实验一根系活性的测定
1．原理：植物的根系能氧化吸附在根表面的α-萘胺，生成红色的α-羟基-1-奈胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色。根对α-萘胺氧化能力与其呼吸强度有密切关系，日本人相见、松中等人认为α-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的作用，该酶的活力愈强，对α-萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。所以，可以根据染色深浅定性的判断根的活力。
α-萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮染料，可供比色测定α-奈胺含量。
2.药品：
（1）40ppm（ug/ml）α-萘胺溶液：精确称取0.10g分析纯α-萘胺，先用2ml95%酒精溶解，加约50ml蒸馏水移入100ml容量瓶中，然后稀释至刻度，保存于棕色瓶中，置于低温暗处保存。用前稀释25倍（40ml稀释至1000ml）即为40ppm溶液。
（2）１％对氨基苯磺酸溶液：称1ｇ对氨基苯磺酸溶于100ml30%乙酸（醋酸）中。（3）100ppm亚硝酸钠溶液：称0.10g亚硝酸钠溶于1000ml蒸馏水中。
（4）0.067mol/L pH7.0磷酸缓冲液
分子量0.067mol PH7.0(1000ml磷酸缓冲液)所需量（ｇ）Ｎa2HPO4.2H2O 178.057.1184g
Ｎa2HPO4.12H2O 358.22 14.4004g
KH2PO4136.09 3.6292g
Ｎa2HPO4.2H2O 7.1184g (或Ｎa2HPO4.12H2O 14.4004g)+ KH2PO4 3.6292g定容到1000ml容量瓶中。
3.方法与步骤：
(1)α-萘胺标准曲线的绘制：用40ppmα-萘胺溶液配制成0、5、10、20、30、40ppm
各浓度α-萘胺的配制：用40ppm溶液配制
混匀，置室温（20~25度）下５分钟使之显色，最后加入蒸馏水，使整个容积为25ml, 摇匀，在20-60分钟内用510nm波长进行比色，以对照光密度为０，读取光密度，以α-萘胺含量作横坐标，光密度作纵坐标绘制标准曲线。
(2)将待测根系吸净吸干附着水称取1g放入100ml三角瓶中，加40ppm的α-萘胺溶液和磷
酸缓冲液各25ml，混匀。
(3)静置5-10分钟后（根吸附以完毕），从瓶中取2ml溶液放入25ml容量瓶。将其余的溶
液塞好瓶塞后，放在震荡器上，在25℃下震荡3-6小时（如无震荡器时要在反应期间，
定时的摇动），反应时间完毕后，再取2mL溶液放入另一刻度试管，因为α-萘胺溶液会自动氧化，所以要同时做无根的同样操作的空白试验（根样最好用整根；用切碎的根，α-萘胺溶液的氧化量会意外增加）。
(4)在上述两次及空白试验所吸取的2ml测定液中，各加入10ml蒸馏水，混匀后再加入1%
对氨基苯磺酸1ml和100ppm的亚硝酸钠溶液1ml，混匀，置于室温下5分钟使之显色，然后加入蒸馏水，使整个容积为25ml，在20-60分钟内用510nm波长进行比色，读取光密度，由标准曲线查出α-萘胺含量。也可以将根系烘干，以干重计算根系活力（更为准确些）。
(5)结果计算
根系对α-萘胺的生物氧化量Y（ug.g-1.h-1）按下式进行计算
Y=[（A-B）-（C-D）]*E/（t*W）
式中：A-第一次取液测定值（ug.ml-1），作为开始值，这是根表面氧化物质的氧化作用而不是根的酶促反应；
B-第二次取液测定值，是根的酶促反应后（如3小时）剩余的α-萘胺浓度（ug.ml-1）。A-B即α-萘胺氧化总量；
C-第一次空白测定值（ug.ml-1）；
D-第二次空白测定值；
C-D即α-萘胺自发氧化量；
E-稀释倍数24（48/2）（因从48ml中又取2ml）；
t-3小时；
W-样品鲜重（也可以用干重计算）；
实验二、硝酸还原酶活性的测定-活体法
[原理]：
硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐，产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸（或对-氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（或萘基乙烯胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以每克鲜重含氮量表示，即以ug.g-1.h-1为单位。NR 的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。
[试剂]
1．亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯NaNO20.9857g溶于去离子水后定容至1 000ml，然后再吸取5ml定容至1000ml，即为含亚硝态氮1ug.ml-1的标准液；
2．0.1molpH7.5的磷酸缓冲液：Na2HPO4.12H2O30.0905g与NaH2PO4.2H2O 2.4965g加去离子水溶解后定容至1 000ml；
3．1%（W/V）溶液：1.0g 对氨基苯磺酸溶于100ml 3 mol.L-1HCL中（25ml浓盐酸加水定容至100ml 即为 3 mol.L-1HCL）；
4．0.02%（W/V）萘基乙烯胺溶液：0.020g萘基乙烯胺溶于100ml 去离子水中，贮于棕色瓶中；
5．0.1mol.L-1KNO3溶液：2.5275g KNO3溶于250Ml 0.1mol.L-1Ph7.5的磷酸缓冲液中；6．0.025mol.L-1Ph 8.7 的磷酸缓冲液：8.864 0g Na2HPO4.12H2O，0.0570g KH2OP4.3H2O，溶于1 000ml去离子水中；
7．30%三氯乙酸溶液：30g三氯乙酸。水溶后定容至100ml。
[方法]
摇匀后在25度下保温30min，然后在540nm下比色测定。以亚硝态氮（ug）为横坐标（X），吸光值为纵坐标（Y）建立回归方程。
2.样品中硝酸还原酶活力测定
1.在取材的前一天加50mmol/L KNO3或NaNO3到培养苗的水中就可以诱导酶的产生。
2.称取作物叶片0.5g（共3份，剪成1cm 左右的小段（均匀），放入3只三角瓶中，其中
1份作对照，另外2份作酶活性测定用。
3.反应：先向对照三角瓶中加入1ml30%三氯乙酸溶液，然后各三角瓶中都加入9ml
0.1mol/L KNO3溶液，混匀后立即放入干燥器中，抽气30分钟（期间几次通入空气，再
抽真空，使叶片完全沉入瓶底，后在25℃黑暗中反应0.5小时，分别向测定瓶（对照瓶除外）加入1ml30%三氯乙酸终止酶反应。
4.比色测定：将各瓶摇匀静置2min后，各取2ml反应液，加入1ml磺胺，摇匀后再加入
1ml萘基乙烯胺，再在35℃水浴中显色15min ，后比色，540nm
5.空白溶液：2ml蒸馏水+1ml磺胺+1mlα-萘胺。同样和样液一样进行水浴15min。
三、结果计算
单位鲜重样品中硝酸还原酶活性t
W x
v v
??=
1
2
[μg/ (g .h)]
式中：为反应液酶催化产生的亚硝态氮总量，μg ；V 1为提取酶时加入的缓冲液体积，ml ；V 2为酶反应时加人的粗酶液体积，ml ；W 为样品鲜重，g ；t 为反应时间，h 。
实验三 外渗电导法
方法：
1. 清洗用具：三角瓶一定要清洗干净。
2. 取样与浸泡，最好用完整叶和根，以消除伤口的影响，用天平准确称取一定量的材料（如
0.1-1.0g ）对应放入已编号的三角瓶中，加入一定量的去离子水浸泡，自然浸泡2小时，可在震荡器上震荡，注意：各处理浸泡时间和测定温度要一致，一般应在室温条件下进行。
3. 测定电导率：在测定前先将各管浸泡上下搅拌或摇匀再测定电导率，为了测定相对外渗
电导值，需将测国电导率的材料，再放入沸水中煮沸10-20分钟，冷却至室温后再测一次总电导率值。
4. 电解质外渗量的表示：直接用电导率值表示
电解质渗出率（%）=浸泡液电导率值/煮沸后电导率值*100] 温度校正：X 25=A t [1+0.02（t-25）]
X 25为校正成25℃时的电导率，A t 为在t ℃下实测电导率值。
参考《植物生理学实验技术》张宪政 P 333，辽宁科学技术出版社
实验四、植物中氮磷钾元素的测定
一、代测液制备：
1、硫酸—过氧化氢消煮法
试剂配制：
（1）浓硫酸：分析纯
（2）30%过氧化氢
测定步骤：
称取0.5000-1.000克（通过0.42mm孔径）样品置50ml小开氏瓶中，用少量水湿润样本后，加入浓硫酸5ml，摇动使硫酸与样本混合，放置半小时或过夜，在电炉上加热至瓶内硫酸开始回流（消化液呈酱红色，冒大量白烟），微沸5min，取下冷却，逐滴加入30%H2O2约0.5ml，再加热微沸5min，取下稍冷却，添加H2O2，反复操作，直至消化液完全清亮为止(最高温度不要超过350度)。添加H2O2量应每次逐渐减少。最后一次应微沸5min，以除尽剩余的H2O2。冷却后先加入10ml蒸馏水，再无损地移如100ml容量瓶中定容，摇匀备用。（注意：H2O2不能沾在开氏瓶上，以免影响磷的测定）
二、氮的测定
用2N KCl提取：取新鲜土壤10g，放入100ml三角瓶，加入2N KCl50ml，用橡皮塞塞紧，振荡30分钟，立即过滤于50ml三角瓶中（含量第可以2.5：1）
A试剂：
1）复合液：28g NOH、5 gNa2EDTA.2H2O和50 g酒石酸钾钠溶于1L去离子水中，保存于棕色瓶中。
2）催化液：150 g水杨酸钠和0.3 g硝普钠溶于1L去离子水中，保存于棕色瓶中。
3）显色液：200 g NOH和250 g苯酚定溶到1L，保存于棕色瓶中。
4）混合液：催化液和显色液1：1混合，用前进行配制。
5）次氯酸溶液：60ml5.25%次氯酸钠溶液稀释到1L，保存于棕色瓶中。
6）氮标准液：
a：2.5mgNH4+-N/ml储备液：11.79g(NH4)2SO4定容到1L。
b：10ugNH4+-N/ml工作溶液：吸收1ml储备液，稀释到250ml。
B步骤
1）打开分光光度计，预热30分钟。
2）吸收1ml样品液加入10ml容量瓶或刻度试管中。
3）吸收0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.7ml工作溶液加入10ml容量瓶中，铵离子的浓度分别为0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.7ug/ml。若超过0.8ug/ml，就不成线形关系。
4）加入5滴0.25%正硝基酚；
5）用5N NOH中和。在碱性条件下，溶液显黄色；
6）加入1ml复合液和1ml的混合液，摇匀；
7）加入1ml次氯酸钠溶液，摇匀；
8）稀释到10ml，室温放置60min后，在626nm 处比色；
9）绘制工作曲线，并寻找样品氮浓度。
C 计算：
含氮率（mg/kg）=(C*Vs)/Ws
C：标准曲线上查的铵浓度（ug/ml）Vs：样品溶液总体积（mL）Ws：样本重量。
紫外分光光度法测定硝态氮
1、试剂：
1）氮标准储存溶液[p(N)=100mg L-1]，称取0.7218g 硝酸钾（KNO3，分析纯），溶于水中，转人1000 mL容量瓶中，定容摇均。
2）氮标准溶液[p(N)=10mg L-1]：将氮标准储存溶液准确稀释10倍。
2、操作步骤：
1）工作曲线：吸取氮标准溶液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL分别于50mL的比色管中，用水定容至刻度，得到氮的标准系列溶液0mg L-1、0.2mg L-1、
0.4mg L-1、0.6mg L-1、0.8mg L-1、1.0mg L-1、1.2mg L-1，测定A220和A275 。以A
（A= A220- A275）为纵坐标，氮的浓度为横坐标绘制工作线。
2）直接吸收样品溶液测定A220和A275，根据样品A值（A=A220-A275）查得测定液的浓度。
3、计算结果
p(N)=pV/W
p(N)：样品中总氮含量，mg kg-1
p：从工作曲线中查得氮浓度mg L-1
V：提取液体积，mL
W：样品重量，g
注意：1、两测定方法中，标准溶液的配制均应用提取土壤的氯化钾溶液进行配制。
2、铵态氮的测定中：2）2ml样品加入到20ml的刻度试管中。
3）吸取0，0.2，0.4，0.8，1.2，1.4ml工作溶液加入20ml容量瓶中，铵离子的浓度分别为0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.7ug/ml。
8）稀释到10ml，室温放置60min后，比色；
三、植物全磷的测定（H2SO4-H2O2消煮-钒钼黄比色法）
原理：待测液中的正磷酸盐能和偏钒酸盐在酸性条件下作用形成黄色的杂聚化合物钒钼酸盐，溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量成正比，可以用比色法定量磷。比色时根据所用比色计的型号和溶液中磷浓度选用波长400-490nm（紫-蓝）或相应的滤光片。
试剂配制：
1．标准曲线：（1）50ppm磷（P）标准液：准确称取经105度烘干的磷酸二氢钾（KH2PO4）
0.2197g，溶于水中，转入1000毫升的容量瓶中，加水至约400毫升，加浓硫酸5毫
升，用水定容，即为50ppm标准液。测定时分别吸取此标准液0，2.5，5，7.5，10，15，20 毫升于50毫升容量瓶中按待测液测定步骤显色后，即为0，2.5，5，7.5，10，15，20ppm的系列标准液。
2．钒钼酸铵试剂12.5g钼酸铵[ （NH4）6Mo7O24。4H2O]溶于200毫升水中。另将0.625g 偏钒酸铵（NH4VO3）溶于150毫升沸水中，冷却后加入125毫升浓硝酸，再冷至室温。
将钼酸铵溶液缓慢地注入偏矾酸铵溶液中，混匀，再用蒸馏水稀释至500毫升。
3．6N氢氧化钠溶液24g 氢氧化钠溶于水稀释至100毫升。
4．2，6（或2，4）-二硝基酚指示剂0.25g二硝基酚溶于100毫升蒸馏水中（饱和）。2，6-二硝基酚的变色范围PH2.4（无色）-4.0(黄色)。变色点是PH3.1。
测定步骤：
吸取适量待测液（含P2O5 0.5-2毫克）20-25毫升于50毫升容量瓶中，加蒸馏水使体积约为35毫升，加2滴二硝基酚指示剂，用6N氢氧化钠和6N硝酸，中和至溶液刚成微黄色，准确加入10毫升钒钼酸铵试剂，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。放置15分钟后比色（450nm 和1cm光径比色杯），同时作空白试验，进行比色，在标准曲线上查的各自ppm值。
结果计算：
P2O5%=[（A-B）*V/W]*取用量倍数*10-4
式中：A-在标准曲线上查的的待测液ppm值；
B-空白试验查得的ppm；
V-显色时溶液体积（50毫升）；
W-样重（克）
取用量倍数-待测液总体积与测定时所取体积之比；
10-4- 将ppm换算成%。
注释：
（1）此处所用钒钼酸铵试剂是硝酸系统的，适用于采用硝酸溶液制备的待测液。如待测液是用盐酸溶液制备的，则本实验应改用下列盐酸-钒钼酸铵试剂的配方：
四、植物全钾的测定（H2SO4-H2O2消煮-火焰光度计法）
1火焰光度法：吸取待测液5ml，移入25ml容量瓶中，用水定容。此溶液钾离子浓度约为10-50ppm（钾）。和钾系列标准液同时在火焰光度计上测读电流计读数。
2标准曲线：称取0.1907克KCL（在110度烘2小时）溶于水中，定容至1升，即为100ppm 钾标准液。吸取此标准液0、1、2.5、10、20、30ml于50ml容量瓶中，加入与待测液等体积得空白消煮液后定容。此系列标准为0、2、5、20、40、60ppm钾，在火焰光度计上测度后绘制工作曲线。
3结果计算：
K2O%=〔查得ppmK*消化液定容体积*取用量倍数〕/W*104
4式中：ppm-根据样品测得读数后，在工作曲线上查得的ppm；
4.1.1、50-火焰光度计上测读时该溶液定容的体积（ml）；
4.1.2、取用量倍数-待测液总体积（100ml）与从中分取体积（ml）之比；
4.1.3、104-将ppm换算成%；
4.1.4、W-样品重（克）。
实验五、 蔗糖、淀粉、可溶性总糖测定
0.1g 干样品 (过100目筛)
10ml 80%乙醇 80℃水浴30min
冷却 2000rpm
离
心
20min
残渣
10ml 80%乙醇 80℃水浴30min 冷却
2000rpm 离
心
20min 合并上清液
残渣
10ml 80%乙醇 80℃水浴30min
冷却
2000rpm 离心20min 残渣
80℃烘干 冷却
加2ml 蒸馏水
沸水浴20min ，不断搅动 吸0.9ml 提取液 吸1.0ml 提取液+1.0ml 水
0.1ml 2N NaOH (或0.5ml 提取液+1.5ml 水)
沸水浴10min 4ml 0.2%蒽酮试剂(用浓H 2SO 4配制)摇匀
冷却
15min 沸水浴 1ml 0.1%间苯二酚
冷却
2ml 9.2N HClO 4 10min 不断振荡
加水6ml
2000rpm 离心25min
残渣
2ml 4.6N HClO 4
合并上清液 10min 不断振荡 加水6ml
过滤
残渣
(注意：①加蒽酮试剂时，试管置于冷水浴中；②测蔗糖用0.9ml 蒸馏水 + 0.1ml 2N NaOH+1ml 0.1%间苯二酚 +3ml 10N HCl 作参比；③测可溶性糖用2ml 蒸馏水 +4ml 蒽酮试剂作参比。） 弃去
实验六、过氧化物酶、超氧化物岐化酶SOD 活性及丙二醛含量的测定
一、原理
1、过氧化物酶：在代谢中调控ZAA 含量水平，免除机体内产生H 2O 2的毒害作用。在过氧
化氢存在下，过氧化氢酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色4-邻甲氧基苯酚。用分光光
(方法同可溶性总糖测定)
度计测量生成物的含量。
2、SOD酶：能消除逆境生理生成的氧自由基作用。
氮基四唑在蛋氨酸和核黄素存在的条件下，照光后能发生光化还原反应而生成蓝甲，后者在560nm处有最大光吸收；超氧化物岐化酶能抑制氮基四唑的光化还原，其抑制强度与酶活性在一定范围内成正比。
3、MDA：是生物膜系统脂质过氧化产物之一，其浓度表示脂质过氧化强度和膜系统伤害程
度，所以是逆境生理指标。丙二醛在酸性环境中和高温下，发生异硫代巴比妥酸反应，形成在波长532nm具有最大光吸收的有色三甲基复合物，这复合物的克分子消光系数为1.55*105cm-1（mol/L）-1，由此，可计算丙二醛的含量。
二、试剂
0.0625mol/L PH7.8磷酸缓冲液（PBS），H2O2（PVP）聚乙烯吡咯啉酮，100mmol/L，PH 7.0PBS、20mmol/L愈创木酚（现配）、0.06mmol/L核黄素、0.205mol/l蛋氨酸.0.003mmol/l 乙二胺四乙酸（EDTA）.1.125mmol/L氮蓝四唑（NBT现配）.10%三氯乙酸（TCA）[含0.3%硫代巴比妥酸（TBA）]。
三、实验步骤
1、丙二醛含量测定
取叶片1g，加入10%TCA2ml和少量的石英沙，再加8mlTCA进一步的研磨，然后在4000转下离心，上清液为提取液
取上述上清液3ml（对照加3ml蒸馏水），加入3ml 0.6% TBA（用10%的TCA配置）溶液，混匀于沸水上反应15min，迅速冷却后再离心。取上清夜测定532、600、450nm 波长下的消光度。（硫代巴比妥酸要在热水中配置，如100ml：50ml20%TCA50ml水，水沸后加TCA）MDA含量（umol.g-1）= MDA浓度*提取液体积/鲜重
C2（umol/L）=6.45（D532-D600）-0.56D450
2、过氧化物酶活性测定取适量酶液（用PBS代替酶液作空白）加3ml反应混合液（100mmol/LpH7.0PBS，20mmol/L愈创木酚），混匀，25℃温育5分钟，加20μlh2O2启动反应于470nm波长处作时间扫描，扫描曲线斜率为酶反应速率，以每分钟O.D.470增加0.01为一个酶活单位（n），酶活性以u/mg蛋白表示。
3、超氧化物歧化酶活性的测定加入5倍于样品量的50mmol/L PH7.8磷酸缓冲液[0.1 mmol/L EDTA，0.3%W/V TX-100，4% W/VPVPP]研磨，在10500r/min离心20min。
在3ml反应混合液（在54ml 14.5 mmol/Ldl 甲硫氨酸中分别加入均以50 mmol/L PH7.8磷酸缓冲液配置的3umol/LEDTA,2.25mmol/LNBT，和60umol/L核黄素各2ml，各个试剂用前配置、闭光）的试管中，加入适量的SOD酶液，然后放在光下照光10min，迅速测定OD560值，以不加酶液的照光管为对照。（酶加10、20、30、40、50ul）
酶单位/样品量=反应被抑制%/[50%*3ml 反应混合液中加的样品量]
实验气相色谱法测定乙烯含量
[实验原理] 乙烯是植物内源激素之一，以气体形式存在，可以直接用气相色谱法测定。所有植物组织都能产生乙烯，而准确测定乙烯释放量，对认识乙烯在植物逆境生理、发育生理、
开花生理学生理过程中的作用有着重要意义。气象色谱仪中的分离系统包括固定相和流动相。由于固定相和流动相对各种物质的吸附能力不同，因此各种物质的分配系数（或吸附能力）不一样，当含混合物的待测样（含乙烯的混合气）进入固定相以后，不断通以流动相（通常为H2或N2），待测物不断地再分配，最后，依照分配系数大小顺序依次被分离，并进入检测系统得到检测。检测信号的大小反映出物质含量的多少。
[实验材料]
[仪器设备及试剂]
（1）气相色谱仪（配氢火焰离子化检测器）；
（2）带橡皮塞的三角瓶或真空干燥器（使用前先测量体积），100ul、1ml注射器。（3）氮、氢及空气钢瓶。
（4）标准乙烯。
[实验步骤]
（1）材料处理。将试验材料称重后装入密封容器中，置于室温（25℃）下1-2h。（2）测定条件。柱温为80℃，气化室温度为120℃，以氮气为载气，流速为50ml/min，空气流速为500ml/min，氢气流速为60ml/min。
（3）配制一定浓度的标准乙烯气体。
（4）用注射器抽取1ml气样，测定乙烯峰高度。取标准乙烯气体，测定峰高值。
[结果计算]
气样中乙烯的浓度=样品峰高*标样的浓度（μl/L）/标准乙烯峰高
乙烯生成速率=乙烯浓度*容器体积/密封时间*样品重量[μl/（g.h）]
实验α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的测定
[实验原理]
α-淀粉酶能将淀粉分子的α-1，4糖苷键任意切断成长短不一的短链糊精及少量麦芽糖和
葡萄糖，使淀粉对碘呈蓝紫色的特异反应消失，以该颜色消失的速度计算酶的活力。β-淀粉酶是从淀粉的非还原性末端分解2个葡萄糖单位的α-1，4糖苷键生成麦芽糖，因此可用DNS法测定溶液中还原糖的含量。
[实验材料]
发芽的水稻种子。
[仪器设备]
分光光度计，恒温水浴锅。
[实验步骤]
1，粗酶液制备
取新鲜植物材料10g，洗净，剪碎，按1：2（m/V）比例加20ml0.1mol/LnaAc 缓冲液（含6mmol/LcaCl2，PH5.0）及少量石英砂研磨，用一层尼龙布过滤。滤液在20000r/min。离心20min，取上清液用10mmol/LnaAc缓冲液透析。过夜后用20000r/min离心10min，取上清液定容，备用。
2.绘制β-极限糊精标准曲线
称取100mgβ-极限糊精加少量水调成糊状，倾入10ml沸蒸馏水，不断的搅入.加
热，煮至透明。流水冷却后定容至10ml即每毫升含10mgβ-极限糊精。取25——
200mlβ-极限糊精（0.25——2.0mg）加水定容至0.5ml，再加 5.0ml0.01%I2-KI
溶液于560nm处测定其光密度（OD）值。以光密度为纵坐标，β-极限糊精含量为
横坐标绘制β-极限糊精标准曲线。
3.α-淀粉酶活力的测定
取0.1——0.5ml粗酶液（相当于含0.1——0.2g鲜重），加0.5mlβ-极限糊精，加10mmol/LnaAc缓冲液定容至 1.0ml，摇匀后在30℃保温。隔不同时间取0.1ml反应液加5.0ml0.01%的I2-IK试剂，0.4mlH2O，摇匀后在560nm处测其光密度。按OD值查标准曲线。计算单位为：mgβ-极限糊精降解/g（鲜重）.h。
4.β-淀粉酶活力的测定
（1）酶反应。在具塞试管中加5ml2%可溶性淀粉.1ml0.1mol/LnaAc（Ph5.0）缓冲液.3.9mlH2O，在37℃预热5分钟，加0.1ml酶液，保温30分钟后煮沸
10分钟。冷却后用DNS法测定还原糖。以每小时生成1mg麦芽糖所需的酶
量作为1个酶活力单位。
酶活力（mg/ml）=1.9K*OD*10*（n/0.5）*0.1
式中，n为酶液稀释倍数；K为每一OD值所相当的葡萄糖量，mg；1.9为葡萄糖换算成麦芽糖的换算因子。
2.DNS法定糖。取试管加1.5mmlDNS试剂0.5ml样品，沸水浴中加热15分钟，冷却后加10.5ml水，摇匀后用分光光度计在540nm处测定其光密度。同时，用不同浓度的葡萄糖制作标准曲线，求K值。
（注：DNS试剂：称10克3，5二销基水杨酸，溶解于水中，加20克氢氧化钠，200克酒石酸钾钠，水500毫升，加热溶解后加重蒸酚2克，无水亚硫酸钠0.5克。加热搅拌，冷却后定容至1000毫升贮存于棕色瓶中，放置1星期后使用）。
实验几种抗氧化剂含量的测定
抗坏血酸（ASA）含量的测定
[实验原理]
抗坏血酸（ASA）是植物细胞重要的抗氧化剂，它可还原O2及清除H2O2，还可再生维生素C。
ASA可将铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与二联吡啶反应，生成红色螯合物。在525nm 波长处的光吸收与ASA含量正相关，从而可利用比色法测定ASA含量.
[实验材料]
水稻叶片。
[仪器设备]
天平，离心机，恒温水浴锅，分光光度计。
[试剂药品]
①5%三氯乙酸（TCA）溶液（W/V）：5克三氯乙酸，用蒸馏水配成100毫升溶液。
②150mmol/LNaH2PO4（PH7.4）溶液；
③10%三氯乙酸（TCA）溶液；
④44%H3PO4；
⑤4%2，2-二联吡啶；
⑥3%FeCl3。
[实验步骤]
1.标准曲线的制作
称取17.613mg的ASA，溶解并定容至100ml，得到1mmol/L的标准母液，利用该标准母液分别配制浓度分别为0mmol/L，0.2mmol/L，0.3mmol/L，0.4mmol/L.0.5mmol/L，
0.6mmol/L，0.7mmol/L的ASA标准液。吸取上述各标准液200μL于编好的对应的不同
试管中，分别往各管中加入150mmol/LNaH2PO4200μL，H2O200μL，混合均匀。超过30s 后再分别往各管中加入10%TCA溶液400μL，44%H3PO4400μL，4%2，2-二联吡啶400μL3%FeCl3200μL，混匀后在37℃水浴中保温60分钟，然后测525nm处的OD值。将测定结果以ASA浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标作标准曲线。
2.提取
称0.5克水稻叶2分，1份用于测定干重1份用于ASA的提取。将样品剪碎加入5ml5%三氯乙酸，研磨，15000*g离心10分钟，上清液定容至5ml。
3.测定
吸取上述制备好的样品上清夜0.2ml，分别加入150mmol/L的NaH2PO4（PH7.4）0.2ml，H2O 0.2ml，混合均匀，至少30s后，再依次分别往各管中加入10%TCA0.4ml，44%H3PO40.4ml，4%2，2-二联吡啶0.4ml和3%FeCl30.2ml，混合后在37℃水浴中保温60分钟，然后测525nm处的光吸值。根据标准曲线计算样品中的ASA含量。
[实验结果与计算]
ASA含量用μg/gFW表示。
二.还原型谷光干肽（GSH）含量的测定
[实验原理 ]
还原型谷光干肽（GSH）是植物细胞内另一种重要的抗氧化剂。它含有活性的疏基，极易被氧化。GSH可以抑制不饱和脂肪酸生物膜组分及其他敏感部位的氧化分解，防止膜脂过氧化，从而保持细胞膜系统的完整性，延缓细胞的衰老和增强植物抗逆行。
本实验利用疏基试剂DTNBGSHJ的含量。
[实验材料]
水稻叶片。
[仪器设备] 天平，离心机，恒温水浴锅，分光光度计，研钵等。
[试剂药品]
①5%三氯乙酸（TCA）溶液；
②150mmol/LNaH2PO4（PH7.7）溶液；
③100mmol/LPH6.8的PBS；
④DTNB试剂；75.3mgDTNB溶于30ml100mmol/LPH6.8PBS中。
[实验步骤]
1)GSH标准曲线的制作
a)配置浓度分别为0mmol/L，0.02mmol/L，0.04mmol/L，0.006mmol/L0.08mmol/L，
0.10mmol/L，0.12mmol/L，的标准GSH溶液，吸取上述标准液各0.25ml分别加入
150mmol/L的NaH2PO4（PH7.7）2.60ml，混合均匀后，往各管中加入DTNB试剂0.18ml，摇匀后，30℃保温反应5分钟，测A412nm（以加磷酸缓冲液代替DTNB试剂作空白对
照）。将测定结果以GSH浓度为横坐标，光密度值为纵坐标作标准曲线。
2)GSH的提取方法同ASA的提取
3)GSH的含量的测定
a)分别取上述的样品提取液0.25ml，各加入150mmol/LNaH2PO4（PH7.7）2.6mlDTNB
试剂0.18ml，以加磷酸缓冲液代替DTNB试剂作空白。摇匀后，于30℃反应5分钟，
测定412nm波长下的光吸收值。根据标准曲线计算样品的GSH含量。
4)[实验结果及计算] GSH含量用μg/gFW表示。
华南农业大学实验报告 专业班次11农学1班组别201130010110 题目根系活力的测定姓名梁志雄日期2012-11-21 一、实验原理 氯化三苯基四氮唑（TTC ）是标准氧化电位为80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF ）生成的三苯甲（TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶会引起的TTC 还原。所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。根系的活力越高，产生的NAD（P）H+H+等还原物质越多，则生成红色的TTF越多。TTF 溶于乙酸乙酯，并在波长485nm处有最高吸收峰，因此，可用分光光度法定量测定。 二、实验材料与实验器材 蒜根、分光光度计、分析天平、恒温水浴锅、研钵、漏斗个、移液管、比色管、10ml容量瓶、50ml烧杯 三、实验试剂 乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠粉末、1％TTC、1/15mol/LpH7.0磷酸缓冲液、1mol/L硫酸 四、实验步骤 1、称取根尖样品0.5 g ，放入小烧杯中，加入0.4 ％TTC 溶液和磷酸缓冲液（pH7.0 ） 各 5 mL ，使根充分浸没在溶液内，在37 ℃下暗保温1 h ，此后立即加入1 mol/L 硫酸 2 mL ，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37 ℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）
2、把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3 ～4 mL ，充分研磨，以提 出TTF 。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2 ～3 次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10 mL ，用分光光度计在波长485 nm 下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC 还原量。 TTC还原量=从标准曲线查出的TTC浓度*提取液总体积*稀释倍数 五、数据记录记录 根重（g）反应起始时间反应终止时间稀释倍数OD485 未煮沸根系0.5 8:35 9:35 1 0.245 死根系0.5 8:35 9:35 1 0.000 从标准曲线上查出TTC的浓度为0.00142（ug/ml） 故可以知道TTC的还原强度为0.00142*10*1/0.5=0.0248 六、实验总结 本实验严格按照实验步骤进行，利用根系生长发育过程中所产生的还原物质，把TTC还原为红色的TTF，再利用TTF溶于乙酸乙酯从而把它提取出来，在485nm的波长下测定其吸光度，从而计算出TTC的还原量，以此来表现根系活力的大小，本实验测得的数据为0.0248，从网上查出的一个数据位0.01844，所以总体上数据还是比较合理的。在分光光度法实验中，样品和表样都加了处理剂，处理剂可能会含有被测物质，使用空白对照就是我去掉被测物质外所带来的结果误差，进行对照，可以清晰检验出结果。
实验 5 植物根系活力的测定（ TTC 法） 植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。 一、原理 氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（ TTF ）， 生成的三苯甲（ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 （二）试剂 1. 乙酸乙酯（分析纯）。 2. 次硫酸钠（ Na 2 S 2 O 4 ，分析纯），粉末。 3. 1 ％ TTC 溶液：准确称取 TTC g ，溶于少量水中，定容到 100 mL 。用时稀释至需要的浓度。 4. 磷酸缓冲液（ 1/15 mol/L ，）。 5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重的浓硫酸 55 mL ，边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL 。 6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 g ，溶于水中，定容至 100 mL 即成。（三）仪器设备 小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管： mL 1 支、 10 mL 1 支、 5 mL 3 支，刻度试管 6 支，分光光度计，分析天平（感量 mg ），电子顶载天平（感量 g ），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。 三、实验步骤 1. 定性测定 （ 1 ）配制反应液把 1 ％ TTC 溶液、 mol ／ L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4 比例混合。 （ 2 ）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置 37 ℃左右暗处放 1 ～ 3 h ，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。 2. 定量测定 （ 1 ） TTC 标准曲线的制作取％ TTC 溶液 mL 放入大试管中，加 mL 乙酸乙酯，再加少许 Na 2 S 2 O 4 粉末摇匀，则立即产生红色的 TTF 。此溶液浓度为每毫升含有 TTF 80 μg 。分别取此溶液 mL 、 mL 、 mL 、 mL 、mL 置 10 mL 刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含 TTF 20 μg 、 40 μg 、 80 μg 、 120 μg 、 160 μg 的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在 485 nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 （ 2 ）称取根尖样品 g ，放入小烧杯中，加入％ TTC 溶液和磷酸缓冲液（）各 5 mL ，使根充分浸没在溶液内，在 37 ℃下暗保温 1 ～ 2 h ，此后立即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL ，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先
植物生理学实验指导书 指导老师马红亮 福建师范大学地理科学学院生态系
实验一植物根系活力的测定（α-萘胺氧化法） 植物根系的作用，主要有(1)对地上部的支持和固定；(2)物质的贮藏；(3)对水分和盐类的吸收；(4)合成氨基酸、激素等物质。因此根系的活力是植物生长的重要生理指标之一。 一、实验目的 通过实验，掌握用α－萘胺法测定植物根系活力的原理和技术。 二、实验原理 植物的根系能氧化吸附在根表面的α─萘胺，生成红色的α—羟基—1—萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色，其反应如下： 根对α-萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。日本人相见、松中等认为α-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的催化作用，该酶的活力愈强，对α—萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。所以，可根据染色深浅定性地判断根的活力；也可测定溶液中未被氧化的α-萘胺量，计算已被氧化的α-萘胺量确定根系活力的大小。
在酸性环境中对氨基苯磺酸与亚硝酸盐先反应，再和α-萘胺作用生成红色的偶氮染料，可在510nm比色测定α-萘胺含量。其反应如上。 三、实验仪器药品 分光光度计，分析天平，烘箱，三角烧瓶，量筒，移液管，刻度试管 Α-萘胺溶液：称10mg α-萘胺，先用2ml左右的95%酒精溶解，然后加水到200ml，成50μg/ml的溶液。 0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0（见附表2） A液：0.2mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O 27. 8g配成1000ml）。 B液：0.2mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O53.65g或Na2HPO4·12H2O71.7g 配成1000ml）。 用时取A液39ml，B液61ml混合，稀释至200ml即成。 1%对氨基苯磺酸：将1g对氨基苯磺酸溶解于100ml 30%的醋酸溶液中。 亚硝酸钠溶液：称10mg亚硝酸钠溶于100ml水中。 四、实验操作步骤 定量测定 (1) 挖出水稻植株，并用水洗净根系上的泥土，剪下它的根系，再用水洗，待洗净后用滤纸吸去根表面的水分，称根 称2g根放在100ml三角烧瓶中。然后加50μg/ml的α—萘胺溶液与磷酸缓冲液(pH7.0)等量混合液50ml，轻轻振荡，并用玻璃棒将根全部浸入溶液中，静置10分钟。吸取2ml溶液，测定α—萘胺含量[测定方法见下面(2)]，用为试验开始时的数值。再将三角烧瓶加塞，放在25℃恒温箱中，经一定时间后，再进行测定。另外，还要用一只三角烧瓶置同样数量的溶液，但不放根，作为α—萘胺自动氧化的空白，也同样测定，求它自动氧化量的数值。 (2) α-萘胺含量的测定 吸取2ml溶液，加入约10ml蒸馏水，再在其中加入1%对氨基苯磺酸溶液1ml和亚硝酸钠溶液1ml，在室温中放置5分钟，待混合液变成红色，再用蒸馏水定容到20ml。在20─60分钟内进行比色。选用波长510nm，读取吸光度，查对标准曲线得相应的α─萘胺浓度。
根系扫描分析系统(WinRHIZO)使用说明 操作步骤： ●插上扫描仪的电源，打开电源开关。 ●将样品放入样品盘中加水并将其展平（若要底色，在盘上盖 上彩板）。 ●打开电脑，插上加密狗，点击电脑桌面上WinRHIZO Pro2007。 ●选定EPSON Expression 10000XL3.4。 ●点击Image下拉菜单中的Acquisition Parameters进行参数测 定。 ●点击左上角的扫描仪图标进行扫描。 ●点击Image下拉菜单中的save Displayed Image，保存扫描图。 ●将左上角的扫描仪图标更换成磁盘图标进行根系分析。 ●点击Data下拉菜单中的New File新建文本文档。 ●点击Analysis下拉菜单中的Restart Analysis进行根系分析。 ●若要进行彩色分析，点击Color下拉菜单中的New Class进行 颜色分级后开始分析根系。 ●若要对整个文件夹分析可点击Batch下拉菜单中的Start Analysis。 ●操作后关闭电脑和扫描仪，拔掉“密码狗”。 注意事项 ●使用过程中请保持扫描仪洁净、干燥。 ●样品盘使用时请尽量减少磨损，防止划痕产生影响分析结果。 ●密码狗用完请及时归还管理员。
根系扫描分析系统(WinRHIZO)描述 一、用途： WinRHIZO是一套用于洗根后的专业根系分析系统，可以分析根系长度、直径、面积、体积、根尖记数等，功能强大，操作简单，广泛运用于根系形态和构造研究。 二、原理： WinRHIZO利用高质量图形扫描系统提供高分辨率的彩色图像或黑白图像，该扫描系统匹配专门的双光源照明系统，去除了阴影和不均匀现象的影响，有效的保证了图像的质量。采用非统计学方法测量计算出交叉重叠部分根系长度等参量，WinRHIZO可以读取TIFF，JPEG标准格式的图像。 三、系统组成： ●根系扫描设备：匹配专门的光源、具有永久校正特点、根系 固定装置等 ●根系分析系统：专业版WinRHIZO分析软件 ●电脑 四、测量参数： ●整体参数：根系总长、平均直径、总面积、总体积、根尖、 分叉和交叠计 ●根直径等级分布参数：长度、面积、体积、根尖计数
第4章植物根系和根际的研究方法 第一节植物根系的研究方法 植物根系具有吸收和输送养分和水分、合成植物激素和其他有机物质、储存营养物质以及支撑植物使之固定于土壤中等多方面的作用。它是植物与外界环境之间进行物质交换的主要器官，因此它与植物营养有着密切的关系。但植物根系的研究比地上部分的研究要困难的多。 一、根系研究方法 （一）钉板法：常用。 1、钉板的制作： 小板：50cm×50cm，钉长5cm，钉距5cm。 大板：60cm×100cm，钉长5cm，钉距5cm。 2、取样 3、清洗 4、根系摄影与测定 （二）容器法： 容器种植主要研究根系生理或生态学特性。条件容易控制。 1、容器大小与根系体积适应 2、种植盒的制作： （三）玻璃壁或玻璃管法：用探头观察根系生长情况。 （四）多孔膜法：尼龙纤维多孔膜(孔径0.3m) 二、根系测定方法 （一）根系形态特征及其测定方法 根系形态特征包括根系体积、几何形状、长度、分布深度、根密度、分枝状况、根重、根表面积、根毛数量和根尖数等。根系形态与养分、水分的吸收能力有密切关系。在植物营养研究中，常用的根形态参数主要有根重、根长、根表面积、根密度、根毛和根尖数等。 1、根重 根重对于表征根的总量是一个很好的参数，植物吸收养分的数量和速率通常用单位根重作参量。根重分为根干重和根鲜重两种。根干重对于养分和水分吸收不是个理想的参数，因为老而粗的根所占的重量很大，而吸收养分和水分的能力很小。但当了解植物地下部的生产力时，干重常作为估计的标准。在估算根/冠比（R/S）时，也要用根干重。 测定根干重的方法，一般采用烘干重量法。在105o C条件下烘干10-20h或在60-70o C下烘干20h，称重。
植物根系的分析对植物的生长以及植物根系形态和构造研究都具有非常重要的意义。然而，由于植物根系是在生长在土地下的，土壤又不透明，因此对植物根系形态和构造的研究具有一定的挑战性。 随着根系分析系统的投入及应用，使得根系的分析研究更加准确和方便。根系分析系统其主要是将扫描系统与图形分析软件结合起来，利用图像分析软件对扫描的根系图像进行分析，计算出根系长度、表面积、体积、根尖数量等指标。该仪器是一款不会对根系有任何的破坏的设备，能观察正在生长中的根系状况，让获取的数据更贴近现实。 就以茶树为例，茶树是多年生植物，在年生长周期内，茶树根系变化差异非常大，前人在茶树根系上研究甚少且不系统。早在1957年，某研究者的研究表明，根系紧密联系地上部分的生长发育，因此是植物整体上非常重要的一部分；要想地上部枝和叶生长茂盛并收获更高产量，就必须设法保证根系良好的生长。而如今又有实验者通过试验结果表明栗茶间作栽培模式下有利于茶树根系的生长，间作茶园中茶树根系的生物量、吸收根密度、比根长和根系部分生理特性都显著优于单作茶树根系，单作茶树的根系不如间作茶树根系在土壤中的分深、更均匀。由此可见，通过对茶树根系的分析研究有利于对茶树的栽培研究分析，而根系分析系统的应用，可以更好的帮助研究人员完成这项工作。 根系分析系统是由托普云农研发生产的，据了解，托普云农GXY-A根系分析系统植物根系可分析测量：根总长；根平均直径；根总面积；根总体积；根尖计数；分叉数；交叉数；根直径等级。同时也可不等间距地自定义分段直径，自动
测量各直径段长度、投影面积、表面积、体积等，及其分布参数；根尖段长分布等。浙江托普云农科技股份有限公司，专业研发生产各类农业仪器，是集技术研发、生产销售、实施应用于一体的高新技术企业。更多详情咨询托普云农！
植物根系分析系统_功能特点_使用说明 托普云农植物根系分析系统也叫植物根系图像监测分析系统，该分析系统是植物生理检测工作中很常见的一种农业仪器。据悉，该系统可以自动、快速地分析根系状况，并自动保存分析结果，功能强大，性能优越。按成像方式不同，可分为对原位根系图像的分析仪，以及对洗根后的根系图像分析仪。一般都要求可分析根系的长度、直径、面积、体积、根尖数、分叉数、根交叉数等。专业些的植物根系分析系统，还可分析植物根系的主侧根拓扑形态关系、连接关系，以及根尖部位的色彩变化，以便进行根系形态和构造研究。zui新的植物根系分析系统应具备大批量图像的全自动分析特性，用户可对自动分析结果进行局部的交互编辑修正，以确保数据的科学性。 ?对原位根系图像，因根系与土壤的颜色可能非常接近，故国内外均采用图像中根系目标的自动增强后，以交互引导的方式进行标记分析的。另外，还有引入分形维数，以及直方图投影来进行根系整体生物量分析的。根系分析的zui新技术还可分析根瘤菌体积在根系中的占比，以客观确定根瘤菌体的贡献量。植物根系分析系统对根系图像进行多参数的自动分析，为研究提供可靠准确的数据。植物根系分析系统主要由数码扫描成像系统、分析软件和电脑组成。植物根系分析系统测量项目：根总长；根平均直径；根总面积；根总体积；根尖计数；分叉计数；交叠计数；根直径等级分布参数；可不等间距地自定义分段直径，自动测量各直径段长度、投影面积、表面积、体积等，及其分布参数；根尖段长分布。植物根系分析系统能进行根系的颜色分析，确定出根系存活数量，输出不同颜色根系的直径、长度、投影面积、表面积、体积；能进行根系的拓扑分析，自动确定根的连接数、关系角等，可单独自动分析主根或任意一支侧根的长度和分叉数等；自动分析根系分级伸展的等级分布情
实验3 根系活力的测定（TTC法） 植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。 一、实验目的 熟悉测定根系活力的方法和原理 二、原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。 三、材料、设备仪器及试剂 1、材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 2、仪器设备：分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；电子顶载天平（感量0.1g）；温箱；研钵；三角瓶50ml；. 漏斗；. 量筒100ml；吸量管10ml；. 刻度试管10ml；. 试管架；容量瓶10ml；. 药勺；. 石英砂适量；. 烧杯10ml、1000ml。 3、试剂：乙酸乙酯（分析纯）。次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。.1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。定容到100ml。用时稀释至各需要的浓度。磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。 四、实验步骤 1、TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml 置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 2、称取根尖样品0.5g，放入10ml烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～3h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。 3、把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出甲月替。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。五、结果计算 四氮唑还原强度（mg/g(根鲜重)/h）＝四氮唑还原量（mg）/[根重（g）×时间(h)] 六、实验作业 七实验总结及思考
一、果树研究的最新进展 1. 根据双作物系数法计算的全生育期平均作物系数为0.90-0.91，液流法和水量平衡法的测定值分别为0.88 - 0.91 和0.93 -0.97。除生育初期计算值明显大于实测值外，其余生育期以及全生育期平均作物系数计算值与液流法测定值基本相似；而作物系数计算值在生育初期和生育末期均小于水量平衡法的测定值，在其它生育期则与水量平衡法测定结果相似。虽然利用双作物系数法计算的土壤蒸发系数和基础作物系数与实测值有一定的差异，但计算的蒸散量以及作物系数与实测值基本一致。因此，可以利用双作物系数法估算干旱半干旱地区充分灌溉条件下桃树的蒸散量和作物系数，并据此初步制定桃树灌溉制度。（仝国栋等，2016，双作物系数法计算华北地区桃树蒸散量的可靠性评价）。 2. 由于水分利用效率可在单叶、植株、群体上分别表达，目前大部分研究中的水分利用效率仅仅是体现在单叶瞬时水平上，但从农业灌溉上说，植株水平和群体水平上的长时间跨度（至少3-5年）的研究才更有说服力，同样的，对植株光合作用的相关研究也应注重在群体水平上的表达。设施栽培具有多方面的优越性，但是对水分管理要求高，要想提高品质，保证产量，就需在适宜的生长阶段提供适量的水分。研究应注重设施栽培下节水灌溉技术体系研究，包括灌溉方式，灌溉制度，水肥耦合效应等。针对本文讨论的调控亏缺灌溉和交替根区灌溉这两种制度而言，由于涉及农业气象、土壤条件、植物生理等多种因素，因此在生产实践方面做的研究比较薄弱，今后的研究应考虑到不同气候条件、不同土质、不同品种下适宜的土壤水分调控方法，包括水流入渗特性，含水量下限阈值等，才能做到因地制宜，摸索出适于当地的节水灌溉制度（王晓玥等，2016，两种新型灌溉制度-调控亏缺灌溉（RDI）和交替根区灌溉（APRI）在葡萄上的研究进展）。 3. 二年生母枝不同修剪程度直接影响樱桃树体高度、树冠直径、树干高度、干周，二年生母枝长度和直径净生长量，新梢长度、直径、发枝量和节间长度，二次梢长度、直径、发枝量和节间长度等，修剪越重，树体越矮，反之，树体越高。通过合理的修剪能够调节樱桃树树体的高度和树干的粗度，也能够促进母枝、新梢和二次梢的生长。二年生母枝着生位置直接影响樱桃树体二年生母枝长度和直径净生长量，新梢长度、直径、发枝量和节间长度，二次梢长度、直径、发枝量和节间长度等。不同年生母枝直接影响樱桃树体母枝长度和直径净生长量，新梢的长度、直径、发枝量和节间长度等。一年生母枝着生位置直接影响树体母枝长度和直径净生长量，新梢长度、直径、发枝量和节间长度等（金方伦等，2016，夏季不同修剪方法对樱桃生长发育的影响）。 二、果树的根系研究情况
实验三植物根系活力的测定——TTC法植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，跟的生长情况的活力水平直接影响地上部分的生长和营养状况及产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据 一、原理： 氧化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到加强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。 二、植物材料、仪器设备及试剂配制： （一）植物材料：完全液和铅溶液培养的黄瓜苗根系 （二）仪器设备：电子天平、生化培养箱、分光光度计、剪刀、镊子、10mL离心管、10mL具塞刻度试管、研钵、漏斗、移液管或移液枪、滴管、小烧杯、玻璃棒等。 （三）配置试剂： 1、乙酸乙酯（分析纯） 2、次硫酸钠（Na2S2O4） 3、1%TTC溶液：标准称TTC1.00g，溶于少量去离子水中，定容到100mL，用时稀释。 4、硫酸缓冲液（1/15mol/L，pH7） 5、1mol/L硫酸：量取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边加入盛有500mL去离子水的 烧杯中，冷却后稀释至1000mL 三、实验步骤： 1.TTC标准曲线的制作：取0.4%TTC溶液0.2mL放入10mL量瓶中，加少许Na2S2O4 粉末摇匀后立即产生红色的甲月替，再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、 2.00mL置于10mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 2.称取新鲜根尖0.5g，放入10mL离心管中，加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液5mL，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1h，此后加入1mol/L硫酸1ml，以终止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加新鲜根，其他操作同上）。 3.把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3~4mL和少量石英砂一起在研钵内磨成浆，以提出甲月替。红色提取液移入10mL刻度试管中，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入刻度试管，最后用乙酸乙酯定容至10mL，摇均匀，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。 四、结果计算： 四氮唑还原强度（mg/g（根鲜重）/h）=四氮唑还原量（mg）/[根重（g）×时间（h）] 五、注意事项： 1.要剪取根尖作为测量材料 2.测定的同时要做空白对照 3.TTC容易氧化，要现用现配，避光保存 4.反应结束后，根系要吸干水分后研磨，否则溶液容易浑浊 5.要用少量多次的乙酸乙酯把残渣中的红色苯三甲腙洗涤干净
植物根系活力的测定（甲烯蓝法） 植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验学习测定根系活力的甲烯蓝法。 【原理】根据沙比宁等的理论，植物对溶质的吸收具有表面吸附的特性，并假定被吸附物质在根系表面形成一层均匀的单分子层；当根系对溶质的吸附达到饱和后，根系的活跃部分能将吸附着的物质进一步转移到细胞中去，并继续产生吸附作用。在测定根系活力时常用甲烯蓝作为吸附物质，其被吸附量可以根据吸附前后甲烯蓝浓度的改变算出，甲烯蓝浓度可用比色法测定。已知1mg甲烯蓝形成单分子层时覆盖的面积为1.1m2，据此可算出根系的总吸收面积。从吸附饱和后再吸附的甲烯蓝的量，可算出根系的活跃吸收表面积，作为根系吸收活力的指标。 【材料、仪器与试剂】1.材料：植物根系。2.仪器及用具：分光光度计；移液管；烧杯；比色管。3.试剂：0.01 mg?mL-1甲烯蓝溶液；0.0002 mol?L-1（0.075 mg?mL-1）甲烯蓝溶液。 【方法与步骤】 1. 甲烯蓝标准曲线的制作按表2－1用0.01 mg?mL-1甲烯蓝溶液配制系列标准溶液，于660 nm处测定吸光度，以甲烯蓝浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 表2－1 甲烯蓝系列标准溶液的配制
2. 将待测的植物根系洗净沥干，浸在装有一定量水的量筒中，用排水法测定根系的体积（或用体积计测定）。 3. 将0.0002 mol?L-1的甲烯蓝溶液（每毫升溶液中应含0.075 mg甲烯蓝，为消除溶液配制和比色误差，其含量需要重新进行比色，查标准曲线确定）分别倒入3个小烧杯中，编号，每个烧杯中溶液体积约10倍于根系的体积。准确记下每个烧杯中的溶液量。 4. 将洗净的待测根系，用吸水纸小心吸干，然后依次浸入盛有甲烯蓝溶液的烧杯中，每杯中浸1.5 min，注意每次取出时，都要使根上的甲烯蓝溶液流回到原杯中去。 5. 从3个小烧杯中各吸取甲烯蓝溶液1 mL，用去离子水稀释10倍后，于660 nm处测定吸光度，根据标准曲线，查得各杯浸根后甲烯蓝的浓度。【结果与计算】 （1）总吸收面积（m2）=[（c1—c1’）×v1+（c2—c2’）×v2]×1.1（2）活跃吸收面积（m2）= [（c3—c3’）×v3]×1.1 （3）活跃吸收面积%=根系活跃吸收面积（m2）/根系总吸收面积（m2）×100%（4）比表面积（cm2·cm-3）= 根系总吸收面积（cm2）/根体积（cm3） 式中c：各杯未浸泡根系前的甲烯蓝浓度（mg?mL-1）；
TTC溶液的配制：取3g TTC溶于1L蒸馏水或冷开水中，配制成0 1％的TTC溶液。药液PH应在6 5～7 5，以PH试纸试之(如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)。 【方法】 1 将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水(30℃)浸泡2～6H，使种子充分吸胀。 2 随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3 把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。 4 放入30～35℃的恒温箱内保温30Min。也可在20℃左右的室温下放置40～60Min。 5 保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力 植物根系活力的测定（TTC法） 一、原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式： 生成的三苯甲（TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 （二）试剂 1. 乙酸乙酯（分析纯）。 2. 次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。 3. 1％TTC溶液：准确称取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到100 mL。用时稀释至需要的浓度。 4. 磷酸缓冲液（1/15 mol/L，pH7.0）。 5. 1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000 mL。 6. 0.4 mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g，溶于水中，定容至100 mL即成。 （三）仪器设备 小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1 mg），电子顶载天平（感量0.1 g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。 三、实验步骤
LA-S植物图像分析仪系统（根系分析增强版）
1用途：用于对ROOT-700、CI-600、ET-100等硬件成像的原位根系图像进行交互引导分析，能自动拼接不同位置的2D根系图像；以及对洗净后的根系图像进行多参数、批量化的自动分析。 2系统组成：双光源扫描成像仪及根盘附件、分析软件和电脑（电脑另配）。 3 主要性能指标： 配光学分辨率4800×9600、A4加长的双光源彩色扫描仪。根系透扫幅面为30 cm×20 cm，最小像素尺寸0.0053mm ×0.0026 mm。可分析测量：1)根总长；2)根平均直径；3)根总面积；4)根总体积；5)根尖计数；6)分叉计数；7)交叠计数；8)根直径等级分布参数；9)根尖段长分布，10）可不等间距地自定义分段直径，自动测量各直径段长度、投影面积、表面积、体积等，及其分布参数；11）能进行根系的颜色分析，确定出根系存活数量，输出不同颜色根系的直径、长度、投影面积、表面积、体积。12）能进行根系的拓扑分析，自动确定根的连接数、关系角等，还能单独地自动分析主根或任意一支侧根的长度和分叉数等，可单独显示标记根系的任意直径段相应各参数（分档数、档直径范围任意可改，可不等间距地自定义），并能进行根的分叉裁剪、合并、连接等修正，修正操作能回退，以快速获得100%正确的结果。13）能用盒维数法自动测根系分形维数。14）大批量的全自动根系分析，对各分析结果图可编辑修正。15）可对原位根系图像进行交互引导分析、锁定编辑根系路径、修正根系的长短、粗细、位置等，具有鼠标编辑点的跟随放大镜，具有根系自动拼图功能。各分析图像、分布图、结果数据可保存，分析结果输出至Excel表，可输出分析标记图。 总价为：67000 +现场服务费（视按路途远近而定） 推荐选配电脑：联想一体机B325R2（双核CPU /2G内存/512M独立显卡/500G硬盘/ 20”彩显/DVD-RM /无线网卡）。
氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定根系活力 摘要：氯化三苯基四氮唑是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于 水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲,TTC被广泛地 用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标. 【原理】 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲（TTF）,如下式： 生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标. 【仪器与用具】 分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；恒温箱1台；研钵1套；100ml三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml 1支、0.5ml 1支；20ml刻度试管；10ml容量瓶；小培养皿；试管架,药匙；石英砂适量. 【试剂】 1、乙酸乙酯； 2、连二亚硫酸钠（Na2S2O4,为强还原剂,俗称保险粉）； 3、1%TTC溶液：准确称取TTC 1.0g,溶于少量蒸馏水中,定容至100ml； 4、0.4%TTC溶液：准确称取TTC 0.4g,溶于少量蒸馏水中,定容至100ml； 5、磷酸缓冲液（1/15mol/L,pH7.0）； 6、1mol/L硫酸：用量筒量取比重1.84的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml； 7、0.4mol/L琥珀酸钠：称取琥珀酸钠（含6个结晶水）10.81g,溶于蒸馏水中,定容至100ml. 【方法】 1、定性测定 （1）配置反应液把1%TTC溶液,0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合. （2）把根仔细洗净,把地上部分从茎基切除,将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1h,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红
根际研究方法 （一）根系“表观自由空间”中养分测定方法 根系“表观自由空间（AFC）”，就是根系内部的细胞间隙和细胞壁微纤丝中的空隙在植物体内相互连通行程运输通道，容许水分和溶液的自由移动。 根系“表观自由空间”值得测定有一些不同的方法，如用非电解质——甘露糖醇测定不同植物的AFC体积，应用同位素标记法测定养分离子在AFC中的转移，等等。70年代以来产生了一种比较简便的化学方法，其原理是应用低温蒸馏水（4O C）降低根系活力,使进入AFS中养分离子只能向外扩散，以此了解AFS的养分状况。 基本测定步骤将待测水培根取出，用蒸馏水冲洗，重复3次，每次10S。用滤纸吸取多余的水分，称1~10g鲜根，置于250ml烧杯中备用。 若为土培的根系，小心取出后置于一块60cm×60cm的尼龙薄膜上，用手工出去容易抖落下来的土壤，这部分可作为原土体的土壤。然后将土根移至另一薄膜上抖动多次，分离出松散附着于根表面土壤，这部分可作为距根1~4mm的根际土。仍然粘附于根表的极为紧密附着的根际土，约距根0~2mm，一般不易从跟表面分离出来，一般采用蒸馏水浸洗的方法收集。洗净根系后，吸干多余的水分，称1~10g鲜根，置于250ml烧杯中。所收集的不同部分的土壤可用于不同的研究目的。 将备用的已知鲜重的根系按1:20的比例加入预先准备好的4O C的蒸馏水中，用玻璃棒轻轻搅拌1~2min，放入冰箱中浸提2h后取出，过滤，对滤液进行所需研究的养分测定。 测定要点样品的处理要求尽量在短时间内完成，以保持原有的养分状况。在土培条件下除去根系上附着的土壤时，主要尽量不要损伤根系，以免细胞内养分由破口处进入AFS 中，使测定结果偏高。 （二）根际土壤的冰冻切片法 冰冻切片法最早是1964年由Brown等建立并应用与土壤养分扩散的研究。主要分两步，首先是根际微环境模拟培育方法，可采用根垫法、集束根——土地接触法、隔层法等，然后将土块冰冻切片，供测试用。 1. 集束根——土地接触法集束根——土地接触法是一种根际微环境的模拟研究手段，其基本原理是利用一种允许养分和水分自由通过而根系不能穿过的隔膜使根系和土壤之间分离开来，分别逐层切取土壤薄片和进行分析，借此了解不同根表面不同距离土壤的物理化学性状。首先，要进行集束平面根的培育，一般地可采用有机玻璃的漏斗形框架（4×13×0.3cm3），在漏斗上放入尼龙网，密集地播种30颗露白的种子（禾谷类植物，如水稻），连同漏斗框架放入溶液中培育。根系通过漏斗颈往下生长，一个月后形成定型的集束平面根。其次，要进行土块的制备。将供试土样磨碎后过100目筛。城区一定量体积为2×4×4cm3的长方形有机玻璃盒内，盒的两端开口，以便连接根系和外界。将制备好的两块土块在某一根段处对称地紧贴于平面根的两侧（根土界面为2×4cm2），中间隔一层能容养分和水分自由通过，而根系无法穿透的隔膜（可用尼龙网或孔径为1.2μm的混合和纤维素脂）。然后放入盆钵中，装进石英砂或土壤，在温室内培育。 2．冰冻法当植株在盆钵中生长了一段时间后（一般低于20天），取出有机玻璃盒和土块，随即置氮液中速冻。将土块在切片机上切成1mm厚的薄片供化学测试。 优点：比较严格地解决了不同层次的微区土壤的区分、定量地研究各种养分、水分在根——土界面上的动态及迁移规律，并可以区分有效养分以及利用同位素方法难以测定的微量养分变化。 主要限制：只能进行短期试验，一般只在2天内。实验技巧要求很高，且每次技能得到有限的土壤样品量。
实验14 植物根系活力的测定 植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。本实验学习测定根系吸收面积和活力的方法。 一、根系总吸收面积和活跃吸收面积的测定 【原理】 根据植物矿质吸收的理论，植物对溶质的最初吸收具有吸附的特性，并假定这时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，因此可以根据根系对某种物质的吸附量来测定根的吸收面积。常用甲烯蓝作为被吸附物质，它的被吸附量可以根据供试液浓度的变化用比色法准确地测出。已知1mg甲烯蓝成单分子层时所占面积为1.1m2，据此即可求出根系的总吸收面积。当根系在甲烯蓝溶液中已达到吸附饱和而仍留在溶液中时，根系的活跃部分能把原来吸附的物质吸收到细胞中去，因而继续吸附甲烯蓝。从后一吸附量求出活跃吸收面积，可作为根系活力指标。 【仪器与用具】 分光光度计1台；100ml烧杯3只；50或100ml量筒1个（依根系大小而定）；吸量管1ml 1支，10ml 1支；试管（15×150mm）10支；容量瓶1000ml 1个，100ml 1个；吸水纸适量；试管架1个。 【试剂】 0.0002mol/L甲烯蓝溶液：精确称取74.8mg甲烯蓝（C16H18N3SCl·3H2O），加水溶解，定容至1000ml。此溶液每ml含甲烯蓝0.0748mg。 0.010mg/ml的甲烯蓝溶液：用刻度吸管吸取0.0002mol/L甲烯蓝13.37ml定容至100ml，摇匀即成。 【方法】 1．植物材料的准备本实验最好采用水培或砂培植物，以获得完整而无损伤的根系。玉米根系发达，是较好的材料。如无水培、砂培试材，也可用盆栽植物，用水将盆土仔细冲净后使用。田间栽培的材料因不可能无损地挖出全部根系，最好避免在正式试验中使用。 2．甲烯蓝溶液标准曲线的制作取试管7支编号，按表14-1次序加入各溶液，即成甲烯蓝系列标准液。 表14-1 各试剂加入顺序 试管号 1 2 3 4 5 6 7 0.01mg/ml甲烯蓝溶液(ml) 蒸馏水(ml) 甲烯蓝浓度mg/ml 0 10 1 9 0.001 2 8 0.002 4 6 0.004 6 4 0.006 8 2 0.008 10 0.01 以第1管（水）为参比在分光光度计下比色，取波长660nm，读出光密度，以甲烯蓝浓度为横坐标，光密度为纵坐标绘成标准曲线。 3．取待测植物根系用滤纸将水吸干再用排水法在量杯或量筒中测定其根系体积。把
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 1、系统组成 背光成像拍摄仪套件、根盘、尺寸标定板、分析软件和电脑（电脑需另配）。 2、用途 用于对洗净后的0.2mm直径以上根系图像进行多参数、批量化的自动分析。其成像速度要比扫描款的快20倍。 3、主要性能指标 配自动对焦的大景深3264x2448像素彩色拍摄仪，具有微距拍摄特性。有效分析幅面400mm×256mm。特别适合快速自动分析测量0.2mm直径以上根系： 1)根总长。 2)根平均直径。
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 3)根总面积。 4)根总体积。 5)根尖计数。 6)分叉计数。 7)交叠计数。 8)根直径等级分布参数。 9)根尖段长分布。 10）可不等间距地自定义分段直径，自动测量各直径段长度、投影面积、表面积、体积等，及其分布参数。 11）能进行根系的颜色分析，确定出根系存活数量，输出不同颜色根系的直径、 长度、投影面积、表面积、体积。 12）能进行根系的拓扑分析，自动确定根的连接数、关系角等，还能单独地自动 分析主根或任意一支侧根的长度和分叉数等，可单独显示标记根系的任意直径段相应 各参数（分档数、档直径范围任意可改，可不等间距地自定义），并能进行根的分叉 裁剪、合并、连接等修正，修正操作能回退，以快速获得100%正确的结果。 13）能用盒维数法自动测根系分形维数。可分析根瘤菌体积在根系中的占比，以 客观确定根瘤菌体贡献量。 14）大批量的全自动根系分析，对各分析结果图可编辑修正。
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司15）能自动测量油菜、大豆等果荚的果柄、果身、果喙部分的粗细、长、弧长、 弦长、弦高等参数。能自动测量各种粒的芒长。能测各类针叶的叶面积、长度、粗细。 16）能做根系生物量分布的大批量自动化估算。 17）各分析图像、分布图、结果数据可保存，分析结果输出至Excel表，可输出 分析标记图。 推荐选配：品牌一体机电脑（酷睿双核CPU /4G内存/1G独立显卡/500G硬盘/ 19.5”彩显 /无线网卡）。
实验植物根系活力的测定 植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。本实验学习测定根系吸收面积和活力的方法。 一、根系总吸收面积和活跃吸收面积的测定 【原理】 根据植物矿质吸收的理论，植物对溶质的最初吸收具有吸附的特性，并假定这时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，因此可以根据根系对某种物质的吸附量来测定根的吸收面积。常用甲烯蓝作为被吸附物质，它的被吸附量可以根据供试液浓度的变化用比色法准确地测出。已知1mg甲烯蓝成单分子层时所占面积为1.1m2，据此即可求出根系的总吸收面积。当根系在甲烯蓝溶液中已达到吸附饱和而仍留在溶液中时，根系的活跃部分能把原来吸附的物质吸收到细胞中去，因而继续吸附甲烯蓝。从后一吸附量求出活跃吸收面积，可作为根系活力指标。 【仪器与用具】 分光光度计1台；100ml烧杯3只；50或100ml量筒1个（依根系大小而定）；吸量管1ml 1支，10ml 1支；试管（15×150mm）10支；容量瓶1000ml 1个，100ml 1个；吸水纸适量；试管架1个。 【试剂】 0.0002mol/L甲烯蓝溶液：精确称取74.8mg甲烯蓝（C16H18N3SCl·3H2O），加水溶解，定容至1000ml。此溶液每ml含甲烯蓝0.0748mg。 0.010mg/ml的甲烯蓝溶液：用刻度吸管吸取0.0002mol/L甲烯蓝13.37ml定容至100ml，摇匀即成。 【方法】 1．植物材料的准备本实验最好采用水培或砂培植物，以获得完整而无损伤的根系。玉米根系发达，是较好的材料。如无水培、砂培试材，也可用盆栽植物，用水将盆土仔细冲净后使用。田间栽培的材料因不可能无损地挖出全部根系，最好避免在正式试验中使用。 2．甲烯蓝溶液标准曲线的制作取试管7支编号，按表14-1次序加入各溶液，即成甲烯蓝系列标准液。 表14-1 各试剂加入顺序 试管号 1 2 3 4 5 6 7 0.01mg/ml甲烯蓝溶液(ml) 蒸馏水(ml) 甲烯蓝浓度mg/ml 0 10 1 9 0.001 2 8 0.002 4 6 0.004 6 4 0.006 8 2 0.008 10 0.01 以第1管（水）为参比在分光光度计下比色，取波长660nm，读出光密度，以甲烯蓝浓度为横坐标，光密度为纵坐标绘成标准曲线。 3．取待测植物根系用滤纸将水吸干再用排水法在量杯或量筒中测定其根系体积。把