基因枪技术发展近况
2013‐09‐13 科技综述类
第一代基因枪是台式基因枪，其中火药型台式基因枪是基因枪中最原始的类型。最早的基因枪是由美国康奈尔大学Sanford于1987年与该校工程技术专家Wolf及Kallen合作研究出的一种基因转移的新方法。该方法一经发明便在学界崭露头角，Klein等人于1987年最早应用基因枪进行洋葱表皮细胞的转化，并获得了成功。
基因枪自1987年诞生以来得到迅速发展。美国康乃尔大学自1988年先后申报了三个关于基因枪技术的专利（EP 0331 855A2，1988：US Patent Number 4，945，050 July 31，1990：US Patent Number 5，036，006 July 30，1991）。1987‐1990年间，高压放电、压缩气体驱动等各种基因枪相继出现，并都在重复的实践中得到改进和发展。McCabe于1988年将目的基因包于钨粉上，电轰击大豆茎尖分生组织，结果约有2%的组织通过器官发生途径获得再生植株，在子代中检测到了外源基因。1989年气动式基因枪转化烟草等植物获得成功，并且得到了瞬时表达。大麦的转基因技术比起其他植物相对发展速度较慢，直到1989年，Kartha等人用大麦的细胞和组织进行培养，成功检测到报告基因的瞬时表达。
1990年，美国杜邦公司(DuPont Company)推出首款商品基因枪PDS‐1000系统。该仪器是一种“biolistic”台式基因枪,有关的工艺技术是从一个小型的Biolistics公司(负责人来自康乃尔大学)购买的。据康乃尔研究基金会副主席和大学专利及技术市场的负责人W.Haeussler 说,向杜邦公司转让的这个技术是当时康乃尔发明的一次最大交易,将总数228万美元的专利税和研究支持费一次性付给康乃尔大学。当时由伯乐公司(Bio‐Rad Laboratories, Inc.)与杜邦签署的的代工与分销商协议。随后，伯乐公司1992年推出了PDS‐1000/He枪。国内中国科学院生物物理所和清华大学也分别于1989年和1991年推出了新的枪种并申请了专利（中国专利89109334和91207467）。与现在新型手持型基因枪不同，台式基因枪体积偏大，实验场所受限，不能灵活应用于田间地头。高压气体需要抽真空，压缩机工作时噪音较大，而且过高气压推动微粒子轰击使得台式基因枪仅限于细胞转殖而不能用于活体转殖。第一代基因枪的每枪轰击成本也很高，金粉与控制气压用的Rapture disk均造价不菲。
Biorad PDS‐1000/He 台式基因枪 PDS‐1000/He基因枪工作原理图
第二代基因枪出现于1996年，伯乐公司推出了Helios 手持式基因枪。这是历史上最早出现的手持式基因枪。该系统通过可调节的氦气脉冲，来带动位于小塑料管内壁处预包有DNA 、RNA 或其它生物材料的金粉颗粒，将其直接打入细胞内部。与第一代台式基因枪相比，Helios 手持式基因枪摒弃了抽真空压缩机，牺牲了一些气体压力，从而使活体动物转殖成为可能，可以对活体动物的肌肉、皮肤直接进行转殖。因其体积小巧，方便实验人员随身携带，大大地拓宽了基因枪的应用范围。在随后的10年里，Helios 手持式基因枪被广泛应用于由原生质体再生植株较为困难和农杆菌感染不敏感的单子叶植物的基因转殖。在基因枪以前，外源DNA 进入细胞质后很难穿过双层膜的细胞器。用基因枪技术转化这类细胞器，转化频率高，重复性好，是目前该领域研究中最常用和最有效的DNA 导入技术。相比较第一代台式基因枪而言，手持式基因枪由于气体压力较小（仅有100‐600 psi ），而不能穿透成熟叶片的细胞壁，一定程度上影响了其在植物中转基因的应用范围，不过与台式基因枪互补，Helios 很好地延伸了基因枪的应用领域。
同样是利用高压气体传送基因，制作技术的改良使得基因枪从细胞转殖到活体转殖，从台式到手持，一步一步将基因枪的应用范围扩大。首先意识到并积极尝试利用基因枪的生命科学工作者在转基因工作中的科研水平得到了极大提高，转基因工作者的想象力也因此得到了解放。蒸蒸日上的基因枪技术被学界寄予厚望，视为转基因领域的明日之星。不过慢慢地人们发现，活体动物的脏器相比于皮肤、肌肉要脆弱得多，如小鼠活体的肝和脾最多只能承受40psi 的压力，在100psi 的高压气体冲击下器官会被严重破坏而导致实验失败。而过低的气体压力并不能令基因微载体具有足够的动量打入细胞内部。气体压力与粒子传递速度的矛盾成了基因枪发展的瓶颈，这个问题在之后的10年一直困扰着各大生命科学仪器厂商的研发团队。
直到2009年，Wealtec 公司推出GDS ‐80低压基因传递系统（又称：GDS ‐80基因枪）（US Patent Number 6,436,709 B1），引领了第三代基因枪技术发展方向。GDS ‐80手持式基因枪巧妙地从流体动力学与航空动力学入手，使用氦气或氮气于低压状态加速生物分子至极高的速度，完成基因传送，从一个全新的角度解决了气压与粒子速度的矛盾。第三代基因枪的超低压（10‐80 psi ）推动，不仅没有牺牲反而大大增加了微粒子的传输动量，因此不仅使基因枪能够成功应用于仅在低压状态下才能完成的动物活体器官层面转殖；而且相比较于第二代手持式基因枪，GDS ‐80射出的携基因微粒子因为其本身的高动量，居然能够像台式基因枪发射出的粒子一样穿透植物细胞壁穿入植物细胞完成转殖，而在此之前，完成这一工作的第一代台式基因枪需要至少1000‐2000psi 的高压气体。在动物细胞，尤其是活体动物转殖实验中，Helios 基因枪工作原理图
Biorad Helios 手持式基因枪
本身具备高动量的生物粒子毋需借由微粒子载体(如金粒子)的携附方式转移至目标体中，这在避免了靶细胞内异物残留问题的同时，大大降低了实验成本。第三代基因枪的低压传导，使得细胞损害与枪体轰击的噪音都大大减少，并有效地在动物实验中降低了由金粉微载体带来的昂贵开销。GDS ‐80基因枪“子弹”的制备也从干式转为湿式，节省了烘干的时间，简化了流程。
资料来源：
百度百科、网络公开资料 Wealtec GDS ‐80手持式基因枪
GDS ‐80基因枪工作原理图
基因重组技术 学生姓名：赵慧芳学号：20115071261 生命科学学院生物科学专业 指导教师：张海滨职称：教授 摘要：基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。发生在生物体内基因的交换或重新组合。包括同源重组、位点特异重组、转座作用和异常重组四大类。是生物遗传变异的一种机制。基因重组是指非等位基因间的重新组合。能产生大量的变异类型，但只产生新的基因型，不产生新的基因。基因重组的细胞学基础是性原细胞的减数分裂第一次分裂，同源染色体彼此分裂的时候，非同源染色体之间的自由组合和同源染色体的染色单体之间的交叉互换。基因重组是杂交育种的理论基础。基因突变是指基因的分子结构的改变，即基因中的脱氧核苷酸的排列顺序发生了改变，从而导致遗传信息的改变。[1] 关键词：基因重组；特点；分离；纯化 Abstract: Genetic recombination is the result of the fracture and the connection of different DNA strand DNA fragments of exchange and recombination, the formation of new DNA molecule. In organisms of gene exchange or recombine. Including the homologous recombination, site specific restructuring, transfer function and abnormal four categories. Is a mechanism of biological genetic variation. Genetic recombination is refers to the recombination between alleles. Can produce a large number of variation types, but only to create new genotypes, does not produce new genes. Genetic recombination is the cytological basis of the original cells first division of meiosis, homologous chromosomes split each other, not the free combination between homologous chromosomes and the intersection of the chromatids of homologous chromosomes swap. Genetic recombination is the theoretical foundation of the cross breeding. Gene mutation is refers to the change of the molecular structure of the gene, the gene sequence of DNA nucleotides changed, resulting in the change of the genetic information. Keywords: Genetic recombination；feature；separate；purification 1.基因工程的核心
基因诊断和治疗的医学应用 郭龙飞 （保山学院资源环境学院云南保山678000） 摘要：各种癌症和恶性肿瘤是目前危害人类健康最为严重的疾病之一，且死亡率很高，现在还没有一种有效的治疗方法。传统的手术、放疗和化疗等方法对中晚期的患者治疗疗效已经明显不足。因此。找到一种新的治疗癌症和恶性肿瘤的治疗方法对人类健康发展是意义重大的。而基因治疗则是用各种手段从基因水平上来治疗各种疾病。于是，基因治疗为众多患者提供了希望，成为了现在医学界的热门话题。本文就是依据前人的研究成果，以基因治疗癌症和恶性肿瘤为主来论述基因治疗在医学上的应用。 关键词：基因诊断基因治疗癌症恶性肿瘤 1基因治疗概述 基因治疗的基本含义是通过遗传或分子生物学技术在基因水平上治疗各种疾病[1]。它是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞,以纠正基因缺陷或者发挥治疗作用,从而达到治疗疾病的目的。广义的基因治疗是指利用基因药物的治疗,而通常所称狭义的基因治疗是指用完整的基因进行基因替代治疗,一般用DNA序列[2]。它是运用基因工程技术直接纠正肿肿瘤细胞基因的结构及（或）功能缺陷，或者间接通过增强宿主对肿瘤的杀伤力和机体的防御功能来治疗肿瘤。通过外源基因的导入，激活机体抗瘤免疫，增强对肿瘤细胞的识别能力、抑制或阻断肿瘤相关基因的异常表达或增加肿瘤细胞对药物的敏感性，这些基因主要包括细胞因子基因、抗肿瘤基因、肿瘤药物相关基因和病毒基因等[3]。 目前基因治疗的方式(type of gene therapy)主要有3种：①基因矫正或置换：即对缺陷基因的异常序列进行矫正，对缺陷基因精确地原位修复，或以正常基因原位置换异常基因，因此不涉及基因组的任何改变。②基因增补：不去除异常基因，而是通过外源基因的导人，使其表达正常产物，从而补偿缺陷基因的功能。③基因封闭：有些基因异常过度表达，如癌基因或病毒基因可导致疾病，可用反义核酸技术、核酶或诱饵转录因子来封闭或消除这些有害基因的表达[4]。 2基因诊断应用 2.1基因诊断新生儿脊髓性肌萎缩 目前报道有一些较严重的SMA I型患儿会出现关节挛缩、骨折、呼吸困难和感觉神经元受损的表现，但机制还不清楚，可能与5ql3缺失大小有关。SMA尚无特异的治疗方法，临床主要是对症治疗，如早期发现SMA患儿呼吸系统受累并干预性通气治疗可以延长疾病的病程、改善患儿生活质量、减少肺部继发性感染及呼吸衰竭发生。本例患儿经抗炎、吸氧、吸痰、补充维生素、给予丙种球蛋白等对症治疗和支持治疗，呼吸困难逐渐缓解，双肺痰鸣音减少，但最终家长考虑远期预后不良而放弃治疗[5]。 最近，在体外实验研究中发现丁酸纳、丙戊酸和Htra—ISl的调节因子可以增加SMN2基蛋白的作用，而且对细胞几乎没有毒性作用，但研究工作还处于动物实验阶段，没有正式应用于临床，该类药物可能为SMA的治疗开辟了新的途径[5]。 2.2早期胰腺藩的基因诊断 近年来，胰腺癌的发病率和死亡率呈逐渐上升趋势，每年有新发病例约20万人，占全部恶性肿瘤发病的2％。其发病匿，早期缺乏特异表现，恶性程度高，极易出现转移，80％-90％的胰腺癌病人就诊时，已经到了晚期，手术切除率只有15％，年生存率为1％-5％。而早期胰腺癌的手术切除率为90-100％，5年生存率可达70％- 100％。另有研究表明，肿瘤的大小是重要的生存率预测因子，如果直径 安全技术措施计划概述 ?安全技术措施计划是企业计划的重要组成部分，是有计划地改善劳动条件的重要手段，也是做好劳动保护工作、防止工伤事故和职业病的重要措施。 ??在社会主义生产建设过程中，有计划地改善劳动条件，是我们党和国家的一贯政 ? ?? 作纳入国家和企业的生产建设计划中，有计划有步骤地解决企业中一些重大安全技术问题，使企业劳动条件的改善逐步走向计划化和制度化；也可以更合理使用资金，使国家在改善劳动条件方面的投资发挥最大的作用。安全技术措施所需要的经费、设备器材以及设计、施工力量等纳入了计划，就可以统筹安排、合理使用。制订和实施安全技术措施计划是一项领导与群众相结合的工作。一方面企业各级领导对编 制与执行措施计划要负起总的责任；另一方面，又要充分发动群众，依靠群众，群策群力，才能使改善劳动条件的计划很好实现。这样，在计划执行过程中，既可鼓舞职工群众的劳动热情，也更好地吸引职工群众参加安全管理，发挥职工群众的监督作用。 ?一、编制安全技术措施计划的依据?? ??? ??《关 ? ??1977年国家计委、财政部、国家劳动总局在《关于加强有计划改善劳动条件工作的联合通知》中规定，要把改善劳动条件的问题列入发展国民经济的长远规划和年度计划，采取行之有效的措施，认真予以解决。1979年国家计委、国家经委、国家建委在《关于安排落实劳动保护措施经费的通知》中规定，在制订年度和长远的生产建设计划以及老企业改造计划时，都要保障安全生产，合理解决安全生产和尘毒 危害问题所需资金、设备、材料，必须一并安排落实。国家劳动总局、全国总工会颁布的《安全技术措施计划的项目总名称表》对安全技术措施计划的范围作了明确的规定。归纳起来，编制安全技术措施计划的依据有5点：①国家公布的安全生产法令、法规和各产业部门公布的有关安全生产的各项政策、指示等；②安全检查中发现的隐患；③职工提出的有关安全、工业卫生方面的合理化建议；④针对工伤事 第1章网络安全概述 练习题 1.选择题 （1）在短时间内向网络中的某台服务器发送大量无效连接请求，导致合法用户暂时无法访问服务器的攻击行为是破坏了（ C ）。 A．机密性B．完整性 C．可用性D．可控性 （2）Alice向Bob发送数字签名的消息M，则不正确的说法是( A ) 。 A．Alice可以保证Bob收到消息M B．Alice不能否认发送消息M C．Bob不能编造或改变消息M D．Bob可以验证消息M确实来源于Alice （3）入侵检测系统(IDS，Intrusion Detection System)是对( D )的合理补充，帮助系统对付网络攻击。 A．交换机B．路由器C．服务器D．防火墙（4）根据统计显示，80%的网络攻击源于内部网络，因此，必须加强对内部网络的安全控制和防范。下面的措施中，无助于提高局域网内安全性的措施是( D )。 A．使用防病毒软件B．使用日志审计系统 C．使用入侵检测系统D．使用防火墙防止内部攻击 2. 填空题 （1）网络安全的基本要素主要包括机密性、完整性、可用性、可控性与不可抵赖性。 （2）网络安全是指在分布式网络环境中，对信息载体（处理载体、存储载体、传输载体）和信息的处理、传输、存储、访问提供安全保护，以防止数据、信息内容遭到破坏、更改、泄露，或网络服务中断或拒绝服务或被非授权使用和篡改。 （3）网络钓鱼是近年来兴起的另一种新型网络攻击手段，黑客建立一个网站，通过模仿银行、购物网站、炒股网站、彩票网站等，诱骗用户访问。 （4）防火墙是网络的第一道防线，它是设置在被保护网络和外部网络之间的一道屏障，以防止发生不可预测的、潜在破坏性的入侵， （5）入侵检测是网络的第二道防线，入侵检测是指通过对行为、安全日志或审计数据或其他网络上可以获得的信息进行操作，检测到对系统的闯入或闯入的企图。 第四节基因突变和基因重组 第2课时基因重组和重组DNA技术 【自主学案】 1．基因重组 （1）概念：生物体在进行________的过程中，控制不同性状的________重新组合的过程。 （2）基因重组的类型 ①自由组合型：生物体在________，非同源染色体上的非等位基因发生自由组合。 ②交叉互换型：生物体在________，同源染色体上的非姐妹染色单体之间交换片段，使得染色单体上的基因发生重新组合。 【思维激活】基因重组有什么意义呢？ 2．重组DNA技术 （1）概念：将从一个生物体内分离得到或人工合成的________入另一个生物体中，使后者获得________或________的技术。 （2）重组DNA技术的一般过程 ①分离目的基因：从生物细胞内直接________，获得目的基因。 ②选择基因工程载体：运载目的基因需要载体，常用的载体有________等。 ③重组DNA技术的基本步骤：体外重组DNA→________→________→目的基因表达。 【思维激活】具备什么条件才能充当载体？ 【典题精析】 重点一：基因重组的理解 例1．以下有关基因重组的叙述，错误的是（） A．非同源染色体的自由组合能导致基因重组 B．非姊妹染色单体的交换可引起基因重组 C．纯合体自交因基因重组导致子代性状分离 D．同胞兄妹的遗传差异与父母基因重组有关 解析：基因重组主要指减数分裂过程中非同源染色体上的非等位基因发生自由组合和同源染色体上的非姐妹染色单体间的交叉互换。纯合体自交后代不发生性状分离。 答案：C 重点二：重组DNA技术技术的操作工具 例2．下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是（） A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶能识别和切割RNA C．限制性内切酶的活性受温度的影响 D．限制性内切酶可以从原核生物中提取 解析：限制性内切酶主要从原核生物中分离纯化出来。它们能够识别一种特定的脱氧核苷酸序列，别且使每条链中特定部位的两个核苷酸间的磷酸二酯键断开。 答案：B 【学生自测】 1．进行有性生殖的生物，其亲子代之间总是存在着一定差异的主要原因是（） A．基因重组 B．基因突变C．染色体变异 D．环境条件的改变 2．下列有关基因重组叙述的说法，错误的是（） A．基因重组发生在减数分裂过程中 B．基因重组产生原来没有的新基因 C．基因重组是形成生物多样性的重要原因之一 D．基因重组能产生原来没有的新性状 3．要将目的基因与载体连接起来，在基因操作中应选用（）A．只需DNA连接酶 B．同一种限制酶和DNA连接酶 C．只需限制酶 D．不同的限制酶和DNA连接酶 4．下列有关基因工程技术的叙述中正确的是（） A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体 B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 基因诊断试题 ————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期: (一）选择题 A型题 １．判定基因结构异常最直接的方法是 A．PCR法 B．核酸分子杂交 C．DNＡ序列测定 Ｄ．RFLP分析 E．ＳSCP分析 2．不符合基因诊断特点的是 A.特异性强 B．灵敏度高 C.易于做出早期诊断 Ｄ．样品获取便利 E．检测对象仅为自体基因 ３．遗传病基因诊断的最重要的前提是 A.了解患者的家族史 B.疾病表型与基因型关系已被阐明 C.了解相关基因的染色体定位 Ｄ．了解相关的基因克隆和功能分析等知识 E.进行个体的基因分型 ４.若要采用Soutｈern或Ｎｏrthern印迹方法分析某特定基因及其表达产物,需要 A．制备固定在支持物上的组织或细胞 B.收集组织或细胞样品，然后从中提取总DNA或ＲNＡ Ｃ．利用PCＲ技术直接从标本中扩增出待分析的片段Ｄ．收集组织或细胞样品,然后从中提取蛋白质 Ｅ.收集培养细胞的上清液 5．目前基因诊断常用的分子杂交技术不包括哪一项A．Sｏuthern印迹 B.Wｅsterｎ印迹 Ｃ.Noｒthern印迹 D．ＤＮA芯片技术 E．等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 6.SNP的实质是 Ａ．碱基缺失 B.碱基插入 C.碱基替换 D．移码突变 E．转录异常 ７.DNＡ指纹的遗传学基础是 Ａ.连锁不平衡 B.DNA的多态性 Ｃ.串联重复序列 D．MHC的限制性 E．ＭHC的多样性 8．在对临床病例进行基因诊断时，若遇到不能检测出已知类型突变的情况，如果表型明确指向某种疾病,适用下列哪一类筛查技术 A．PCR法 B．AＳO分子杂交 Ｃ.反向点杂交 D．变性高效液相色谱(DＨPLC） E．ＳTR拷贝异常的诊断 9.生殖细胞若发生基因结构突变可引起哪种疾病 A.肿瘤 Ｂ．高血压 Ｃ．糖尿病 D．遗传病 Ｅ．传染病 10.PCR技术容易出现 Ａ.假阴性结果 B．假阳性结果 C.灵敏度不高 D．适用不广 Ｅ．操作繁冗 1１．目前检测血清中乙肝病毒最敏感的方法是 A.斑点杂交试验 B.等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 C．Sｏutｈern印迹 第十二章安全生产技术保证措施 为保证工程顺利进行，坚决贯彻“安全第一，预防为主”的国家安全生产方针，严格遵守国家、建设部、哈尔滨市的有关职业健康安全生产的政策及有关规定，切实保障职工在生产过程中的安全与健康。 第一节施工安全生产目标 本工程施工安全生产目标为：“五无一杜绝”，“一创建”。 “五无”即：无工伤死亡事故，无重大交通事故和机械事故，无火灾、洪灾事故，无倒塌事故，无中毒事故； “一杜绝”即：杜绝重伤事故； “一创建”即：创建安全质量标准化工地。 第二节安全生产保证体系 ⑴组织保证 成立由项目经理、项目副经理、项目总工程师、专职安全工程师组成的安全领导小组，其中，项目经理为第一责任人，项目副经理为安全生产的直接责任人，项目总工程师为技术负责人，专职安全工程师负责安全工作的落实，督促工人按有关安全规定进行生产。各施工队设专职安全员，各班组设兼职安全员管理本辖区日常的安全工作。 ⑵制度保证 建立健全安全生产管理制度，有组织、有领导地开展安全管理活动。建立安全教育制度、安全考核制度、安全检查制度、事故分析制度、安全奖惩制度等。由各级安全组织监督检查，形成上下齐抓共管的安全管理网络，做到安全工作层层有人抓，工前有布置，工中有落实，工后有讲评。营造“安全生产，人人有责”的良好氛围。 ⑶责任保证 实行安全生产责任制，实行注册安全责任制。建立各级各部位安全岗位责任制，将岗位责任制与经济挂钩，切实落实各级管理人员和操作人员的安全职责。 第三节主要施工项目安全技术措施 ⑴施工现场安全技术措施 ①施工现场的布置须符合防火、防风、防雷、防洪、防触电等安全规定及安全月施工的要求，施工现场的生产、生活用房、仓库、材料堆放场、修理间、停车场等须按建设单位批准的总平面布置图进行统一布置。 ②现场道路平整、坚实、畅通，危险地点须悬挂按照有关规范规定的标牌，夜间有人经过的坑、洞须设红灯示警，现场道路须符合《工厂企业厂内运输安全规程》GB4378-84 的规定，施工现场设置大幅安全宣传标语。 ③现场的生产、生活区要设足够的消防水源和消防设施网点，消防器材专人管理不得乱拿乱动，并组成一个由15-20 人的义务消防队，所有施工人员均熟悉并掌握消防设备的性能和使用方法。 ④各类房屋、库棚、料场等的消防安全距离符合管理部门的规定，室内不得堆放易燃品。严禁在木工加工场、料库等处吸烟；现场的易燃杂物随时清除； 严禁在有火种的场所或其近旁堆放。 ⑤氧气瓶不得沾染油脂，乙炔发生器必须有防止回火的安全装置，氧气瓶与乙块发生器要隔离存放。 ⑥施工现场临时用电，严格按《施工现场临时用电安全技术规范》的有关规定执行。 ⑦临时用电线路的安装、维修、拆除，均由经过培训并取得上岗证的电工完成，非电工不准进行电工作业。 ⑧电缆线路须采用“三相五线”接线方式，电气设备和电气线路必须绝缘良好。 ⑨室内配电柜、配电箱前要有绝缘垫，并安装漏电保护装置。 ⑩各类电器开关和设备的金属外壳，均设接地或接零保护。 ⑾防火、防雨配电箱，箱内不得存入杂物并设门加锁，专人管理。 ⑿移动的电气设备的供电线使用橡胶电缆，穿过场内行车道时，穿管埋地敷设，破损电缆不得使用。 ⒀检修电气设备时必须停电作业，电源箱或开关握柄上挂“有人操作、严禁合闸”的警示牌并设专人看管。必须带电作业时要经有关部门批准。 基因测序技术的优缺点及应用 随着人类基因组计划的完成,人类对自身遗传信息的了解和掌握有了前所未有的进步。与此同时,分子水平的基因检测技术平台不断发展和完善,使得基因检测技术得到了迅猛发展,基因检测效率不断提高。从最初第一代以 Sanger 测序为代表的直接检测技术和以连锁分析为代表的间接测序技术,到 2005 年,以Illumina 公司的 Solexa技术和 ABI 公司的 SOLiD 技术为标志的新一代测序 (next-generation sequencing,NGS) 的相继出现,测序效率明显提升,时间明显缩短,费用明显降低,基因检测手段有了革命性的变化。其技术正向着大规模、工业化的方向发展,极大地提高了基因检测的检出率,并扩展了疾病在基因水平的研究范围。2009 年 3 月,约翰霍普金斯大学的研究人员在《Science》杂志上发表了通过 NGS外显子测序技术,发现了一个新的遗传性胰腺癌的致病基因PALB2,标志着 NGS 测序技术成功应用于致病基因的鉴定研究。同年,《Nature》发表了采用 NGS 技术发现罕见弗里曼谢尔登综合征MYH3 致病基因突变和《Nat Genet》发表了遗传疾病米勒综合征致病基因。此后,通过 NGS 技术,与遗传相关的致病基因不断被发现,NGS 技术已成为里程碑式的进步。2010 年,《Science》杂志将这一技术评选为当年“十大科学进展”。 近两年,基因检测成为临床诊断和科学研究的热点,得到了突飞猛进和日新月异的发展,越来越多的临床和科研成果不断涌现出来。同时,基因检测已经从单一的遗传疾病专业范畴扩展到复杂疾病和个体化应用更加广阔的领域,其临床检测范围包括高危疾病的新生儿筛查、遗传疾病的诊断和基因携带的检测以及基因药物检测用于指导个体化用药剂量、选择和药物反应等诸多方面的研究。目前,基因检测在临床诊断和医学研究的应用正越来越受到医生的普遍重视和引起研究人员的极大的兴趣。 本文介绍了几种 DNA 水平基因检测常见的方法,比较其优缺点和在临床诊断和科学研究中的应用,对指导研究生和临床医生课外学习,推进临床科研工作和提升科研教学水平有着指导意义。 1、第一代测序 1.1 Sanger 测序采用的是直接测序法。1977年,Frederick Sanger 等发明了双脱氧链末端终止法,这一技术随后成为最为常用的基因测序技术。2001 年,Allan Maxam 和 Walter Gibert 发明了 Sanger 测序法,并在此后的 10 年里成为基因检测的金标准。其基本原理即双脱氧核苷三磷酸(dideoxyribonucleoside triphosphate,ddNTP) 缺乏PCR 延伸所需的 3'-OH,因此每当 DNA 链加入分子 ddNTP,延伸便终止。每一次 DNA 测序是由 4个独立的反应组成,将模板、引物和 4 种含有不同的放射性同位素标记的核苷酸的ddNTP 分别与DNA 聚合酶混合形成长短不一的片段,大量起始点相同、终止点不同的 DNA 片段存在于反应体系中,具有单个碱基差别的 DNA 序列可以被聚丙烯酰胺变性凝胶电泳分离出来,得到放射性同位素自显影条带。依据电泳条带读取DNA 双链的碱基序列。 人类基因组的测序正是基于该技术完成的。Sanger 测序这种直接测序方法具有高度的准确性和简单、快捷等特点。目前,依然对于一些临床上小样本遗传疾病基因的鉴定具有很高的实用价值。例如,临床上采用 Sanger 直接测序 FGFR 2 基因证实单基因 Apert 综合征和直接测序 TCOF1 基因可以检出多达 90% 的 分生—重组DNＡ技术试题 一、单选 1、在分子生物学领域,分子克隆主要就是指（ ) A、DNA得大量复制 B、ＤNA得大量转录 C、DＮＡ得大量剪切 D、RNA得大量反转录 E、RＮＡ得大量剪切 2、在分子生物学领域,重组DNA又称( ) A、酶工程 B、蛋白质工程 C、细胞工程Ｄ、基因工程 E、DNA工程 ３、在重组DＮA技术中,不常用到得酶就是( ） A、限制性核酸内切酶Ｂ、ＤNＡ聚合酶C、ＤNＡ连接酶 D、反转录酶 E、ＤNA解链酶 4、多数限制性核酸内切酶切割后得DＮＡ末端为（） Ａ、平头末端Ｂ、３突出末端 C、5突出末端 D、粘性末端 E、缺口末端５、可识别DNA得特异序列,并在识别位点或其周围切割双链ＤＮA得一类酶称为( ） A、限制性外切核酸酶Ｂ、限制性内切核酸酶Ｃ、非限制性外切核酸酶 D、非限制性内切核酸酶 E、DNＡ内切酶 6、ＣDNA就是指（ ) A、在体外经反转录合成得与ＲNA互补得DNA B、在体外经反转录合成得与DNＡ互补得ＤNA C、在体外经转录合成得与ＤNＡ2补得RNA D、在体内经反转录合成得与RNA互补得DNA E、在体内经转录合成得与DＮA互补得RNA 7、基因组代表一个细胞或生物体得( ） A、部分遗传信息 B、整套遗传信息 C、可转录基因 D、非转录基因 E、可表达基因 ８、在基因工程中通常所使用得质粒存在于( ) A、细菌染色体 B、酵母染色体 C、细菌染色体外 Ｄ、酵母染色体外E、以上都不就是 9、就分于结构而论,质粒就是（） A、环状双链ＤNA分子 B、环状单链ＤNA分于 C、环状单链RNＡ分子 D、线状双链DNA分子 E、线状单链DNA分子 1０、聚合酶链反应可表示为( ) Ａ、PEＣ B、PER C、PDR Ｄ、BCR E、PＣR 11、在已知序列信息得情况下,获取目得基因得最方便方法就是( ) A、化学合成法 B、基因组文库法 C、CDNＡ文库法 D、聚合酶链反应Ｅ、差异显示法 １2、重组DNA得基本构建过程就是将( ) A、任意两段ＤNＡ搂在一起 B、外源DNＡ接入人体ＤNA C、目得基因接人适当载体Ｄ、目得基因接入哺乳类ＤNA E、外源基因接人宿主基因 1３、ECoRI切割ＤＮA双链产生( ） A、平端Ｂ、5’突出粘端 C、３’突出粘端 D、钝性末端Ｅ、配伍末端 14、催化聚合酶链反应得酶就是( ) A、ＤＮA连接酶 B、反转录酶 C、末端转移酶 D、碱性磷酸酶 E、TaqＤNＡ聚合酶 15、将ＰstI内切酶切割后得目得基因与用相同内切酶切割后得载体ＤNＡ连接属( ) A、同聚物加尾连凑 B、人工接头连接 C、平端连接 D、粘性末端连接 Ｅ、非粘性末端连接 16、限制性核酸内切酶切割DNA后产生( ) A、3磷酸基末端与5羟基末端 B、5磷酸基末端与３羟基末端 C、３磷酸基末端与５磷酸基末端 D、5羟基末端与3羟基末端 E、3羟基末端、５羟基末端与磷酸 17、重组ＤNＡ技术中实现目得基因与载体DNＡ拼接得酶就是( ) Ａ、ＤNA聚合酶 B、RNA聚合酶Ｃ、DNＡ连接酶Ｄ、RＮＡ连接酶 E、限制性核酸内切酶 １8、以质粒为载体。将外源基因导入受体菌得过程称( ） Ａ、转化Ｂ、转染C、感染 D、转导 E、转位 基因治疗在疾病防治中的应用 120311102 张宇鑫 [摘要] 传染病是目前人类所面临的一类重大疾病，在某些疾病状态下，人类还未寻找到理想的治疗方法，如病毒感染等。现代基因治疗是一种应用基因工程技术和分子遗传学原理，对人类疾病进行治疗的新疗法。主要是指对致病基因的修正和基因增强及采用外源性细胞因子基因、核酶、基因药物进行疾病治疗的方法。经过多年的发展，技术逐步走向成熟，在传染性疾病的防治中显示了重大的临床应用前景。传染性疾病的基因治疗包括：基因疫苗、RNA干扰、反义技术、药物靶向治疗等。 [关键词] 基因疫苗反义技术药物靶向治疗 一、现状 1.1我国传染病预防现状 21世纪人类依然面临着传染病的挑战，就全球而言，艾滋病是当前首恶，由于其病毒极易发生变异，所以到目前为止疫苗仍在试验阶段，缺乏理想的特效药物，免疫损伤治疗难度大。我国2003年比2002年发病率上升44．39%，人类免疫缺陷病毒检出率提高了55％。并且防治工作面临来自传统传染病和新发传染病的双重压力：传统传染病威胁持续存在，新发传染病不断出现。近10年来，我国几乎每一两年就有1种新发传染病出现，许多新发传染病起病急，早期发现及诊断较为困难，缺乏特异性防治手段，早期病死率较高。其次，人口大规模流动增加了防治难度，预防接种等防控措施难于落实。三是环境和生产生活方式的变化增加了传染病防治工作的复杂性。一些地区令人堪忧的城乡环境卫生状况，以及传统的生产生活方式，使一些人畜共患病持续发生。 1.2基因治疗研究的现状 (1) 复合免疫缺陷综合征的基因治疗 1991年美国批准了人类第一个对遗传病进行体细胞基因治疗的方案，即将腺苷脱氨酶（ADA）采用反转录病毒介导的间接法导入一个4岁患有严重复合免疫缺陷综合征（SCID）的女孩，大约1－2月治疗一次，8个月后，患儿体内ADA水平达到正常值的25%，未见明显副作用。此后又进行第2例治疗获得类似的效果。 (2)黑色素瘤的基因治疗 对肿瘤进行基因治疗是人们早已期望的事，在进行了多方面探索的基础上，发现了肿瘤浸润淋巴细胞（即能在肿瘤部位持续存在而无副作用的一种淋巴细胞）在肿瘤治疗中的作用。于1992年实施了TNF/肿瘤细胞和IL－2/肿瘤细胞方案，即分别将IL－2基因肿瘤坏死细胞（TNF）基因导入取自患者自身并经培养的肿瘤细胞，再将这些培养后的肿瘤细胞注射至病人臀部，3周后切除注射部位与其引流的淋巴结，在适合条件下培养T细胞，将扩增的T细胞与IL－2合并用于病人，结果5名黑色素瘤病人中1名肿瘤完全消退，2名90%的肿瘤消退，另2人在治疗后9个月死亡。由于携有TNF的TIL可积于肿瘤处，因而TIL的应用提高了对肿瘤的杀伤作用。 上山掘进安全技术措施 一、概述 煤(岩)层：该巷道设计在L7灰岩中掘进。 用途：十一水平及以下各工作面的回风。 设计长度为143m，总工程量为143m，坡度为26° 二、巷道布置 巷道断面设计为半圆拱形断面，半径R=1.4m，直墙高为1.1m，净宽2.8m，净高2.5m。 该巷道设计长度为143m，斜巷开拓，以200°方位掘进上山,计总工程量为143m。 向上掘进时必须每隔40m掘进一个躲避硐。躲避硐规格为净高1.5m，净深1.5m，净宽1.5m。 三、支护设计 巷道支护设计为锚网喷浆支护： ①锚杆的间排距为700mm×800mm。 ②采用高强度金属网。 ③喷层厚度不小于100mm。 四、支护工艺 1、锚杆的类型及安装要求 ⑴打眼使用专用钻杆，使用直径为28mm的钻头，不得使用其它型号钻头，打眼时保证锚杆与巷道壁垂直或与岩面夹角≮75°； ⑵钻孔的深度要求：锚杆长度2.0m，锚杆眼深1.9～2.0m，其眼深误差不超过20mm，特殊地段必须采用2.5m的锚杆； ⑶安装锚杆前要用风管吹净眼内的岩粉； ⑷每个锚杆眼安装树脂药卷两节，并用钻头搅拌缓慢送入，时间控制在20～30秒送到位； ⑸每根锚杆外露部分不得超过50mm，锚杆的锚固力≮60KN； ⑹锚杆的间排距为700mm×800mm； ⑺挂网时，两金属网的边缘要互相连接好，并且用钢垫和锚杆压好。 2、喷射混凝土的技术要求及参数 ⑴混凝土成份：425#水泥，粒度5～10mm的石子，砂子为中粒，其配合比：水泥： 水：砂子=1：2：2； ⑵速凝剂：用量为水泥用量的3～4%； ⑶混凝土的厚度不小于100mm； ⑷喷射混凝土采用转子N型的喷浆机； ⑸喷射距离：喷浆机距迎头不能超过40m，喷头与受喷面之间必须保持0.8～1.2m 的距离； ⑹喷浆前对工作面范围进行全面检查，敲帮问顶，打掉活矸、危岩。排尽迎头积水，清理现场，检查各种防尘设施以及个人防护用品是否完好、齐全； ⑺喷浆前要进行质量检查，依据巷道的规格要求，全面检查受喷段尺寸状况，锚杆安装和金属网铺设是否符合设计要求，发现问题及时处理。对受喷段岩面凸凹不平位置，要用手镐或风镐尽量找平。用手镐或风镐切齐直墙，清理出喷射基础，使其达到设计深度； ⑻喷射前，工作范围内的巷道洒水冲洗干净； ⑼喷浆顺序：从基础开始，自下而上，由后向前，先填凹找平后，再按正规操作进行； ⑽喷射手要掌握好喷射角度，喷嘴力求垂直岩面。喷墙时其喷射角度以下俯10°～15°为宜，喷正顶时其最小仰角为65°。 ⑾喷射时，应根据风压大小和回弹情况，及时调整喷射距离，喷头距受喷面的距离一般为0.8～1.2m； ⑿采用划圈喷射法，即喷出料以一圈压半圈，呈螺旋状沿横向由下向上，反复运动，圈径以200～250mm为宜； ⒀初喷紧跟迎头，初喷厚度≮50mm，复喷距迎头≯10m，喷厚不小于设计数值； ⒁复喷24小时后要洒水养护，并做好养护记录。 五、凿岩方式 一、施工方式 1、破岩方法：钻眼爆破法 2、支护：上锚杆、挂网、初喷、复喷 3、装矸：采用耙矸机将矸石装入矿车 4、运输方式：电瓶车牵引矿车运矸 5、施工方案：一次成型、复喷 6、钻具：YT-28或YT-24气腿式凿眼机，B22、B25小钎杆，38mm钻头凿炮孔。 网络安全技术第1章网络安全概述习题及答案 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII 第1章网络安全概述 练习题 1.选择题 （1）在短时间内向网络中的某台服务器发送大量无效连接请求，导致合法用户暂时无法访问服务器的攻击行为是破坏了（ C ）。 A．机密性B．完整性 C．可用性D．可控性 （2）Alice向Bob发送数字签名的消息M，则不正确的说法是( A ) 。 A．Alice可以保证Bob收到消息M B．Alice不能否认发送消息M C．Bob不能编造或改变消息M D．Bob可以验证消息M确实来源于Alice （3）入侵检测系统(IDS，Intrusion Detection System)是对( D )的合理补充，帮助系统对付网络攻击。 A．交换机B．路由器C．服务器D．防火墙（4）根据统计显示，80%的网络攻击源于内部网络，因此，必须加强对内部网络的安全控制和防范。下面的措施中，无助于提高局域网内安全性的措施是( D )。 A．使用防病毒软件B．使用日志审计系统 C．使用入侵检测系统D．使用防火墙防止内部攻击 2. 填空题 （1）网络安全的基本要素主要包括机密性、完整性、可用性、可控性与不可抵赖性。 （2）网络安全是指在分布式网络环境中，对信息载体（处理载体、存储载体、传输载体）和信息的处理、传输、存储、访问提供安全保护，以防止数据、信息内容遭到破坏、更改、泄露，或网络服务中断或拒绝服务或被非授权使用和篡改。 （3）网络钓鱼是近年来兴起的另一种新型网络攻击手段，黑客建立一个网站，通过模仿银行、购物网站、炒股网站、彩票网站等，诱骗用户访问。 网络安全技术综述 研究目的： 随着互联网技术的不断发展和广泛应用，计算机网络在现代生活中的作用越来越重要，如今，个人、企业以及政府部门，国家军事部门，不管是天文的还是地理的都依靠网络传递信息，这已成为主流，人们也越来越依赖网络。然而，网络的开放性与共享性容易使它受到外界的攻击与破坏，网络信息的各种入侵行为和犯罪活动接踵而至，信息的安全保密性受到严重影响。因此，网络安全问题已成为世界各国政府、企业及广大网络用户最关心的问题之一。 21世纪全世界的计算机都将通过Internet联到一起，信息安全的内涵也就发生了根本的变化。它不仅从一般性的防卫变成了一种非常普通的防范，而且还从一种专门的领域变成了无处不在。当人类步入21世纪这一信息社会、网络社会的时候，我国将建立起一套完整的网络安全体系，特别是从政策上和法律上建立起有中国自己特色的网络安全体系。 网络安全技术指致力于解决诸如如何有效进行介入控制，以及何如保证数据传输的安全性的技术手段，主要包括物理安全分析技术，网络结构安全分析技术，系统安全分析技术，管理安全分析技术，及其它的安全服务和安全机制策略。在网络技术高速发展的今天，对网络安全技术的研究意义重大，它关系到小至个人的利益，大至国家的安全。对网络安全技术的研究就是为了尽最大的努力为个人、国家创造一个良好的网络环境，让网络安全技术更好的为广大用户服务。 研究意义： 一个国家的信息安全体系实际上包括国家的法规和政策,以及技术与市场的发展平台.我国在构建信息防卫系统时,应着力发展自己独特的安全产品,我国要 想真正解决网络安全问题,最终的办法就是通过发展民族的安全产业,带动我国网络安全技术的整体提高。信息安全是国家发展所面临的一个重要问题.对于这个问题,我们还没有从系统的规划上去考虑它,从技术上,产业上,政策上来发展它.政府不仅应该看见信息安全的发展是我国高科技产业的一部分,而且应该看到,发展安全产业的政策是信息安全保障系统的一个重要组成部分,甚至应该看到它对我国未来电子化,信息化的发展将起到非常重要的作用。 第二十一章基因诊断与基因治疗 基因诊断与基因治疗能够在比较短的时间从理论设想变为现实，主要是由于分子生物学的理论及技术方法，特别是重组DNA技术的迅速发展，使人们可以在实验室构建各种载体、克隆及分析目标基因。所以对疾病能够深入至分子水平的研究，并已取得了重大的进展。因此在20世纪70年代末诞生了基因诊断(gene diagnosis)；随后于1990年美国实施了第一个基因治疗(gene therapy)的临床试验方案。可见，基因诊断和基因治疗是现代分子生物学的理论和技术与医学相结合的范例。 第一节基因诊断 一. 基因诊断的含义 传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断。现知各种表型的改变是由基因异常造成的，也就是说基因的改变是引起疾病的根本原因。基因诊断是指采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA水平）或功能（RNA水平）是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。基因诊断有时也称为分子诊断或DNA诊断(DNA diagnosis)。基因诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态，从而可以对表型正常的携带者及某种疾病的易感者作出诊断和预测，特别对确定有遗传疾病家族史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义。 二. 基因诊断的原理及方法 （一）基因诊断的原理 疾病的发生不仅与基因结构的变异有关，而且与其表达功能异常有关。基因诊断的基本原理就是检测相关基因的结构及其表达功能特别是RNA产物是否正常。由于DNA的突变、缺失、插入、倒位和基因融合等均可造成相关基因结构变异，因此，可以直接检测上述的变化或利用连锁方法进行分析，这就是DNA诊断。 对表达产物mRNA质和量变化的分析为RNA诊断(RNA diagnosis)。 （二）基因诊断的方法 基因诊断是以核酸分子杂交(nucleic acid molecular hybridization)和聚合酶链反应（PCR）为核心发展起来的多种方法，同时配合DNA序列分析，近年新兴的基因芯片可能会发展成为一种很有用的基因诊断方法。 1.DNA诊断 常用检测致病基因结构异常的方法有下列几种。 ⑴斑点杂交：根据待测DNA 样本与标记的DNA探针杂交的图谱，可以判断目标基因或相关的DNA片段是否存在，根据杂交点的强度可以了解待测基因的数量。 ⑵等位基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide probe, ASO probe）杂交：是一种检测基因点突变的方法，根据点突变位点上下游核苷酸序列，人工合成约19个核苷酸长度的片段，突变的碱基位于当中，经放射性核素或地高辛标记后可作为探针，在严格杂交条件下，只有该点突变的DNA样本，才出现杂交点，即使只有一个碱基不配对，也不可能形成杂交点。一般尚合成正常基因同一序列，同一大小的寡核苷酸片段作为正常探针。如果受检的DNA样本只能与突变ASO探针，不与正常ASO探针杂交，说明受检二条染色体上的基因都发生这种突变，为突变纯合子；如果既能与突变ASO探针又能与正常ASO探针杂交， 人工运料安全技术措施 一、概述 为加强施工安全，保证掘进迎头人工运料作业安全，根据现场情况特制定如下措施。 二、运送物料明细 人工搬运物料明细： 第一类：W钢带、网片、锚索托盘、锚杆托盘、锚杆、梯子梁、槽钢托梁、锚杆钻机、锚索钻机等施工工器具。 第二类：轨道、钢管、金属单体液压支柱、锚索及其它设备配件等。 三、施工方法 第一类物料：采用人工搬或肩扛的方法运输。 第二类物料：轨道、钢管、单体支柱等无极绳绞车不能运达时，采用专用滑动运输工具沿已铺设好轨道拖运；锚索采用人工拖运的方法运输；减速机、电机、水泵等设备可采用滑动平板小车或旱船拖运。 四、施工安全技术措施 （一）运输物料要求 第一类物料：运输梯子梁一次不得超过5根；锚索托盘一次不得超过3块；锚杆托盘一次不得超过10块；金属菱形网、塑料网一次不得超过2捆、钢筋网不超过3片；锚杆一次不得超过5根；梯子梁不超过2根，槽钢托梁1块。 运输前，必须分别将以上物料采用12#铅丝或尼龙绳按规定数量捆绑牢固。 第二类物料：每次运输不少于3人，并且最多允许运送2节（根）；锚索人工拖运一次不得超过2根；较重设备配件必须单独拖运。 运料施工前，必须由班组长对运输路线进行安全确认，保证巷道 支护牢固、路线畅通。每个作业人员必须将安全帽、帽带戴好、系紧，将矿灯置于安全帽上灯卡内，灯线甩在身后，衣袖扣、腰带需系紧、系严，以保证作业安全。 （二）物料运输安全技术措施 1、抬运大件时，首先检查行走路线的支护情况，如有隐患必须及时排除后，方可抬运。每次斜坡人工运输作业前，必须由当班班长负责对运输线路进行确认，确认路线内无任何人员，没有煤（矸）块及其它影响运输作业的物料，如果有影响运输作业的障碍物必须清理干净。 2、斜坡（大于15°）拖运时坡底安排专人站岗，严禁任何人员进入，否则严禁运输。 3、两人合力肩扛物料时要有统一口令、同时用力、同时同侧上肩、同时放下物料。用手抓物料时一定要抓牢，避免抓滑出现意外。物料运送到指定地点后一定要分类轻放码放整齐，严防猛扔摔坏物料或弹伤人员。 4、人工扛运物料间距不得小于10m，拖运时必须单独进行，严禁前后两处及以上同时拖运。 5、施工期间，作业人员必须集中精力、站稳脚跟、缓慢运输物料。 6、运输物料时，人员、物料必须与胶带输送机有不小于0.4m的安全间距，无极绳绞车必须停电闭锁，严禁运行。 7、采用专用工具拖运时，物料和拖运工具之间必须用铁丝固定，防止其在运行过程中翻滚或滑动，地板不平上行拖运时，下方不应有人；下行拖运时，应采取防下滑措施，有专人在后方拉留绳，下行运输最大坡度不超过15°，下行拖运时人员不得站在物料正前方，必须在前方两侧拖运。 8、滑动拖运：物料外形较大或不规则不能使用专用拖运工具的 伞钻的安全技术措施 一、概述塔拉壕煤矿回风立井总工程量为165米，其中表土段工程量32米，现已施工完毕进入基岩段，为了加快施工进度，决定采取深孔松动爆破的方法爆破，爆破采用伞钻打眼，采用中心回转式抓岩机装货，5m?吊桶进行提升。为了施工安全，特制定本安全技术措施。二、准备工作下井前的准备工作1、每班下井前须将各油雾器都加满油之后将油盖拧紧。2、检查各管路部分是否渗漏，发现问题及时处理。3、操作推进油缸使凿岩机上下滑动，看其是否正常。4、检查钎头、钎杆水眼和凿岩机水针是否畅通，钎杆是否直，钎头是否磨损。5、检查吊环部分是否可靠，有无松动现象。6、检查操纵手柄是否在“停止”位置，检查机器收拢位置正确与否，注意软管外露部分是否符合下井尺寸，以免吊盘喇叭口碰坏管路系统。7、用两根钢丝绳分别在推进器上部和下部位置捆紧，防止意外松动。8、在井底面打一个深度为400毫米左右的定钻架中心孔，孔径Φ40mm左右，安放钻座。下井及工作面固定1、事先同提升司机、井口、吊盘和工作面信号工联系好，讲明钻架下落各深度应注意的事项，以便很好配合，确保安全操作。2、伞钻上下井转换挂钩时，井盖门必须关上。3、伞钻通过吊盘喇叭口时，应停下检查是否有凸出部分碰上吊盘。4、下放伞钻到距井底约300毫米时，停止下放，放好钻座。应将伞钻移至井筒中央，坐与底座上，此时中心稳车绳将伞钻吊正，随后接通总风管和水管。5、接通球阀，启动启动马达使油泵工作，供给压力油。操纵立柱油路阀升起支撑臂，伸出支撑爪，撑住井筒壁，整体伞钻垂直固定后放松稳绳少许使之扶住伞钻，确保安全。6、支撑臂支撑位置要避开升降人员，吊桶及吊泵等设备位置，以免碰坏。同时，在支撑臂住井壁后不可开动调高油缸，以免折断支撑臂。7、立柱固定时要求垂直井底面，以避免炮眼偏斜和产生卡钎现象。打眼1、首先调整好推进压力，将0-16Mpa压力表插入操纵台顶上的插座孔中，使钎头顶住井底，根据岩石软硬进行调压，一般为3-4Mpa或更小，调压后拧紧调压阀，锁紧螺母卸掉压力表的插头。2、打眼过程中，辅助提升上下人和输送工具时，信号工应特别注意，防止碰伤支撑臂、动臂或挤伤人。3、动臂移动开安全技术措施计划概述
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