｓｙｌｔｒｅｈａｌｏｓｅｔｒｅｈａｌｏｈｙｒｏｌａｓｅ，ＭＴＨａｓｅ）”’”Ｊ，这２种酶联台作Ｈｊ＿ｒ不同ＤＥ值（ＤＥ≥３）的麦芽寡糖或袁链淀粉１Ｆ磷酸化合成海藻糖，缚次从麦芽寡糖生成少两个葡萄糖单位的麦芽寡糖及海藻糖。其中ＭＴＳａｓｅ作用丁底物还原性末端的Ｃ１－ＯＨ，产生ａ－１，４糖苷键到ａ，ａ．１，１糖茁键的分子Ｉ匈转糖基作用（ｉｎｌｒａｌｎｏｌｅｃｕｌａｒｌｒａｎｓｇＩｙｃｏｓｙＩ“ｏｎ），形成中间产物麦芽寡糖基海藻糖，该酶表现出高度的配向性和专一性，但有数据表明由Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ３３９０９提纯的ＭＴＳａｓｅ对ａ．１，４糖苜键也有轻微的水解作用【５”。ＭＴＨａｓｅ则专一地内切该中间产物中麦芽寡锴基与海藻糖相连的ａ．１，４糖苻键，使之断裂产生海藻糖和减少两个葡萄糖单位的麦芽寡糖，酶对麦芽五糖、蔗糖、乳糖、海藻精、可溶性淀粉、纤维素、支链淀粉、糊精、果聚精、菊粉罅无活，。肾氏时间的保温才对麦芽五糖和可溶性淀粉卉轻微的水解”“，表明其具器很强号一性。Ｍ’ＦＳａｓｅ与ＭＴＨａｓｅ构成酶系的反应机理见图卜７。
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图卜７ＭＴＳａｓｅ和ＭＴＨａｓｅ作用－ｔ－＇淀粉合成海藻糖的简图
ＦｉｇＩ－７ＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＴｒｅｈａｌｏｓｅｆｒｏｍＳｔａｒｃｈｂｙ
ＭＴＳａｓｅａｎｄＭｔｈａｓｅ
该酶系也可催化直链淀粉生成海藻糖，且反应不需磷酸盐共存。以淀粉为原料使得成本人＿人降
博士后工作衄告酶法夸或Ｉ；蘩藻艟袖研究马薷
低，在赫本，这项酶究融谈瘴翊于，ｔ攮｛乞生产海藻藏巾１５“。｛筮楚在：ｌ：监性静生产毫，还霈《０台其它的淀粉水解酶：ａ一淀粉酶．异淀粉酶，葡萄糟茴转移酶ＣＧＴａｓｅ，葡萄糖淀粉酶，遮样海藻糖的转纯率霹选８５％毅Ｌ。
除节杆曲外，在徽黄短杆黼，根瘸菌，水生黄杆酾等多株细菌中都发现了这两种酶的存在。而毯。，存在于嚣攒蓝拳ｌ攫瘸筵中嬲ＭＴＳａｓｅ蟊ＭＴＨａｓｅ豹基测基分划在太题杼蘑中兜隆零”擎捌分据１ｓ２－５６｝。
磊本嬲｛麟嚏淫公司赢ｊ｛Ｊ开发中心从瀑采中分裹褥剿一乖｜，占纲越，巯矿硫化｝｝｜赫ＫＭｌ，也毙以淀粉为原料生产海藻糖，以此进行的基冈克隆也已获成功‘５。“。『１ｉ细黼中存程的酶系‘』来源丁１，秆国的ＭＴＳａｓｅ年¨ＭＴＨａｓｅ作蝈原理极为摺似，同耐由于该酶系采源予瞎热菌，嘲而有赣良好的耐热性，在７５～８５℃保渝６ｈｒｓ仍保留９０％以上的酶活力。当戳经曾鲁兰淀粉酶作用厮的淀粉为底鞠时，海藻翘｝纳产率达８１．５％。
３．２．６海藻糖台酶
海藻耱台成酶为一摹孛变穰瓣（ｍｕｉａｓｅ）荠彝鸯轻徽麓承解嚣挂，滚酶对麦势糖和海藻耱豹Ｋ。毽受黼度影响很火，过高的反廊温度使逆向反应（澎芽糖方向）速度增火，导致海藻糖产率降低。另外该酶氇可缆｛皂蔗糖羲嗨蒺酮糖之阕豹转诧。
（１）海藻糖台酶的分布
海藻糖台酶（ｔ｝ｅｂ８ｉｏｓｅｓｙ“ｔｈ８ｓｅ）是近肇采藜捩发现麓～穆酶，它麓姆勰魏麦劳糖赢接转化为海藻糖。就目前的文献报道来祷，海藻糖台酶主要存＾在于微生物细胞内。檄据１９９５年ＮｉｓｈｉｍｏｔｏＴ等人的报道ｌ…，她｛｝】盔峦土壤中分裹褥到弱２５０多个微生物薅株中发现了多拣具有转化麦努糖生成海藻糖活力的甜株。主瓣有脂肪杆菌Ｒ４８，恶奥假单胞轩菌Ｈ２６２，水生栖热菌ＡＴＣＣ３３９２３，ＡＴＣＣ２５ｔ０５，ＡＴＣＣ２７６３４，丝状援热越ＡＴＣＣ４３２８０蛰。其巾灏：ｉ砷隐中的酶涵力最高。
同ｎ寸，在海藻糖台酶的研究中，ｌｉＪｆ＿究人员也返川了基因重组技术。１９９６年，日术的ＴｓｕｓａｋｉＫ簿入报道，拯海藻穰台酶的基因导八人肠抒菇震，褥到了赢效袭达产物，实验证明这种基周蓬组酶｛＿Ｉ勺性质稳滋甚至好于原供体细胞中的海藻糖酶＿’”ｌ。
（２）海藻耱台薅姻特蛙
海藻糖合酶能够特异性的催化麦芽糖转化为海藻糖，该酶是一种分子内葡糖前转移酶，即将安茅糖熬ｎ．１，４猿蛰键转化为ａ．１，Ｉ糖营键。在夏癍避程中，不露黉育磷酸盐共存。海藻糠台酶的底物专～性强．只作＿Ｉｌｊｆ麦芽糖生成海藻糖及使海藻糖生成囊芽糖，且前蒲反应速发明显火丁币糟ｐ｝删。
海藻糖合酶具有徽弱的水解作用．使海藻糖或麦芽糖生成少量的葡萄糖。另外，据ＫｕｂｏｔａＭ．等Ａ摄遂，来囊水生牺热菠ＡＴＣＣ３３９２的海藻耱台酶丐以催化蔗糖生成Ｔｒｅｈａｌｕｌｏｓｅ，颟且蔗糖会完全抑制海藻糖合酶催亿分子内转葡萄精营的活力，冈此麦芽糖，海藻糖，蔗耩可能与海藻糖含酶分子一ＬＩＮ－－个活性暖域相继台【６’Ｉ。
研究发现不同来源的海藻糖台酶诅ｉ～级结构上有着相似之处。其氯基酸顺序为：ｎｐ．ｘ１．Ａｒｇ－Ｘ２．Ａｔａ－Ｘ３，Ｐｈｅ，（其中ｘｌ为Ｐｈｅ或Ｐｒｏ，Ｘ２为Ｔｈｒ或Ｐｒｏ，Ｘ３为ｖａｌ或Ａｌａ），或是Ａｌａ－Ｖａｔ．Ｘ４．Ｔｙｒ（Ｘ４为Ｐｈｅ或ｌｉｅ）¨…。
综台文献搬邀中对纯化海藻糖台酶的特性研究，硎］二表１－２中。
些圭量兰竺兰兰登兰尘垒兰兰兰竺茎叁；＝；：＝：！兰：
表卜２海藻糖合酶的特性
Ｔａｂｌｅｌ—２Ｃｈａｒ＆ｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｔｒｅｈａｌＯＳＯｓｙｎｔｈａｓｅ
来锅［最适温度（。Ｃ）佟稳定性（。Ｃ］最适ｐＮ口Ｈ稳定性分子量等电点抑制荆澈祸荆引ＨＪ文献月Ｒ聃扑蔺＜３０７５６０．９０６２，０００４６ｚ—ＴｒｉｓＣｕ“Ｈ９２＋ｓｒＤＴＴＢｆｌＭｎ２４５水‘Ｉ二椭热闻６５＜８０６５ｔ０５，０００４３ｃｕ—ｔ１９２‘ＩｒｉｓＦｅｌ＋
甚臭很单胞杆菌４０－５０６ｏ＿１００ｊ０＿ＩｌＯ４０．０００－?８０，ｏｏｏ，凸６０Ｚｎ２ｉＮｉｌ＊ｃａ”ｃａｌ＋４９，５０
基因重组酶Ｉ＜８０６０－６７５５－９５
攮圳重组酶¨５７０００—６７抛００４１．５Ｉ
注：箍吲再纽酶Ｉ：克降水生柄热菌海藻糖台酶
箍陆ｌ重ｌｌ上酶ｌ｜：克晦脂肪杆菌海藻糖台ｆｉ｜覃
（３）应用海藻糖台酶生产海藻糖
跃期以来，由于海藻糖制职上存１生的凼难使海藻糖的价格昂贵，限制了它的应刖。随着应ＪＬｆ』微生物酶台成海藻糖这一课题的深入研究，人们陆续发现了ＪＬ条适于工业生产海藻糖的微生物酶途径。Ｎ，ｕ４海藻糖合酶以麦芽糖为原料生产海藻糖就是一条极有一Ｌ业化前景的重要途径。由于麦芽糖可以通过淀粉水解得到，因而使原料成本犬为降低。而且利心麦芽糖转化海藻糖，仅需一步反麻，．Ｌ岂简单，易于调控。现将海藻糖台酶与麦芽糖磷酸化酶及海藻糖磷酸化酶两条催化麦芽糖生成海藻糖的过程作对比．如图ｌ，８所示。同时研究表明，海藻糖的产率不受底物浓度的影响。如将这一简单有效的反应与生化反应器结合．这将适于大量生产海藻糖。
图１．８麦芽糖为底物酶法合成成海藻糖的途径
Ｆｉｇ．１－８ＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＴｒｅｈａｌｏｓｅｆｒｏｍｍａＲｏｓｅｂｙＥｎｚｙｍｅ
据ＴｓｕｓａｋｉＫ．和Ｋｕｂｏｔａｍ．等人报道１６５－６９１，将提纯的基冈重组酶ＩＩ与５０％（ｗ／ｗ）的麦芽糖溶液
博士后工谁报告酶珐合成海藻糖曲耕竞马鸯
热同保温，州可以产生５０％（ｗＡｙ）海藻糖；将基因羹组酶Ｉ与５０％（ｗ／ｗ）麦芽糖溶液一嗣傈温，海藻糖产率可达８０％（ｗ／ｗ）；使Ｈ』从脂肪杆菌戏水生牺热菌中分离纯化的海藻糖合酶，其产率也都稿ｉ８溉左右。总的来说，承生旗热蔼鹃海藻禧台酶静热稳定健辩，衣翻予酶的保存。｛ｌｌ；釜在较高瓣溉度Ｆ反应可肪｝ｆ：杂菌污染，更适合Ｉ：业生产。以麦芽糖为底物由海藻糖台酶合成海藻糖的途径见溅ｉ一８。
４海藻糖的陂用
４，１食品方面
在食黼顿城，琥正瓢海藻糖最宥靛ｌ｝还孤犍、保温经、抗豫缡性幂ｌ澍子瀑梭。趣联魏沫及齄器来源等功能与特性方面进行多种刚途的于１：发研究。例如。用作禽有卵等的蛋向质食品在干燥或冻结时沟变性爨ｌ｛ｊ舞鼙。海藻辕本羹袋与其穗舔嗉裁毒ｌ；ｌ滋龠｛｛＿｛１‘调眯料中，以增姻糕昧，或捌捧，裂嗾教匙荆，品质改良荆。配合谯预制粉、粉米酱油、粉末果汁中可以防止粘着、结块【ｌ“３”。表２列出了．海藻耱癍耀予食黻翔一［的，Ｌ条途径。
表卜３海藻糖在食品中的庶用
＇ｌｈｂｌｅＩ－３ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＴｒｅｂａｌｏｓｅｉｎＦｏｏｄＭａｎｕｆａｃｔｕｒｅ
应用性质举例
诋纛鼹糖米点心、耱荣、珏孬糖、巧悫力、冰淇游等
热酸稳定性疆酱、茶饮料、果汁饮料、非油炸方便食晶簿
抗淀耪老化糯米点心、露簸尊
蚩向抗变性剂照制，礼肉制一铺、蛋制ｔ‰乳制ｒ铺年¨掰条锋
坻吸漫性无油蛋糕、甜饼、火腿等
低蟹色一陛冰淇淋、调味料、咖啡阳糖等
口感改良荆凝鲜蔬菜等
试验证明，瑚海藻糖干燥巢泥，炒鸡蛋，经复永衙仍保持着原裔的色香味与废遮。这样就延＆”ｒ食品妁赁架期峨
１９９８年．蜡本林藤生化研究所审请了使厢海藻稿的稚油炸俊餐食晶锈逡方法静专苯Ｊ，公开了食品原料芹”加．Ｉ：食品在以海藻糖为主成分的糠液中加热、脱水的方法…。
海藻稽在食黼方爵豹麻臻，将会国予英徐樯静一Ｆ辫和豁徽到大鬃供瘫焉越来越ｊ“泛。
４．２在爱物桶灏孛静应用
撬彀清抗髂在海藻糖存在辩，３７℃Ｆ空气干燥最予室滠’Ｆ贮存，３ｄ赢生甥涎矬不发＝！妻明显变化川。在对ＤＮＡ６良制性内切酶ｎ勺稳定性和保护件川研究中，当ＥｃｏｒＩ．ＢＲＩＩＩ，ＰｓｔＩ，ＨｉｎｄｌＩＩ等在禽海藻耱弱缓；孛滚中，予３７℃避羝于燥，结果予蠊后的酪，在７ｅ℃缳莓３５ｄ艨，仍戆糕确切断ＤＮＡ。Ｈｊ海藻糖干燥抗体、血小板、酶、病毒等生物活性物质．无需冷冻保存，待复永后均日ｇ恢复活力”。“｜．妇英晷盘｜辑Ｑｕａｄｒａｎｔ公司帮擞舞卫生组织将合作，剥用海藻糖干燥小儿疵甥疫苗，以解决从产地到第三做弊一些融家酝埝运输中的冷冻问题，搦统计，仪此一项即可省下数爵万美元的冷箍系统费糟谯蛙婪上，海藻糖已被秘裂在试剂和诊断药的稳定化铃方面。
现正从海藻糖具有的非还原性、稳定优随的舌韩睬、能鼙米源等功能和特性上积极探索海藻耱麓髯种剐途。例如：应用在移植用脏器的保存液中。或者用于某些生理活性物质。蜘激素、疫苗、维生紊、酶等。蠛包含这类物质的医药赫，傈键食品等的品矮馥矗帮、稳定翱簿。海藻耱静禁些锈室
博士后工作报告辞珐合成海藻糖的研究－５鸯
物还ｊ＝ｌｊ作制癌荆雨Ｉ抗肿瘤药物。
以往，对海藻糖的应儿ｊ研究多集中在离体条什Ｆ。而日本林原生化研究所最近的一项研究表明，以摘除了卵巢的骨质疏松症鼠作模型，发现１：３服海藻糖可改善骨质疏松症。这一发现将会开辟海藻糖在医药应用领域的新川途，极人地拓宽海藻糖的麻』４ｊ市场。
４３化妆品方面
由］ｉ海藻糖具有保湿性，它的硫酸衍生物和脂肪酸衍生物可以作为制造新化妆＾＾的原料。例如：添加到洗液或奶液中，以抑制皮肤干燥，提高皮肤水份和保湿性。或者在门红、口中甜味剂等的符种组成物中做甜味剂、呈味改良剂、品质改良剂稳定剂。
４．４农业领域
通过生物技术构建含海藻糖的转基冈植物．为培养抗早转基因植物开辟了新的选径。含海藻糖转基因植物的建成不仅提高作物的抗旱能力及抗冻一陛，而且使作物在收获加ｉ『：后保持新鲜，更具风味。
可以预见，抗早植物的建成及其发展将有可能为抵抗早灾、冻灾及改造沙漠、绿化荒早地做…重人贡献。海藻糖既有优质甜味及供能的作Ｊ｛；Ｉ，义具有保湿、抗冻、耐干燥及非还原性的重要生理功能，符合食黼添加剂“天然”、“营养”、“多功能”的发展方向，使其在食品、医药、化妆品领域有着广泛的应用前景。
５研究内容及展望
ｉ４Ｉ；Ｉ澡糖作为?种特异性的生物保护剂有其广‘阔的应州前艇。以淀粉、麦芽糖等常见的碳源为底物，戍Ｊ¨酶投术合成海藻辘圩，魁降低海藻｛ｌ！＿ｆ的成木，扩人臆ＪＪＪ范嗣的展佳方法。本研究以淀粉平¨麦芽糖为底物，经过人帑实验筛选…两株适寅的海藻赫龠酶，＂剥其产酶特性进行了详细的研究。卜要｛ｌ川＝究内窬为：
（＂适宜麦芽糖为底物的透性化细胞海藻糖台酶的研究
①筛选出产海藻槠台酶的曲株
⑦确定产酶菌株的最佳培养，毖０最佳端莽条什
③渗透细胞获得透性化海藻祧合酶的办‘法‘“。艺的研究
④透性化鲜¨胞海藻糖台酶特性的研究
⑤利用麦芽糖制取海藻糖反应工艺的优化
（２）适宜淀粉为底物的海藻精合酶的研究
①商产凶株的筛选、西变及『｛辞的捉取
②高产菌株培养条件的优化
③ＭＴＳａｓｅ和ＭＴＨａｓｃ的酶学特性研究
④以淀粉为底物酶法合成海藻糖的丁：艺研究
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