仪器分析重点提要
GC
1、GC仪和HPLC仪在结构原理上有何异同？
答：同：气源→→色谱柱→检测器→记录仪
进样
异：（1）气源用气泵或贮气瓶供气；（2）要让被测样品组分充分气化，相关通路中应具备高温（100~400℃）环境。
2、能够在GC上检测的化合物，应具哪些主要的理化特性？
答：具有易挥发性、高温不分解、不能与载气发生反应。
3、GC常用载气有哪些？
答：N2、H2、Ne
4、固定相、吸附剂、担体、固定液有何异同？常见的气-固吸附色谱有哪些？常见的担体、固定液有哪些？
答：一、固定相主要分二大类：（1）固体固定相（2）液体固定相
气-固（吸附）色谱固定相吸附剂分类：
吸附剂（1）非极性吸附剂：如活性炭
（2）极性吸附剂：如硅胶、氧化铝、分子筛等
气-液色谱（分配色谱）固定相（1）固定液（2）惰性担体
担体：又称为载体，是一种化学惰性的多孔固体颗粒，作用是提供惰性表面，支持固定液，使固定液以薄膜状态分布在其表面。
二、常见的气-固吸附色谱
（1）非极性吸附剂：如活性炭
（2）极性吸附剂：如硅胶（较强极性）、活性氧化铝（弱极性）、分子筛等
三、常见的担体有：（1）硅藻土型（红色硅藻土白色硅藻土）
（2）非硅藻土型
常见固定液
第一类：非极性固定液
多数是饱和烷烃，如：异角鲨烷。固定液和组分分子间的作用力是色散力，主要用于分离烃类和非极性化合物
第二类：弱极性固定液
主要是含甲基的硅氧烷类。固定液和组分分子间的作用力为色散力。
第三类：中等极性固定液
种类多、应用广，如硅氧烷（OV－17）等
5、GC检测器可分为哪几种类型（英文缩写），其工作原理是什么？哪些属于浓度型检测器，哪些属于质量型检测器？
答：（1）热导池检测器（TCD）
检测原理：基于不同的物质有不同的导热系数
（2）（氢）火焰离子化检测器（FID）
原理：根据气体的导电率与该气体中所含带电离子的浓度呈正比这一事实而设计的。
一般情况下，组分蒸汽不导电，但在能源作用下，组分蒸汽可被电离生成带电离子而导电。
（3）电子捕获检测器（ECD）
原理：第一步:形成约10-8A的基流
N2 +β→ N2+ + e-
第二步：电子捕获
AB + e- → AB- + E
AB + e- → A· + B- + E
第三步：生成中性化合物
AB- + N2+ → AB + N2
A- 或 B- + N2+ →中性分子→由载气带出
（4）火焰光度检测器（FPD）
原理：利用在一定外界条件下（即在富氢条件下燃烧）促使一些物质产生化学发光，通过波长选择、光信号接收，经放大把物质及其含量和特征的信号联系起来。按输出信号与组分含量关系：（1）浓度型检测器(热导池检测器、电子捕获检测器)
（2）质量型检测器(（氢）火焰离子化检测器、火焰光度检测器) 6、各种检测器一般用什么载气？氢焰检测器、火焰光度检测器涉及到哪几种气体？
答：热导池检测器（TCD：用N2作载气，灵敏度较低，He、H2，灵敏度高（氢）火焰离子化检测器（FID）：选用N2作载气
电子捕获检测器（ECD）：载气一般为N2或Ar
火焰光度检测器（FPD）：N2
氢焰检测器涉及：H2、O2、N2
火焰光度检测器涉及：H2、O2、N2
7、各种检测器在性能上各有什么特点？各有什么缺点？各有什么侧重应用？
答：（1）热导池检测器（TCD）
由于结构简单，性能稳定，通用性好，而且线性范围宽，价格便宜，因此是应用最广，最成熟的一种检测器。其主要缺点是灵敏度较低。
（2）（氢）火焰离子化检测器（FID）
特点：灵敏度很高，比热导检测器的灵敏度高约103倍；能检测大多数含碳有机化合物；死体积小，响应速度快，线性范围也宽；结构不复杂，操作简单，是目前应用最广泛的色谱检测器之一
缺点：不能检测永久性气体；燃烧会破坏离子原形，无法回收
（3）电子捕获检测器（ECD）
特点：γ电子俘获检测器是选择性很强的、浓度型检测器
γ具有灵敏度高、选择性好
γ对电负性物质特别敏感
γ分析痕量电负性有机物最有效的检测器
γ广泛应用于农药残留量、大气及水质污染分析，以及生物化学、医学、药物学和环境监测
缺点：是线性范围窄，只有103左右，且响应易受操作条件的影响，重现性较差（4）火焰光度检测器（FPD）
它是一种对含磷、硫有机化合物具有高选择性和高灵敏度的质量型检测器，检出限可达10-12g（对P）或10-11g·（对S）
用于大气中痕量硫化物以及农副产品，水中的毫微克级有机磷和有机硫农药残留量的测定。
8、GC试验条件涉及哪些因素？
答：一、分离效果指标
1、柱效能
2、选择性
3、总分离效能指标――分离度（又称为分辨率）
4、基本分离方程（n 、α、k 、R 之间的关系）
二、色谱分离操作条件的选择
1、载气及流速
2、固定液的配比（又称为液担比）： 影响CLu
3、柱温的选择
4、气化温度的选择
5、色谱柱长和内径的选择
6、进样时间和进样量的选择
7、检测室温度
8、样品的预处理：分解法和衍生法
9、载气的流速一般为多少？柱温的选择原则？
答：一、流速大小：若需用流速大的载气可用分子量小，扩散系数大的 H2或He ，减小气相传质阻力；若需载气流速小的载气，则可用分子量大，扩散系数小的N2或Ar 为载气，减小分子扩散的影响
对于填充柱，N2的最佳实用线速为
10～20cm/s ，
H2的最佳实用线速为15～20cm/s
二、柱温的选择
1. 在能保证R 的前提下尽量使用接近或略低于组分的平均沸点的温度。
2. 绝不能高于固定液使用温度。
3. 宽沸程样品应采用程序升温
10、固定液的选择及用量，组分的流出先后（要会举一反三）。
答：固定液用量及其配比的选择：
①固定液用量太少，易存在活性中心，致使峰形拖尾；且会引起柱容量下降，进样量减少 ②常采用固定液和载体总重量之比来表示，简称液载比，在填充柱色谱中，液担比一般为 5％～25％。
固定液选择及其组分流出先后关系：
（i ）分离非极性物质：一般选用非极性固定液
? 组分和固定液分子间的作用力主要是色散力
? 试样中各组分按沸点由低到高的顺序出峰
? 常用的有：角鲨烷（异三十烷）、十六烷、硅
油等
（ii ）分离中等极性物质：一般选用中等极性固
定液
? 组分和固定液分子间作用力主要是色散力和
诱导力。
? 试样中各组分按沸点由低到高的顺序出峰
（iii ）分离极性物质：选用极性固定液
? 组分和固定液分子间的作用力主要是定向
力
? 待测试样中各组分按极性由小到大的顺序出峰
例：用极性固定液聚乙二醇(PEG)-600，分析乙醛、丙烯醛气体混合物的情形就是这样，
C
B u op
乙醛的极性比丙烯醛小，故先出峰
11、如何应用GC 法进行化合物的定性鉴别和定量测定？
答：详见Word 版资料（第四章中定性鉴别与定量测定）
12、掌握内标法计算方法。
2、答：内标法：选择适宜的物质作为待测组分的参比物，定量加到样品中去，根据待测组分和参比物在检测器上的响应值之比和参比物加入量进行定量分析的方法。
关键：选择合适的内标物
内标物的选择原则：
A 、内标物必须是原样品中不存在的物质，其性质尽量与待测组分相近(同系物、异构体)
B 、内标物不能和被测组分起化学反应，要能完全溶于被测样品中；
C 、内标物的峰尽可能接近待测组分的峰，或位于几个待测组分的中间，但必须和样品中的所有峰完全分离；
D 、内标物的加入量应和待测组分相近。
待测组分(i)的量m i 为： 设样品的总量为m ，则待测组分i 的质量分数为
内标法的特点：★ 无归一化法的限制，即只要被测组分能出峰，不和其他峰重叠，不管其他组分是否出峰或是否重叠，都可以用内标法进行定量分析
★定量准确，受操作条件影响较小
★ 可部分补偿待测组分在样品前处理时的损失
★ 若加入几种内标物，还可提高定量分析的精度
★ 内标物的选择比较困难，同时内标物称量要求准确，操作麻烦
·内标标准曲线法 从内标公式可知
如果每次称取同样量(m )的试样，每次加入相等量(m s )的内标物，则上式中m ，m s ，f i ’均为常数，计算公式可写为： 例:取二甲苯生产母液1500mg ，母液中合有乙苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯及溶剂和少量苯甲酸，其中苯甲酸不能出峰。以150mg 壬烷作内标物，测得有关数据如下： 物质 壬烷 乙苯 对二甲苯 间二甲苯 邻二甲苯
Ai/cm2 98 70 95 120 80 f`m 1.02 0.97 1.00 0.96 0.98 求:各组分的含量。
解：母液中苯甲酸不能出峰，所以只能用内标法计算。由各组分的绝对校正因子计算得壬烷、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯的相对校正因子分别为1.00，0.95，0.98，0.94，0.96。 根据内标法计算公式，对于乙苯有：
S S S i i i A f m A f m ?=?=S
i i S S i i S i A A f A f A f m m ?'=??=S S i i i m A A f m ??'=%100%100????'=?=m
A m A f m m w S S i i i i %%100100????'=?=m A m A f m m w S S i i S i i 常数?=?=S i S i i A A m m w %100%79.6%1001500981507095.0%100(=????=?=m m w i 乙苯）
同样可以计算出对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯的质量分数分别为9.5%，11.5%，7.84%。
HPLC
1、 按功能结构高效液相色谱仪可分为那几个大部分？
答：分为五个部分：梯度淋洗系统、高压输液泵与流量控制系统、进样系统、分离住与检测系统。
2、 根据分离原理，高效液相色谱仪的检测器分为哪几大类？哪些是通用检测器，哪些是选择性检测器？哪些是浓度型检测器，哪些是质量型检测器？
答：紫外检测器、荧光检测器、电导检测器、示差检测器（选择性检测器、浓度型检测器） 示差检测器、蒸发光散射检测器（ELSD ）（通用型检测器。质量型检测器）
3、 各种检测器的检测原理？流速对各种检测器的检测信号强度和峰面积有何影响？ 答：（1）紫外检测器（选择性检测器）
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光或可见光的选择性吸收。
吸光度与试样组分浓度之间的定量关系符合朗伯-比尔定量。
（2）荧光检测器（选择性检测器）
原理：化合物受到紫外光的照射后，吸收辐射能，发出比吸收波长长的特征辐射，这种特征辐射光线就是荧光,测定发出的荧光能量即可定量
（3）电导检测器（选择性检测器）
原理：根据某些物质在溶液中可分生电离从而引起溶液电导率的变化的特性进行检测。
（4）示差检测器（通用型检测器）
原理：示差折光检测器是通过连续监测参比池和测量池中溶液的折光指数之差来测定样品浓度
浓度型响应信号与流速无关，峰面积与流速有关（流速越快，峰宽越小，峰面积越小） 响应信号与流动相中组分的浓度有关的检测器称为浓度型检测器。
响应信号与耽误时间内进入检测器中组分的量的多少有关的检测器称为质量型检测器。 质量型检测器的响应值与流量成正比、峰面积与流速无关。
输出信号：HPLC 图，以时间为横坐标，以信号强度mv 为纵坐标。
4、 检测器的性能指标有哪些？理解各种指标的含义，比较检出限D 、最小检测量Q 0异同？ 答：衡量检测器性能的主要指标: 灵敏度、检测限和检测器的线性范围
（1）灵敏度：单位浓度或质量的组分通过检测器时所产生的响应信号R 的大小叫灵敏度。
（2）检测限D 定义： 某组分的峰高(mV)恰为噪音的2倍（或3倍）时，单位体积(或时间)引入检测器的试样量。 （3）最低检出量
最小检测量Q0表示检测器能产生和噪音相鉴别的信号时，进入色谱柱的最小物质量（或浓度） 对于质量型检测器：
对于浓度型检测器：
5、 什么叫吸附平衡常数，吸附平衡常数与组分流出先后的关系？理论上组分从色谱柱中流
Q R S ??=D R Q R S N 3=??=D Y Q ??=2/10065.1D q Y Q VF ???=2/10065.1m
s c c K ==组分在流动相中的浓度组分在固定相中的浓度
出曲线呈什么形状？
答：吸附平衡常数：
①一定温度下，各组分在两相间的 K 不同 ，在色谱柱中的移动速度不同，使得原来K 仅有微小差异的各组分在经过反复多次的分配后，产生很大的分离效果
② K 小的组分，较早流出色谱柱
③ K 大的组分，较晚流出色谱柱
理论上组分从色谱柱中流出曲线呈正态分布。
6、 根据分离原理，色谱可分为那几大类？理解其分离原理。
答：1、吸附色谱法（ adsorption chromatography ）
根据吸附剂表面对不同组分物理吸附能力的强弱差异进行分离的方法。
2、分配色谱法 （partition chromatography ）
根据不同组分在固定相中的溶解能力和在两相间分配系数的差异进行分离的方法。
3、离子交换色谱法（ion exchange chromatography ）
根据不同组分离子对固定相亲和力的差异进行分离的方法。
4、排阻色谱法（ size exclusion chromatography ） 又称凝胶色谱法 （gel chromatography ）
根据不同组分的分子体积大小的差异进行分离的方法。其中：以水溶液作流动相的称为凝胶过滤色谱法 ；以有机溶剂作流动相的称为凝胶渗透色谱法
5、亲和色谱法 (affinity chromatography)
利用不同组分与固定相共价键合的高专属反应进行分离的方法
7、 什么叫固定相，什么叫流动相，什么叫正相色谱，什么叫反相色谱？
答：试样混合物在色谱仪中的分离是在色谱柱中的两相之间进行的，分离过程也就是随着试样中各组分在色谱分离柱中的运动，组分在两相间不断重复进行着分配过程，其中的一相固定不变，称为固定相（可以是无机固体吸附剂或有机化合物液膜），另一相是携带混合物流过此固定相的流体（可以是气体、液体、超临界流体），称为流动相。
（1） 正相色谱——固定液极性 > 流动相极性
极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱,适于分离极性组分
（2） 反相色谱——固定液极性 < 流动相极性
极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱,适于分离非极性组分
8、 常见的所谓C18柱是什么意思？以C18柱的HPLC 属于正相色谱还是反相色谱？是吸附色谱还是分配色谱？固定液是什么？固定液的支持载体是什么？固定液与支持载体是怎么连接的？
答：C18柱，即十八烷基键合硅胶柱又称ODS 柱，是最常见的反相柱。
以C18柱的HPLC 属于反相色谱，是分配色谱。
固定液是十八烷基化合物，支持载体是硅胶。
将十八烷基通过化学反应键合到硅胶表面的硅羟基上。
9、 离子交换色谱中，固定相上的离子交换功能基团有哪些？了解交换能力的大小。 答： 阳离子交换树脂 (1) 强酸性 (2) 弱酸性 阴离子交换树脂 (1) 强碱性 (2)
弱碱性 10、准确理解基本术语，基线、噪音、保留值、保留体积、相对保留时间、相对保留体积、 COOH -PO 3H N (CH 3)3X N C 2H 4OH
(CH 3)2X -SO 3H
NR 2NHR NH 2
死时间、死体积、峰高、峰宽、半峰宽、分离度、拖尾因子、理论板数、峰面积。 答：详见书本P68
11、为什么半峰宽不等于峰宽/2，分离度，理论板数的计算。
答：半(高)峰宽：峰高一半处的色谱峰宽度， 分离度：相临两组分间峰顶间距离是峰底宽平均值的几倍（衡量色谱分离条件优劣的参数）
12、按极性大小顺序，写出4~5种常见的HPLC 流动相用溶剂？
答： 常用溶剂的极性顺序为： 水（极性最大）、甲酰胺、乙睛、甲醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃、醋酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、环己烷、己烷、…
13、当流动相中含有水时，其比例不得大于多少？
答：HPLC 中，流动相中含水比例不得大于95%，即有机溶剂的比例不得低于5%.
14、用C18柱的HPLC 中，甲醇：水（2:8）、甲醇：水（4:6）、甲醇：水（6:4）三种流动相，哪种洗脱能力强，哪种洗脱能力弱？在同一C18色谱柱上，对于同一的组分来说，用哪种流动相时组分的保留时间短，哪种流动相时组分的保留时间长？
答：C18柱，反相色谱柱中，流动相的极性越小，组分流出速度越快，反之越慢。
甲醇：水（6:4）（组分保留时间短）的洗脱能力强；甲醇：水（2:8）组分保留时间长）的洗脱能力弱
15、在同一C18色谱柱上使用同一流动相，下列几种化合物，哪个保留时间长、哪个保留时间短？哪个先出峰、哪个后峰？
苯甲酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醇、甲苯、对羟基甲苯。
答：在反相色谱中，极性大的组分先流出，极性小的组分后流出；
极性大小：对羟基苯甲酸>对羟基苯甲醇>对羟基甲苯>苯甲酸>苯甲酸>苯甲醇>甲苯 保留时间逐渐增加，对羟基苯甲酸保留时间最短，先出峰。
16、用硅胶柱的HPLC 中，二氯甲烷：甲醇（2:8）、二氯甲烷：甲醇（4:6）、二氯甲烷：甲醇（6:4）三种流动相，哪种洗脱能力强、哪种洗脱能力弱？在同一硅胶柱上，对于同一组分来说，用哪种流动相时组分的保留时间短，用哪种流动相时组分的保留时间长？ 答：硅胶色谱柱 正相色谱柱中流动相的极性越大，组分流出速度越快，反之，越慢。 二氯甲烷：甲醇（2:8）极性大（保留时间短），洗脱能力强；二氯甲烷：甲醇（6:4）极性小（保留时间长），洗脱能力弱；
17在同一硅胶柱色谱上使用同一流动相，下列几种成分化合物，哪个保留时间长、哪个保留时间短？哪个先出峰，哪个后出峰？
苯甲酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醇、甲苯、对羟基甲苯。
答：正相色谱中，极性小的组分先流出、极性大的组分后流出。
甲苯先流出、保留时间短；对羟基苯甲醇后流出，保留时间长；
18、如何应用HPLC 法进行药物成分的定性鉴别和定量测定？
答：一、定性鉴别
HPLC 中用保留值定性的方法 保留值定性的主要方法：
★直接与已知标准物对照 ★某一未知峰和已知标准物的保留值完全相 同-----可能是
★改变色谱柱或流动相，保留时间仍完全相同--------基本是 σ
σ354.22ln 222/1==W 0.00
0.05
0.10
0.15
0.200.250.300.350.400.000.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.507.00
AU
Minutes
Uracil Ethylparaben
Propylparaben
j v e E E E hv E E E ?+?+?===-=?光子ε12利用文献的数据进行对比和定性分析
注意HPLC 的柱填充技术的复杂性，定性受到限
制
最简单的方法：标准添加法
前提：要有标准物
判断的标准：加入标准样后，使未知样色谱峰增
高，改变色谱条件，未知峰仍能增高
二、定量分析方法：内标法、外标法、标准加入法（详
见Word 版资料P5）
19、常见HPLC 柱的规格尺寸，流动相的常见流速？
答：内径2~6mm,常见的有：4、6mm ； 长15~50cm ，常见的有15、20、25cm 常见的流速：60ml/min
UV 可见吸收光谱法
1、光谱的分区，紫外、可见、红外光的波长范围？
答：通常所说的紫外－可见吸收光谱是指２００～８００ｎｍ（近紫外、可见光区分子吸收光谱）。
紫外－可见光区（P250）：１００～２００ｎｍ 远紫外区；２００～４００ｎｍ 近紫外区； ４００～８００ｎｍ 可见光区；
红外光：0.75~2.5μm 近红外 ；2.5~50μm 中红外 ；50~1000μm 远红外；
2、分子内部的运动形式有哪些？各种运动形式能级及其能级的大小顺序？
答：分子的内部运动可分为：分子内价电子（外层电子）运动、分子内原子的振动、分子饶其重心的转动，分别对应能级：电子能级、分子振动能级、分子转动能级。
分子转动能级 ≦ 分子振动能级 ≦ 电子能级
3、可见-紫外吸收光谱带较宽的原因？
答：
λ=c/ν
频率越大，波长越短，能量越强；
频率越小，波长越长，能量越弱；
电磁波的能量与频率成正比、与波长成反比。
分子的“电子光谱” 是由许多线光谱聚集在一起的带光谱组成的谱带，称为“带状光谱”。 紫外光谱曲线上的吸收峰都是宽峰，这是由于电子跃迁与振转次能级的变化相互叠加所致。
4、电子能级跃迁可同时伴有哪些能级的跃迁，基团振动能级的跃迁可同时伴有哪些的跃迁？
答：电子能级跃迁可同时伴有振动能级、转动能级
基团振动能级的跃迁可同时伴有转动能级
5、分子轨道的能量高低顺序？
答：成键轨道与反键轨道：σ<π 6、各类分子轨道上的电子能级跃迁的难易？ 答：σ→σ* > n→σ* ≥π→π* > n→π* 7、有机化合物的可见紫外吸收，主要依赖于哪些轨道上的电子的跃迁？ 答：有机化合物结构与紫外信息的关系 （1）200-400nm 无吸收峰。饱和化合物，单烯。 （2）270-350 nm有吸收峰（ε=10-100）醛酮n→π* 跃迁产生的R带。 （3）250-300 nm 有中等强度的吸收峰（ε=200-2000），芳环的特征吸收（具有精细解构的B带）。 （4）200-250 nm有强吸收峰（ε≥104），表明含有一个共轭体系（K）带。 ?β,α不饱和醛酮：K带~230 nm ，R 带~310-330 nm 260nm,300 nm,330 nm有强吸收峰，3,4,5个双键的共轭体系。 8、红外、可见-紫外光线照射物质分子各可引起分子哪些能级跃迁？ 答： 9、什么叫生色团？什么叫助色团？写出常见多的生色团、助色团及它们的电子跃迁类型。答：（1）生色团（发色团）：具有π轨道的不饱和官能团称为发色团 有机化合物：具有不饱和键和未成对电子的基团 具n 电子和π电子的基团 产生n→π*跃迁和π→π*跃迁 跃迁E较低 ?例：C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N— 注：当出现几个发色团共轭，则几个发色团所产生的吸收带将消失，代之出现新的共轭吸收带，其波长将比单个发色团的吸收波长长，强度也增强 （2）助色团：本身无紫外吸收，但可以使生色团吸收峰加强同时使吸收峰长移的基团 有机物：连有杂原子的基团 例：—OH，—OR，—NH2 ，—NR2—，—X 当这些基团单独存在时一般不吸收紫外-可见区的光辐射。但当它们与具有轨道的生色基团相结合时，将使生色团的吸收波长长移（红移），且使吸收强度增强（助色团至少要有一对与生色团π电子作用的孤对电子） 10、什么叫红移？什么叫紫移？ 答：由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基）或采用不同溶剂后吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移） 吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移） 11、什么叫K吸收带？K吸收带有什么特点？（P256） 答：K带：由共轭双键的π→π*跃迁产生 ?(—CH＝CH—)n —CH＝C—CO— ?λmax >200nm，εmax>104 ?共轭体系增长，λmax↑→红移，εmax↑ ?溶剂极性↑， 对于—(—CH＝CH—)n—λmax不变 对于—CH＝C—CO—λmax↑→红移 12、什么叫R吸收带？R吸收带有什么特点？ 答：R带：由含杂原子的不饱和基团的n →π*跃迁产生 ?C＝O；C＝N；—N＝N— ?E小，λmax250 ～400nm，εmax<100 ?溶剂极性↑，λmax↓→蓝移（短移） 13、什么叫E吸收带？E吸收带有什么特点？ 答：E带：由苯环环形共轭系统的π→π*跃迁产生 ?芳香族化合物的特征吸收带 ?E1 180nm εmax>104 （常观察不到） ?E2 200nm εmax=7000 强吸收 ?苯环有发色团取代且与苯环共轭时，E2带与K带合并一起红移（长移） 14、什么叫B吸收带？B吸收带由什么引起？有哪些特点？ 答：B带：由π→π*跃迁和苯环的振动的重叠引起的产生 ?芳香族化合物的主要特征吸收带 ?λmax =254nm，宽带，具有精细结构； ?εmax=200 ?极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失 15、溶剂对紫外吸收光谱有哪些影响？甲醇、乙晴、乙酸、二氯甲烷、苯的最低使用波长极限？ 答：溶剂效应： 对λmax影响：N -π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↓蓝移 π-π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↑红移 溶剂极性↑，溶剂的选择——极性；纯度高；截止波长< λmax 苯环精细结构消失 甲醇205nm、乙晴190nm、乙酸？、二氯甲烷235nm、苯280nm 16、Beer-Lambert 定律及其应用？ 答：（1） Lambert 定律 当一束单色光通过浓度一定的溶液时，液层厚度愈大，光线强度减弱愈显著。 （2） Beer 定律 当一束单色光通过液层厚度一定的溶液时，溶液的浓度愈大，光线强度减弱愈显著。 令：A = - log T ，A 定义为吸光度 A=-logT=ELC 应用; ①进行光度分析时，试剂或溶剂有吸收，则可由所测的总吸光度 A 中扣除，即 以试剂或溶剂为空白的依据； ②测定多组分混合物； ③校正干扰。 17、如何使用UV 吸收光谱进行化合物的定性鉴别？在定性鉴别试验中应注意哪些问题？ 答：定性鉴别的依据－吸收光谱的特征： 吸收光谱的形状；吸收峰的数目；吸收峰的位置（波长）；吸收峰的强度；相应的吸光系数； (一）比较吸收光谱法 根据化合物吸收光谱的形状、吸收峰的数目、强度、位置进行定性分析 待测样品 相同条件 样品谱 标准物质 标准谱 （二）计算λmax 的经验规律 18、给你两个UV 吸收光谱，让你判断这两个ＵＶ吸收光谱是否可能来源于同一个物质（要注意仪器读数的正常误差）？ 答：不能判断，因为不同物质具有相似的谱图，所以谱图“完全一致”并不是确认结构的充分条件。 当未知化合物与已知化合物的紫外光谱一致时，可以认为两者具有同样的发色基团，即具有同样的骨架结构。 19、如何利用ＵＶ吸收光谱进行化合物的纯度检查？ 答：①待测样品中主成分在某波长处无吸收，而杂质有吸收，直接观察样品在该波长处的吸收光谱即可。 ②样品中的主成分在某波长处与杂质在该波长处的吸收差异较大（待测主成分在某波长处有 吸收，杂质无吸收；主成分有弱吸收，杂质有强吸收）可通过测定其 进行判断，若εmax 与标准小于1%可认为一致。 ③试样主成分与杂质在某波长处均无吸收，则不能用该法进行纯度检查（检查杂质最大吸收峰波长处的吸收强度）。 20、为了减少仪器读数的误差，我们在应用ＵＶ光谱法进行试样的含量测定时，应控制试样溶液的浓度在多少为宜？ KL I I T t ==0KC I I T ==0t %11cm E 21、百分吸收系数与摩尔吸收系数之间如何换算？ 答：（1）摩尔吸光系数ε： 含义：指浓度为 1mol/L 的溶液，在液层厚度为1cm 时的吸光度。 ε〉104 ，为强吸收 ε 102～104，为中强吸收 ε〈102，为弱吸收 （2）比吸收系数或称为百分吸收系数， 含义：指浓度为1％（w/v ）的溶液，用厚度为1cm 吸收池时的吸光度 例：氯霉素（Mr ＝323.15）的水溶液在278nm 有最大吸收。假设用纯品配制100ml 含2.00mg 的溶液，以1.00cm 厚的吸收池在278nm 处测得透光率为24.3％。求吸光度A 和吸光系数 ε、 。 解：A=-logT=-log0.243=0.614 ＩＲ光谱分析 １、红外光谱分析中常用的红外线波长范围（ｎｍ、ｃｍ）。（P277） 答：红外光区的波长范围为0.75~1000μm 0.75~2.5μm 近红外 ；2.5~50μm 中红外 ；50~100μm 远红外； ２、波数与波长的换算关系？ 答： ３、红外吸收光谱的产生条件是什么？ 答：红外光谱产生条件： 分子吸收红外辐射的频率恰等于分子振动频率整数倍。 分子在振、转过程中的净偶极矩的变化不为0， 即分子产生红外活性振动，且辐射与分子振动发生能量耦合。 ４、什么叫红外活动性振动、什么叫非红外活性振动？ 答：红外活性振动：分子振动产生偶极矩的变化，从而产生红外吸收的性质 红外非活性振动：分子振动不产生偶极矩的变化，不产生红外吸收的性质 ５、亚甲基有哪些振动形式？（详见Word 版资料） 答：振动的自由度：指分子独立的振动数目，或基本的振动数目 N 个原子组成分子，每个原子在空间具三个自由度 注：振动自由度反映吸收峰数量 并非每个振动都产生基频峰 30711000.2614.03%11=??=?=-L C A E cm 992030710 15.32310%11=?=?=cm r E M ε%1110cm E Mr ?=ε%11cm E ν υν?=?L 即0 ≠?μ即转动自由度） （平动自由度分子振动自由度+-=N 363-=N F 非线性分子：53-=N F 线性分子：)(10)(41m cm μλσ=- 吸收峰数常少于振动自由度数 亚甲基（-CH2-）属于非线性分子：F=3N-6=3*3-6=3种 对称伸缩振动和非对称伸缩振动、变形振动（剪式、面内摆式、扭曲振动、面外摇摆） ６、影响基团振动频率的因素有哪些？并理解其原理（尤其是电效应和氢键效应）。（P305）答：1．内部因素： （1）电子效应：引起化学键电子分布不均匀的效应。 诱导效应（I效应）：使振动频率移向高波数区 ， ，双键性 吸电性 K ↑? ↑ ↑ ↑ν 偶极场效应(F效应) I效应和M效应都是通过化学键起作用，但F效应是通过分子内的空间起作用，是相 互靠近的基团之间通过偶极矩的作用，改变基团的特征吸收频率 （2）氢键效应：使伸缩频率降低分子内氢键：不受浓度影响 分子间氢键：受浓度影响较大，浓度稀释，吸收峰位发生变化 （3）振动耦合：当两个振动频率相同或相近的基团相邻并由同一原子相连时，两个振动相 互作用（微扰）产生共振，谱带一分为二（高频和低频）。如羧酸酐分裂为νC=O（ν as1820、ν s1760cm-1） （4）费米共振：当一振动的倍频与另一振动的基频接近（2νA=νB）时，二者相互作用而 产生强吸收峰或发生裂分的现象。 2．外部因素：受溶剂的极性和仪器色散元件性能影响 溶剂极性↑，极性基团的伸缩 振动频率↓ 色散元件性能优劣影响相邻 峰的分辨率 ７、计算Ｃ９Ｈ１０Ｏ的饱和度？ 答：（略）手写 ８、影响红外吸收强弱的因素有哪些？ 答：跃迁频率越大，吸收越强。从基态向第一激发态跃迁的概率最大，因此，基频吸收带一 般较强； 振动时偶极矩变化越大，吸收越强，偶极矩变化的大小与分子结构和对称性有关。化学 键两端所连接的原子负性差别越大，分子对称性越差，振动时偶极矩变化越大，吸收带越强。一般说来，伸缩振动的吸收强于变形振动，非对称振动的吸收强于对称振动。（伸缩>变形， 非对称>对称） ９、测试ＩＲ光谱前的制样方法有哪些，各注意哪些问题？ 答：制样方法 一、液体或溶液试样 1）沸点低易挥发的样品：液体池法。 2）高沸点的样品：液膜法（夹于两盐片之间）。 3）固体样品可溶于CS2或CCl4等无强吸收的溶液中。 二、固体试样 1）压片法：1~2mg样+200mg KBr——干燥处理——研细：粒度小于2 m（散射小）——混合压成透明薄片——直接测定； 2）石蜡糊法：试样——磨细——与液体石蜡混合——夹于盐片间；石蜡为高碳数饱和烷烃，因此该法不适于研究饱和烷烃。 3）薄膜法：高分子试样——加热熔融——涂制或压制成膜； 高分子试样——溶于低沸点溶剂——涂渍于盐片——挥发除溶剂 样品量少时，采用光束聚光器并配微量池。 生物技术制药期末复习 提纲 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT 生物技术制药复习提纲 生物技术所含的主要技术范畴包含有哪几个工程 基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程； 基因工程菌在传代过程中的质粒不稳定的现象主要是指哪两种不稳定质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性 基因工程菌的培养方式有哪几种 分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养； 从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可以分为哪几种 悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。 动物细胞培养基分为哪三类 天然培养基合成培养基无血清培养基 植物组织和细胞培养所用培养基种类较多，但通常都含有哪几类。 无机盐碳源植物生长调节剂有机氮源维生素 在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而 c 区则决定了Ig分子的异种抗原性。 酶固定法中的包埋法可分为哪两种 网格型微囊型 发酵工业的生产水平取决于哪三个要素 生产菌种、发酵工艺和发酵设备 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类 治疗药物、预防药物、诊断药物 基因工程药物制造的主要步骤如何 目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验 酶和细胞的固定化载体主要有哪三类 吸附载体包埋载体交联载体 单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为哪两种 体内免疫法和体外免疫法 生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系以及工程细胞系。 目前工业常用的酶一般是以什么为主要来源 微生物 发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有哪几种 自然选育、诱变育种和原生质体融合 . 一：命名下列化合物或写出其结构：（10） C H 3C H 3CH 3 1 NH CH 3 O CH 3 2 CH 3 O 3 CH 3 SO 3H CH 3 C H 3Br 5 CHCH 2COOH CH 3 CH 3 OH NO 2 H OH CH 3 3 Br CH 3 8 O COOH 9 10. CH 3 二：完成下列反应（30 ） CH 3CH 2C= CH 2 CH 3 Br + 2, Cl 2 高温 OCH 2CH 3 + 5, KM nO4 H2C C H C H3 (CH 3 ) 2 CHCHCH 3 OH NaOH 3 CH 2 CHCH(CH 3 ) 2 Cl 稀 (2)水 9,CH3CH2CH2CHO NaOH 4 10 O Cl+OH (CH3)2CHCHO Br2C2H 5 OH 干HCl 11. CH3 12+KM nO4 + O +2Br2 13 NH O KOH CH3CH2OH CH3CHBrCH3 14 NaNO2, HCl NH2 0-5℃ OH 15. 三：排序（10 ） 1．将下列化合物对亲电取代反应的容易程度排列成序 OH CHO Br 2．比较下列醇与卢卡氏试剂反应的相对速率的大小 CH 2OH CH 3 C H 33 OH C H 3CH 3 3．将下列化合物中羰基与同一亲核试剂加成反应的活性大小排列成序 C H 3CHO C H 3CHO CH 3 C H 3CH 3 O 4．比较下列羧酸的酸性 COOH COOH COOH COOH 3H NO 2 Cl 5． 比较下列卤代烃按S N 2反应的速度大小 CH 3CH 2CH 2CH 2Br (CH 3)3C Br CH 3CH 2CHBr CH 3 四、区别下列各组化合物：（6） 1 C H 3CH 3 CH C H 3C H 3CH 3 2 苯甲醛 苯甲酮 3－己酮 五 用化学方法分离下列各组化合物（6） OH CH 2OH 1 2 乙醚 乙烷 六 用指定的原料合成下列各化合物（小分子试剂任选）（20） 1．以丙烯为主要原料合成1-氯-2,3-二溴丙烷 第二章生物药物概论 一、生物药物生产原料选择的主要原则、生物药物的特性及种类。 主要原则:有效成分含量高,原料新鲜;来源丰富,易得;原料产地较近;杂质含量少;原料成本低;易提取。 特性:(1)药理学特性:治疗的针对性强;药理学活性高;毒副作用小,营养价值高;生理副作用常有发生。 (2)生产、制备中的特殊性:原料中的有效物质含量低;稳定性差;易腐败;注射用药有特殊要求。 (3)检验上的特殊性:要有理化检验指标,与生物活性检验指标。 分类: 按药物化学本质与化学特性分类:(1)氨基酸及基衍生物类(2)多肽与蛋白质类(3)酶与辅酶类(4)核酸及其降解物与衍生物类(5)糖类(6)脂类(7)细胞生长因子类(8)生物制品类(9)小动物制剂(10)动物器官或组织制剂。 按原料来源分类:(1)人体组织(2)动物组织(3)植物组织(4)微生物(5)海洋生物来源的药物。按生理功能与用途分类:(1)治疗药物(2)预防药物(3)诊断药物(4)其她。 二、生物药物提取分离制备方法的工艺过程。在对生物药物进行提取操作时,选择提取试剂需注意的问题。 工艺流程:1、生物药物原料的选择、预处理与保存(保存方法: 冷冻法,-40℃;②有机溶剂脱水法;③防腐剂保鲜,多用于液体)。 2、生物药物的提取:(1)生物组织与细胞破碎:磨切法,压力法,反复冻融法,超声波震荡破碎法,自溶法,酶溶法(2)选择合适的溶剂进行提取(考虑提取剂的用量、提取时间、提取次数,注意温度、变性剂等因素)。 3、生物药物的分离纯化:(1)蛋白质类药物的分离纯化:沉淀法,亲与层析法,疏水层析法(2)核酸类药物的分离纯化:提取法,发酵法(3)糖类:沉淀法,离子交换层析法(4)脂类:沉淀法,吸附层析法,离子交换层析法(5)氨基酸类:沉淀法,吸附法,离子交换法。 试剂的选择:1、对所需要提取的活性成分溶出度较高,对杂质较低。2、不破坏活性成分。3、利于后续预处理。4、对环境影响较小,有利于回收与处理。5、对设备要求不高。6、成本较低。7、最好对人体无害。 第三章基因工程制药 一、基因工程制药的主要工艺过程。 获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌(或细胞)→培养工程菌→产物的分离纯化→质量控制→产品检验包装 二、什么就是目的基因？有几种获取方法？用于构建基因工程菌的目的基因应该达到什么要求？ 目的基因既就是人们所需要的特定基因,一般也就是接受目的基因的细胞或个体原本没有的基因。 获取方法:(1)直接从生物体中提取总DNA,构建基因文库,从中调用目的基因;(2)以mRNA为模板,反转录合成互补的DNA片段;(3)利用聚合酶链式反应(PCR)特异性地扩增所需要的目的基因片段(4)化学合成法;⑸逆转录(RT)-PCR法合成cDNA。 基本要求:不含多余干扰成分,纯度高;片段大小适合重组操作;结构、序列正确,达到一定数量。 三、基因工程克隆细胞与表达细胞、克隆载体与表达载体其各自特点。 克隆载体:1、具备复制原点,在宿主细胞内必须能够自主复制。2、有一个或多个用于筛选的 仪器分析练习题及答案 第2章气相色谱分析 一．选择题 1.在气相色谱分析中, 用于定性分析的参数是( ) A保留值 B 峰面积 C 分离度 D 半峰宽 2. 在气相色谱分析中, 用于定量分析的参数是( ) A保留时间 B 保留体积 C 半峰宽 D 峰面积 3. 使用热导池检测器时, 应选用下列哪种气体作载气, 其效果最好？( ) A H2 B He C Ar D N2 4. 热导池检测器是一种( ) A浓度型检测器 B 质量型检测器 C 只对含碳、氢的有机化合物有响应的检测器 D 只对含硫、磷化合物有响应的检测器 5. 使用氢火焰离子化检测器, 选用下列哪种气体作载气最合适？( ) A H2 B He C Ar D N2 6、色谱法分离混合物的可能性决定于试样混合物在固定相中（）的差别。 A. 沸点差， B. 温度差， C. 吸光度， D. 分配系数。 7、选择固定液时，一般根据（）原则。 A. 沸点高低， B. 熔点高低， C. 相似相溶， D. 化学稳定性。 8、相对保留值是指某组分2与某组分1的（）。 A. 调整保留值之比， B. 死时间之比， C. 保留时间之比， D. 保留体积之比。 9、气相色谱定量分析时（）要求进样量特别准确。 A.内标法； B.外标法； C.面积归一法。 10、理论塔板数反映了（）。 A.分离度； B. 分配系数；C．保留值；D．柱的效能。 11、下列气相色谱仪的检测器中，属于质量型检测器的是（） A．热导池和氢焰离子化检测器； B．火焰光度和氢焰离子化检测器； C．热导池和电子捕获检测器；D．火焰光度和电子捕获检测器。 12、在气-液色谱中，为了改变色谱柱的选择性，主要可进行如下哪种（些）操作？（） A. 改变固定相的种类 B. 改变载气的种类和流速 C. 改变色谱柱的柱温 D. （A）、（B）和（C） 13、进行色谱分析时，进样时间过长会导致半峰宽（）。 A. 没有变化， B. 变宽， C. 变窄， D. 不成线性 14、在气液色谱中，色谱柱的使用上限温度取决于（） A.样品中沸点最高组分的沸点， B.样品中各组分沸点的平均值。 C.固定液的沸点。 D.固定液的最高使用温度 15、分配系数与下列哪些因素有关（） A.与温度有关； B.与柱压有关； C.与气液相体积有关； D.与组分、固定液的热力学性质有关。 一．命名或写出结构式（12题×1分＝12分）： CH 3CH 2CH(CH 3)CHCH 2CH 2CH 3 CH(CH 3)2 CH 3 OH COCH 3 H 2C H 3C C COOCH 3 NOH SO 3H NO 2 O O O C H 2N H 3C H NH O C CH 3CH 3 O N O C H CH 2 H 2 C Cl 二、填空（每个空格填一个答案）（28分） 1、 ( ) ( ) ( ) ( ) H 3O+ CH 3CH 2CH 2CN SOCl 2 (CH 3)2NH LiAlH 4 2、 LiAlH 4CH 3CH 2CH 2CHO HCN OH-稀NaHSO 3 NHNH 2NO 2 O 2N Zn-Hg,HCl 干HOCH 2CH 2OH Cl H ( ) ( ) ( ) ( )( ) ( ) ( ) 4、 ( ) ( ) ( ) NH O O NaOH KOH BrCH 2COOCH 2CH 3 OH-O H 2 NaOH/H 2O Cl HNO 3,H 2SO 4 5 Cl Zn, HOAc 6 O 3 H 2O (1)(1) CH 3I N Ag 2O 7 8 H 2O, H (1)B 2H 6(2)H 2O 2, NaOH NaOH Cl OH CH 3OH 9 2 NO 2 Br Fe/HCl Br 2 /H 2 O (CH 3 CO) 2 O 稀盐酸 10 三、用化学方法区别下列各组化合物（10分） A) CH 3(CH 2)3NH 2 B) (CH 3CH 2CH 2)2NH C) (CH 3CH 2)3N 1. A) CH 3CH 2CH 2CH 2Br B) CH 3CHBrCH 2CH 3 C) (CH 3)3CBr 2. 四、简要回答问题（10分） 1．写出下述反应的机理： CH 2OH H ++ 生物技术制药考试题复 习 内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128） 一：选择题 1、酶的主要来源是（C） A、生物体中分离纯化 B、化学合成 C、微生物生产 D、动/植物细胞与组织培养 2、所谓“第三代生物技术”是指 (A) A、海洋生物技术 B、细胞融合技术 C、单克隆技术 D、干细胞技术 3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A) A、大于 B、等于 C、小于 D、无关 4、促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（E） A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用? B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定? C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 5、目前基因治疗最常用的载体是：(B) A、腺病毒? B、反转录病毒 C、腺相关病毒 D、痘苗病毒 E、疱疹病毒 6、cDNA第一链合成所需的引物是：（D） A、Poly?A B、PolyC C、PolyG D、PolyT E、发夹结构 7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达? C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达? D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能 B、表达产物的产量C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易? 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和（安全性鉴定）。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A.糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇（PEG）诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分子量大，促进融合率高 B、PEG的浓度高，促进融合率高 C、PEG的相对分子量小，促进融合率高 D、PEG的最佳相对分子量为4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋白质 B、表达产物存在的部位是在菌体内 C、容易培养，产物提纯简单 D、表达产物为天然产物? 13、人类第一个基因工程药物是：(A) 第一章绪论 1、仪器分析主要有哪些分析方法？请分别加以简述。 答：a、光学分析法b、电化学分析法c、分离分析法d、其他仪器分析方法光学分析法：分为非光谱法和光谱法。非光谱法是不涉及物质内部能级跃迁的，通过测量光与物质相互作用时其散射、折射等性质的变化，从而建立起分析方法的一类光学测定法。光谱法是物质与光互相作用时，物质内部发生量子化的能级间的跃迁，从而测定光谱的波长和强度而进行分析的方法。 电化学分析法：利用溶液中待测组分的电化学性质进行测定的一类分析方法。 分离分析法：利用样品中共存组分间溶解能力、亲和能力、吸附和解吸能力、迁移速率等方面的差异，先分离，后按顺序进行测定的一类仪器分析法。 其他：其他仪器分析法和技术：利用生物学、动力学、热学、声学、力学等性质进行测定的仪器分析方法和技术。如：免疫分析、热分析、光声分析等。 2、仪器分析的联用技术有何显著优点？ 多种现代分析技术的联用，优化组合，使各自优点得到充分发挥、缺点得到克服、分析仪器与计算机之间的联用解决了：程序控制、计算、条件选择等问题。 3、仪器分析：是以物质的物理或物理化学性质为基础，探求这些性质在分析过程中所产生分析信号与被分析物质组成的内在关系和规律，进而对其进行定性、定量、进行形态和结构分析的一类测定方法。由于这类方法的测定常用到各种比较昂贵、精密的分析仪器，所以称仪器分析。 与化学分析相比：优点：选择性高、重现性好。缺点：仪器复杂、昂贵，相对误差较大。4、检出限：是评价一个分析方法及测试仪器性能的重要指标, 是指某一特定分析方法,在给定的显著性水平内,可以定性地从样品中检出待测物质的最小浓度或最小量。所谓“检出”是指定性检出, 在检出限附近不能进行准确的定量。检出限可分为测量方法检出限和仪器检出限。 5、比移值：薄层色谱法中原点到斑点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值。 又称Rf值，是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物。 6、精密度：指在相同条件下对同一样品进行多次平行测定，各平行测定结果之间的符合程度。 7、准确度：指多次测定的平均值与真值相符合的程度，用误差或相对误差描述，其值越小准确度越高。 第二章分析吸光分析法 1、为什么分子光谱总是带状光谱？ 当分子发生电子能级跃迁时，必伴随着振动能级和转动能级的跃迁，而这些振动能级和转动能级的跃迁是叠加在电子跃迁之上的，所以是带状光谱。 2、有机化合物分子的电子跃迁有哪几种类型？哪些类型的跃迁能在紫外-可见光区吸收光谱中反映出来？ 可能有：σ→σ*、σ→π*、π→σ*、π→π*、n→σ*和n→π*等六种形式，产生有机化合物分子光谱的电子跃迁形式有：n→σ*、π→π*、n→π*三种。 生物制药练习题A 一、名词解释： 1.生物技术： 2.疏水层析： 3.生物技术制药： 4.疏水层析： 5.生物反应器： 6.贴壁培养： 二、判断题： 1．细胞工程操作主要对象是细胞。（） 2．细胞工程理论基础是细胞的全能性。（） 3．细胞核移植是指将一种细胞的细胞核转移到另一种去掉了细胞核的细胞质内，然后将不同来源的细胞核和细胞质融合组成新的细胞。（） 三、填空题： 1．生物技术制药的特征包括：（1）；（2）；（3）； （4）；（5）。 2．基因工程药物主要包括: （1）；（2）；（3）；（4）。 3．细胞物理破碎包括：（1）；（2）； （3）；（4）。 4．酶在医药领域的应用：（1）； （2）；（3） ；（4）。 四、简答题： 1. 现代生物药物包括哪几类？ 2．次级代谢产物的特征。 3．B淋巴细胞杂交瘤技术中常用哪种选择性培养基和细胞融合剂？4．提高质粒稳定性的方法。 5．基因工程产品纯化前的性质。 五、问答题： 1．成纤维细胞型细胞的特点及来源。 2．正常细胞体外培养在原代培养期的特点并举例。 3. 免疫毒素可用于治疗哪些疾病？优点是什么？ 4. 发酵过程的溶氧变化。 5．固定化酶的优点。 生物制药练习题A答案 一、名词解释： 1. 生物技术： 生物技术是以生命科学为基础，利用生物体（或生物组织、细胞及其组分）的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程相结合，利用这样的新物种（或品系）进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系。 2．疏水层析： 是利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异，对蛋白质组分进行分离的层析方法。 3.生物技术制药： 采用现代生物技术可以人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。 4.疏水层析： 是利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异，对蛋白质组分进行分离的层析方法。 5．生物反应器： 在体外模拟生物体的功能，设计出来用于生产或检测各种化学品的反应装置。或者说，生物反应器是利用酶或生物体（如微生物）所具有的生物功能，在体外进行生化反应的装置系统，是一种生物功能模拟机，如发酵罐、固定化酶或固定化细胞反应器等。 6．贴壁培养： 第一章、绪论 1. 生物技术制药：采用现代生物技术，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。 2. 生物技术药物：采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。 3. 生物药物：指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法，利用生物体、生物组织、细胞、体液等制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 4. 现代生物药物四大类型：⑴应用重组DNA技术制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂； ⑵基因药物 ⑶来自动物、植物和微生物的天然药物； ⑷合成与部分合成的生物药物。 5. 生物药物功能用途分类：⑴治疗药物，⑵预防药物⑶诊断药物。 6. 生物技术制药的特征：⑴高技术⑵高投入⑶长周期⑷高风险⑸高收益 7. 生物技术在制药中的应用：⑴基因工程制药：①基因工程药物品种的开发、②基因工程疫苗、③基因工程抗体、④基因诊断与基因治疗、⑤应用基因工程技术建立新药的筛选模型、⑥应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物、⑦基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用、⑧利用转基因动、⑨植物生产蛋白质类药物 ⑵细胞工程制药：①单克隆抗体技术、②动物细胞培养 ⑶酶工程制药 ⑷发酵工程制药 8. 我国生物技术制药现状和发展前景（自己阐述观点） 第二章基因工程制药 1．基因工程生产哪些药：⑴免疫性蛋白，如各种抗原和单克隆抗体。⑵细胞因子，如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子。⑶激素，如胰岛素、生长激素、心钠素⑷酶类，如尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。 2. 利用基因工程技术生产药品的优点在于： ⑴利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用建立有效的保障。 ⑵可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围。 ⑶利用基因工程可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质。 ⑷内源生理活性物质在作为药物使用时，存在不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程读起进行改造。 ⑸利用基因工程技术可以获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 3. 上游阶段：是研究开发比不可少的基础，主要是分离目的基因、构建工程菌（细胞）。上游阶段的工作主要咋实验室内完成。 4. 下游阶段：是从工程菌（细胞）的大规模培养直到产品的分离纯化、质量控制等。下游阶段是将实验室成果产业化、商品化。 5. 制备基因工程药物的基本过程：获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装 6. 宿主菌应该满足以下要求：⑴具有高浓度、高产量、高产率；⑵能利用易得廉价原料； ⑶不致病、不产生内毒素；⑷发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；⑸容易进行代谢调控；⑹容易进行重组DNA技术；⑺产物容易提取纯化 7. 宿主细胞分为两大类：⑴原核细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、芽孢杆菌、链霉菌等；⑵真核细胞：酵母、丝状真菌 8. 表达载体必须具备以下条件（特点）： ⑴载体能够独立地复制 ⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选。而且克隆位点应位于启动子序列后，以使克隆的外源基因得以表达。 ⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别。 ⑷应具有阻遏子，使启动子收到控制，只有当诱导时候才能进行转录。 ⑸应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因，同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定。 ⑹所产生的mRNA必须具有反义的起始信号，即起始密码AUG和SD序列，以便转录后能顺利翻译。 ⒐密码子的偏爱性：在基因组中把使用频率高的同义密码子称为主密码子或偏爱密码子。此现象被称为密码子偏爱性 ⒑融合蛋白：由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的，称为融合蛋白。 ⒒酵母的复制序列的几种不同载体：⑴YEp类（酵母附加体质粒） ⑵YRp类（酵母复制型质粒） ⑶YCp类(酵母着丝粒质粒) ⑷Yip类（酵母整合型质粒） ⒓基因工程菌的不稳定性：基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。 研究生复习提纲 1.色谱法定性和定量的依据是什么？ 答.色谱定性的依据是保留值，定量的依据是m=fA 色谱定性分析方法:1、用保留时间定性2、用峰高增加法定性3、与其他仪器连用定性（如：GC-MS） 定量分析方法:1、归一化法2、外标法3、内标法 用保留值定性的依据是：当固定相和操作条件严格固定不变时，任何一种物质都有确定不变 的保留值，通过比较已知物和未知物的保留值，就可以确定色谱图中某一色谱峰代表什么物质。 2.什么叫程序升温？它有什么作用？ 答.程序升温色谱法，是指色谱柱的温度按照组分沸程设置的程序连续地随时间线性或 非线性逐渐升高，使柱温与组分的沸点相互对应，以使低沸点组分和高沸点组分在色谱柱中 都有适宜的保留、色谱峰分布均匀且峰形对称。程序升温具有改进分离、使峰变窄、检测限 下降及省时等优点。对于沸点范围很宽的混合物，往往采用程序升温法进行分析。在气相色 谱中多采用程序升温技术解决洗脱色谱的一般问题，而在液相色谱中多采用梯度洗脱技术解 决这一问题。 3.什么叫梯度洗脱？它有什么优点？ 答：梯度洗脱就是在分离过程中，让流动相的组成、极性、pH 等按照一定程序连续变化，使样品中各组分能在最佳的分配比下出峰，使保留时间短、拥挤不堪、甚至重叠的组分，或 保留时间过长而峰形扁平的组分获得很好的分离，特别适合样品中组分的分配比值范围很宽 的复杂样品的分析。梯度洗脱十分类似气相色谱的程序升温，两者的目的相同。不同的是程 序升温是通过程序改变柱温，当流动相和固定相不变时，分配比的变化是通过温度变化引起的。而液相色谱是通过改变流动相组成、极性、PH 来达到改变分配比的目的，一般柱温保持 恒定。 4.为什么用分离度R作为色谱柱的总分离效能指标？ 答：塔板理论和速率理论都难以描述难分离物质对的实际分离程度，即柱效为多大时， 相邻两组分能够被完全分离。难分离物质对的分离度大小受色谱分离过程中两种因素的综合 影响：保留值之差——色谱分离过程中的热力学因素；区域宽度——色谱分离过程中的动力 学因素。考虑色谱分离过程的热力学因素和动力学因素，引入分离度(R)来定量描述混合物 中相邻两组分的实际分离程度。分离度R 由三项的乘积决定。第一项为动力学因素项，表现 在色谱峰的宽度，由色谱柱性能决定。第二项为热力学因素项，决定于色谱峰问的距离。第 三项为分配比项，影响组分的保留时间。 5.根据速率理论，色谱柱的板高H由哪些因素决定？试给出最佳流动相流速U最 和最小板 佳高H最 的计算公式。 小 答：H 首先取决柱子填充均匀程度和固定相颗粒大小。气相载气流速、柱温和载气分子 质量影响纵向扩散。液相固定相性质，组分在固定相和流动相的扩散系数影响传质阻力。因 液相中纵向扩散很小，塔板高度H 主要由传质阻力项决定，即流速越大，H 越大。气相中纵 向扩散明显，低流速时增大流速H 降低，流速继续增大，传质阻力增大，H 增大。 生物技术制药复习提纲 生物技术所含的主要技术范畴包含有哪几个工程？ 基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程； 基因工程菌在传代过程中的质粒不稳定的现象主要是指哪两种不稳定？ 质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性 基因工程菌的培养方式有哪几种？ 分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养； 从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可以分为哪几种？ 悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。 动物细胞培养基分为哪三类？ 天然培养基合成培养基无血清培养基 植物组织和细胞培养所用培养基种类较多，但通常都含有哪几类？。 无机盐碳源植物生长调节剂有机氮源维生素 在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而c 区则决定了Ig分子的异种抗原性。 酶固定法中的包埋法可分为哪两种？ 网格型微囊型 发酵工业的生产水平取决于哪三个要素？ 生产菌种、发酵工艺和发酵设备 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类？ 治疗药物、预防药物、诊断药物 基因工程药物制造的主要步骤如何？ 目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验 酶和细胞的固定化载体主要有哪三类？ 吸附载体包埋载体交联载体 单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为哪两种？ 体内免疫法和体外免疫法 生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系以及工程细胞系。 目前工业常用的酶一般是以什么为主要来源？ 微生物 发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有哪几种？ 自然选育、诱变育种和原生质体融合 . 在制备大量微生物菌体或其代谢产物时，可采用不同的发酵方式。微生物的发酵方式有哪几种？ 分批发酵、补料分批发酵、连续发酵 目的基因的获得方法有哪几种？用反转录法获得目的基因，首先必须获得什么？cDNA法获得目的基因的优点是什么？将构建好载体导入动物细胞最常用的方法是什么？ 反转录法、反转录-聚合酶链反应法和化学合成法 目的基因的mRNA 获得的目的基因编码序列无内含子，目的基因的筛选较容易 磷酸钙沉淀法电穿孔法 复习题答案 1．分子光谱: 由分子的吸收或发光所形成的光谱称为分子光谱（molecular spectrum），分子光谱是带状光谱。 2．分子荧光分析: 某些物质被紫外光照射激发到单重激发态后，在回到基态的过程中发射出比原激发波长更长的荧光，通过测量荧光强度进行定量分析的方法。 3．气相干扰： 是指干扰发生在气相过程中（如电离干扰、激发干扰）以气相化学反应引起的干扰。 4．标记PCR(LP-PCR)： 利用同位素、荧光素等对ＰＣＲ引物进行标记，用以直观地检测目的基因。 5．毛细管电泳: 是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。 6．红外吸收光谱： 又称为分子振动—转动光谱。当样品受到频率连续变化的红外光照射时，分子吸收了某些频率的辐射，并由其振动或转动运动引起偶极矩的净变化，产生分子振动和转动能级从基态到激发态的跃迁，使相应于这些吸收区域的透射光强度减弱。 7．Fermi共振： 当一振动的倍频与另一振动的基频接近时，由于发生相互作用而产生很强的吸收峰或发生裂分。 8．荧光发射： 电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态（多为S1→S0跃迁），发射波长为‘2的荧光；10-7～10 -9 s 。 9．原子光谱:原子的电子运动状态发生变化时发射或吸收的有特定频率的电磁频谱.原子光谱是一些线状光谱,发射谱是一些明亮的细线,吸收谱是一些暗线. 10．分子吸收光谱:分子对辐射选择性吸收使基态分子跃迁至更高能级的激发态而发出的特征光谱为分子吸收光谱. 11．内转化：处于相同的重态的两个离子间的非辐射跃迁. 12．宽带吸收： 是用紫外可见分光光度法测量溶液中分子或离子的吸收，吸收宽带宽从几纳米到几十纳米，是用的是连续光源，这种测量方法叫 13．塔板理论： 在每一块踏板上，被分离柱分在气液两相间瞬时达到一次分配平衡，然后随载气从一块踏板以脉动式迁移，经过多次分配平衡后，分配系数小的组分先离开精馏塔，分配系数大的后离开，从而使分配系数不同的组分分离。 14．高效液相色谱法： 第三章动物细胞工程制药 一?生产用动物细胞目前用于生物制药的动物细胞有4类,即原代细胞?二倍体细胞系,融合的或重组的工程细胞系和转化细胞系? 1原代细胞 原代细胞是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液?动物细胞生产生物药品的早期,一般用原代培养的细胞来生产疫苗,如鸡胚细胞?原代兔肾细胞?鼠肾细胞,淋巴细胞等,Ender最先用原代培养的猴肾组织细胞来生产脊髓灰质炎灭活疫苗?原代细胞增殖能力有限,需要大量动物才能增加产量,费钱费力,限制了它的应用? 2传代细胞系 原代细胞经过传代筛选克隆,从多种细胞成分中挑选并纯化出某种具有一定征的细胞株称为CCL?许多CCL建立于50年代,用它们来生产疫苗不仅可以降低实验动物的量,并且因为所用的细胞性质均一,通过体外大规模培养技术生产的疫苗可以保证质量,避免了动物个体差异产生的疫苗质量不稳定问题?但C CL在生物学特性上与肿瘤细胞有许多相似之处,有时是从肿瘤细胞衍生而来,由于缺乏有效的科学手段来排除其潜在的致瘤性,因而数十年间未允许C CL用于生产?7 O 年代以后,大量研究工作证实了二倍体细胞的安全性,wI一38是第一个生产脊髓灰质炎灭活疫苗的二倍体细胞系?二倍体细胞系一般从动物胚胎组织中获取,有明显的贴壁和接触抑制特性,有正常细胞的核型,一般可传代培养5 0代?且无致瘤性,现在C C L已被广泛用于人用治疗性药物的生产,但仍不是理想的生产细胞系? 3工程细胞系 工程细胞系是指采用基因工程技术或细胞融合技术对宿主细胞的遗传物质进行修饰改造或重组,获得具有稳定遗传的独特性状的细胞系?用于构建工程细胞的动物细胞有BHK一2l,CHO—dhfr?Namalwa?Vero?SP2/O,Sf一9等细胞系?sP2/0一Ag l4工程细胞系是通过融合的方法,从抗羊红细胞活性的BALB/c的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞P3x63A98融合杂交瘤sP2/NL—Ag 亚克隆中分离获得,可用于生产单克隆抗体幢l?目前用重组DNA技术改造的C H O细胞生产干扰素,白介素,E P O?单克隆抗体?诊断试剂以及其它各种蛋白质类药品已成为国际医药市场上的热销产品,但这些产品的生产规模普遍较小(大多为5~50升的小型培养罐)? 4转化细胞系 通过某个转化过程形成的,常由于染色体断裂变成异倍体,失去正常细胞特点,而获得无限增殖能力?转化细胞系具有长期培养,倍增时间短,对培养条件和生长因子等要求较低的特点,适于大规模工业化生产?在生物制药中,可通过改造宿主细胞特性,如延长细胞周期.提高工程细胞原始表达水平等来提高药物的产量?李红艳等研究空间环境对CH0(dhfr)细胞生长特性的影响,结果表明空间诱变致生长减慢的细胞株有利于提高目的蛋白的产量,为筛选优化的生物工程制药细胞提供可能?目前cHo(dhfr)作为重要的基因表达受体细咆,已成功应用于表达促红细胞生成素(EPO)?重组乙型肝炎疫苗等生物制药领域? 二、动物细胞工程制药技术 1细胞融合 一、根据结构式命名或写出下列化合物的结构式（本大题共10小题，每小题1分，共10分） 二、单项选择题(本大题共15小题，每小题1分，共15分) 在每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，请将其代码填写在题后的括号内。错选、多选或未选均无分。 1. 下列各组化合物不属于同分异构体的是（A）。 A. 乙醇和乙醚 B. 环丙烷和丙烯 C. 环戊烯和戊炔 D. 1，3-丁二烯和丁炔 2. 下列化合物中若按S N1反应,反应速度最快的是（ D ） A. 1-溴丁烷 B. 2-溴丁烷 C. 2-甲基-2-溴丁烷 D. 2-甲基-3-溴丁烷 3. 下述卤代烃中发生S N2反应速度最快的是（ C ）。 4. 下列化合物中不属于Lewis酸的是（A）。 A. 硫酸 B. 三氯化铝 C. 三氟化硼 D. 氯化锌 5. 下列化合物中与硝酸银溶液作用最快的是（A）。 A. 氯化苄 B. 氯苯 C. 溴苯 D. 氯乙烯 6. 化合物HOOCCH（OH）CH（OH）COOH中含有手性碳原子个数为（ B ）。 A. 1个 B. 2个 C. 3个 D. 4个 7. 下列化合物硝化反应速度最快的是（ C ）。 A. 硝基苯 B. 氯苯 C. 甲苯 D. 苯 8. 用卢卡氏试剂可鉴别下列哪组化合物?（A） A. 叔丁醇与丙醇 B. 苯与甲苯 C. 环己烷与己烯 D. 乙烯与乙炔 9. 能与2,4-二硝基苯肼反应生成黄色沉淀，但不能发生银镜反应和碘仿反应的是（ D ）。 A. 丁醛 B. 2-丁醇 C. 2-丁酮 D. 3-戊酮 10. 甲苯与氯气在光照下进行反应的反应机理是（ C ）。 A. 亲电取代 B. 亲核取代 C. 自由基取代 D. 亲电加成 11. 我们常用下列哪种试纸判断重氮化反应的终点。（ C ） A. PH试纸 B. 刚果红试 C. 淀粉-碘化钾试纸 D. 石磊试纸 12. 下列乙酸衍生物中最容易发生水解反应的是 ( D )。 A. 乙酸乙酯 B. 乙酸酐 C. 乙酰胺 D. 乙酰氯 13. 下列化合物中酸性最强的是（ B ）。 A. 苯酚 B. 氯乙酸 C. 冰醋酸 D. 对硝基苯酚 14. 下述含氮化合物中碱性最强的是（A）。 A. 甲胺 B. 苯胺 C. 乙酰胺 D. 四丁基溴化铵 15. 下述手性化合物中互为对映异构体的一组是（ B ）。 《生物技术制药》复习资料（Biotech nological Pharmaceutics ） 第一章绪论 一、概述 1.概念：生物药物（生物制药）是泛指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗疾病的医药品。|采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，叫做生物技术制药。 2.技术范畴：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程以及后来衍生出来的第二代、第三代的蛋白质工程、抗体工程、糖链工程和海洋生物技术等。 3.相关学科：有生物学（含微生物学、分子生物学、遗传学等）、化学、工程学（化学工程、电子工程等）、医学、药学、农学等。但从基础学科来讲，生物学、化学和工程学是其主要的学科。 4.应用范围：（1）医药；（2）农业；（3）食品；（4）工业；（5）环境净化；（6）能源。 二、生物技术的发展简史 1.传统生物技术阶段 主要产品：乳酸、酒精、丙酮、丁酸、柠檬酸、淀粉酶。 生产的特点：过程简单，大多属兼气发酵或表面培养，生产设备要求不高，产品化学结构简单，属初级代谢产物。 2.近代生物技术阶段 主要产品：抗生素、维生素、甾体、氨基酸；食品工业的工业酶制剂、食用氨基酸、酵母、啤酒；化工业的酒精、丙酮、丁醇、沼气；农林业的农药；环境保护业的生物治理污染。生物技术的特点：（1）产品类型多，初级（氨基酸、酶、有机酸）、次级（抗生素）、生物转化（甾体）；（2）生物技术要求高， 纯种、无菌、通气，产品质量要求也高；（3）生产设备规模大；（4）技术发展速度快。 3.现代生物技术 主要产品：胰岛素、干扰素、生长激素等。 生物技术的内容包括：（1）重组DNA技术及其它转基因技术（基因工程）；（2）细胞和原生质体融合技术（细胞工程）；（3）酶或细胞的固定化技术（酶工程）；（4）植物脱毒和快速繁殖技术；（5）动物细胞大量培养技术；（6）动物胚胎工程技术；（7）现代发酵技术；（8）现代生物反应工程和分离工程技术；（9）蛋白质工程技术；（10）海洋生物技术。 三、医药生物技术的新进展 1.基础研究不断深入 仪器分析期末考题 一．薄层色谱 1.薄层基本原理分类 1.吸附色谱：利用被分离物质在吸附剂上被吸附的能力不同，当用展开剂展开 时，不同的物质因吸附和解吸附能力的不同而造成的迁移不同，从而达到分离的目的，是薄层色谱上最常用的方法。常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、硅藻土等。 2.分配色谱：利用被分离物质在两相中分配系数的不同使组分分离。常以硅胶、 硅藻土、纤维素等作载体，它们吸附一定量的水分或其它溶剂(如:缓冲液、酸液、甲酰胺、丙二醇等)作固定相，再用与固定相不相混溶的展开剂展开,被分离物质在两相之间不断地进行分配,从而达到分离。 3.离子交换色谱：利用被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同使组分 分离。常用的有离子交换纤维制成的薄层板，用于分离某些亲水性强、能成离子态的物质。 4.凝胶色谱：葡聚糖凝胶的分离原理是葡聚糖凝胶在吸水后形成凝胶粒子，在 其交联的骨架中有许多一定大小的网眼。网眼大，大分子物质能进入网眼内； 网眼小，只有小分子物质才能进入网眼；而超过一定限度的大分子物质，就被排阻在凝胶粒子的外部而不能进入网眼。如同按照分子大小过筛一样，所以称为分子筛。用于高分子的非离子化合物的分离，如蛋白质及核酸等。5.其他薄层色谱 1)络合薄层色谱法：AgNO 3 2)微乳薄层色谱法：以微乳液为流动相 3)胶束薄层色谱法：应用一定浓度的表面活性剂溶液所形成的胶束溶液作 为流动相 4)反相薄层色谱法：利用化学键合反应，将烃基硅烷键合到硅胶表面，制 成非极性固定相，用极性较大的液体作流动相 5)手性固定相法：光学活性的天然高分子－纤维素，纤维素衍生物等 2.填空：检测xxx用( )色谱 3.常用TLC鉴别方法 1.对照品鉴别 2.对照药材鉴别 3.对照提取物鉴别 4.参比物对照鉴别 5.阴性，阳性对照鉴别 二．液相色谱（PPT最后一页重点） 1.高效液相色谱法的特点 生物技术制药期末复习提 纲 Jenny was compiled in January 2021 生物技术制药复习提纲 生物技术所含的主要技术范畴包含有哪几个工程？ 基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程； 基因工程菌在传代过程中的质粒不稳定的现象主要是指哪两种不稳定？ 质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性 基因工程菌的培养方式有哪几种？ 分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养； 从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可以分为哪几种？ 悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。 动物细胞培养基分为哪三类？ 天然培养基合成培养基无血清培养基 植物组织和细胞培养所用培养基种类较多，但通常都含有哪几类。 无机盐碳源植物生长调节剂有机氮源维生素 在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而 c 区则决定了Ig分子的异种抗原性。 酶固定法中的包埋法可分为哪两种？ 网格型微囊型 发酵工业的生产水平取决于哪三个要素？ 生产菌种、发酵工艺和发酵设备 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类？ 治疗药物、预防药物、诊断药物 基因工程药物制造的主要步骤如何？ 目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验 酶和细胞的固定化载体主要有哪三类 吸附载体包埋载体交联载体 单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为哪两种？ 体内免疫法和体外免疫法 生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系以及工程细胞系。 目前工业常用的酶一般是以什么为主要来源？ 微生物 发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有哪几种？ 自然选育、诱变育种和原生质体融合 . 在制备大量微生物菌体或其代谢产物时，可采用不同的发酵方式。微生物的发酵方式有哪几种？ 分批发酵、补料分批发酵、连续发酵 目的基因的获得方法有哪几种用反转录法获得目的基因，首先必须获得什么cDNA法获得目的基因的优点是什么将构建好载体导入动物细胞最常用的方法是什么 反转录法、反转录-聚合酶链反应法和化学合成法 目的基因的mRNA 获得的目的基因编码序列无内含子，目的基因的筛选较容易 一：命名下列化合物（10） 1. F Br I Cl H 3C C O N CH 3CH 3 2 3 CH 3 NO 2 NO 2 O 2N 4 5. 6. COOCH 3 7 NH 2 HOOC 8 SO 3H 3 9. OH HO OH 10. 3 H 3C 二：完成下列反应（30） H 3C H C CH 2 H 2C H C H C CH 2 1NBS + Cl 2 光 2, CH C H 3[A g (N H 3)2]N O 3 3 O OH 4. SOCl 2CH 3OH + 5, KMnO4 H2C CHCH3 6 NaOH溶液 7, OH CH3CH2CHCH3 C2H5OH NaOH 8 稀 (2)水9,CH3CH2CH2CHO4 O N H2 CH3 +N a O H+Br2 10 (CH3)2CHCHO Br2CH3OH 干HCl 11. CH3 O H 2 O 12 13, NH O KOH C2H5OH CH3CHBrCH3 14 NaNO2, HCl NH 2 0-5℃ 15. 三：排序（10 ） 1．将下列化合物对亲电取代反应的容易程度排列成序 NO2Cl H CH3 2．比较下列化合物的碱性（气态条件下） 氨甲胺二甲胺 3．将下列化合物中羰基与同一亲核试剂加成反应的活性排列成序 COCH 3 CH 3CH 2 CHO CH3COCH3 4．比较下列化合物的酸性 C6H5OH CH3COOH ClCH2COOH 5.比较下列卤代烃按S N1反应的速度大小 CH 3CH 2 CH 2 CH 2 Br(CH3)3C Br CH3CH2CHBr CH 3 四、区别下列各组化合物：（6） 1 丙烷，丙烯，丙炔 22-丁醇苄醇正丙醇 五用化学方法分离下列各组化合物（10） 1.苯、苯酚 2. 2—丁醇与2—丁酮 六立体化学问题：用R/S标出下列手性碳原子的构型（4分） H3C C Cl Br C H C2H5 C3H7 2 3 3 HBr 6 H5 3生物技术制药期末复习提纲
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